Pihkauutteen mikrobiologiaa. Perusselvitys pihkajalosteen antimikrobisista ominaisuuksista

Transkriptio

1 Pihkauutteen mikrobiologiaa Perusselvitys pihkajalosteen antimikrobisista ominaisuuksista Rainer Peltola Täsmätietoa Lapin luonnontuotteista maakunnalle 2016

2

3 Pihkauutteen mikrobiologiaa Perusselvitys pihkajalosteen antimikrobisista ominaisuuksista Sisällys TAUSTAA... 1 TUTKIMUSMENETELMÄ... 1 TULOKSET... 2 JOHTOPÄÄTÖKSET... 6 LÄHTEET... 6

4

5 1 Taustaa Lapin ammattiopiston toimeksiannosta tutkittiin pihka / kasvisöljyseoksen antimikrobista tehoa. Tutkimusmenetelmä Antimikrobinen teho arvioitiin sovelletulla agardiffuusiomenetelmällä 1, jossa kasvatusmaljalle olevalle kiinteälle kasvatusalustalle siirrostetaan tasainen mikrobikasvusto. Siirrostamisen jälkeen kasvatusalustaan tehdään kuoppa, johon lisätään tutkittava pihkan ja kasviöljyn seos. Mikrobikasvua ehkäisevä vaikutus näkyy kirkkaana alueena (=estokehä) kuopan ympärillä. Mallimikrobit Gram - positiiviset bakteerit o Staphylococcus aureus: Ihon ja limakalvojen normaalifloraan kuuluva bakteeri, joka voi kuitenkin aiheuttaa infektioita, mm. karvatupen tulehduksia, märkärupea ja ihonalaisen rasvakudoksen infektioita. o Staphylococcus epidermidis: Ihon ja limakalvojen normaalifloraan kuuluva bakteeri, joka voi kuitenkin aiheuttaa infektioita sairaalaoloissa erityisesti katetrien ja implanttien pintojen välityksellä. o Streptococcus pyogenes: Ihon ja limakalvojen normaalifloraan kuuluva bakteeri, joka voi kuitenkin aiheuttaa infektioita, mm. nieluinfektiota sekä ruusua ja märkärupea iholla. Gram negatiiviset bakteerit o Escherichia coli: Suoliston normaalifloraan kuuluva bakteeri, joka voi kuitenkin aiheuttaa maha-suolitulehduksia ja virtsateiden infektioita. o Pseudomonas aeruginosa: Hyvin kestävä bakteeri, joka infektoi tyypillisesti palovammoja. Eukaryoottiset mikrobit o Candida albicans: Hiiva, joka voi aiheuttaa ihoinfektioita etenkin kosteilla ihoalueilla (nivustaipeet, pakaravako, rintojen alustat, kainalot) sekä suupielissä ja kynsivalleissa. Mallimikrobit kasvatettiin kiinteillä kasvualustoilla yön yli, maljoille kasvaneesta mikrobimassasta valmistettiin suspensio 0.9 % (w/v) NaCl liuokseen. Suspensioiden sameus (=mikrobitiheys) vakioitiin tasolle A625 nm = 0,090 0,110. Suspensioita siirrostettiin dreijaamalla kasvatusmaljoille tasaisiksi kasvustoiksi. Maljoille tehtiin kasvatusalustaan kuoppa, joka täytettiin pihka / kasvisöljyseoksella (30 %). Maljoja inkuboitiin 35 o C:ssa 1 vrk, mikrobikasvu pihka/kasviöljyseoksen ympärillä tutkittiin silmämääräisesti.

6 2 Tulokset Mikrobikasvatusmaljoilla havaittiin estokehä seuraavilla mikrobeilla: Staphylococcus aureus (Kuva 1.) Staphylococcus epidermidis (Kuva 2.) Streptococcus pyogenes (Kuva 3.) Kuva 1. Staphylococcus aureus bakteerin kasvun (harmaa, tasainen massa maljalla) estyminen pihka / kasvisöljyseoksen läheisyydessä. Kasvun estyminen näkyy kirkkaina alueina seoksien (kellertävät täplät maljalla) läheisyydessä.

7 3 Kuva 2. Staphylococcus epidermidis bakteerin kasvun (harmaa, tasainen massa maljalla) estyminen pihka / kasvisöljyseoksen läheisyydessä. Kasvun estyminen näkyy kirkkaina alueina seoksien (kellertävät täplät maljalla) läheisyydessä Kuva 3. Streptococcus pyogenes bakteerin kasvun (harmaa, tasainen massa maljalla) estyminen pihka / kasvisöljyseoksen läheisyydessä. Kasvun estyminen näkyy kirkkaina alueina seoksien (kellertävät täplät maljalla) läheisyydessä

8 4 Mikrobikasvatusmaljoilla ei havaittu estokehää seuraavilla mikrobeilla: Escherichia coli (Kuva 4) Pseudomonas aeruginosa (Kuva 5) Candida albicans (Kuva 6) Kuva 4. Eschericia coli bakteerin kasvu (harmaa, tasainen massa maljalla) pihka / kasvisöljyseoksen läheisyydessä. Kasvun estymistä ei havaittu. Kuva 5. Pseudomonas aeruginosa bakteerin kasvu (harmaa, tasainen massa maljalla) pihka / kasvisöljyseoksen läheisyydessä. Kasvun estymistä ei havaittu.

9 Kuva 6. Candida albicans hiivan kasvu (harmaa, pilkuttainen massa maljalla) pihka / kasvisöljyseoksen läheisyydessä. Kasvun estymistä ei havaittu. 5

10 6 Johtopäätökset Pihka / kasvisöljyseoksen antimikrobinen vaikutus tutkituilla mikrobeilla on osittain varsin paikallinen mutta kuitenkin havaittava. Seos ehkäisi gram-positiivisten, mutta ei gram-negatiivisten bakteerien eikä hiivan kasvua. Tulos on samanlainen kuin aiemmissa tutkimuksissa 2. Lähteet (1) Clinical Laboratory Standards Institute Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests; Approved standard 9th ed. CLSI document M2-A9. 26:1. Clinical Laboratory Standards Institute, Wayne, PA. (2) Antibacterial effects of home-made resin salve from Norway Spruce (Picea abies). Rautio, M. Sipponen, A., Peltola, R. Lohi, J. Jokinen, J., Papp, A., Carlson, P., Sipponen, P Acta Pathologica, Microbiologica et Immunologica Scandinavica