II

Koko: px
Aloita esitys sivulta:

Download "II 1111111 11 1 111011 1111111 1111110111111111"

Transkriptio

1 (12 ) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI B II F B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus Patent- och registerstyrelsen (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 C 12P 21/02, C 12N 15/31 C 07K 14/31, A 61K 38/16 (21) Patenttihakemus - Patentansökning (22) Hakemispäivä - Ansökningsdag (24) Alkupäivä - Löpdag (41) Tullut julkiseksi - Blivit offentlig (32) (33) (31) Etuoikeus - Prioritet SE P (73) Haltija - Innehavare 1. Alfa-Laval Agri International Aktiebolag, Box 39, Tumba, Sverige, (SE) (72) Keksijä - Uppfinnare 1. Höök, Magnus, 4734 Bridge Water Road, Birmingham, AL 35243, USA, (US) 2. Lindberg, Martin Kjell, Kornvägen 5, Uppsala, Sverige, (SE) 3. Signås, Lars Christer, Hamnesplanaden 2A, Uppsala, Sverige, (SE) 4. Wadström, Torkel Mikael, Rektorsvägen 7, Lund, Sverige, (SE) 5. Fröman, Gunnar, Lindsbergsgatan 5 B, Uppsala, Sverige, (SE) (74) Asiamies - Ombud: Berggren Oy Ab, Jaakonkatu 3 A, Helsinki (54) Keksinnön nimitys - Uppfinningens benämning Hybridi-DNA-molekyyli, joka koodaa fibronektiiniå sitovaa proteiinia sekå menetelmä proteiinin valmistamiseksi Hybrid-DNA-molekyl, som kodar fibronektinbindande protein och förfarande för frammtållning av protein (83) Mikro-organismitalletus - Deposition av mikroorganism: 4124 DSM (56) Viitejulkaisut - Anförda publikationer FEMS Symposium 31 (1986) (Fröman et al.), J. Biol. Chem. 262 (14) (1987) (Fröman et al.), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80 (1983) (Löfdahl et al.), Chemical Abstracts 97 (1982) e (Esperson och Clemmensen) - Infection and Immunity 37 (1982) (57) Tiivistelmä - Sammandrag Esillä oleva keksintö kohdistuu uuteen yhdistelmä-hybridi-dna-molekyyliin,joka käsittää S. aureuksesta peräisin olevan nukleotidisekvenssin,jokakoodaaprote - iinia tai polypeptidiä, jolla on fibronekliiniä sitovia ominaisuuksia.

2 Föreliggande uppfinning avser en ny re- kombinanthybrid-dna-molekylinnefattan- de en nukleotidsekvens från S. aureus, som kodar protein eller polypeptid, som har fibronektinbindande egenskaper Ball 1 L CO GGCC..,:=AATAI5C- GGCCGTCT =;L GC:1-,=.,,,.TAT Gly81nAsnSerGlyAsnGlnSerPhe810(318,4spThrGluGluspLyzysTyr 61 + t , -' GAACAAGGT88CAATATCGT,L:GMTATCGTTTTGATGTGTACCCTTCATTii=,., GluGlr.81yeilyAsnileYa~lleApPhe.erlYs1PrGlnileHIEClyGlr, A.,,,To,,AAGGTAATCGTCATTCGGGA,48gTAC C,,,,.:CGTATGAT,=.inLys-GlErerPhe0luGlu.4EpThrG10Lys,.'ipL ":t.d1_,,, styrgluhis -1& GGCGGTA,,,CATCTTGAT,;TCGACTTCGACAGTGTL:CT, TTC,C.GGTTCATI48 GlyGlyAsnllellesplleAspPheEper1P-Illtlis131,yFh"Et,Lys t CAC,,,CTG.4.gATTTTGA.,,G.W.Tii,.C.,,A=JA A,TTATCATTCG0TGGA HisThrGlul1e11eG1uGluipThrAsrd_yrk -:-,,TyrG1131Gly 31/C21) C;-.CH,TAJ.T13TT,CTTTC,Ai-,,G,AA&4TACL.TTC1_,,,,,.,--,,,,TA.,38-1- rglyglnlugly HisAsnSerVal.zpFt.eGluGlupThrLuEr:_ys CAACACLIATTC-GTAL:.-,.CL.C.TCL.T..,T,1,_,_,-,_ L..,,,L,-.L.,_ GlnG1nThrlleG1uGluiTnrThrPrz,Pre.li, Ys1Pr.:F- -- t-,rprfr.:,thrl..: , :. c -: -,-..-,:' :.----:,T,LL,,, 81uUa1Pro8erG1ug'roGluTr,rPrThrProF1, rty -F1Free., GIL,P. c, 481 t- -+ t 540 G1uThrProThrPr8Pr rogluvalpror;11.51,thrfr:, Tt r:, P44ff 541 -I 559 ACACCAGAGGTi;C:CGCTC, ThrProGluValFoAla

3 Hybridi-DNA-molekyyli, joka koodaa fibronektiiniä sitovaa proteiinia sekä menetelmä proteiinin valmistamiseksi Esillä oleva keksintö kohdistuu menetelmään fibronektiiniä sitovan proteiiniin val- 5 mistamiseksi sekä hybridi-dna-molekyyleihin, esim. plasmideihin tai faageihin, jotka käsittävät nukleotidisekvenssin, joka koodaa sanottua proteiinia. Lisäksi hakemuksensa kuvataan mikro-organismeja, jotka käsittävät sanottuja molekyylejä, ja niiden käyttöä sanottuja proteiineja valmistettaessa. Esillä olevan keksinnön kohteena on saada aikaan minimaalinen fibronektiiniä sito- 10 va proteiini. Lisäksi kohteena on saada aikaan sanottu proteiini geenitekniikalla käyttämällä esim. plasmidia, joka käsittää nukleotidisekvenssin, joka koodaa sanottua proteiinia. Muut kohteet ilmenevät seuraavasta selityksestä. WO-A1-85/05553 selostaa bakteerisolupintaproteiineja, joilla on fibronektiiniä, 15 fibrinogeeniä, kollageeniä ja/tai laminiinia sitova kyky. Täten on osoitettu, että eri bakteereilla on kyky sitoutua fibronektiiniin, fibrinogeeniin, kollageeniin ja/tai laminiiniin. Lisäksi on osoitettu, että fibronektiiniä sitovan proteiinin molekyylipaino on 165 kd ja/tai 87 kd, joten on oletettavissa, että pienempi proteiini on suuremman osa.. 20 Fibronektiini on suuri glykoproteiini (Mr suunnilleen 450 kd), jossa on kaksi sa- manlaista alayksikköä, joiden molekyylikoko voi vaihdella riippuen prekursori- mrna:n (1) kompleksiliitoskaavasta. Fibronektiinin pääasiallinen funktio, jota fibronektiiniä on löydetty ruumiinnesteistä, verihyyteistä ja solunulkoisista matrikseista, näyttää olevan kohdistunut proteiinin kykyyn välittää useimpien eukaryootti- 25 solujen substraattiadheesiota (2, 3, 4, 5). Seitsemänkymmentäluvun loppupuolella Kuusela havaitsi, että fibronektiini ei vain toimi yhdessä eukaryoottisolujen kanssa, vaan sitoutuu Staphylococcus aureuksen. soluihin (6). Tästä havainnosta lähtien on lukuisten patogeenisten mikro-organis-. mien osoitettu sitoutuvan fibronektiiniin suurella spesifisyystasolla ja suurella affi- 30 niteetillä (7). Fibronektiini näyttää toimivan solunulkoisessa matriksissa myös eri- laisten mikro-organismien kasvualustana. Fibronektiiniin sitoutuminen on monille

4 mikro-organismeille ratkaiseva vaihe isännän kudoksen asuttamisessa ja tulehduksen kehittämisessä. Useita erilaisia solupintakomponentteja on havaittu fibronektiinireseptoreiksi Grampositiivisissa bakteereissa lipotekiohapot (8, 9) ja proteiini (10) mukaanlukien. 5 Aikaisemmissa tutkimuksissa fibronektiiniä sitova proteiini, jonka Mr on kd, on eristetty S.aureus-lajista Newman (11, 12) ja se on identifioitu kokeellisesti fibronektiinireseptoriksi. Tämän fibronektiiniä sitovan proteiinin, joka on peräisin S. aureuksesta, lisäluonnehtimiseksi kloonattiin tätä proteiinia varten oleva geeni E. colissa. Tässä proteiinissa oleva fibronektiiniä sitova alue on myös paikallistettu ja 10 tämän domeenin sisältävän fuusioproteiinin ja proteiini A:n IgG:tä sitovien alueiden käyttäytymistä selostetaan jäljempänä. Nyt on yllättäen havaittu mandolliseksi ottaa talteen hybridi-dna-molekyyli, joka käsittää nukleotidisekvenssin, joka koodaa proteiinia tai polypeptidiä, jolla on fibronektiiniä sitovia ominaisuuksia. Todisteena tästä on seuraavanlainen nukleotidi- 15 sekvenssi läsnä geenissä, joka koodaa sanottua proteiinia: -. GGC CAA AAT AGC GGT AAC CAG TCA TTC GAG GAA GAC ACA GAA GAA GAC AAA CCT AAA TAT GAA CAA GGT GGC AAT ATC GTA GAT ATC GAT TTT GAT AGT GTA CCT CAA ATT CAT GGT CAA AAT AAA GGT AAT CAG TCA TTC GAG GAA GAT ACA GAA AAA GAC AAA CCT AAG TAT GAA CAT 20 GGC GGT AAC ATC ATT GAT ATC GAC TTC GAC AGT GTG CCA CAT ATT CAC GGA TTC AAT AAG CAC ACT GAA ATT ATT GAA GAA GAT ACA AAT AAA GAT AAA CCA AGT TAT CAA TTC GGT GGA CAC AAT AGT GTT GAC TTT GAA GAA GAT ACA CTT CCA AAA GTA AGC GGC CAA AAT GAA GGT CAA CAA AGC ATT GAA GAA GAT ACA ACA CCT CCA ATC GTG CCA CCA Keksintö käsittää lisäksi plasmidin tai faagin, joka käsittää nukleotidisekvenssin, jo ka koodaa sanottua fibronektiiniä sitovaa proteiinia. ACG CCA CCG ACA CCA GAA GTA CCA AGT GAG CCG GAA ACA CCA ACG CCA CCA ACA CCA GAA GTA CCA AGT GAG CCG GAA ACA CCA ACA CCA CCG ACA CCA GAA GTG CCG AGT GAG CCA GAA ACT CCA ACA CCG CCA ACA CCA GAG GTA CCA GCT Keksintö käsittää lisäksi mikro-organismin, joka käsittää vähintään yhden edellä esitetyn mukaisen hybridi-dna-molekyylin. Keksintö käsittää lisäksi menetelmän fibronektiiniä sitovan proteiinin valmistamiseksi, jossa menetelmässä vähintään yksi edellä esitetty hybridi-dna-molekyyli

5 viedään mikro-organismiin, viljellään sanottua mikro-organismia viljelyväliaineessa, ja eristetään täten muodostunut proteiini liukenemattomaan kantoaineeseen sitoutuneesta fibronektiinistä tehdyn affiniteettikromatografian avulla, jota seuraa ioninvaihtokromatografia. 5 Keksinnön oleelliset tunnusmerkit on esitetty oheisissa patenttivaatimuksissa. Sopivat kantajaproteiinit voidaan liittää aminohapposekvenssiin samoin, kuten proteiini-a:n IgG:tä sitovat alueet. Kuvio la esittää affiniteettikromatografiaa fibronektiini-sepharosella Lysaattiin (86) ml, joka saatiin E. coli -kloonin pfroo1 kylmällä osmoottisella 10 shokilla, sekoitettiin 29 ml 2 M ammoniumasetaattia. Näyte levitettiin sitten kolonniin (1,9 x 5,7 cm), joka oli tasapainotettu 0,5 M ammoniumasetaatilla 50 ml/h virtausnopeudella. Näytteen levittämisen jälkeen kolonni pestiin viidellä kolonnitilavuudella 0,5 M ammoniumasetaattia 20 ml/h virtausnopeudella. Samaan aikaan UV-monitorin herkkyys kasvoi viiden kertoimella. 200 ja 220 ml:n välille eluoituva 15 materiaali kerättiin, neutraloitiin ammoniumhydroksidilla ja dialysoitiin 10 mm ammoniumasetaattia vasten, ph 7,6. Kuvio 1 B esittää ioninvaihtokromatografiaa Esimerkissä 1A kuvattu affiniteettikromatografiasta dialysoitu materiaalinäyte (10 ml) levitettiin 1 ml Mono Q (Pharmacia, Ruotsi) -anionikolonniin, joka oli tasapai- 20 notettu 10 mm ammoniumasetaatilla, ph 7,6. Virtausnopeus oli 2 ml/min ja kolonni,:.:. elutoitiin vuorauksen lisäyksellä 25 mm per mooli ammoniumasetaattipitoisuudessa.., Kaksi huippua (I ja II) yhdistettiin, kuten kuviossa on osoitettu....: Kuvio 2 esittää E. coli pfro01:n osmoottinen shokki -lysaatin erilaisista puhdistus- vaiheista peräisin olevien materiaalien polyakryyliamidigeelielektroforeesia 25 Materiaali levitettiin (kaista 1) affiniteettikolonniin (fibronektiini-sepharose) adsor-... boimaton (kaista 2) ja adsorboitu (kaista 3) materiaali. Affmiteetilla puhdistetun materiaalin ioninvaihtokromatografia Mono Q FPLC -kolonni (Pharmacia, Ruotsi): yhdistelmä I (kaista 4) ja yhdistelmä II (kaista 5,) kuten kuviossa 1B on merkitty. :. :.: Kuvio 3 esittää pfroo Leen liitetyn liitoksen restriktiokarttaa, subklooneja ja delee- 30 tioita (A) 6,5 ke:n liitoksen restriktiokartta. (B) erilaisia sub-klooneja, jotka on konstruoitu. geenin alueen määrittämiseksi, joka alue koodaa fibronektiiniä sitovaa toimintaa. (C) deleetioita, jotka on tehty joko EcoRI-PstI-fragmentin 3'- tai 5'-päästä käsittele-

6 mällä eksonukleaasilla Ba131 (katso selostusta yksityiskohtia varten). Erilaisten geenituotteiden fibronektiiniä sitova toiminta on osoitettu. Kuvio 4 esittää ZZ-FR-proteiinin polyakryyliamidigeelielektroforeesia Proteiini A (Sigma Chemial Co, St. Louis; kaista A) ja ZZ-FR-fuusioproteiini 5 (kaista B) redusoitiin ja alistettiin elektroforeesiin SDS:ssä 5-15-%:isella polyakryyliamidigeelillä. Geeli värjättiin lisäksi Coomassie bluella. Kaistoissa C & D fraktionoitiin ZZ-FR-fuusioproteiini ja proteiini A vastaavasti SDS-elektroforeesilla 5-9-%:isella polyakryyliamidigeelillä, sähkötäplitettiin selluloosanitraattipaperille ja testattiin 125I-merkityllä 29 kd:n fibronektiinifragmentilla, kuten on selostettu 10 (Fröman et al., 1987). Nuolet osoittavat tunnetun molekyylipainon standardiproteiinien migraatioetäisyyttä. Kuvio 5 esittää ZZ-FR-proteiinin affiniteettikromatografiaa ZZ-FR-fuusioproteiinia (0,6 mg; ruutu A) ja proteiinia A (Sigma Chemical Co; 0,5 mg, ruutu B) levitettiin 7 ml Sepharose 4B CL -kolonniin, joka oli substituoitu kd fibronektiinifragmentilla. Kolonni pestiin 0,5 M NaCl PBS:ssä ja eluoitiin lisäksi 6 M GuHC1 PBS:ssä. 2 ml:n fraktiot kerättiin ja proteiini testattiin käyttämällä BioRad-järjestelmää....: Kuvio 6 esittää ZZ-FR-fuusioproteiinivalmisteen, joka on fraktionoitu affiniteettikromatografialla, polyakryyliamidigeeli-elektroforeesia Materiaali, joka ei ollut sitoutunut (kaista A) ja joka oli sitoutunut sekä elutoitu (kaista B) vastaavasti, ja joka oli peräisin 29 kd affiniteettikolonnista, analysoitiin SDS-geelielektroforeesilla 5-15-%:isilla polyakryyliamidigeeleillä. Geelit värjättiin lisäksi Coomassie bluella. Nuolet osoittavat tunnetun molekyylipainon standardiproteiinien migraatioetäisyyttä. :: 25 Kuvio 7 esittää 125I-fibronektiinin sitoutumisen bakteerisoluihin Lajin Newman (ruutu A) tai lajin stafylokokki-soluja (5x107) inkuboitiin i.. 5x104 cpm:llä 125I-merkittyä intaktia fibronektiiniä (o-o) tai 29 kd N-terminaalista. fibronektiinifragmenttiä (A-A) PSB:ssä, jota oli täydennetty 0,1 %:lla BSA:ta ja 0,1. %:11a TweenR 80 0,5 ml:n kokonaispitoisuudessa 1 tunti ZZ-FR-fuusioproteiinin tai. 30 proteiinin A (-) lisääntyvien määrien läsnäollessa. Katso käytetyn sitoutumistestin. lisäyksityiskohtia Fröman et al. (1987). 125I-merkityn radioaktiivisuuden määrät, jotka liittyivät bakteerisoluihin määriteltiin ja fibronektiinin sitoutumisen laajuus laskettiin. Sata prosenttia sitoutumista edustaa 125I-ligandin sitoutumista bakteereihin inhiboivan proteiinin puuttuessa ja 0 % sitoutumista vastaa radioak- 35 tiivisuutta, joka on mitattu inkubaatioseoksista, joissa ei ole bakteereita.

7 Kuvio 8A esittää nukleotidisekvenssiä, joka koodaa fibronektiiniä sitovaa proteiinia Nukleotidisekvenssi, joka koodaa fibronektiiniä sitovaa proteiinia vastaavine aminohappoineen esitetään. Erilaiset 38 aminohappotoisteet on merkitty samoin kuin seuraavien lähes neljän täydellisen 14 aminohappotoisteen. Restriktiopaikat BalI- 5 HincII-PvuII on merkitty kuvioon samoin kuin aminohapposekvenssit, jotka vastaavat erilaisia nukleotidisekvenssejä. Kuvio 9 esittää kemiallisesti syntetoidun polypeptidin fibronektiiniä sitovaa kykyä Testattiin esimerkin 2 mukaisesti syntetoidun 38 aminohappotähdepolypeptidin fibronektiiniä sitova kyky yhdessä sanotun polypeptidin fragmenttien fibronektiiniä si- 10 tovan kyvyn kanssa. (*-*) tarkoittaa polypeptidiä, joka vastaa aminohapposekvenssin 38(2)-toistoa; ( ) tarkoittaa polypeptidiä, joka vastaa aminohapposekvenssin aminohappoja 1-19; (o-o) tarkoittaa polypeptidiä, joka vastaa aminohapposekvenssin aminohappoja 20-38; (A-A) tarkoittaa polypeptidiä, joka vastaa aminohapposekvenssin aminohappoja no 9-30; ja (- - -) polypeptidiseosta, joka käsittää 15 aminohappojen 1-19, aminohappojen ja aminohappojen 9-30 polypeptidit. Sitoutumiskyky on merkitty prosenteissa lisätyn polypeptidin ilg:tä kohti. Keksintöä selostetaan seuraavassa viitaten annettuihin esimerkkeihin, jotka eivät kuitenkaan rajoita sitä. Esimerkki 1 3 : : 20 Geenipankin seulonta fibronektiiniä sitovaa proteiinia varten (FNBP) Staphylococcus aureus -lajista (8325-4) peräisin olevan kromosomaalisen DNA:n plasmidissa pbr322 oleva geenipankki, joka on kuvattu aikaisemmin (13):ssa, seulottiin FNBP:tä ilmentäviä klooneja varten. E. coli -kloonit lysoitiin ja lysaattien kyky inhiboida 125I-fibronektiinin sitoutumista S. aureus -soluihin Cowan I testat- 25 tiin, kuten menetelmäkappaleessa kuvattiin. Seulonnan yksinkertaistamiseksi kloonit jaettiin 25 erään, lysoitiin ja testattiin. Kun 22 erää oli testattu, se, jolla oli suurin inhiboiva toiminta testattiin uudelleen 5:n 5:nä eränä. Lopuksi testattiin positiivisen erän yksittäiset kloonit, ja sitä seurasi yhden yksittäisen positiivisen kloonin eristäminen. Positiivisessa kloonissa oleva plasmidi nimitettiin pfro01:ksi..:. 30 Tämä plasmidi pfroo1 on tallennettu E. coli -lajissa 259 Deutsche Sammlung von Mikroorganismen (DSM):iin ja on sieltä saatavissa tallennenumerolla

8 Stafylokokkiperäisen FNBP:n eristäminen E. colista E. coli -kloonia, joka on FNBP-positiivinen, viljeltiin LB-väliaineessa 37 C:ssa muuttumattomaan kasvufaasiin. Bakteerisolut sentrifugoitiin ja lysoitiin osmoottisella shokkimenetelmällä (14). Sen poissulkemiseksi että shokkilysaatin inhiboiva 5 toiminta 125I-fibronektiinin sitoutumiseen S. aureus -soluihin johtuisi proteolyyttisestä vaikutuksesta, lysaatti lisättiin inkubointiseokseen, ja S. aureukseen sitoutuneen 125I-fibronektiinin määrä määritettiin 1, 2, 3, ja 4 tunnin inkuboinnin jälkeen. Tämän inkubointijakson avulla lysaatin aiheuttama inhibitiotaso jäi vakaaksi (esim. 50 %) osoittaen, että inhibitio ei johtunut 125I-merkityn ligandin tai vastaavan re- 10 septorin kehittyvästä degradaatiosta. Jos inhiboiva toiminta johtuu lysaatissa läsnäolevien FNBP-kaltaisten rakenteiden läsnäolosta, niiden pitäisi osoittaa spesifistä affiniteettia fibronektiiniin. Lysaatti analysoitiin sen tähden affiniteettikromatografialla fibronektiini-sepharose-pylväällä, kuten Materiaaleissa ja menetelmissä (kuvio 1A) on kuvattu. Puhdistus oli noin kertainen. Lisäfraktionoiminen saatiin alistamalla affiniteettipuhdistettu materiaali ioninvaihtokromatografiaan käyttämällä mono Q- pylvästä sovitettuna FPLCjärjestelmään. Tässä fraktionointivaiheessa saatiin kaksi suurempaa huippua (kuvio 1 B). Analyysit polyakryyliamidigeelielektroforeesilla osoittivat, että nämä kaksi huippua sisälsivät proteiineja, joiden molekyylipainot olivat vastaavasti 165 ja kd (kuvio 2). Molemmat komponentit inhiboivat 125I-fibronektiinin sitoumista S.... aureukseen. Fraktiolla, joka sisälsi 165 kd:n proteiinin, oli 220 yksikköä/qg:n spe- sifinen inhibointitoiminta, joka osoittaa 430-kertaisen puhdistumisen alkuperäisestä.. shokkilysaatista ja se oli 30 kertaa aktiivisempaa, kuin 87 kd:n proteiini moolipe-.. rustalla (tietoa ei esitetty). ::: 25 Näiden kanden proteiinin aminohappoanalyysi osoitti, että niillä oli hyvin samanlai- nen aminohappokoostumus, joka myös muistutti tarkalleen sitä, mikä on määritetty luonnolliselle FNBP:lle, joka on eristetty S. aureus -lajista Newman (taulukko 1). E.. colista pfroo1 eristetyn 165 kd:n proteiinin immunologinen suhde luonnolliseen S. aureus -lajista Newman eristettyyn FNBP:hen analysoitiin. 165 kd:n proteiini. : merkittiin ja immunopresipitoitiin S. aureus -lajin Newman vasta-aineen kasvavilla laimennoksilla. Vastaseerumin 300-kertainen laimennus presipitoi 50 % merkitystä proteiinista. Merkitsemättömät 165 ja 87 kd proteiinit sekä luon- nollinen FNBP ehkäisivät merkityn 165 kd:n proteiinin immunopresipitaatiota (tie-. toa ei esitetty). Nämä havainnot osoittavat, että S. aureus -lajista Newman eristetyt ja 87 kd:n proteiinit ovat läheistä sukua fibronektiiniä sitovalle proteiinille (FNBP).

9 fnbp-geenin sitovaa toimintaa koodaavan alueen identifiointi Liitoksen koko plasmidissa pfroo1 on noin 6,5 kep. Liitoksen restriktiokartta on osoitettu kuviossa 3(A). Transkriptiosuunnan määrittämiseksi ja sitovaa toimintaa koodaavan alueen paikallistamiseksi noin 3,7 kep PstI-fragmentti uudelleenkloonat- 5 tiin pbr322:n PstI-paikkaan. Tämä aiheuttaa tämän plasmidin ampisilliiniresistanssi-fenotyypin katoamisen. Kandeksan tällaista kloonia otettiin talteen, joista klooneista oli viisi fibronektiiniä sitovalle toiminnalle positiivisia ja negatiivisia kolme. Jokaisesta testattiin PstI-fragmentin orientaatio. Positiivisen kloonin pfroo4 plasmidilla oli EcoRI-paikka lähimpänä Amp-promoottoria ja negatiivisen kloonin Eco- 10 RI-paikalla oli päinvastainen orientaatio. Nämä tiedot osoittivat, että transkriptioorientaatio on EcoRI:sta PstLeen 3,7 kep EcoRI-Pst-fragmentissa ja että vähintään osa fnbp-geenistä, joka koodaa sitovaa toimintaa, sijaitsee tässä fragmentissa. Tämän varmentamiseksi pfro04:ssä oleva Amp-promoottori poistettiin EcoRI-hajotuksella, mitä seurasi plasmidin uudelleenligatointi. Tuloksena saatu plasmidi 15 pfroo8 ei osoita fibronektiiniä sitovaa toimintaa. Endogeeninen promoottori sijaitsee täten otaksuttavasti pfroo1:ssä jossain EcoRI-paikan vasemmalla puolella, kuten kuviossa 3(A) on osoitettu nuolella. Plasmidikonstruktiolla (ei kuvattu yksityiskohtaisesti) vietiin sitten pfro01:stä peräisin oleva EcoRl (liitoksessa) -SalI (pbr322:ssa) -fragmentti pfro08:aan. Fibronektiiniä sitova toiminta palautui fnbp- 20 geenistä peräisin olevan endogeenisen promoottorin palauttamisen ansiosta. Kun tiedettiin fnbp-geenin transkriptiosuunta (vasemmalta oikealle, kuten kuviossa. 3(A) on esitetty) fuusioita geenin stafylokokkiproteiini Aita varten suoritettiin.... Konstruoitiin ilmentymis/sekreetiovektori, joka on nimetty prit3:ksi, joka perustuu e proteiini A -geeniin, ja jossa on restriktioentsyymimultiliittäjä (15). Multiliittäjä ::: 25 sijaitsee välittömästi myötävirtaan viimeisestä IgG:tä sitovasta alueesta, ja eliminoi : :. : siten proteiini A:n C-terminaalisen soluseinää sitovan alueen. pfro01:stä peräisin oleva 3,7 kep:n EcRI-PstI-fragmentti liitettiin tähän vektoriin odottaen sen kooditta-. van proteiini A - FNBP -fuusioproteiinia, josta saatu lukemisrakenne oli korrekti.. Tämä oli itsestään selvä tapaus, koska plasmidi, jota kutsutaan pfro13, on testeissä 30 sekä proteiini A- että FNBP-positiivinen. :-. : I. Plasmidia pfro13 käsiteltiin eksonukleaasilla Ba131 tarkoituksella identifioida alue, joka on 3,7 kep liitosta pienempi, ja koodaa fibronektiiniä sitovaa toimintaa. Plasmidi pilkottiin EcoRI:lla tai Pstl:llä (koodaavan alueen 5'- ja 3'-päässä vastaavasti), käsiteltiin useita kertoja Ba131:11ä ja ligatoitiin uudelleen. Ligatoinnin aikana. '. 35 lisättiin 20-kertainen ylimäärä EcoRI-liittäjää EcoRI-paikkojen viemiseksi uusiin asemiin. Kuvio 3(C) esittää deleetioita, jotka saatiin joko 3'- tai 5'-päähän ja vastaa-

10 vaa fibronektiiniä sitovaa toimintaa. Noin 700 ep geenialue, joka koodaa sitovaa toimintaa sijaitsee deleetionumeron 56 (deleetio 5'-päästä) ja -numeron 22 (deleetio 3'-päästä) päätepisteiden välissä. Deleetioplasmidista numero 56 subkloonattiin 900 ep alue, joka on peräisin äskettäin PvuII-paikkaan viedystä EcoRI-paikasta. Tämä 5 fragmentti kloonattiin puc18:ssa EcoRI:llä ja SmaI:llä pilkottuna. Tulokseksi saatu plasmidi, joka koodittaa fuusioproteiinia, jossa on sekä P-galaktosidaasia ja fibronektiiniä sitovaa toimintaa, nimitettiin pfro15:ksi. Fragmentti voidaan uudelleenkloonata pfro15:stä EcoRI- ja BamHI-pilkonnalla, koska puc18:ssa on multiliittäjä. 10 Restriktiofragmentit subkloonattiin myös kuten kuviossa 3(B) on osoitettu. EcoRI- PstI- ja EcoRI-ClaI-fragmenttien tapauksessa käytettiin proteiini A:n ilmentymisvektoria prit3. Fragmentit BalI-PvuII ja BalI-HincII subkloonattiin ja ilmennettiin puc18:ssa. Kaikissa tapauksissa, paitsi EcoRI-ClaI-fragmentin, saatiin talteen fuusioproteiineja, joilla on fibronektiiniä sitova toiminta. Negatiivinen tulos ClaI-ClaI- 15 subkloonin tapauksessa voi johtua liitoksesta, joka on väärässä lukemisjäijestyksessä. Fuusioproteiinin ZZ-FR valmistaminen ja luonnehdinta 165 kd:n proteiinin saanto (kuvio 2), joka on peräisin E. coli HB101 -solujen lysaatista, jossa on plasmidia pfro01, oli noin 40 pg per litra viljelyväliaineessa. Vaikka 20 esiintyi katoja, jotka johtuivat korkean molekyylipainon yhdisteen degradaatiosta puhdistuksen aikana, kaikki tosiasiat osoittivat, että fnbp-geeni, jossa on endogeeninen promoottori, ilmentyy heikosti E. colissa. Ilmentymistason parantamiseksi käytettiin äskettäin kehitettyä ilmentämisjärjestelmää, joka sallii heterologisten pro- s : : teiinien sekreetion E. colin kasvuväliaineeseen (16). Käytetty plasmidivektori 1 : : 25 pezz318 sisältää geenin kaksi synteettistä, hieman modifioitua IgG:tä sitovaa domeenia stafylokokkiproteiinia A varten, joita edeltää saman geenin promoottori ja signaalisekvenssi. fnbp-geenin noin 600 ep BalI-Pvull-fragmentti (kuvio 3(B)), joka. on kloonattu puc18:ssa, kloonattiin uudelleen pezz318:ssa, joka on pilkottu. EcoRI:llä ja HindIII:11a. Ligatoinnin ja transformaation jälkeen eristettiin pezz-fr.. : 30 Tämä plasmidi koodittaa fuusioproteiinia, joka koostuu IgG:tä sitovasta tuotteesta ZZ ja FNBP:n fibronektiiniä sitovasta alueesta. ZZ-FR-proteiinin valmistamiseksi E. coli -lajia HB101, jossa on plasmidia pezz- FR, viljeltiin yön yli Trypticase Soy Brothissa. Bakteerit poistettiin sentrifugoimalla ja viljelyväliaine vietiin IgG-Sepharose Fast Flow -pylvään läpi. Pylvään TST- 35 puskurilla (50 mm Tris-HC1, ph 7,4, 150 mm NaC1, 0,05 % Tween R 20) pese-

11 misen jälkeen proteiini eluoitiin 0,5 M etikkahapolla titrattuna ph:hon 2,8 käyttämällä ammoniumasetaattia. Noin 50 mg proteiinia eluoitiin pylväästä per litra käytettyä viljelyväliainetta. Lyofilisoinnin jälkeen eluoitu materiaali analysoitiin SDS-PAGE:lla, joka ilmaisi 5 suuremman proteiininauhan olevan noin 63 kd (kuvio 4). Lisäksi esiintyi nauhoja, jotka vastasivat pienempiä fragmentteja, mikä johtuu ilmeisesti fuusioproteiinin proteolyyttisestä degradaatiosta. Intakti proteiini A, joka oli samalla geelillä, esiintyi 56 kd:n hajanaisena nauhana. Geelissä olevat proteiinit siirrostettiin elektroforeettisesti selluloosanitraattipaperiin ja tutkittiin 125I-merkityllä 29 kd:n fibronektiini- 10 fragmentilla. Kuviossa 4 kaistat C ja D osoittavat, että fuusioproteiini, mutta ei intakti proteiini A, sitoo radioaktiivisesti merkittyä fibronektiinifragmenttia. Lisätodiste ZZ-FR-fuusioproteiinin fibronektiiniä sitovasta kyvystä saatiin affiniteettikromatografian avulla Sepharose-pylväällä, joka oli substituoitu 29 kd:n fibronektiinifragmentilla. Fuusioproteiini sidottiin pylvääseen ja eluoitiin affiniteetti- 15 matriksista 6 M GuHC1:11ä (kuvio 5A). ZZ-FR-fuusioproteiinin fibronektiiniä sitova toiminta sijaitsi ilmeisesti FR-alueella, koska intakti proteiini A ei sitoutunut affiniteettimatriksiin (kuvio 5B). ZZ-FR-fuusioproteiinivalmisteen osa, joka ei sitoutunut affiniteettimatriksiin, koostui proteiineista, joissa Mr on alempi kuin intaktien fuusioproteiinien (kuvio 6, kaista A), kun taas materiaali, joka sitoutui pylvääseen, koostui lähes puhtaasta intaktin 63 kd ZZ-FR-fuusioproteiinin valmisteesta (kuvio Oe 6, kaista B). Ol Sen määrittämiseksi, kuinka paljon stafylokokkisolujen fibronektiiniä sitovasta ky-. vystä voidaan pitää kloonatun FNBP:n ominaisuutena, mitattiin ZZ-FR-fuusiopro- teiinin inhibointitoiminta. Kuten kuviossa 7 on esitetty, inhiboi fuusioproteiini totaa- : 25 lisesti 125I-merkityn 29 kd fragmentin sitoutumisen sekä intaktin fibronektiinin. : sitoutumisen sekä S. aureus-lajien Newman että soluihin, proteiini A, jota. käytettiin kontrollina, ei inhiboinut sitoutumista (kuvio 7).. Kuuselan raportoitua (6), että S. aureus sitoutuu fibronektiiniin, on kohdistettu.. paljon työtä yrityksiin identifioida bakteerikomponentti (-komponentit), jotka ovat 30 vastuussa sitoutumisesta. Näiden tutkimusten perusteena on ollut, että patogeenisten bakteerien sitoutuminen fibronektiiniin voi edustaa kudoskiinnittymismekanismia, jolla on ratkaiseva merkitys infektion varhaisissa vaiheissa. Proteiinit, jotka on puhdistettu affiniteettikromatografialla immobilisoidun fibronektiinin päällä, ovat osallistuneet stafylokokkisolujen sitoutumiseen fibronektiiniin. Kuitenkin fibronek- 35 tiiniä sitovien proteiinien selostetut molekyylipainot vaihtelevat 18 kd:sta kauttaal-

12 taan 197 ja 210 kd:iin (11, 17). Pääsyynä molekyylikoon hetorogeeniuteen voi olla proteiinien proteolyyttinen degradaatio eristysmenetelmien aikana. Esillä olevassa selostuksessa esitetään geenin, joka koodaa S. aureus -lajista peräisin olevaa fibronektiiniä sitovaa proteiinia, kloonaaminen E. colissa. Kun fnbp- 5 geeni ilmennetään E. colissa endogeenisestä promoottorista, voidaan proteiini eristää periplasmasta osmoottisella shokilla. Tämä osoittaa, että promoottori ohella myös signaalipeptidi, on funktionaalinen E. colissa. Vaikka proteiineilla, jotka on koodattu kloonatulla fnbp-geenillä, on 165 ja 87 kd:n molekyylipaino (kuvio 2), joka on pienempi kuin FNBP:n molekyylipaino, joka 10 FNBP on eristetty S. aureus -lajista Newman (Mr = 210 kd) (12), niiden aminohappokoostumukset muistuttavat läheisesti luonnollisen proteiinin koostumuksia (taulukko 1). Lisäksi vasta-aineet, jotka on herätetty luontaista FNBP:tä vastaan, ristireagoivat 165 ja 87 kd:n proteiinien kanssa. Nämä tiedot osoittavat vahvasti, että proteiinien rakenne, jotka proteiinit on koodattu S. aureus -lajista peräi- 15 sin olevalla kloonatulla geenillä, muistuttaa S. aureus -lajista Newman peräisin olevaa luonnollisen FNBP:n rakennetta. 87 kd:n proteiini voi olla tulosta preterminaatiosta 165 kd:n proteiinin transkriptionaalisella tai translaationaalisella tasolla tai vaihtoehtoisesti proteolyyttisestä pilkkoutumisesta. Tällä hetkellä ei voida selittää, miksi 165 kd:n proteiini on yli kolmekymmentä kertaa aktiivisempi kuin 87 kd:n proteiini fibronektiinin sitoutumisen S. aureus -soluihin inhiboinnissa.. t Deleetiokartoituksella käyttäen BaI31-pilkontaa ja subkloonaamalla restriktiofrag-,.. mentit fnbp-geenin alue, joka koodittaa fibronektiiniä sitovaa toimintaa, on paikal-.: listettu noin 300 ep:n alueelle (kuvio 3(B)). Noin 600 ep geenin fragmentti, joka 9 / : : kattaa nämä 350 ep, ligatoitiin suoraan proteiini A -geenin synteettisen IgG:tä si- 1 ; 25 tovan domeenin peräkkäin toistettuun sekvenssiin (zz), jota edeltää proteiini A. -promoottori ja signaalisekvenssi ilmentämisvektorissa pezz318 (16). Tulokseksi. saatu fuusioproteiini (ZZ-FR), jonka molekyylipaino on noin 63 kd määritettynä :.. SDS-PAGE11a (kuvio 4), sisältää ZZ-domeenin 126 aminohappoa, joita seuraa noin aminohappoa, jotka on kooditettu 600 ep liitoksella, joka on peräisin fnbp-gee-., 30 nistä. Proteiinin C-terminaalinen pää koostuu aminohapoista, jotka ovat tulosta kaa-.,..., vion ulkopuolelta lukemisesta vektorin lacz'-geenin kautta, kun translaation pysäytyskodoni on saavutettu. Fuusioproteiini (ZZ-FR), joka on ilmentynyt korkealla ta- : solla ja sekretoitunut E. colin viljelyväliaineeseen, on helposti eristettävissä affini- teettikromatografialla käyttäen ZZ-domeenin IgG:tä sitovaa kykyä.

13 ZZ-FR-proteiini sitoutui fibronektiinin 29 kd:n NH2-terminaaliseen domeeniin ja inhiboi täydellisesti intaktin fibronektiinin sitoumisen S. aureukseen (kuviot 5 ja 6). Nämä tiedot osoittavat, että inkubaatio-olosuhteissa käytetyt muut proteiinit, jotka tunnistavat domeenit, jotka ovat fibronektiinin 29 kd:n N-terminaalin ulkopuolella, 5 eivät ole ilmennettävissä stafylokokkisoluilla. Lisäksi FNBP:n fibronektiiniä sitova toiminta on paikallistettu proteiinin melko pieneen segmenttiin. Luontaisen 210 kd:n FNBP:n, joka oli eristetty S. aureus -lajista Newman, äskettäinen analyysi osoitti, että tämä proteiini on multivalentti ja yksi FNBP:n molekyyli kykenee sitomaan 6-9 fibronektiinimolekyyliä (12). Kloonattu fnbp-geeni on johdettu S. 10 aureus -lajista Jos S. aureus -lajien välillä ei olisi eroja, yksi voisi FR-aluetta lukuunottamatta sisältää useita toistavia sekvenssejä. Tähän kysymykseen on vastattu kloonatun fnbp-geenin sekvenssianalyysillä. FR-alueen sekvenssi, jolla on FNBP-ominaisuuksia, on annettu kuviossa 8. On syytä uskoa, että FR-sitova toiminta liittyy kuhunkin 38 aminohappotoistoon, 15 koska Bal 1 -Pvull-fragmentti koodittaa sitovaa toimintaa (ks. kuvio 3); koska Ball-HincII-fragmentti koodittaa sitovaa toimintaa; ja koska HincII-Pvull-fragmentti ei koodita sitovaa toimintaa. Lisäksi yksi ainoa 38 aminohapon toisto on funktionaalinen fibronektiinin sitomisessa, sillä syntetoidulla 38 aminohappoa pitkällä peptidillä (38(2)-toisto) on sitova kyky, kuten on esitetty kuviossa 9. Kukin kolmesta aminohapon toistosta oli hyvin homologinen. Esimerkki 2.. Polypeptidin kemiallinen synteesi, joka perustuu nukleotidisekvenssiin, joka koodaa. 38 aminohapon (38(2)-toisto) fibronektiiniä sitovaa aluetta, suoritettiin rakentamalla. aminohapposekvenssi, joka vastaa sanottua nukleotidisekvenssiä alkaen C-terminaa-. ::. 25 lisesta histidiinistä, ja reagoittamalla vaiheittain sopivalla aminohapolla sekä lopuksi reagoittamalla glysiinin kanssa N-terminaalisessa päässä, kiintofaasisynteesillä K.B. Merrifieldin, J. Am. Chem. Soc. 86, s. 304, (1964) mukaisella menetelmällä. Täten.. syntetoitiin polypeptidi, joka vastaa toista aminohappotoistetta, samaten 3 muuta polypeptidiä, jotka ovat osia tästä 38-toistosta, nimittäin 1) polypeptidi, joka kattaa ;.. 30 aminohapot 1-19, 2) polypeptidi, joka kattaa aminohapot 9-30 ja 3) polypeptidi, joka kattaa aminohapot 20-38, syntetoituivat kaikki saman menetelmän mukaisesti. 0 8 II I. Täydellisen 38-toiston, samoin kuin 1-19 aminohappopolypeptidin, 9-30 aminohappopolypeptidin, aminohappopolypeptidin sekä näiden kolmen pienemmän polypeptidin seoksen fibronektiiniä sitova kyky testattiin ja tulokset on annettu ku- 35 viossa 9. Täydellisen 38-toiston fragmentit syntetoitiin tarkoituksella tarkistaa, onko

14 fibronektiinisitovuus riippuvainen täydellisestä 38-toistosta, kuten on ennalta odotettu, vai rajoittuvatko fibronektiiniä sitovat ominaisuudet 38 aminohapposekvenssin jollekin pienemmälle alueelle. Kuten kuviosta 9 ilmenee, on fibronektiiniä sitova ominaisuus läsnä vain täydellisessä 38 aminohapon sekvenssissä. 5 Materiaalit ja menetelmät Bakteerilajit ja plasmidit Staphylococcus aureus -lajista peräisin olevan kromosomaalisen DNA:n pbr322:ssa oleva geenipankki, joka on kuvattu aikaisemmin (13):ssa seulottiin kloonien saamiseksi, jotka ilmentävät fibronektiiniä sitovaa toimintaa. Subkloonaus- 10 ja ilmentymiskokeissa käytettiin E. coli -lajeja HB102, (18) ja JM105 (19). Käytetyt plasmidivektorit olivat pbr322 (20), puc18 (21) ja proteiini A -vektorit prit3 (15) ja pezz318 (16). Fibronektiiniä sitovan proteiinin (FNBP) testeissä käytettiin S. aureus -lajeja Cowan I, Newman ja Mikro-organismien viljelyväliaine 15 E. coli -bakteerien viljelyssä käytettiin seuraavaa väliainetta. Annetut määrät koskevat litraa väliainetta. Trypton Soy Broth (Oxoid Ltd,. : Basingstoke, Hants, GB) 30 g : hiivauute (Oxoid) 10 g :.. 20 D-glukoosi 40 g NH4C1 2,5 g Na2HPO4.2H20 7,5 g KH2PO4 3,0 g. Na2SO4.10H20 2,5 g 25 MgSO4.7H20 0,2 g CaC12.2H20 0,5 g FeC13.6H20 16,7 mg ZnSO4.7H20 0,18 mg : CuSO4.5H20 0,16 mg 30 MnSO4.4H20 0,15 mg : CoC12 0,10 mg NaEDTA 20,1 mg

15 Fibronektiiniä sitovan proteiinin (FNBP) analysointi Fibronektiinin sitoutumisen määrittäminen S. aureus -soluihin on kuvattu aikaisemmin (10). Jos muuta ei ole mainittu, 10 9 S. aureus Cowan I -solua inkuboitiin 125I-merkityllä fibronektiinillä tai fibronektiinin 29 kd NH2-terminaalisella frag- 5 mentilla PBS:ssä, joka sisältää 1 mg/ml naudan seerumialbumiinia kokonaismääränä 0,3 ml. 2 tunnin 22 C:ssa inkuboinnin jälkeen soluihin sitoutunut radioaktiivisuus mitattiin gammalaskijalla. E. coli -kloonien lysaatit, jotka valmistettiin Tris-HC1-puskurissa, ph 8,1, joka sisältää lysotsyymi-edta:a, kuten aikaisemmin on kuvattu (13):ssa, analysoitiin fib- 10 ronektiiniä sitovan toiminnan toteamiseksi mittaamalla niiden kyky kilpailla stafylokokkisolujen kanssa sitoutumisesta fibronektiinin 125I-merkittyihin 29 kd NH2- terminaalisiin fragmentteihin. FNBP:n määrä, joka kykenee inhiboimaan sitomista 50 %:iin, on ilmaistu yhtenä toiminnan yksikkönä. Osmoottista shokkimenetelmää käytettiin proteiinien vapauttamiseen E. colin solu- 15 limatilasta (14). FNBP:n puhdistaminen Puhdistaminen perustui affiniteettikromatografiaan fibronektiini-sepharosen päällä, jota seurasi ioninvaihtokromatografia.... Humaani-fibronektiini valmistettiin vanhentuneesta verestä tunnetulla menetelmällä ; :: 20 (22). Fibronektiini dialysoitiin vasten 20 mm Tris-HC1, ph 8,3, ja konsentroitiin. DEAE-pylväässä. Fibronektiinin kytkentä Sepharose SL-4B:hen tehtiin tunnetulla bromisyaaniaktivointimenetelmällä (23). E. coli -lysaatit pumpattiin affiniteettipylvääseen, jota pestiin 0,5 M ammoniumasetaatilla, kunnes perusviiva oli vakaa (noin neljä pylvään tilavuutta). Sitten FNBP eluoitiin 0,4 M etikkahapolla ja joko neutralisoitiin ammoniakilla tai lyofilisoitiin.. Sen jälkeen kun se oli dialysoitu vasten 10 mm ammoniumasetaattia, jonka ph on säädetty 7,6:een, jossa oli ammoniakkia, suoritettiin lisäfraktionointi ioninvaihto-. 0. kromatografialla Pharmacia FPLC -varusteilla käyttämällä mono Q-pylvästä. ' Nukleotidisekvenssianalyysi... :...: 30 Nukleotidisekvenssi määritettiin Maxam, A.M. et al.:n kuvaamien menetelmien mukaisesti.

16 Aminohappoanalyysi Aminohappokoostumus määritettiin käyttämällä Dunum D-500 -analysaattoria. Näytteitä hydrolysoitiin 6 M HC1:ssa, joka sisältää 2 mg/ml fenolia, 24 tuntia 110 C:ssa. Yksi näytteistä myös hapetettiin permuurahaishapolla kysteiinin ja 5 metioniinin määrittämiseksi. Norluesiinia lisättiin sisäisenä standardina. Proteiini määritettiin (24):n mukaisesti käyttämällä naudan seerumialbumiinia standardina. Elektroforeesi Jos muuta ei ole mainittu, suoritettiin SDS-polyakryyliamidigeelielektroforeesi 5-15-%:isissa gradienttigeeleissä. Geelit värjättiin Coomassie brilliant bluella, väri 10 poistettiin ja valokuvattiin. Sädetysimmuunitestimenetelmä Puhdistettu FNBP, jonka arvioitu molekyylipaino on 165 kd SDS-polyakryyliamidigeelielektroforeesissa, merkittiin 125I-odiinilla tunnetulla kloramiini-t-menetelmällä (25). Jodauksen jälkeen materiaali kromatografoitiin uudelleen fibro- 15 nektiini-sepharose-pylväässä. Inkubointiseokseen, joka sisälsi 125I-FNBP (3400 cpm 10 l:ssa), sekoitettiin erilaisia kaniantiseerumin (joka sisältää vasta-aineita, jotka on suunnattu S. aureus -lajia Newman vastaan) laimennoksia inkubointipuskurissa (PBS, 0,1 % Triton X-100 ja 0,02 % natriumatsidi) tilavuudessa 0,2 ml. Näytteitä inkuboitiin 2 tuntia 20 C:ssa antigeeni-vasta-ainereaktion mandollistamiseksi. 0,1 ml proteiini A - Sepharosen 10-%:ista suspensiota (paino/til.) PBS:ssä lisättiin ja seosta inkuboitiin toinen tunti. Inkubointi pysäytettiin lisäämällä toiset 1,7 ml inkubointipuskuria näytteisiin. Sentrifugoinnin 2000 rpm 3 niin jälkeen supernatantit imettiin pois. Pelletit pestiin kandesti inkubointipuskurissa ja radioaktiivisuus, joka liittyy proteiini A - Sepharoseen mitattiin gammalaskijalla. Restriktioendonukleaasit ja muut entsyymit Restriktioentsyymit, T4-DNA-ligaasi ja Ba131 hankittiin BRL:stä ja käytettiin heidän suositustensa mukaisesti. Muut menetelmät mukaanä lukien DNA-tekniikat olivat oleellisesti tunnettuja (26).

17 Taulukko 1 E. colista pfroo1 eristettyjen fibronektiiniä sitovien proteiinien (87 ja 165 kd) aminohappokoostumusten ja luonnollisen S. aureus -lajista Newman eristetyn luontaisen FNBP:n (210 kd) vertailu. 5 Koostumus (mooli-%) Aminohappo 210 kda) 165 kd 87 kd ' asparagiinihappo/asparagiini 15,4 14,6 13,4 treoniini 9,7 10,7 10,3 seriini 7,4 6,5 8,0 glutamiinihappo/glutamiini 17,9 17,1 15,1 proliini 6,3 6,2 5,8 glysiini 8,9 7,9 8,4 alaniini 5,3 4,6 4,7 puoli-kystiini 0,1 0,2 n.d. valiini 7,2 7,8 8,6 metioniini 0,6 0,6 n.d. isoleusiini 4,3 4,7 3,8 leusiini 4,1 4,0 4,6 tyrosiini 2,1 2,3 4,1 fenyylialaniini 2,4 2,0 3,6 histidiini 1,0 3,2 3,0 lysiini 5,3 6,3 6,6 tryptofaani n.d. n.d. n.d. arginiini 1,9 1,2 a) Fröman et al.:sta (1987), (12).0 n.d = ei määritetty.. Esillä olevaa fibronektiiniä sitovaa proteiinia voidaan käyttää immunointiin, jolloin ;' proteiini, edullisesti yhdistelmänä fuusioproteiinin kanssa suuren antigeenivasteen.... luomiseksi, injektoidaan annoksina, jotka aiheuttavat immuunireaktion isäntänisäk- käässä. Täten fibronektiiniä sitovaa proteiinia voidaan käyttää märehtijöiden rokot- : tamiseen stafylokokki-infektioiden aiheuttamaa utaretulehdusta vastaan. Tämän kek-... sinnön fibronektiiniä sitova proteiini on osoittautunut muodostavan vasta-aineita 35 stafylokokkiperäistä nisätulehdusta vastaan hiirimallissa, kuten taulukossa on jäljempänä osoitettu.

18 Taulukko Kokeellinen hiiren nisätulehdus aiheutettiin S. aureus -lajilla SA 113(83A) annoksena 1,0x103 cfu. Immunointi arvioitiin käyttämällä 15 g proteiinia per hiiri fibronektiiniä sitovaa proteiinia, joka on ilmennetty E. colissa, joka sisältää plasmidia 5 pfro01, kuten tässä on identifioitu. 10 Hiiriryhmä Rokot. maitorauhasten määrä Vamman yhteistutkintatyyppi Tutkittujen Vamman mikroskooppinen tyyppi (%) (%) maitorauhasten määrä A B Cl C2 C3 15 Rokotetut (FNBP) Kontrolli : Nisätulehdus: +++ = voimakas; ++ = keskiasteinen; + = lieväasteinen; 0 = ei paljain silmin näkyviä muutoksia; A = yhdenmukaisesti ei-reaktiivinen, totaali nekroosi; B = pitkälle kehittyneitä re- e gressiivisiä muutoksia + lievä tulehdusreaktio; C 1 = levinnyt tulehdusreaktio + pai-. kallinen nekroosi; C2 = levinnyt tulehdusreaktio; C3 = paikallinen tulehdusreaktio; 25 0 = ei reaktiota. 1 Kuten edellä oleva taulukko osoittaa, yhdenmukainen immunointi saadaan aikaan käyttämällä FNBP:tä, joka on ilmennetty E. colilla, joka sisältää plasmidia FRO01. Lisäksi fibronektiiniä sitovaa proteiinia voidaan käyttää estämään avoimen ihohaavan infektio käsittelemällä haavaa käyttämällä fibronektiiniä sitovaa proteiinia suspensiossa. Täten fibronektiiniä sitovaa proteiinia voidaan käyttää haavojen hoitoon, esiin. proteiinireseptorien suojastukseen tai immunointiin (rokotus). Jälkimmäisessä tapauksessa isännän ruumis tuottaa spesifisiä vasta-aineita, jotka voivat suojella sitä bakteerilajien invaasiolta, jotka käsittävät tällaista fibronektiiniä sitovaa proteiinia.

19 Täten vasta-aineet estävät bakteerilajien kiinnittymisen vahingoittuneeseen kudokseen. Esimerkkejä kudosvammojen kolonisoinnista ovat: a) ihohaavojen ja sidekudosten kolonisointi, jotka haavat johtuvat mekaanisista 5 vammoista, kemiallisista vammoista ja/tai kuumuudesta johtuvista vammoista; b) limakalvojen haavojen kolonisoinnista, kuten suuontelon, tai maitorauhasten, virtsaputken tai emättimen limakalvojen haavat; c) sidekudosproteiinien kolonisoinnista, jotka sidekudokset ovat altistuneet minimaalisille vammoille (vähäpätöinen vamma) yhteydessä epiteeliin ja endoteeliin 10 (nisätulehdus, sydänläpän infektio, lonkanvaihtokirurgia). Jos esillä olevaa FNBP:tä tai 38 aminohappopolypeptidiä käytetään nisäkkäiden, ihminen mukaan luettuna, immunointitarkoitukseen (rokotus), proteiini tai polypeptidi dispergoidaan steriiliin isotoniseen suolaliuokseen samalla kun optionaalisesti lisätään farmaseuttisesti hyväksyttävää dispergointiainetta. Lisäksi voidaan 15 käyttää erityyppisiä apuaineita kudokseen vapautumisen pitkittämiseksi ja siten proteiinin tai polypeptidin altistamiseksi pitemmäksi aikaa kehon immuunipuolustusjärjestelmälle... Sopiva annostus immunoinnin aikaansaamiseksi on 0,5-5 gg FNBP:tä tai polypep-. tidiä per ruuminpainokilo ja immunointi-injektio. Kestävän immunoinnin aikaan- :: 20 saamiseksi rokotus pitää suorittaa useamman kuin yhden peräkkäisen kerran 1-3 viikon aikana, edullisesti 3 kertaa. : : : Jos esillä olevaa FNBP:tä tai polypeptidiä käytetään ulkoisesti paikallisesti, proteiini : dispergoidaan isotoniseen suolaliuokseen gg/1 pitoisuuteen. Haavoja käsitellään sitten vain sellaisella määrällä, joka kostuttaa täydellisesti haavan pinnan Keskimäärin käytetään haavoihin vain muutama millilitra liuosta tällä tavoin. Kä-. sittelyn käyttämällä proteiiniliuosta jälkeen haavat pestään soveltuvasti isotonisella suola- tai muulla sopivalla haavanhoitoliuoksella. 1 Lisäksi keksinnön mukaista fibronektiiniä sitovaa polypeptidiä samaten kuin mini-. maalista fibronektiiniä sitovaa paikkapolypeptidiä voidaan käyttää stafylokokkilajien 30 aiheuttamien bakteeri-infektioiden diagnosointiin, jolloin esillä olevan keksinnön.. mukainen fibronektiiniä sitova proteiini immobilisoidaan kiinteällä kantoaineella, kuten pienet lateksi- tai Sepharose -palloset, minkä jälkeen seerumien, jotka sisäl-

20 tävät vasta-aineita, annetaan läpäistä ja reagoida FNBP:n kanssa, jolloin FNBP immobilisoituu. Agglutinaatio mitataan sitten tunnetuilla menetelmillä. Lisäksi FNBP:tä tai polypeptidiä voidaan käyttää ELISA-testissä (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay; E. Engvall, Med. Biol. 55, 193, (1977)). Polystyreenimik- 5 rotiitterilevyn kolot peitettiin FNBP:llä ja inkuboitiin yön yli 4 C:ssa. Levyt pestiin sitten perusteellisesti käyttämällä PBS:ää, joka sisältää 0,05 % TWEEN 20, ja kuivattiin. Potilaan seerumin sarjalaimennos tehtiin PBS-Tweenissä, lisättiin koloihin ja inkuboitiin 30 C:ssa 1,5 tuntia. Huuhtelun jälkeen antihumaani-igg:tä, joka oli konjugoitu entsyymiin, tai antinaudan-igg:tä, joka oli konjugoitu entsyymiin, 10 vastaavasti, piparjuuriperoksidaasia tai alkalista fosfataasia lisättiin koloihin ja inkuboitiin 30 C:ssa 1,5 tuntia, kunnes IgG oli sitoutunut siihen ja huuhtelemisen jälkeen lisättiin entsyymialusta, alkalisen fosfataasin tapauksessa p-nitrofosfaattia tai peroksidaasin ollessa kyseessä lisättiin ortofenyleenidiamiinisubstraattia (OPD) vastaavasti. Levyt, jotka käsittivät koloja, huuhdeltiin sitten käyttämällä sitraatti- 15 puskuria, joka sisältää 0,055 % OPD ja 0,005 % H202, ja inkuboitiin 30 C:ssa 10 min. Entsyymireaktio pysäytettiin lisäämällä H202:n 4 N liuosta kuhunkin koloon. Värinkehitys mitattiin käyttämällä spektrofotometria. Käytetystä entsyymialustasta riippuen voidaan käyttää yhtä hyvin fluorointimittausta. ' : 20 Toinen menetelmä stafylokki-infektioiden diagnoimiseksi on käyttää DNA-geenikoetinmenetelmää, joka perustuu FNBP-sekvenssiin tai 38 aminohappopolypeptidi- ' sekvenssiin. Tällöin luonnollinen tai synteettinen DNA-sekvenssi kiinnitetään kiin- II.. teään kantojaan, kuten edellä mainittu polystyreenilevy, esim lisäämällä maitoa pin-. nalle nisätulehdusta diagnosoitaessa. DNA-geenikoetin, joka on merkitty optionaa lisesti entsymaattisesti tai radioaktiivisella isotoopilla, lisätään sitten kiinteään oikot : : tasoon, joka käsittää DNA-sekvenssin, jolloin DNA-geenikoetin kiinnittyy sekvens- siin, jossa se on. Entsyymi tai radioaktiivinen isotooppi voidaan sitten helposti. määritellä tunnetuilla menetelmillä.. :. Edellä oleva termi "fibronektiiniä sitova proteiini" käsittää minkä tahansa 38 ami-. 30 nohappopolypeptidisekvenssin samoin kuin sen, jossa 38 aminohappopolypeptidi- sekvenssi muodostaa täydellisen proteiinin minimaalisen fibronektiiniä sitovan pai- : : : kan.

21 Viitteet Beachey, E.H. and Simpson, W.A(1982). Infection 10, Bolivar, F., Rodriguez, R.L., Greene, P.J., Betlach, M.C., Heyneker, H:L., Boyer, H.W., Crosa, J.H. and Falkow, S. (1977). Gene, 2, Boyer, H.W. and Roulland - Dussoix, D. (1969). J. Mol.Biol: 41, Courtney, H.S., Ofek,I-, Simpson, W.A.,.Hasty,...D.L. and Beachey, E.H. (1986). Infect. Immun. 53, Espersen, F. and Clemmensen, I. (1982). Infect. Immun. 37, Fröman, G., Switalski, L.M., Guss, B., Lindberg, M., Höök, 15 M. and Wadström, T. (1986) In Lark, D.L. ed. Protein-Car- bohydrate Interactions in Biological Systems. Academic Press, London, pp Fröman, G., Switalski, L.M., Speziale, P. and Hook, M. (1987) in press. J. Biol. Chem Hunter, W.M. (1978) Radioimmunoassay. In: Wier, K.M. ed. Handbook of Experimental Immunology. London Slackwell Hynes, R.O. (1985) Annu. Rev. Cell Biol. 1, Hynes, R.O. (1986) Sci. Ann. 254, , Kuusela, P. (1978) Nature 276, Lowry, 0.H., Rosebrough, N.J., Farr, A.L. and Randall, :.: R.J., Biol. -Chem. 193, 265= Löfdahl, S., Guss 8., Uhlen, M., Philipson, L. and lind- 1:: berg, M. (1983) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80, Maniatis, T., Fritsch, E.F. and Sambrok, J. (1982). Mole- cular cloning: a Laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York. 23. March, S.C., Parikh, I. and Cuatrecasas, P. (1974). Ana- lyt. Biochem. 60, , Maxam, A.M. and Gilbert, W., (1977),.Prcc. Natl. Acad. Sci., 1JSA, 74, Merrifield, K.B., J. Am. Chem. Soc., 86, oo.30 4, (1964) 19. Mess'in2, J. and Carlsson, J. (1984). J. Biotechnol. 1,

22 Miekka, S.I., Ingham, K.C. and Menache, D. (1982). Thromb Res. 27, Nilsson, B., Abrahamsdn, L. and Uhlen, M. (1985). EMBO J. 4, Nilsson, B., Moks, T., Jansson, B., Abrahamsen, L., Elm- blad, A., Holmgren, E., Henrichson, L., Jones, T.A. and Uhlen, M. (1986). Protein Engineering, In press. 21. Norrander, J., Kempe, T. and Messing, J: (1983). Gene, 26, Nossal, N.G. and Heppel, L.A. (1965). J. Biol. Chem. 241, Ruoslahti, E. and Pierschbacher, M.D. (1986). Cell, 44, Ryden, C., Rubin, K., Speziale, P., Höök, M., Lindberg, 15 M. and Wadström, T. (1983), J. Biol. Chem. 258, Wadström, T., Switalski, L., Spezi -ale, P., Rubin, K., Ryden, C., Fröman, G., Faris, A., Lindberg, M., Höök, M., (1985), In Jackson, G.J. (ed), Pathogenesis of Infection. Springer Verlag, Berlin, Heidelberg, New York, Tokyo, , 4. Woods, A., Couchman, J.R., Johansson, S., and Höök, M. (1986), EMBO J. 5, Yamada, K.M. (1983), Annu. Rev. Biochem. 52, :

23 Patenttivaatimukset Hybridi-DNA-molekyyli, tunnettu siitä, että se käsittää yhden tai useamman seuraavista nukleotidisekvensseistä: GGC CAA AAT AGC GGT AAC CAG TCA TTC GAG GAA GAC ACA GAA GAA 5 GAC AAA CCT AAA TAT GAA CAA GGT GGC AAT ATC GTA GAT ATC GAT TTT GAT AGT GTA CCT CAA ATT CAT GGT CAA AAT AAA GGT AAT CAG TCA TTC GAG GAA GAT ACA GAA AAA GAC AAA CCT AAG TAT GAA CAT GGC GGT AAC ATC ATT GAT ATC GAC TTC GAC AGT GTG CCA CAT ATT CAC 10 GGA TTC AAT AAG CAC ACT GAA ATT ATT GAA GAA GAT ACA AAT AAA GAT AAA CCA AGT TAT CAA TTC GGT GGA CAC AAT AGT GTT GAC TTT GAA GAA GAT ACA CTT CCA AAA GTA 2. Menetelmä proteiinin valmistamiseksi, jolla on kyky sitoa fibronektiiniä, 15 tunnettu siitä, että viljellään patenttivaatimuksen 1 mukaisella hybridi-dna-molekyylillä transformoitua mikro-organismia, ja muodostunut proteiini eristetään. 3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että sanottua transformoitua mikro-organismia viljellään kasvua edistävässä väliaineessa, ja täten muodostunut proteiini eristetään affiniteettikromatografian avulla kolonnissa,.. 20 jossa fibronektiini on sitoutunut liukenemattomaan kantoaineeseen, mitä seuraa.. ioninvaihtokromatografia. 4. Plasmidi pfroo1 sisällytettynä E. coli -kantaan 259, jonka talletusnumero on DSM 4124.

24 Patentkrav Hybrid-DNA-molekyl, kännetecknad av att den omfattar en eller flera av följande nukleotidsekvenser: GGC CAA AAT AGC GGT AAC CAG TCA TTC GAG GAA GAC ACA GAA GAA 5 GAC AAA CCT AAA TAT GAA CAA GGT GGC AAT ATC GTA GAT ATC GAT TTT GAT AGT GTA CCT CAA ATT CAT GGT CAA AAT AAA GGT AAT CAG TCA TTC GAG GAA GAT ACA GAA AAA GAC AAA CCT AAG TAT GAA CAT GGC GGT AAC ATC ATT GAT ATC GAC TTC GAC AGT GTG CCA CAT ATT CAC 10 GGA TTC AAT AAG CAC ACT GAA ATT ATT GAA GAA GAT ACA AAT AAA GAT AAA CCA AGT TAT CAA TTC GGT GGA CAC AAT AGT GTT GAC TTT GAA GAA GAT ACA CTT CCA AAA GTA 2. Förfarande för framställning av protein som förmår binda fibronektin, kän- 15 netecknat av att man utför odling med en mikroorganism transformerad med hybrid-dna-molekylen enligt patentkrav 1, och proteinet som bildas isoleras. 3. Förfarande enligt patentkrav 2, kännetecknat av att nämnda transformerade mikroorganism odlas i ett växtfrämjande medium, och det protein som sålunda bildas isoleras med affinitetskromatografi i en kolonn, i vilken fibronektinet bun- : 20 dits vid en olöslig bärare, varefter följer jonutbyteskromatografi. 4. Plasmid pfroo1 ingående i E. coli-stammen 259, vars depositionsnummer är DSM 4124.

111111111111111111 II IIII II II 11111111111111111111

111111111111111111 II IIII II II 11111111111111111111 111111111111111111 II IIII II II 11111111111111111111 F10008 (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSICRIFT (10) FI B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.04.1999 (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 SUOMI-FINLAND (FI)

Lisätiedot

( II ) ( 1 1 ) KUULUTUSJULKA I SU. UTLAGGN I NG S SKR I FT C ( " r) (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5. (24) Alkupäivä - Löpdag 30.05.85

( II ) ( 1 1 ) KUULUTUSJULKA I SU. UTLAGGN I NG S SKR I FT C (  r) (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5. (24) Alkupäivä - Löpdag 30.05.85 ( II ) ( 1 1 ) KUULUTUSJULKA I SU UTLAGGN I NG S SKR I FT C ( " r) (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5. 84431 A 61K 39/02, C 07K 15/04, C 12P 21/00 (21) Patenttihakemus - Patentansökning 860417 SUOMI-FINLAND (FI)

Lisätiedot

(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT. - (51) Kv.lk.4 "-' A 61K 39/12. (24) Alkupäivä Löpdag 01.06.84

(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT. - (51) Kv.lk.4 -' A 61K 39/12. (24) Alkupäivä Löpdag 01.06.84 (B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT C (45) PAÖntti Myörinetty Paten't - beviljats - (51) Kv.lk.4 "-' A 61K 39/12 (21) Patenttihakemus Patentansökning 842215 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus

Lisätiedot

lpar1 IPB004065, IPB002277, and IPB Restriction Enyzme Differences from REBASE Gained in Variant Lost from Reference

lpar1 IPB004065, IPB002277, and IPB Restriction Enyzme Differences from REBASE Gained in Variant Lost from Reference lpar1 IPB465, IPB2277, and IPB5385 Genomic Sequence Coding Sequence For help interpreting these results, view the PARSENP Introduction page. # View On Sequence Nucleotide Change Effect Restriction Enyzme

Lisätiedot

111111111 1111 11111! 11 0 1111(111 11101113111111 1 11 11111111111111111

111111111 1111 11111! 11 0 1111(111 11101113111111 1 11 11111111111111111 111111111 1111 11111! 11 0 1111(111 11101113111111 1 11 11111111111111111 (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.07.1999 SUOMI-FINLAND (FI) (51) Kv.lk.6

Lisätiedot

VASTAUS 1: Yhdistä oikein

VASTAUS 1: Yhdistä oikein KPL3 VASTAUS 1: Yhdistä oikein a) haploidi - V) ihmisen sukusolu b) diploidi - IV) ihmisen somaattinen solu c) polyploidi - VI) 5n d) iturata - III) sukusolujen muodostama solulinja sukupolvesta toiseen

Lisätiedot

Peptidi ---- F ----- K ----- V ----- R ----- H ----- A ---- A. Siirtäjä-RNA:n (trna:n) (3 ) AAG UUC CAC GCA GUG CGU (5 ) antikodonit

Peptidi ---- F ----- K ----- V ----- R ----- H ----- A ---- A. Siirtäjä-RNA:n (trna:n) (3 ) AAG UUC CAC GCA GUG CGU (5 ) antikodonit Helsingin yliopisto/tampereen yliopisto Henkilötunnus - Biokemian/bioteknologian valintakoe Sukunimi 24.5.2006 Etunimet Tehtävä 3 Pisteet / 20 Osa 1: Haluat selvittää -- F -- K -- V -- R -- H -- A peptidiä

Lisätiedot

I1111111 111111111IlIl 11111111111111111111181111111111i

I1111111 111111111IlIl 11111111111111111111181111111111i I1111111 111111111IlIl 11111111111111111111181111111111i F I00008 111111 il I I Ill (B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 91688. L.-*, 1.-Lu-..IC " _ b./ n * I. - A I... I. 1. n!. : :,.:. (17) :-

Lisätiedot

Peptidisynteesi. SPPS:n Periaate

Peptidisynteesi. SPPS:n Periaate Tapio Nevalainen Lääkeainesynteesit II 2011 eptidisynteesi i eptidisynteesi Suoritetaan yleensä kiinteän faasin pinnalla; solid phase peptide synthesis (SS) Suuret peptidiainemäärät valmistetaan liuosfaasissa.

Lisätiedot

PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT FI 109029 B. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.05.2002. (51) Kv.lk.7 - Int.k1.7

PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT FI 109029 B. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.05.2002. (51) Kv.lk.7 - Int.k1.7 II UR IMI ii II F I 0001 09029B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 109029 B SUOMI - FINLAND (FI) (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.05.2002 (51) Kv.lk.7 - Int.k1.7 CO7K 14/00, C12N 15/31,

Lisätiedot

Pihkauutteen mikrobiologiaa

Pihkauutteen mikrobiologiaa Pihkauutteen mikrobiologiaa 1. Taustaa Lapin ammattiopiston toimeksiannosta tutkittiin pihka / kasvisöljyseoksen antimikrobista tehoa. 2. Tutkimusmenetelmä Antimikrobinen teho arvioitiin sovelletulla agardiffuusiomenetelmällä

Lisätiedot

VALMISTEYHTEENVETO 1. LÄÄKEVALMISTEEN NIMI. Vaminolac infuusioneste 2. VAIKUTTAVAT AINEET JA NIIDEN MÄÄRÄT ml sisältää:

VALMISTEYHTEENVETO 1. LÄÄKEVALMISTEEN NIMI. Vaminolac infuusioneste 2. VAIKUTTAVAT AINEET JA NIIDEN MÄÄRÄT ml sisältää: VALMISTEYHTEENVETO 1. LÄÄKEVALMISTEEN NIMI Vaminolac infuusioneste 2. VAIKUTTAVAT AINEET JA NIIDEN MÄÄRÄT 1 000 ml sisältää: Vaikuttavat aineet Alaniini Arginiini Asparagiinihappo Kysteiini (+ kystiini)

Lisätiedot

Biokemian labrameiningit I harjoitustyöosuus. Arne Raasakka, 20.10.2007 Työ suoritettu: 12. 13.10.2007 arne.raasakka@oulu.fi

Biokemian labrameiningit I harjoitustyöosuus. Arne Raasakka, 20.10.2007 Työ suoritettu: 12. 13.10.2007 arne.raasakka@oulu.fi Työ 1. Rekömbinanttipröteiinin puhdistaminen Ni-NTA affiniteettikrömatögrafialla seka pröteiinin mölekyylipainön ma a ritys elektröföreesilla ja geelisuödatuskrömatögrafialla Biokemian labrameiningit I

Lisätiedot

KUULUTUSJULKAISU r 7. Patentti MY'jnr1.2'_ ty 10 Cl 193 (45) 1i. (go) KvA?mit.a3. (21) Patenttlhakemus Patemensökning (n) HaltemispIllvi AmoöknIquelag

KUULUTUSJULKAISU r 7. Patentti MY'jnr1.2'_ ty 10 Cl 193 (45) 1i. (go) KvA?mit.a3. (21) Patenttlhakemus Patemensökning (n) HaltemispIllvi AmoöknIquelag SUOMI FINLAND (F I) Patentti- ja rekisterihallitus Patent- och registerstyreisen (B]. KUULUTUSJULKAISU r 7 C UTLAGGNINGSSKRIFT 0 Patentti MY'jnr1.2'_ ty 10 Cl 193 (45) 1i (go) KvA?mit.a3 (21) Patenttlhakemus

Lisätiedot

Biokemian menetelmät I kurssi, työselostukset, kevät 2016.

Biokemian menetelmät I kurssi, työselostukset, kevät 2016. Biokemian menetelmät I kurssi, työselostukset, kevät 2016. DEADLINET: työselostus tulostettuna paperille Työ 3: To 24.3.2016 klo 15:00 KE1132:n palautuspiste tai BMTK:n Työ 2: Pe 1.4.2016 klo 16:00 KE1132:n

Lisätiedot

Geenitekniikan perusmenetelmät

Geenitekniikan perusmenetelmät Loppukurssikoe To klo 14-16 2 osiota: monivalintatehtäväosio ja kirjallinen osio, jossa vastataan kahteen kysymykseen viidestä. Koe on auki klo 14.05-16. Voit tehdä sen oppitunnilla, jolloin saat tarvittaessa

Lisätiedot

Bioteknologian tutkinto-ohjelma Valintakoe Tehtävä 3 Pisteet / 30

Bioteknologian tutkinto-ohjelma Valintakoe Tehtävä 3 Pisteet / 30 Tampereen yliopisto Bioteknologian tutkinto-ohjelma Valintakoe 21.5.2015 Henkilötunnus - Sukunimi Etunimet Tehtävä 3 Pisteet / 30 3. a) Alla on lyhyt jakso dsdna:ta, joka koodaa muutaman aminohappotähteen

Lisätiedot

Pihkauutteen mikrobiologiaa. Perusselvitys pihkajalosteen antimikrobisista ominaisuuksista

Pihkauutteen mikrobiologiaa. Perusselvitys pihkajalosteen antimikrobisista ominaisuuksista Pihkauutteen mikrobiologiaa Perusselvitys pihkajalosteen antimikrobisista ominaisuuksista Rainer Peltola Täsmätietoa Lapin luonnontuotteista maakunnalle 2016 Pihkauutteen mikrobiologiaa Perusselvitys

Lisätiedot

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTS1CRIFT (10) FI 100723 B. (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 C 12N 9/50, 15/57, C 12P 21/00

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTS1CRIFT (10) FI 100723 B. (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 C 12N 9/50, 15/57, C 12P 21/00 11111111 Ili F 1000B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTS1CRIFT (10) FI B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 13.02.98 (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus Patent-

Lisätiedot

Nimi sosiaaliturvatunnus. Vastaa lyhyesti, selkeällä käsialalla. Vain vastausruudun sisällä olevat tekstit, kuvat jne huomioidaan

Nimi sosiaaliturvatunnus. Vastaa lyhyesti, selkeällä käsialalla. Vain vastausruudun sisällä olevat tekstit, kuvat jne huomioidaan 1. a) Mitä tarkoitetaan biopolymeerilla? Mihin kolmeen ryhmään biopolymeerit voidaan jakaa? (1,5 p) Biopolymeerit ovat luonnossa esiintyviä / elävien solujen muodostamia polymeerejä / makromolekyylejä.

Lisätiedot

Genetiikan perusteiden harjoitustyöt

Genetiikan perusteiden harjoitustyöt Genetiikan perusteiden harjoitustyöt Molekyylien kloonaus ja siihen liittyvät taidot ja temput, osa 1 Restriktioentsyymit, elektroforeesi Moniste sivulta 24-: Geenien kloonaus CELL 491- Isolating, cloning,

Lisätiedot

(B) (11)KUULUTUBJULKAIBU. UTLAGGNINGSSKRIFT C (45) Patentea my;:,,l;v4 Patent. (51) Kv.lk.6 - Int.c1.6. (21) Patenttihakemus - Patentansökning 940684

(B) (11)KUULUTUBJULKAIBU. UTLAGGNINGSSKRIFT C (45) Patentea my;:,,l;v4 Patent. (51) Kv.lk.6 - Int.c1.6. (21) Patenttihakemus - Patentansökning 940684 (B) (11)KUULUTUBJULKAIBU UTLAGGNINGSSKRIFT C (45) Patentea my;:,,l;v4 Patent (51) Kv.lk.6 - Int.c1.6 C 07K 14/315, 16/12, A 61K 39/09 111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111

Lisätiedot

GEENITEKNIIKAN PERUSASIOITA

GEENITEKNIIKAN PERUSASIOITA GEENITEKNIIKAN PERUSASIOITA GEENITEKNIIKKKA ON BIOTEKNIIKAN OSA-ALUE! Biotekniikka tutkii ja kehittää elävien solujen, solun osien, biokemiallisten menetelmien sekä molekyylibiologian uusimpien menetelmien

Lisätiedot

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 106844 B. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 30.04.2001. (51) Kv.Ik.7 - Intk1.7

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 106844 B. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 30.04.2001. (51) Kv.Ik.7 - Intk1.7 11111111111111i111111 100 11(311111111,111i1111111111i 1111111 (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 106844 B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 30.04.2001 SUOMI - FINLAND (FI) (51) Kv.Ik.7

Lisätiedot

1. ELÄINLÄÄKEVALMISTEEN NIMI. AURIZON korvatipat, suspensio 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS

1. ELÄINLÄÄKEVALMISTEEN NIMI. AURIZON korvatipat, suspensio 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS VALMISTEYHTEENVETO 1. ELÄINLÄÄKEVALMISTEEN NIMI AURIZON korvatipat, suspensio 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS 1 ml valmistetta sisältää: Vaikuttavat aineet: Marbofloksasiini... 3,0 mg Klotrimatsoli...

Lisätiedot

11111111111111! 11,1!111111,1, 1 11! 1 111111 111111 111 1

11111111111111! 11,1!111111,1, 1 11! 1 111111 111111 111 1 11111111111111! 11,1!111111,1, 1 11! 1 111111 111111 111 1 (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSICRIFT (10) FI B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.01.1999 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus

Lisätiedot

Bioteknologian perustyökaluja

Bioteknologian perustyökaluja Bioteknologian perustyökaluja DNAn ja RNAn eristäminen helppoa. Puhdistaminen työlästä (DNA pestään lukuisilla liuottimilla). Myös lähetti-rnat voidaan eristää ja muuntaa virusten käänteiskopioijaentsyymin

Lisätiedot

10.9.2015 Pipetointi, sentrifugointi ja spektrofotometria

10.9.2015 Pipetointi, sentrifugointi ja spektrofotometria BIOKEMIAN MENETELMÄT I, SYKSY 2015 VASTAUKSET LUENTOMATERIAALIN TEHTÄVIIN: 10.9.2015 Pipetointi, sentrifugointi ja spektrofotometria Pesukoneen g-voimat: RCF (x g) = 1,119 10-5 (rpm)2 r = roottorin säde

Lisätiedot

Broilerivehnän viljelypäivä 2.2.2012 Essi Tuomola

Broilerivehnän viljelypäivä 2.2.2012 Essi Tuomola Hankeaika 10.10.2007-31.12.2012 Yhteistyössä: Siipikarjan tuottajat Broilerivehnän viljelypäivä 2.2.2012 Essi Tuomola Broilerin rehustuksen koostumus Valkuaisaineet Aminohapot Vehnän rehuarvo broilerille

Lisätiedot

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT 11111111 1 1111111 111,11111!1,11,1 1,11111!111!11111111111 1 11111111 F (10) FI 116838 B

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT 11111111 1 1111111 111,11111!1,11,1 1,11111!111!11111111111 1 11111111 F (10) FI 116838 B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT 11111111 1 1111111 111,11111!1,11,1 1,11111!111!11111111111 1 11111111 F (10) FI 116838 B SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERINALLITUS PATENT- OCH REGISTERSTYRELSEN

Lisätiedot

Eeva Seppänen ENDOTELIINI-1-FUUSIOPROTEIININ KLOONAAMINEN JA TUOTTAMINEN

Eeva Seppänen ENDOTELIINI-1-FUUSIOPROTEIININ KLOONAAMINEN JA TUOTTAMINEN Eeva Seppänen ENDOTELIINI-1-FUUSIOPROTEIININ KLOONAAMINEN JA TUOTTAMINEN ENDOTELIINI-1-FUUSIOPROTEIININ KLOONAAMINEN JA TUOTTAMINEN Eeva Seppänen Opinnäytetyö Syksy 2010 Laboratorioalan koulutusohjelma

Lisätiedot

5 LIUOKSEN PITOISUUS Lisätehtävät

5 LIUOKSEN PITOISUUS Lisätehtävät LIUOKSEN PITOISUUS Lisätehtävät Esimerkki 1. a) 100 ml:ssa suolaista merivettä on keskimäärin 2,7 g NaCl:a. Mikä on meriveden NaCl-pitoisuus ilmoitettuna molaarisuutena? b) Suolaisen meriveden MgCl 2 -pitoisuus

Lisätiedot

1. Nimeä kuvaan nuolien osoittamat reitit/tavat, joiden kautta haitalliset aineet voivat päästä elimistöön.

1. Nimeä kuvaan nuolien osoittamat reitit/tavat, joiden kautta haitalliset aineet voivat päästä elimistöön. KOTITEHTÄVÄ 1 Biokemian menetelmät I syksy 2015 Opiskelijanumero: Kotitehtäviä saa miettiä ryhminä, mutta jokainen opiskelija palauttaa oman itsenäisesti käsin kirjoitetun vastauksen tehtäviin. Kotitehtävästä

Lisätiedot

11111111111111 11 [II 1111

11111111111111 11 [II 1111 11111111111111 11 [II 1111 F (000101453B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTS1CRIFT (10) FI 101453 B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 30.06.98 (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 SUOMI-FINLAND (FI) A 61K 39/012,

Lisätiedot

Plasmidi-DNA:n eristys bakteerisoluista DNA:n geelielektroforeesi (Proteiinien geelielektroforeesi)

Plasmidi-DNA:n eristys bakteerisoluista DNA:n geelielektroforeesi (Proteiinien geelielektroforeesi) Plasmidi-DNA:n eristys bakteerisoluista DNA:n geelielektroforeesi (Proteiinien geelielektroforeesi) CHEM-A1310 Biotieteen perusteet Heli Viskari 2017 DNA-harjoitustöiden aikataulu, valitse yksi näistä

Lisätiedot

UTLAGGNINGSSKRIFT 93733 C (", 2C

UTLAGGNINGSSKRIFT 93733 C (, 2C 111111111111111111111111111 111111111111111111111111111 1 11111 111 111111 111 n000093733e3 (B) (11)KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 93733 C (", 2C (51) Kv.lk.6 - Int.c1.6 C 07K 14/315, 16/12, 1/36,

Lisätiedot

(B) (11) KUSJULKAISU UTLAGG NINGSSKRIFT. C t -1 n. (51) Kv.lk.5 Int.c1.5 A 61K 39/29, C 12N 7/08. (21) Patenttihakemus - Patentansökning 861966

(B) (11) KUSJULKAISU UTLAGG NINGSSKRIFT. C t -1 n. (51) Kv.lk.5 Int.c1.5 A 61K 39/29, C 12N 7/08. (21) Patenttihakemus - Patentansökning 861966 (B) (11) KUSJULKAISU UULUT UTLAGG NINGSSKRIFT 86376 C t -1 n. (51) Kv.lk.5 Int.c1.5 A 61K 39/29, C 12N 7/08 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus Patent- och registerstyrelsen (21) Patenttihakemus

Lisätiedot

1111111111!11,11)11111,11111111111191 1 111 111111 111 11111

1111111111!11,11)11111,11111111111191 1 111 111111 111 11111 1111111111!11,11)11111,11111111111191 1 111 111111 111 11111 (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 111384B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.07.2003 SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS

Lisätiedot

α-amylaasi α-amylaasin eristäminen syljestä ja spesifisen aktiivisuuden määritys. Johdanto Tärkkelys Oligosakkaridit Maltoosi + glukoosi

α-amylaasi α-amylaasin eristäminen syljestä ja spesifisen aktiivisuuden määritys. Johdanto Tärkkelys Oligosakkaridit Maltoosi + glukoosi n eristäminen syljestä ja spesifisen aktiivisuuden määritys. Johdanto Työssä eristetään ja puhdistetaan merkittävä ja laajalti käytetty teollisuusentsyymi syljestä. pilkkoo tärkkelystä ensin oligosakkarideiksi

Lisätiedot

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 117514 B. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.11.2006. (51) Kv.lk. - Int.kl.

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 117514 B. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.11.2006. (51) Kv.lk. - Int.kl. (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT III 11 1 1111 111111 1111111111 F 10001 17514B II (10) FI 117514 B SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS PATENT- OCH REGISTERSTYRELSEN (45) Patentti myönnetty

Lisätiedot

NaturaPura Ibérica Elokuu 10, 2009 Rua das Australias, No. 1 4705-322 Braga Portugali

NaturaPura Ibérica Elokuu 10, 2009 Rua das Australias, No. 1 4705-322 Braga Portugali NaturaPura Ibérica Elokuu 10, 2009 Rua das Australias, No. 1 4705-322 Braga Portugali VIITATEN: IN VITRO IHOÄRSYTTÄVYYSTESTAUSRAPORTTI Oheisena NaturaPuran toimittaman 100% puuvillakangasmateriaalin in

Lisätiedot

Original Elche antimicrobi TM desinfiointiaineen testaus Legionella lajeille

Original Elche antimicrobi TM desinfiointiaineen testaus Legionella lajeille Original Elche antimicrobi TM desinfiointiaineen testaus Legionella lajeille Tutkimusraportti 145606 10.3.2006 Sivu 1:6 Sisällysluettelo 1. YHTEYSTIEDOT... 3 2. TESTATTAVAT LEGIONELLA-LAJIT... 3 3. TESTAUSMENETELMÄT...

Lisätiedot

Reaktiosarjat

Reaktiosarjat Reaktiosarjat Usein haluttua tuotetta ei saada syntymään yhden kemiallisen reaktion lopputuotteena, vaan monen peräkkäisten reaktioiden kautta Tällöin edellisen reaktion lopputuote on seuraavan lähtöaine

Lisätiedot

Päähaku, molekyylibiotieteiden kandiohjelma Valintakoe klo

Päähaku, molekyylibiotieteiden kandiohjelma Valintakoe klo Päähaku, molekyylibiotieteiden kandiohjelma Valintakoe 26.4.2019 klo 9.00 13.00 Kirjoita henkilö- ja yhteystietosi tekstaamalla. Kirjoita nimesi latinalaisilla kirjaimilla (abcd...), älä esimerkiksi kyrillisillä

Lisätiedot

PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (12) FI 106564 B (10) (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 28.02.2001. (51) Kv.11c7 - Int. k1.

PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (12) FI 106564 B (10) (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 28.02.2001. (51) Kv.11c7 - Int. k1. (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 106564 B SUOMI - FINLAND (FI) (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 28.02.2001 (51) Kv.11c7 - Int. k1.7 C12N 15151, 7/00, A61K 39/29, GO1N 33/576 C120 1/70,

Lisätiedot

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) F11177898. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats. (51) Kv.lk. - Int.kl.

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) F11177898. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats. (51) Kv.lk. - Int.kl. (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT 1 1 10 111 (10) F18 (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 28.02.2007 SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS PATENT- OCH REGISTERSTYRELSEN (51) Kv.lk.

Lisätiedot

11111111111 1111111 1 111111 1111111 II 1111111111111 1111 F I 000103122B

11111111111 1111111 1 111111 1111111 II 1111111111111 1111 F I 000103122B 11111111111 1111111 1 111111 1111111 II 1111111111111 1111 F I 000B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 30.04.1999 (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 SUOMI-FINLAND

Lisätiedot

DNA:n informaation kulku, koostumus

DNA:n informaation kulku, koostumus DNA:n informaation kulku, koostumus KOOSTUMUS Elävien bio-organismien koostumus. Vety, hiili, happi ja typpi muodostavat yli 99% orgaanisten molekyylien rakenneosista. Biomolekyylit voidaan pääosin jakaa

Lisätiedot

111 111111!11, 1111111 1111111111p21111111111111i

111 111111!11, 1111111 1111111111p21111111111111i 111 111111!11, 1111111 1111111111p21111111111111i (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 105105 B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.06.2000 SUOMI - FINLAND (FI) (51) Kv.lk.7 - Int.kl.7

Lisätiedot

QIAsymphony DSP Circulating DNA Kit

QIAsymphony DSP Circulating DNA Kit QIAsymphony DSP Circulating DNA Kit Helmikuu 2017 Suorituskykyominaisuudet 937556 Sample to Insight Sisällysluettelo Suorituskykyominaisuudet... 4 Perussuorituskyky... 4 Ajon tarkkuus... 6 2 ml:n ja 4

Lisätiedot

GMO analytiikka Annikki Welling Kemian tutkimusyksikkö Evira

GMO analytiikka Annikki Welling Kemian tutkimusyksikkö Evira GMO analytiikka Annikki Welling Kemian tutkimusyksikkö Evira Millaisia GM kasvit ovat ja kuinka tätä käytetään hyväksi analytiikassa Aromaattisten aminohappojen biosynteesireitti kasvissa Kasvi tarvitsee

Lisätiedot

Sukunimi 26. 05. 2005 Etunimet Tehtävä 3 Pisteet / 20

Sukunimi 26. 05. 2005 Etunimet Tehtävä 3 Pisteet / 20 Helsingin yliopisto/tampereen yliopisto Henkilötunnus - Biokemian/bioteknologian valintakoe Sukunimi 26. 05. 2005 Etunimet Tehtävä 3 Pisteet / 20 3: Osa 1 Tumallisten solujen genomin toiminnassa sekä geenien

Lisätiedot

11 11111111 111 11111 11 1110111! 11 11191911 1 11111111 111 111111

11 11111111 111 11111 11 1110111! 11 11191911 1 11111111 111 111111 11 11111111 111 11111 11 1110111! 11 11191911 1 11111111 111 111111 (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 107515B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 31.08.2001 SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI-

Lisätiedot

SUOMI-FINLAND 0 KUULUTUSJULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFt43094

SUOMI-FINLAND 0 KUULUTUSJULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFt43094 SUOMI-FINLAND 0 KUULUTUSJULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFt Kv. lk./int. Cl. C 1 2 k 7/00 Lk./KI. 30 h 6 CO Patentti myönnetty 11 11971 Patent meddetat Patenttihakemus Patentansökning 2099/66 Hakemispkiivä Ansökningsdag

Lisätiedot

Mikrobiologisten tulosten laskeminen

Mikrobiologisten tulosten laskeminen Vastuuhenkilö Tuula Johansson Sivu/sivut 1 / 6 1 Pesäkkeiden laskeminen maljoilta 1.1 Yleistä Pesäkkeitä laskettaessa tarvittaessa apuna käytetään suurennuslasilla varustettua pesäkelaskijaa. Siihen kuuluu

Lisätiedot

b) Laske prosentteina, paljonko sydämen keskimääräinen teho muuttuu suhteessa tilanteeseen ennen saunomista. Käytä laskussa SI-yksiköitä.

b) Laske prosentteina, paljonko sydämen keskimääräinen teho muuttuu suhteessa tilanteeseen ennen saunomista. Käytä laskussa SI-yksiköitä. Lääketieteellisten alojen valintakokeen 009 esimerkkitehtäviä Tehtävä 4 8 pistettä Aineistossa mainitussa tutkimuksessa mukana olleilla suomalaisilla aikuisilla sydämen keskimääräinen minuuttitilavuus

Lisätiedot

Labqualitypäivät 04.02.10 Riitta Karttunen. HUSLAB, kl. Mikrobiologia Virologian ja immunologian osasto

Labqualitypäivät 04.02.10 Riitta Karttunen. HUSLAB, kl. Mikrobiologia Virologian ja immunologian osasto Syfiliksen laboratoriodiagnostiikka ato od ag ost a Labqualitypäivät 04.02.10 Riitta Karttunen HUSLAB, kl. Mikrobiologia Virologian ja immunologian osasto Aiheet suora bakteerin osoitus tai nukleiinihappotestiosoitus

Lisätiedot

111 11111111 III IIII 1111111111111 11 11111 II III III

111 11111111 III IIII 1111111111111 11 11111 II III III 111 11111111 III IIII 1111111111111 11 11111 II III III F I 000B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 30.06.2000 SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS

Lisätiedot

KOMISSION DIREKTIIVI 96/8/EY, annettu 26 päivänä helmikuuta 1996, laihdutukseen tarkoitetuista vähäenergiaisista elintarvikkeista

KOMISSION DIREKTIIVI 96/8/EY, annettu 26 päivänä helmikuuta 1996, laihdutukseen tarkoitetuista vähäenergiaisista elintarvikkeista N:o L 55/22 \ FI Euroopan yhteisöjen virallinen lehti 6. 3. 96 KOMISSION DIREKTIIVI 96/8/EY, annettu 26 päivänä helmikuuta 1996, laihdutukseen tarkoitetuista vähäenergiaisista elintarvikkeista (ETA:n kannalta

Lisätiedot

Inieilii!lim 111 1!!!mill

Inieilii!lim 111 1!!!mill Inieilii!lim 111 1!!!mill (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (1 0) FI B SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS PATENT- OCH REGISTERSTYRELSEN (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.11.2002

Lisätiedot

111111 1111111111 1111 111 11 II

111111 1111111111 1111 111 11 II 111111 1111111111 1111 111 11 II F I 000100169B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 100169 B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.10.97 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus

Lisätiedot

Vinkkejä opettajille ja odotetut tulokset SIVU 1

Vinkkejä opettajille ja odotetut tulokset SIVU 1 Vinkkejä opettajille ja odotetut tulokset SIVU 1 Konteksti palautetaan oppilaiden mieliin käymällä Osan 1 johdanto uudelleen läpi. Kysymysten 1 ja 2 tarkoituksena on arvioida ovatko oppilaat ymmärtäneet

Lisätiedot

Tarja Huhta. FUUSIOPROTEIINI Fc-ENDOSTATIININ TUOTTAMINEN NISÄKÄSSOLUSSA

Tarja Huhta. FUUSIOPROTEIINI Fc-ENDOSTATIININ TUOTTAMINEN NISÄKÄSSOLUSSA Tarja Huhta FUUSIOPROTEIINI Fc-ENDOSTATIININ TUOTTAMINEN NISÄKÄSSOLUSSA FUUSIOPROTEIINI Fc-ENDOSTATIININ TUOTTAMINEN NISÄKÄSSOLUSSA Tarja Huhta Opinnäytetyö Kevät 2012 Laboratorioalan koulutusohjelma Oulun

Lisätiedot

Nivelreuman serologiset testit: mitä ne kertovat? LT, apulaisylilääkäri Anna-Maija Haapala TAYS Laboratoriokeskus

Nivelreuman serologiset testit: mitä ne kertovat? LT, apulaisylilääkäri Anna-Maija Haapala TAYS Laboratoriokeskus Nivelreuman serologiset testit: mitä ne kertovat? LT, apulaisylilääkäri Anna-Maija Haapala TAYS Laboratoriokeskus Sisältö 1. Nivelreuma: etiologia, esiintyvyys, diagnostiikka 2. Nivelreuman serologiset

Lisätiedot

Valtuuskunnille toimitetaan oheisena asiakirja C(2017) 3664 final LIITTEET 1 2.

Valtuuskunnille toimitetaan oheisena asiakirja C(2017) 3664 final LIITTEET 1 2. Euroopan unionin neuvosto Bryssel, 6. kesäkuuta 2017 (OR. en) 10021/17 ADD 1 SAATE Lähettäjä: Saapunut: 2. kesäkuuta 2017 Vastaanottaja: DENLEG 47 AGRI 309 SAN 242 DELACT 91 Euroopan komission pääsihteerin

Lisätiedot

Injektioneste, suspensio. Vaaleanpunertava tai valkoinen neste, joka sisältää valkoista sakkaa. Sakka sekoittuu helposti ravisteltaessa.

Injektioneste, suspensio. Vaaleanpunertava tai valkoinen neste, joka sisältää valkoista sakkaa. Sakka sekoittuu helposti ravisteltaessa. 1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI Trilyme injektioneste, suspensio koirille 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS Yksi annos (1 ml) sisältää: Vaikuttavat aineet: Inaktivoitu Borrelia burgdorferi sensu lato: Borrelia

Lisätiedot

Euroopan unionin neuvosto Bryssel, 12. toukokuuta 2016 (OR. en)

Euroopan unionin neuvosto Bryssel, 12. toukokuuta 2016 (OR. en) Euroopan unionin neuvosto Bryssel, 12. toukokuuta 2016 (OR. en) 8540/16 ADD 1 REV 1 DENLEG 34 AGRI 222 SAN 162 SAATE Lähettäjä: Euroopan komissio Saapunut: 10. toukokuuta 2016 Vastaanottaja: Neuvoston

Lisätiedot

SUOIVII FINLAND (21) Patenttihakemus Patentansökning 883876

SUOIVII FINLAND (21) Patenttihakemus Patentansökning 883876 1111111 11111 1111 111111111111111111111111111111111111 F 10000B (B) (11)KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT C (45) Patentti myönnetty Patznt me1de1at 27 01 1997 (51) Kv.lk.6 - Int.c1.6 A 61K 39/09, C 12N

Lisätiedot

UTLAGGNINGSSKRIFT 86508 A 61K 39/104, 35/74 //(A 61K 39/104, C 12R 1:385) (32) (33) (31) Etuoikeus - Prioritet 24.06.

UTLAGGNINGSSKRIFT 86508 A 61K 39/104, 35/74 //(A 61K 39/104, C 12R 1:385) (32) (33) (31) Etuoikeus - Prioritet 24.06. (B) (11) ICUULUTUSJULICAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 86508 c ) (51) Kv.lk.5 Int.c1.5 1 A 61K 39/104, 35/74 //(A 61K 39/104, C 12R 1:385) (21)Patenttihakemus Patentansökning 872750 SUOMIFINLAND (FI) Patentti ja

Lisätiedot

Nimi sosiaaliturvatunnus. Vastaa lyhyesti, selkeällä käsialalla. Vain vastausruudun sisällä olevat tekstit, kuvat jne huomioidaan

Nimi sosiaaliturvatunnus. Vastaa lyhyesti, selkeällä käsialalla. Vain vastausruudun sisällä olevat tekstit, kuvat jne huomioidaan 1. a) Seoksen komponentit voidaan erotella toisistaan kromatografisilla menetelmillä. Mihin kromatografiset menetelmät perustuvat? (2p) Menetelmät perustuvat seoksen osasten erilaiseen sitoutumiseen paikallaan

Lisätiedot

SUOMI FINLAND (21) Patenttihakemus - Patentansökning 860015

SUOMI FINLAND (21) Patenttihakemus - Patentansökning 860015 111111111111111111111111111 1 111111111111111111 1 111111111111111111 1 111 F 0000B (B) (U)KUULUTUBJULKAIBU UTLAGGNINGSSKRIFT '''` Pat: - t :::13cl -J.t 27 C3 12:5 (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5 A 61K 39/00,

Lisätiedot

LABORATORIOTYÖ: AGAROOSIGEELIELEKTROFOREESI

LABORATORIOTYÖ: AGAROOSIGEELIELEKTROFOREESI LABORATORIOTYÖ: AGAROOSIGEELIELEKTROFOREESI Agaroosigeelielektroforeesi (AGE) on yksinkertainen ja tehokas menetelmä erikokoisten DNAjaksojen erottamiseen, tunnistamiseen ja puhdistamiseen. Eri valmistajien

Lisätiedot

KOMISSION ASETUS (EU) /, annettu , asetuksen (EY) N:o 847/2000 muuttamisesta vastaavanlaisen lääkkeen käsitteen määritelmän osalta

KOMISSION ASETUS (EU) /, annettu , asetuksen (EY) N:o 847/2000 muuttamisesta vastaavanlaisen lääkkeen käsitteen määritelmän osalta EUROOPAN KOMISSIO Bryssel 29.5.2018 C(2018) 3193 final KOMISSION ASETUS (EU) /, annettu 29.5.2018, asetuksen (EY) N:o 847/2000 muuttamisesta vastaavanlaisen lääkkeen käsitteen määritelmän osalta (ETA:n

Lisätiedot

GLUTEENIANALYTIIKKA KELIAKIAN KANNALTA. Viljateknologien Helmikollokvio Hartwall, Lahti 8.2.2008 Päivi Kanerva

GLUTEENIANALYTIIKKA KELIAKIAN KANNALTA. Viljateknologien Helmikollokvio Hartwall, Lahti 8.2.2008 Päivi Kanerva GLUTEENIANALYTIIKKA KELIAKIAN KANNALTA Viljateknologien Helmikollokvio Hartwall, Lahti 8.2.2008 Päivi Kanerva Gluteenittomuus Gluteenittomia tuotteita koskevan standardin on asettanut Codex Alimentarius

Lisätiedot

Sekvenssievoluutio ja fylogeniat

Sekvenssievoluutio ja fylogeniat Sekvenssievoluutio ja fylogeniat Miksi ja miten nukleotidikorvautumiset lasketaan havaittujen sekvenssierojen perusteella? -sekvenssien linjaus -mitä eroa on eroilla ja korvautumisilla - nukleotidikorvautumisten

Lisätiedot

Kehitysbiologiassa käytetään lukuisia viekkaita kuvantamismenetelmiä

Kehitysbiologiassa käytetään lukuisia viekkaita kuvantamismenetelmiä Kehitysbiologiassa käytetään lukuisia viekkaita kuvantamismenetelmiä Reportterigeenit ja reportterikonstruktiot? Monissa tilanteissa tarvitaan ilmaisinta (proobi, luotain, reportteri) kertomaan, mitä/missä/milloin

Lisätiedot

Tekijä Pitkä matematiikka On osoitettava, että jana DE sivun AB kanssa yhdensuuntainen ja sen pituus on 4 5

Tekijä Pitkä matematiikka On osoitettava, että jana DE sivun AB kanssa yhdensuuntainen ja sen pituus on 4 5 Tekijä Pitkä matematiikka 6..06 8 On osoitettava, että jana DE sivun AB kanssa yhdensuuntainen ja sen pituus on 5 sivun AB pituudesta. Pitää siis osoittaa, että DE = AB. 5 Muodostetaan vektori DE. DE =

Lisätiedot

Reseptoripotentiaalista (RP) aktiopotentiaaliin

Reseptoripotentiaalista (RP) aktiopotentiaaliin Haju- ja makuaisti Reseptoripotentiaalista (RP) aktiopotentiaaliin Reseptoristimulaatio lokaalinen sähköinen ärtyminen (melkein aina depolarisaatio) RP syntymekanismi vaihtelee aistimesta toiseen RP leviää

Lisätiedot

(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT A 61K 37/02, 39/145, C 12N 15/44. (22) Hakemispäivä - Ansökningsdag 29.08.85

(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT A 61K 37/02, 39/145, C 12N 15/44. (22) Hakemispäivä - Ansökningsdag 29.08.85 (B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 85811 C (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5 ' 10 C,1; A 61K 37/02, 39/145, C 12N 15/44 (21) Patenttihakemus - Patentansökning 853320 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus

Lisätiedot

VALMISTEYHTEENVETO 1. LÄÄKEVALMISTEEN NIMI. Aminoplasmal 16 N/l infuusioneste, liuos 2. VAIKUTTAVAT AINEET JA NIIDEN MÄÄRÄT. Infuusioneste sisältää:

VALMISTEYHTEENVETO 1. LÄÄKEVALMISTEEN NIMI. Aminoplasmal 16 N/l infuusioneste, liuos 2. VAIKUTTAVAT AINEET JA NIIDEN MÄÄRÄT. Infuusioneste sisältää: VALMISTEYHTEENVETO 1. LÄÄKEVALMISTEEN NIMI Aminoplasmal 16 N/l infuusioneste, liuos 2. VAIKUTTAVAT AINEET JA NIIDEN MÄÄRÄT Infuusioneste sisältää: Aminohapot: per 1 ml per 250 ml per 500 ml per 1000 ml

Lisätiedot

S UOM 1 FI N LAN D 0 KUULUTUSJULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFT 4 5 7 6 6

S UOM 1 FI N LAN D 0 KUULUTUSJULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFT 4 5 7 6 6 S UOM 1 FI N LAN D 0 KUULUTUSJULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFT 4 5 7 6 6 Kv. lk./int. Cl. C 12 k 5/00 (5:» Uc./KI. 30 h 6 Patentti myönnetty Patent meddelat 11 IX 1972 Patenttihakemus Patentansökning 547 /6 9

Lisätiedot

Seuraavat E.coli antigeenit. 16 HA yksikköä. 50 HA yksikköä 987P 0,15 µg LTB 0,1 µg (HA = hemagglutiini)

Seuraavat E.coli antigeenit. 16 HA yksikköä. 50 HA yksikköä 987P 0,15 µg LTB 0,1 µg (HA = hemagglutiini) VALMISTEYHTEENVETO 1 ELÄINLÄÄKEVALMISTEEN KAUPPANIMI COLISORB vet. 2 VAIKUTTAVAT AINEET JA APUAINEET JA NIIDEN MÄÄRÄT Kvantitatiivinen koostumus Vaikuttavat aineet Seuraavat E.coli antigeenit vähintään

Lisätiedot

EPH-RESEPTORIN KLOONAUS, TUOTTO JA PUHDISTUS HYÖNTEISSOLUSTA

EPH-RESEPTORIN KLOONAUS, TUOTTO JA PUHDISTUS HYÖNTEISSOLUSTA Eph- reseptorin kloonaus, tuotto ja puhdistus hyönteissoluista Bio- ja Elintarviketekniikka Biotekniikka 2012 Shevin Mamandi EPH-RESEPTORIN KLOONAUS, TUOTTO JA PUHDISTUS HYÖNTEISSOLUSTA OPINNÄYTETYÖ (AMK)

Lisätiedot

Syöpä. Ihmisen keho muodostuu miljardeista soluista. Vaikka. EGF-kasvutekijä. reseptori. tuma. dna

Syöpä. Ihmisen keho muodostuu miljardeista soluista. Vaikka. EGF-kasvutekijä. reseptori. tuma. dna Ihmisen keho muodostuu miljardeista soluista. Vaikka nämä solut ovat tietyssä mielessä meidän omiamme, ne polveutuvat itsenäisistä yksisoluisista elämänmuodoista, jotka ovat säilyttäneet monia itsenäisen

Lisätiedot

VALMISTEYHTEENVETO. Valmistetta käytetään seuraavien loisten häätämiseen naudalla, porolla ja sialla:

VALMISTEYHTEENVETO. Valmistetta käytetään seuraavien loisten häätämiseen naudalla, porolla ja sialla: VALMISTEYHTEENVETO 1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI Bimectin vet 10 mg/ml injektioneste, liuos 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS Vaikuttava aine: 1 ml sisältää: ivermektiiniä 10 mg Täydellinen apuaineluettelo,

Lisätiedot

Vastaanottaja Ramboll Finland Niko Rissanen Asiakirjatyyppi Nitrifikaation ja hapenkulutuksen inhibitio - Tutkimusraportti Päivämäärä 22.2.2016 Viite 1510025001 KUUSAKOSKI OY RAJAVUOREN KAATO- PAIKKAVEDEN

Lisätiedot

Sikojen uusi energia- ja valkuaisarvojärjestelmä

Sikojen uusi energia- ja valkuaisarvojärjestelmä Sikojen uusi energia- ja valkuaisarvojärjestelmä Hilkka Siljander-Rasi MTT Kotieläintuotannon tutkimus Rehuarvoseminaari Helsinki 15.5.2014 20.5.2014 Nykyisessä sikojen energia-arvojärjestelmässä puutteita

Lisätiedot

Julkaistu Helsingissä 24 päivänä helmikuuta 2014. 141/2014 Maa- ja metsätalousministeriön asetus

Julkaistu Helsingissä 24 päivänä helmikuuta 2014. 141/2014 Maa- ja metsätalousministeriön asetus SUOMEN SÄÄDÖSKOKOELMA Julkaistu Helsingissä 24 päivänä helmikuuta 2014 141/2014 Maa- ja metsätalousministeriön asetus äidinmaidonkorvikkeesta ja vieroitusvalmisteesta annetun kauppa- ja teollisuusministeriön

Lisätiedot

Tenttipäivät. Tentti TI :30-17:30 1. uusinta MA :30-17:30 2. uusinta MA :30-17:30

Tenttipäivät. Tentti TI :30-17:30 1. uusinta MA :30-17:30 2. uusinta MA :30-17:30 Tenttipäivät Tentti TI 14.11. 14:30-17:30 1. uusinta MA 11.12. 14:30-17:30 2. uusinta MA 30.1.2018 14:30-17:30 Jos on joku iso päällekkäisyys (= tutkinnon pakollisen kurssin pakollinen läsnäolo, esimerkiksi

Lisätiedot

Taulukko 1. RespiFinder RG Panel -tuotteen toteamisraja puhdistus huomioiden (QIAamp MinElute Virus Spin -sarja) 10(0,40) TCID 50 /0,2 ml

Taulukko 1. RespiFinder RG Panel -tuotteen toteamisraja puhdistus huomioiden (QIAamp MinElute Virus Spin -sarja) 10(0,40) TCID 50 /0,2 ml RespiFinder RG Panel Suorituksen ominaispiirteet RespiFinder RG Panel, versio 1, 4692163 Tarkista ennen kokeen suorittamista uusien elektronisten etikettiversioiden saatavuus osoitteesta www.qiagen.com/p/respifinder-rg-panel-ce.

Lisätiedot

Geenisakset (CRISPR)- Geeniterapian vallankumousko? BMOL Juha Partanen

Geenisakset (CRISPR)- Geeniterapian vallankumousko? BMOL Juha Partanen Geenisakset (CRISPR)- Geeniterapian vallankumousko? BMOL 19.11.2016 Juha Partanen Geenisakset 2 2 N A T U R E V O L 5 2 2 4 J U N E 2 0 1 5 Sisältö Geenimuokkaus: historiallinen perspektiivi Geenisakset

Lisätiedot

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTS1CRIFT (10) FI B. (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 C 12N 9/50, 15/57, C 12P 21/00

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTS1CRIFT (10) FI B. (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 C 12N 9/50, 15/57, C 12P 21/00 11111111 Ili F 1000B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTS1CRIFT (10) FI B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 13.02.98 (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus Patent-

Lisätiedot

( B ) KUULUTUSJULKA I SUU UTLAGGNI NG S SKR I FT 81262. (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5 A 61K 39/10, C 07K 3/12. (21) Patenttihakemus - Patentansökning 851859

( B ) KUULUTUSJULKA I SUU UTLAGGNI NG S SKR I FT 81262. (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5 A 61K 39/10, C 07K 3/12. (21) Patenttihakemus - Patentansökning 851859 ( B ) KUULUTUSJULKA I SUU UTLAGGNI NG S SKR I FT 81262 C ) (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5 1 A 61K 39/10, C 07K 3/12 (21) Patenttihakemus - Patentansökning 851859 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus

Lisätiedot

(12) PATENTMULKAISU 111111111111111!!!!!!!linillie PATENTSKRIFT (10) FI 107620 B. (51) Kv.lk.7 - Intk1.7 C12Q 1168. (24) Alkupäivä - Löpdag 18.11.

(12) PATENTMULKAISU 111111111111111!!!!!!!linillie PATENTSKRIFT (10) FI 107620 B. (51) Kv.lk.7 - Intk1.7 C12Q 1168. (24) Alkupäivä - Löpdag 18.11. (12) PATENTMULKAISU 111111111111111!!!!!!!linillie PATENTSKRIFT (10) FI 107620 B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 14.09.2001 SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS PATENT- OCH REGISTERSTYRELSEN

Lisätiedot

(10) FI 116828 B. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.03.2006. (51) Kv.lk. - Int.kl. A61K 39/395 (2006.01) CO7K 16/24 (2006.

(10) FI 116828 B. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.03.2006. (51) Kv.lk. - Int.kl. A61K 39/395 (2006.01) CO7K 16/24 (2006. (12) PATENTTIJULKAISU 111111111111111111M1 111 R9 11111111111111 PATENTSKRIFT III (10) FI B SUOMI - FINLAND (FI) (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.03.2006 (51) Kv.lk. - Int.kl. A61K 39/395

Lisätiedot

Nimi sosiaaliturvatunnus. Vastaa lyhyesti, selkeällä käsialalla. Vain vastausruudun sisällä olevat tekstit, kuvat jne huomioidaan

Nimi sosiaaliturvatunnus. Vastaa lyhyesti, selkeällä käsialalla. Vain vastausruudun sisällä olevat tekstit, kuvat jne huomioidaan 1. Valitse listasta kunkin yhdisteen yleiskielessä käytettävä ei-systemaattinen nimi. (pisteet yht. 5p) a) C-vitamiini b) glukoosi c) etikkahappo d) salisyylihappo e) beta-karoteeni a. b. c. d. e. ksylitoli

Lisätiedot

PUTKIKAKSOISNIPPA MUSTA

PUTKIKAKSOISNIPPA MUSTA Takorauta Tuote LVI-numero Pikakoodi 0753007 RU33 KESKIRASKAS KESKIRASKAS KESKIRASKAS KESKIRASKAS KESKIRASKAS KESKIRASKAS KESKIRASKAS KESKIRASKAS DN 65 KESKIRASKAS 0 KESKIRASKAS 0 KESKIRASKAS SK/UK SK/UK

Lisätiedot

(12) PATENTTI JULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 101936 B. (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 A 61K 39/095, C 12N 15/31, 15/63, 1/20

(12) PATENTTI JULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 101936 B. (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 A 61K 39/095, C 12N 15/31, 15/63, 1/20 11111111111 111 111111111 111 11 11 1 1111111111111111111 1 F1000B (12) PATENTTI JULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 30.09.1998 (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 SUOMI-FINLAND

Lisätiedot

VALMISTEYHTEENVETO. Täydellisen parenteraalisen ravitsemuksen täydennyksenä vesiliukoisten vitamiinien päivittäisen tarpeen tyydyttämiseksi.

VALMISTEYHTEENVETO. Täydellisen parenteraalisen ravitsemuksen täydennyksenä vesiliukoisten vitamiinien päivittäisen tarpeen tyydyttämiseksi. VALMISTEYHTEENVETO 1. LÄÄKEVALMISTEEN NIMI Soluvit infuusiokuiva-aine, liuosta varten 2. VAIKUTTAVAT AINEET JA NIIDEN MÄÄRÄT Yksi Soluvit-injektiopullo sisältää: Yksi pullo sisältää vaikuttavia aineita:

Lisätiedot

(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 83667. (51) Kv.lk.5 - Int.cl.5 C 12N 5/18, A 61K 39/012. (21) Patenttihakemus - Patentansökning 843142

(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 83667. (51) Kv.lk.5 - Int.cl.5 C 12N 5/18, A 61K 39/012. (21) Patenttihakemus - Patentansökning 843142 (B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 83667 _. (51) Kv.lk.5 - Int.cl.5 C 12N 5/18, A 61K 39/012 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus Patent- och registerstyrelsen (21) Patenttihakemus

Lisätiedot