!11, p i

Koko: px
Aloita esitys sivulta:

Download "111 111111!11, 1111111 1111111111p21111111111111i"

Transkriptio

1 !11, p i (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats SUOMI - FINLAND (FI) (51) Kv.lk.7 - Int.kl.7 C12N 15/48, 15/49, 15/37, 15/86, A61K 39/21, 48/00, CO7H 21/04, CO7K 14/155, 14/16, 14/025 (21) Patenttihakemus - Patentansökning PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS PATENT- OCH REGISTERSTYRELSEN (22) Hakemispäivä - Ansökningsdag (24) Alkupäiva - Löpdag (41) Tullut julkiseksi - Blivit offentlig (73) Haltija - Innehavare 1 Oy Finnish immunotechnology Ltd, Pirkankatu 1 A 7, Tampere, SUOMI - FINLAND, (FI) (72) Keksijä - Uppfinnare 1 Tähtinen,Marja, Välitie 24, Ruutana, SUOMI - FINLAND, (FI) 2 Peterson,Pärt, Kaskitie 13 F, Tampere, SUOMI - FINLAND, (FI) 3 Krohn,Kai, Salmentaantie 751, Salmentaka, SUOMI - FINLAND, (FI) 4 Ranki,Päivi Annamari, Salmentaantie 751, Salmentaka, SUOMI - FINLAND, (FI) (74) Asiamies - Ombud: Kolster Oy Ab Iso Roobertinkatu 23, Helsinki (54) Keksinnön nimitys - Uppfinningens benämning Itsereplikoiva DNA-vektori immunisoimiseksi HIV:tä vastaan Självreplikerande DNA-vektor för immunisering mot HIV (56) Viitejulkaisut - Anförda publikationer JP A (A 61 K 39/12, Okuda Kenji, Terumo Corp.), WO A 97/24451 (C 12N 15/86, Estonian Biocentre), Vaccine 15 (8), 1997, , Hinkula, J. et al., Scand. J. Immunol. 46 (4), 1997, , Asakura, Y. et al., Nucleic Acids Research 26 (5), 1998, , Touze, A. ja Coursaget, P., AIDS Research and Human Retroviruses 11 (11) 1995, , Blazevic, V. et al. (57) Tiivistelmä - Sammandrag HIV:n säätelyproteiinia NEF, REV tai TAT tai niiden immunologisesti aktiivista fragmenttia koodittava nukleotidisekvenssi sijoitetaan vektoriin, joka käsittää pitkäaikaisen säilymisen kannalta välttämättömiä ja riittäviä papilloomaviruksen nukleotidisekvenssejä. Tuloksena olevat vektorit ovat itsereplikoivia, ja niiden kopiolukumäärä on suuri. Ne ilmentävät HIV-geenejä suurina määrinä pitkäaikaisesti. Nämä vektorit herättävät sekä humoraalisen että soluvälitteisen immuunivasteen ja ovat siksi potentiaalisia HIV:n vastaisia DNA-immunisointirokotteita. Keksintö koskee mainittuja vektoreita ja rokotteita ja menetelmää näiden vektoreiden valmistamiseksi. Lisäksi keksintö koskee tätä vektoria käsittävää isäntäsolua, tämän vektorin käyttöä rokotteen valmistuksessa ja menetelmää HIV:n ehkäisemiseksi tai hoitamiseksi. En nukleotidsekvens, som kodar det regulatoriska HIVproteinet NEF, REV eller TAT eller ett immunologiskt aktivt fragment därav, införs i en vektor som innhåller nukleotidsekvenser från papillomavirus vilka är nödvändiga och tillräckliga för ett långt fortbestånd. De resulterande vektorema är självreplikerande och har ett högt antal kopior. De uttrycker HIV-genema i stora mängder under en lång tid. Vektorema väcker både ett humoralt och ett av celler förmedlat immunsvar och utgör därför potentiella DNAimmunisationsvaccin mot HIV. Uppfinningen riktar sig på nämnda vektorer och vacciner och på ett förfarande för framställning av vektorema. Uppfinningen berör ytterligare en värdcell som innehåller vektom, användning av vektom vid framställning av ett vaccin, och ett förfarande för att förhindra eller behandla HIV.

2 Itsereplikoiva DNA-vektori immunisoimiseksi HIV:ta vastaan Keksinnön alue Keksintö koskee itsereplikoivaa rekombinanttivektoria, joka on 5 käyttökelpoinen DNA-immunisoinnissa HIV:tä vastaan. Keksintö koskee myös mainittua vektoria käsittävää rokotetta, menetelmää vektorin valmistamiseksi ja sitä käsittävää isäntäsolua. Lisäksi keksintö koskee mainitun vektorin käyttöä HIV:n vastaisen rokotteen valmistamiseksi ja menetelmää HIV:n hoitamiseksi tai ehkäisemiseksi. 10 Keksinnön tausta Selkärankaisten ja siten myös ihmisten vuorovaikutusta patogeenisten mikrobien, kuten bakteereiden, sienten ja virusten, kanssa säätelee selkärankaisen elimistön kyky muodostaa immuunivaste elimistöön tunkeutuvaa mikrobia vastaan. Tämä reaktio perustuu immuunijärjestelmän kykyyn erottaa 15 toisistaan oma ja vieras; normaalitilanteessa immuunivaste sietää elimistön omia rakenteita, soluja ja antigeenisiä molekyylejä, samalla kun se hyökkää elimistöön tunkeutuvissa mikrobeissa esiintyviä vieraita antigeenejä vastaan. Kun selkärankainen, kuten ihminen, saa mikrobi-infektion, immuunivaste auttaa selviytymään infektiosta tappamalla mikrobeja tai mikrobien infektoimia 20 soluja tai estämällä infektion leviämisen vaarattomaksi tekevien vasta-aineiden toiminnan kautta. Toisaalta, ja mikä on tärkeämpää, tunkeutuvaa organismia vastaan kerran syntyneellä immuunivasteella on luontainen muistimekanismi, ja siten yksilö, joka on kerran käynyt läpi jonkin määrätyn mikrobi-infektion, on usein immuuni eikä voi saada infektiota toista kertaa. 25 Tämä immunologinen muisti, jonka aiheuttaa luonnollisessa tilanteessa infektio, on perustana rokotteille, jotka jäljittelevät monin tavoin luonnollista infektiota. Ihanteellinen rokote ei aiheuta oireita tai aiheuttaa vain lieviä oireita rokotetuissa yksilöissä, mutta johtaa silti sellaisen immunologisen muistin indusoitumiseen, jolla on kyky muodostaa vahva ehkäisevä immuunivaste, 30 jos rokote joutuu vastakkain kyseisen mikrobin kanssa. Rokotteen suunnittelu jotakin määrättyä mikrobia vastaan riippuu mekanismista, jolla elimistö luonnollisen infektion ollessa kyseessä saattaa selvitä tästä määrätystä organismista ja estää myöhemmät infektiot. On olemassa muutamia tapoja, joilla immuunivaste voi herättää tämän suotuisan 35 toiminnan. Ensinnäkin B-Iymfosyyttien syntetisoimat ja erittämät vasta-aineet voivat sitoutua mikrobiin ja tuhota sen komplementtivälitteisen lyysin kautta.

3 Toiseksi vasta-aineet voivat estää infektion leviämisen inhiboimalla mikrobin sitoutumista kohdesoluunsa. Kolmanneksi vasta-aineet voivat komplementin aktivaation yhteydessä tuhota infektoituneita soluja ja myös spesifiset sytotoksiset T-Iymfosyytit (CTL:t) voivat tappaa ja tuhota mikrobin infektoimia soluja. 5 Kaikkien näiden mekanismien on ajateltu olevan mukana immuunivasteessa, jonka herättää tyyppiä 1 ja 2 oleva ihmisen immuunikatovirus (HIV) (HIV-1 ja HIV-2). HIV:n infektoimien yksilöiden immuunivasteelle on kuitenkin tavallisesti tunnusomaista voimakas vasta-ainevaste ja vähemmän tehokas T- lymfosyyttivaste tai jopa sen puuttuminen [J. Gerstott et a/., J. Immunol. 22, 10 nro 5 (1985) ; M. C. Re et al., J. Clinical Pathol. 42, nro 5 (1989) ]. Tämä voi olla syynä siihen, miksi kerran HIV-infektion saaneissa yksilöissä on kehittynyt krooninen infektio huolimatta voimakkaasta vastaainevälitteisestä immuunivasteesta. Ehkäisevän immuunivasteen virusinfektiolle voivat yleisesti ottaen 15 välittää edellä kuvatut neljä immuunivastetyyppiä, mutta tiedetään, että CTLvaste, jolla on kyky tappaa viruksen infektoimia soluja, on tehokkain. Tästä syystä elävät heikennetyt virusrokotteet ovat yleisesti ottaen osoittautuneet tehokkaimmiksi. Itse asiassa ensimmäinen rokote, jonka Jenner kehitti yli 200 vuotta sitten, elävä lehmänrokkovirus, joka pystyy ehkäisemään isorokkoviru- 20 sinfektion, on esimerkki tästä periaatteesta. Kun yksilö rokotetaan elävällä heikennetyllä virusrokotteella, isäntäsolut infektoituvat ja syntetisoituu virusproteiineja. Joitakin virusproteiinimolekyyleistä käytetään viruspartikkelien tuotantoon, kun taas jotkut pilkkoutuvat proteolyyttisesti pieniksi peptideiksi, jotka sitoutuvat päähistokompatibiliteetti (MHC) -antigeeneihin (ihmisessä HLA luokat 25 1 ja II) ja ovat tarjolla T-lymfosyyteille infektoituneiden solujen pinnalla. Sen jälkeen T-lymfosyytit, joilla on asianmukainen T-solureseptori (TCR), tunnistavat HLA:han liittyneen vieraan peptidin ja joko ovat B-solujen apuna vasta-aineen tuottamiseksi (auttaja-/indusoija-t-solut; Th) tai tuhoavat infektoituneen solun (sytotoksinen T-lymfosyytti; CTL). 30 Huolimatta vuosikymmenen kestäneestä työstä tehokas rokote ihmisen immuunikatovirus (HIV) infektiota ja AIDSia vastaan puuttuu edelleen. Aiemmat yritykset ovat keskittyneet steriloivan immuniteetin aikaansaantiin HIV:n ulkovaipan glykoproteiinin, gp120/gp160:n, vastaisten vaarattomaksi tekevien vasta-aineiden avulla. Vaiheen 1/11 gp160/gp120-tutkimukset osoittavat 35 kuitenkin vain laboratoriokantojen vaarattomaksi tekemisen, mutta eivät onnistu tekemään kentältä eristettyjä kantoja vaarattomiksi.

4 Sen sijaan heikennetyllä viruksella tehdyt kokeet ovat olleet menestyksellisiä apinan immuunikato (SIV) -mallissa. SIV, jossa on NEF- tai REV-geenideleetioita, käyttäytyy heikennettynä viruksena ja suojaa rokotetut eläimet sairauden kehittymistä muttei villin tyypin haastajaviruksen aiheutta- 5 maa infektoitumista vastaan. REV-virheen sisältävän viruksen ollessa kyseessä ainoa suojauksen kanssa korreloiva immunologinen tekijä oli soluvälitteinen immuunivaste (CMI-vaste) SIV:n säätelyproteiineja NEF ja TAT vastaan. Yksi tärkeä havainto tässä kokeessa oli, että rokotetut eläimet pystyivät jopa selviämään villin tyypin haastajaviruksen aiheuttamasta infektiosta. Viime aikoina 10 on raportoitu että myös HIV-infektiopotilaat saattavat satunnaisesti selvitä näkyvissä olevasta infektiosta. Ainoa merkitsevä suojauksen kanssa korreloiva tekijä näyttää näissä eläin- ja/tai ihmiskokeissa olevan soluvälitteinen immuunivaste HIV:tä vastaan. Tämäntyyppistä immuunivastetta ei yleensä saada aikaan proteiini- 15 immunisoinnilla. HIV:n ollessa kyseessä elävät heikennetyt rokotteet voisivat olla tehokkaita infektion ehkäisemiseksi, mutta ne ovat teoriassa vaarallisia useasta syystä. Yhdellä vähän aikaan sitten kuvatulla menetelmällä, geneettisellä immunisoinnilla (synonyymit: nukleiinihappoimmunisointi, DNAimmunisointi), on useita elävien heikennettyjen rokotteiden eduista muttei nii- 20 den potentiaalisesti vahingollisia haittavaikutuksia. DNA-rokote, joka on yhtä tai muutamaa virusproteiinia vastaavan geenin sisältävän eukaryoottisen ilmentämisvektorin muodossa, voi indusoida virusproteiinisynteesin, kun isäntäsolu on transfektoitu DNA-vektorilla. Kohdesolussa syntetisoituneet virusproteiinit joutuvat sitten proteolyyttisten entsyymien prosessoimiksi; muodos- 25 tuneet peptidit sitoutuvat MHC/HLA-molekyyleihin ja niitä esiintyy transfektoitujen solujen pinnalla. Tämä aiheuttaa CTL-välitteisen immunologisen muistin, joka siinä tapauksessa, että yksilö joutuu myöhemmin virulentin villin tyypin viruksen infektoimaksi, tappaa tehokkaasti viruksen infektoimia soluja välittömästi tartunnan jälkeen ja ehkäisee siten infektion. On osoitettu, että cdna:n. 30 suora lihaksen- tai ihonsisäisen injektointi eukaryoottisessa ilmentämisplasmi- dissa indusoi immuunivasteen [Wolff et al., Science 246 (1990) ]. Vieraiden antigeenien ilmentäminen mainitunlaisin keinoin johtaa pääasiassa auttaja-t-solujen alaryhmä 1 (TH1) -tyyppisiin immuunivasteisiin, joihin liittyy voimakas sytotoksinen T-Iymfosyytti (CTL) -vaste ja joskus myös korkeatiitteri- 35 nen vasta-ainevaste [B. Wang et al., PNAS 90 (1993) ; Wang et al., NY Acad. Sci 772 (1995) ; Haynes et al., AIDS Res. Hum. Retro-

5 ,E viruses 10, nro 2 (1994) 43-45]. Lisäksi on raportoitu antigeenispesifisestä CTL:stä ja suojauksesta käytettäessä influenssa A -viruksen nukleoproteiiniantigeenia [Ulmer et al., Science 259 (1993) ]. Lisäksi on saatu aikaan hiirissä suojaus mykoplasmainfektiota vastaan käyttämällä DNA- 5 immunisointia [Barry et al., Nature 377, nro 6550 (1995) ; Lai et al., DNA Cell. Biol. 14, nro 7 (1995) ] ja ihmisen papilloomavirusta vastaan kaniinimallissa [Donnelly et al., J. Inf. Dis. 173, nro 2 (1996) ]. DNA-immunisointia on käytetty myös sytotoksisten lymfosyyttien välittämän kasvaintenvastaisen immuniteetin indusointiin [Bohm et al., Cancer Immunol. 10 lmmunother. 44, nro 4 (1997) ]. DNA-immunisoinnilla on useita etuja verrattuna eläviin heikennettyihin virusrokotteisiin. Koska infektoivaa virusta ei muodostu, isäntäorganismiin indusoidut virusgeenit pysyvät ainoastaan alun perin transfektoiduissa soluissa, eikä virusinfektion oireita esiinny. HIV:n ollessa kyseessä tärkein teoreetti- 15 nen haittavaikutus elävän heikennetyn viruksen kohdalla olisi mutaatioiden aiheuttama palautuminen virulentiksi villin tyypin virukseksi. DNA-immunisoinnin yhteydessä voidaan lisäksi käyttää vain niitä virusgeenejä tai niiden osia, joiden tiedetään olevan tehokkaita ehkäisevän immuunivasteen indusoinnissa. Tehokkaan CTL-vasteen kannalta olisi tärkeää, että sytotoksiset T- 20 solut tuhoaisivat infektoituneet solut ennen rakenneproteiinien muodostumista ja valmiiden viruspartikkelien vapautumista. Immuunivaste virussyklin varhaisia proteiineja vastaan olisi siksi suotuisa. HIV:n replikaatiota säätelevät sen omat säätelygeenit ja -proteiinit. HIV-genomi koodittaa kolmea säätelevää eirakenneproteiinia (NEF, TAT, REV), jotka ovat korvaamattomia viruksen repii- 25 kaation kannalta in vivo. REV kuljettaa genomi-rna:n sytoplasmaan, TAT edistää viruksen transkriptiota, ja NEF saa aikaan replikaation lepotilassa olevissa soluissa. SIV-kokeet osoittavat, että virukset, joista puuttuu yhden tällaisen säätelygeenin toiminta, eivät ehkä pysty indusoimaan sairautta viruksen riittämättömän replikaation vuoksi. Näitä kolmea proteiinia ilmenee tilapäisesti 30 ja pieninä määrinä virusinfektiosyklin ensimmäisten tuntien aikana [Ranki et al., Arch. Viro!. 139 (1994) ]. Vain pienellä osalla HIV-infektion saaneista yksilöistä esiintyy humoraalinen ja/tai soluvaste näihin proteiineihin, ja tämä vaste korreloi suotuista kliinisen taudinkulun kanssa. NEF:n, TAT:n ja REV:n vastaisia CTL-vasteita on tutkittu laajasti. 35 NEF-spesifiset CTL ja Th (T-auttajasolu) -vasteet korreloivat suotuisan kliinisen ennusteen kanssa. REV-virheen sisältävän SIV-rokotteen ollessa kysees-

6 sä immuunivasteet NEF:iin ja TAT:iin olivat suojaavia. TAT- ja REVproteiineissa olevat Th- ja CTL-epitoopit, jotka HIV-1-infektion saaneet yksilöt tunnistavat ja jotka korreloivat kliinisesti, on identifioitu [Blazevic et al., J AIDS 6 (1993) ; Blazevic et al., AIDS Res. Hum. Retroviruses 11 (1995) ]. Kokonaisuutena tarkasteltuina nämä tulokset osoittavat, että sairaudelta suojaamiseksi saattaa olla välttämätöntä viruksen kohtuullinen repiikaatio (heikennetty kasvu) yhdistettynä spesifisiin immuunivasteisiin viruksen repiikaation tukemiseen osallistuvia säätelyproteiineja vastaan. DNA-immunisoinnissa voidaan käyttää useita eukaryoottisia ilmen- 10 tämisvektoreita, mutta niiden teho vaihtelee. Jotkut parametreistä, jotka säätelevät jonkin määrätyn ilmentämisvektorin tehoa immuunivasteen indusoinnissa, ovat tuntemattomia, mutta antigeenisen proteiinin korkea ilmentymistaso olisi ilmeisesti edullista. Ajanjaksolla, jona soluun viety vektori voi ilmentää vierasta antigeenistä virusproteiinia, voi myös olla merkitystä. Ilmentämisvek- 15 torit, jotka indusoivat tietyntasoisen soluvaurion, voivat myös olla edullisia, koska on tunnettua, että kudostuho vahvistaa immuunivastetta muutamien biologisesti aktiivisten molekyylien, kuten sytokiinien, lymfokiinien ja kemokiinien, kautta, joita antigeenista proteiinia ilmentävä solu erittää. Tämä on todennäköisesti yksi lisäsyy siihen, miksi elävä heikennetty virus, joka aiheuttaa 20 tietyntasoisen kudos- ja solutuhon, on niin tehokas immuniteetin indusoinnissa, ja siksi elävää heikennettyä rokotetta jäljittelevä DNA-vektori olisi edullinen. Epäspesifiset tekijät, kuten sytokiinit ja lymfokiinit, voivat myös säädellä virusten repiikaatiota ja immuunivasteita HIV-1-infektiossa. Clerici ja Shearer [Immunology Today 14, nro 3 (1993) ] ja muut ovat osoitta- 25 neet tehtävän, joka on auttajasolujen Th1/Th2-tasapainolla, jota heijastaa näille kandelle T-solupopulaatiolle spesifisten lymfokiinien tuotanto. Liukoiset tekijät, joita tuottavat CD8-solut ja joilla on kyky vähentää HIV-1:n infektoimien CD4-solujen virustuotantoa, on vähän aikaa sitten identifioitu RANTESiksi, MIP1-a:ksi ja MIP1-6:ksi [Cocchi et ei., Science 270, nro 5243 (1995) ]. On mandollista, että sytokiinit, joiden tuotanto joko lisääntyy tai vähenee HIV-1-infektiossa, säätelevät viruksen transkriptiota. Aiemmat DNA-immunisaatiotutkimukset, joissa on käytetty HIVsäätelyproteiinia NEF koodittavaa geeniä, ovat osoittaneet T-solujen prolife-. raatiovasteet [Hinkula et al., Vaccine 15, nro 8 (1997) ja Hinkula et 35 al., J. Virol. 71, nro 7 (heinäkuu 1997) ]. Positiivinen vaikutuskor-

7 relaatio suotuisan kliinisen taudinkulun kanssa on kuitenkin nimenomaan CTLvasteella. Yksi esillä olevan keksinnön päätavoitteista on siksi saada aikaan DNA-immunisointirokote, joka koodittaa HIV-säätelyproteiinia ja jolla on kyky 5 herättää CTL-vaste HIV:n infektoimia soluja vastaan infektiosyklien varhaisessa vaiheessa, ennen uusien valmiiden infektoivien viruspartikkelien vapautumista. Keksinnön yhtenä toisena tavoitteena on saada aikaan rokote, joka lisäksi herättää humoraalisen vasteen HIV:tä vastaan. 10 Keksinnön yhtenä lisätavoitteena on saada aikaan HIV-rokote, joka on turvallinen käyttää, koska se ei altista vastaanottajaa HIV:n rakennegeeneille tai -proteiineille. Keksinnön yhtenä muuna tavoitteena on saada aikaan itsereplikoiva vektori, joka aiheuttaa pitkäaikaisen ja korkean HIV-säätelyproteiini- 15 ilmentymistason ja tietynasteisen solutuhon, mikä edelleen stimuloi immuunivastetta. Keksinnön yhtenä muuna tavoitteena on vielä saada aikaan HIVsäätelyproteiineja ilmentävä itsereplikoiva rekombinattivektori, joka antaa tulokseksi pitkäaikaisen stabiilin ylläpidon ja suuren kopioluvun trasfektoiduissa 20 soluissa, nisäkässolut mukaan luettuina. Keksinnön yhtenä lisätavoitteena on saada aikaan mainittua vektoria käsittävä isäntäsolu. Keksinnön yhtenä muuna tavoitteena on vielä saada aikaan menetelmä edellä mainitun itsereplikoivan vektorin valmistamiseksi. 25 Esillä oleva keksintö tarjoaa lisäksi käyttöön menetelmä HIV:n hoi- tamiseksi tai ehkäisemiseksi. Keksinnön yhtenä muuna tavoitteena on vielä mainitun vektorin käyttö HIV:n vastaisen DNA-immunisointirokotteen valmistamiseksi. Keksinnön yhteenveto 30 Tämän keksinnön tavoitteet voidaan saavuttaa sisällyttämällä hete- - rologinen nukleotidisekvenssi, joka koodittaa HIV-säätelyproteiinia NEF, REV tai TAT tai niiden immunologisesti aktiivista fragmenttia, vektoriin, joka käsittää papilloomaviruksen El-geenin ja E2-geenin, papilloomaviruksen minimaalisen replikonin ja papilloomaviruksen minikromosomaalisen ylläpitoelementin.

8 Keksintö koskee toisin sanoen itsereplikoivaa rekombinanttivektoria, joka käsittää papilloomaviruksen nukleotidisekvenssejä, jotka koostuvat olennaisesti (i) papilloomaviruksen E1-geenistä ja E2-geenistä, 5 (ii) papilloomaviruksen minimaalisesta replikonista ja ja (iii) papilloomaviruksen minikromosomaalisesta ylläpitoelementistä, heterologisen nukleotidisekvenssin, joka koodittaa HIV- säätelyproteiinia NEF, REV tai TAT tai niiden immunologisesti aktiivista frag- 10 menttia. Keksintö tarjoaa lisäksi käyttöön HIV:n vastaiseen DNAimmunisointiin tarkoitetun rokotteen, joka käsittää mainittua vektoria, mainitun vektorin käytön HIV:n vastaisen rokotteen valmistamiseksi ja menetelmän HIV:n hoitamiseksi tai ehkäisemiseksi, jossa annetaan tämän tarpeessa ole- 15 valle henkilölle vaikuttava määrä itsereplikoivaa vektoria ja saatetaan NEF-, REV- tai TAT-proteiini tai niiden immunologisesti aktiivinen fragmentti ilmentymään mainitussa henkilössä. Keksintö tarjoaa vielä käyttöön menetelmän itsereplikoivan vektorin valmistamiseksi, joka menetelmä käsittää seuraavaa: 20 A) insertoidaan heterologinen nukleotidisekvenssi, joka koodittaa HIV-säätelyproteiinia NEF, REV tai TAT tai niiden immunologisesti aktiivista fragmenttia, vektoriin, joka käsittää papilloomaviruksen nukleotidisekvenssejä, jotka koostuvat olennaisesti - (i) papilloomaviruksen E1-geenistä ja E2-geenistä, 25 - (ii) papilloomaviruksen minimaalisesta replikonista ja tä, ja - (iii) papilloomaviruksen minikromosomaalisesta ylläpitoelementis- B) transformoidaan isäntäsolu tuloksena olevalla itsereplikoivalla rekombinattivektorilla, 30 C) viljellään isäntäsolua ja D) otetaan talteen mainittu vektori. täsolun. Keksintö tarjoaa käyttöön myös mainittua vektoria käsittävän isän- Piirustusten lyhyt kuvaus 35 Kuvio 1A esittää sukkulavektoria pue83. Kuvio 1B esittää sukkulavektoria pnp177.

9 Kuvio 2 esittää keksinnön mukaista pbntkrev-plasmidia. Kuvio 3 esittää keksinnön mukaista pbnsratat-plasmidia. Kuvio 4 esittää keksinnön mukaista pbnsranef-plasmidia. Kuvio 5 esittää NEF-ilmentymistä pbnsranef:ilä transfektoiduissa 5 COS-7-soluissa. Western blot -näytteet on otettu 72 tunnin kuluttua transfektiosta ja tehty näkyviksi ECL:11ä. Kuvio 6 esittää anti-nef-vasta-aineita pbnsranef:ilä immunisoitujen hiirten seerumissa detektoituina Western blot -menetelmällä. Näytteet 1-4 otettiin 2 viikon kuluttua viimeisestä immunisoinnista ja näytteet 5-8 otettiin 4 10 viikon kuluttua viimeisestä immunisoinnista. Kuvio 7 esittää pbnsranef-vektorilla immunisoitujen hiirten CTLvasteita. Kuvio 7A esittää CTL-vasteita, ilmaistuina kohdesolujen prosentuaalisena spesifisenä lyysinä, neljässä hiiressä, jotka testattiin kanden viikon kuluttua viimeisestä immunisoinnista. Kuvio 7B esittää näitä arvoja neljän viikon 15 kuluttua viimeisestä immunisoinnista. Spesifistä lyysiä >4 % pidetään positiivisena tuloksena. Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus Heterologinen HIV-nukleotidisekvenssi insertoidaan keksinnön mukaisesti vektoriin, joka käsittää papilloomaviruksen El-geenin ja E2-geenin, 20 papilloomaviruksen minimaalisen replikonin (MO) ja papilloomaviruksen minikromosomaalisen ylläpitoelementin (MME). Tätä E1/E2/MO/MME:n käsittävää vektoria kutsutaan tästedes pbn:ksi, ja sitä on kuvattu yksityiskohtaisesti julkaisussa WO 97/24 451, johon viitataan. Mainittu patenttijulkaisu perustuu siihen havaintoon, ettei MO:sta käsin tapahtuva DNA-replikaatio sinänsä riitä 25 papilloomaviruksissa stabiiliin pitkäaikaiseen säilymiseen vaan tarvitaan toista virussekvenssiä MME ja että parhaat tulokset saadaan, kun vektori käsittää lisäksi papilloomaviruksen E1- ja E2-geenit. "Papilloomavirus" tarkoitta tässä käytettynä mitä tahansa papilloomavirusryhmän jäsentä. Keksinnön yhteydessä käytettävä papilloomavirus on 30 edullisesti naudan papilloomavirus (BPV) tai ihmisen papilloomavirus (HPV). " ja "E2" ovat papilloomavirusten säätelyproteiineja, jotka replikoivat MO:n kautta ja ovat välttämättömiä replikaatiolle. "Minimaalinen replikoni" ("minimal origin of replication", MO) on papilloomaviruksen hyvin pieni sekvenssi, joka on välttämätön DNA-synteesin 35 käynnistymiselle.

10 "Minikromosomaalinen ylläpitoelementti" ("minichromosomal maintenance element", MME) tarkoittaa papilloomavirusgenomin aluetta, johon sitoutuu papilloomaviruksen replikaatiolle välttämättömiä virus- tai ihmisproteiineja. MME on välttämätön papilloomavirus-mo:n stabiilille episomaaliselle yl- 5 läpidolle isännässä. MME käsittää edullisesti useita sitoutumiskohtia transkriptioaktivaattoriproteiinille E2. "Itsereplikoiva vektori" tarkoittaa tässä hakemuksessa käytettynä vektoriplasmidia, joka kykenee autonomiseen replikaation eukaryoottisessa isäntäsolussa. 10 "Heterologinen" tarkoittaa vierasta. Esimerkeiksi keksinnön mu- kaisten vektoreiden suhteen heterologinen nukleotidisekvenssi tarkoittaa eipapilloomasekvenssiä. "Immunologisesti aktiivinen fragmentti" tarkoittaa fragmenttia, jolla on kyky herättää immunologinen vaste vastaanottajassa. 15 "Papilloomaviruksen nukleotidisekvenssit, jotka koostuvat olennai- sesti" tarkoittaa, että vektori käsittää papilloomanukleotidisekvenssit, jotka ovat välttämättömiä ja riittäviä vektorin pitkäaikaiselle säilymiselle ja replikaatiolle. Tämä tarkoittaa esimerkiksi sitä, että ylimääräiset sekvenssit, kuten kaikki papilloomaviruksessa kooditettuina olevat onkogeeniset sekvenssit, on poistettu 20 tämän keksinnön yhteydessä käytetyistä pbn-vektoreista. El- ja E2-geenien, MO:n, MME:n ja NEF-, REV- tai TAT-geenin lisäksi keksinnön mukaiset vektorit käsittävät promoottoreja kooditettuja proteiineja varten samoin kuin lisäksi säätelysekvenssejä, polyadenylaatiosekvenssejä ja introneja. Vektorit sisältävät edullisesti myös bakteeri-isäntäsolun repii- 25 konin ja yhden tai useamman valikointimarkkerigeenin vektori-dna:n valmistamiseksi bakteeri-isäntäsolussa. Yksi pbn-vektoreiden olennainen piirre on, että ne eivät ole isäntäsoluspesifisiä. Tämä johtuu siitä, että El- ja E2-proteiinien ilmentymistä säätelevät promoottorit, jotka eivät ole luontaisia, ts. ovat heterologisia. Mai- 30 nitut promoottorit ovat joko toimivia laajasti nisäkässoluissa tai -kudoksissa tai solu- tai kudosspesifisiä. Esillä olevan keksinnön mukaisissa vektoreissa El-geeni on edullisesti sr-a-promoottorin tai tymidiinikinaasipromoottorin (tk) ohjauksessa ja E2- geeni on edullisesti LTR-gag-promoottorin ohjauksessa. NEF-, REV- tai TAT- 35 geeni voi olla CMV-promoottorin tai RSV-LTR-promoottorin ohjauksessa. Vektori voi käsittää lisäksi SV40:n varhaisen promoottorin antibioottivalikoinnin

11 (neomysiini tai kanamysiini) mandollistavan geenin ilmentymisen käynnistämiseksi. Isäntäsolun replikoni on keksinnön mukaisissa vektoreissa edulli- sesti puc-ori ja käytetyt valikointimarkkerit ovat esimerkiksi kanamysiini- 5 ja/tai neomysiinimarkkereita. lntroni on edullisesti beeta-globiini-ivs. TK-promoottoripohjaisissa plasmideissa esiintyvä oktasekvenssi on oktameerisen proteiinin koodittamaton sekvenssi. Sillä ei ole toiminnallista tarkoitusta plasmidissa, mutta sitä tarvittiin sopivien restriktiokohtien luomiseksi lopullisten plasmidien valmistamista varten. 10 Plasmidiin pbn insertoitavat NEF-, REV- tai TAT-geenit voidaan saada useista kaupallisista lähteistä, kuten plasmidista pkp59, jota on saatavissa tallennuspaikasta AIDS Reagent Project MHC. Mainitut geenit ovat yleisesti tunnettuja, ja ne on sekventoitu täydellisesti [Wain-Hobson et al., Cell 40 (1985) 9-17]. On tietenkin myös mandollista insertoida vain mainittujen HIV- 15 proteiinien immunologisesti aktiivista fragmenttia koodittava sekvenssi. NEF-, REV- tai TAT-geenit tai niiden fragmentit insertoidaan ensin sopiviin sukkulavektoreihin. Nämä vektorit voivat sisältää MO-alueen tai olla sisältämättä sitä. Esimerkeissä valaistaan kahta sukkulavektoria: pnp177:ää, joka ei sisällä MO:ta, ja pue83:a, joka sisältää MO:n. On tietenkin mandollista 20 käyttää muitakin sukkulavektoreita. Sekä sukkulavektoreita että tuloksena olevia keksinnön mukaisia vektoreita lisätään edullisesti Escherichia colissa. Esimerkkejä tuloksena olevista esillä olevan keksinnön mukaisista pbn-nef-, pbn-rev- tai pbn-tat-vektoreista esitetään kuvioissa 2, 3 ja 4. Keksinnön mukaiset vektorit ovat stabiileja ja itsereplikoivia suurina kopiomäärinä. Euka- 25 ryootti-isäntäsolun trasfektoinnin jälkeen vektori (plasmidi) monistuu ja tuottaa kertaisen määrän uusia plasmideja, joista kukin pystyy ilmentämään haluttua HIV-proteiinia. Tämän keksinnön patenttivaatimusten mukainen isäntäsolu voi olla joko vektorilla transfektoitu eukaryoottisolu tai vektorilla transformoitu prokary- 30 oottisolu. Eukaryoottisolu on edullisesti nisäkässolu ja prokaryoottisolu on edullisesti bakteerisolu, erityisesti E. coli. Tuloksena olevien esillä olevan keksinnön mukaisten plasmidivekto- rien HIV-NEF:n, -REV:n ja -TAT:n ilmentymistä testattiin sekä transfektoiduis- sa COS-7-soluissa että mainituilla plasmideilla immunisoiduissa hiirissä. HIV- 35 proteiinien voimakas ilmentyminen oli osoitettavissa COS-7-soluissa, ja immu- nisoiduissa hiirissä esiintyi huomattava humoraalinen ja soluvälitteinen (CTL)

12 immuunivaste. Nämä tulokset osoittavat, että keksinnön mukaisilla vektoreilla on potentiaalisesti käyttöä tehokkaina HIV:n vastaisina rokotteina. Esillä olevaa keksintöä valaistaan tarkemmin seuraavissa esimerkeissä. Esimerkit kuvaavat yksityiskohtaisesti keksinnön joitakin suoritusmuo- 5 toja, mutta niiden ei tulisi tulkita rajoittavan keksintöä, jonka määrittelevät oheiset patenttivaatimukset. Esimerkki 1 HIV-1-geenien REV ja TAT kloonaaminen itserepiikoiviin pbnsr-a- ja pbntk-plasmideihin 10 pbntkrev:n ja pbnsratat:n tuottaminen Vaihe 1: Eristetystä kannasta BRU, jota kutsutaan myös LAI:ksi, peräisin olevia HIV-1:n REV- ja TAT-geenejä [Wain-Hobson et al., Cell 40 (1985) 9-17] monistettiin pcrev- ja pctat-vektoreista käsin [Arya et al. Science (1985) 69-73] käyttämällä Dynazyme Taq -DNA-polymeraasia (Finnzymes, Suomi) ja seuraavia alukkeita, joissa on restriktioentsyymikohdat entsyymejä Xhol ja Xbal varten: REV: 5'-TTTTTCTAGAACCATGGCAGGAAGAAGCGGA-3' 20 5'-TTTTCTCGAGCTATTCMAGTTCCTGG-3' TAT: 5'-11111CTAGAACCATGGAGCCAGTAGATCCT-3' 5'-TTTTCTC GAG CTAATCGAACG GATCTG C-3' 25 Monistettuja geenejä ja sukkulavektoria pue83 (kuvio 1) pilkottiin lämpötilassa +37 C Xbal:llä ja Xhol:Ilä (New England Biolabs, USA) yön yli yhteensopivien päiden aikaansaamiseksi. Pilkotut DNA-fragmentit analysoitiin 1,5-prosenttisilla agaroosigeeleillä ja jatkopuhdistettiin käyttämällä Band Prep 30 Kit -välineistöä (Pharmacia Biotech, Ruotsi). Kukin geeni ligatoitiin vektoriin erikseen käyttämällä T4-DNA-ligaasia (New England Biolabs, USA) tehden inkubointi yön yli lämpötilassa +16 C. Ligaatiotuotteilla transformoitiin kompetentit E. coli solut (One Shot Kit; Invitrogen, Alankomaat), jotka siirrostettiin LB-maljoille, jotka sisälsivät kanamysiiiniä valikointia varten. Kasvavista kloo- 35 neista tehtiin miniprep-preparaatit ja kloonattujen geenien läsnäolo analysoitiin pilkkomalla Xhol:llä ja Xbal:llä. Kloonattujen geenien läsnäolo varmistettiin

13 myös PCR:11ä, joka tehtiin miniprep-preparaatista lähtien käyttämällä edellä mainittuja alukkeita. Oikean geenin sisältäviä klooneja massaviljeltiin ja piasmidit puhdistettiin käyttämällä Megaprep-pylväitä (Qiagen, Saksa). Vaihe 2: 5 DNA-fragmentti, joka sisälsi BPVori:n, RSV-LTR-promoottorin, REV- tai TAT-geenin ja b-globiini-ivs-poly(a):n pilkottiin irti sukkulavektorista Hind111:11a (New England Biolabs, USA) ja puhdistettiin käyttämällä 1- prosenttista agaroosigeeliä ja Band Prep Kit -välineistöä. Ligaatio Hind111- pilkottuun ja defosforyloituun (alkalinen fosfataasi, CIP, Promega, USA) plas- 10 midiin pbnsra tai pbntk, solujen transformointi, kloonatun geenin läsnäolon tarkistus ja plasmidin puhdistus tehtiin kuten vaiheessa 1. Tuloksena olevia plasmideja kutsutaan pbntkrev:ksi ja pbnsratat:ksi ja ne esitetään kuvioissa 2 ja 3. Esimerkki 2 15 HIV-1:n NEF: n kloonaaminen itsereplikoivaan pbnsraplasmidiin pbnsranef:n tuottaminen Vaihe 1: HIV-1:n NEF-geeni saatiin plasmidi pcnef vektorista, joka sisälsi 20 LAI-isolaatin NEF-geenin insertoituna pctat-vektoriin, josta puuttuu TATgeeni. Jatkokloonaukseen käytetty NEF-geeni saatiin 1,3 ke:n fragmenttina pcnef:stä Spel- ja Hind111-pilkonnalla. Jotta eliminoidaan Hindlll-kohdan uudelleenmuodostuminen ligaatiossa, fragmentti käsiteltiin HindIII-pilkkomisen jälkeen Klenow-entsyymillä ja nukleotidien datp, dctp ja dgtp seoksella, 25 minkä jälkeen tehtiin Spel-pilkkominen. Saadut fragmentit erotettiin elektroforeettisesti 1-prosenttisella agaroosigeelillä standardikokomarkkerien rinnalla. Kooltaan oikeat vyöhykkeet leikattiin irti ja DNA otettiin talteen käyttämällä Sephaglas Bandprep Kit välineistöä (Pharmacia Biotech) valmistajan ohjeen mukaan. 30 Kuvion 1B mukainen sukkulavektori pnp177 pilkottiin ensin Xhol:11ä, käsiteltiin sitten Klenow-entsyymillä ja dntp-seoksella ja pilkottiin lopuksi Xbal:11ä. Vektori käsiteltiin myös vasikan suoliston alkalisella fosfataasilla (CIP). NEF-geenin sisältävä fragmentti ligatoitiin pilkotun pnp177-vektorin 35 kanssa käyttämällä T4-ligaasia lämpötilassa +14 C yön yli. Transformointiin käytettiin kompetenttia E. colia (One Shot; lnvitrogen). Positiiviset kloonit iden-

14 tifioitiin käyttämällä restriktioentsyymipilkkomisia ja elektroforeesia. Plasmidi- DNA:ta monistettiin edelleen E. colissa ja se puhdistettiin laajassa mitassa Qiagen-kolonneilla. Tuloksena oleva lopullinen piasmidi nimettiin pnp177chivnef:ksi. 5 Vaihe 2: Sukkulavektori pnp177 on suunniteltu sisältämään vain kaksi HindIII-kohtaa, joiden väliin voidaan kloonata insertti. Plasmidin HindIII-pilkonta antaa siten tulokseksi fragmentin, joka voidaan kloonata edelleen. pnp177chivnef:n Hindlll-fragmentti kloonattiin pbnsra:aan. Tämä vektori 10 pilkottiin Hind111:11a ja käsiteltiin CIP:11ä. Käytettiin samoja vyöhykkeidenerotus-, ligaatio- ja transformointimenetelmiä kuin ensimmäisessä vaiheessa ja insertin oikea orientaatio varmistettiin restriktioanalyysillä. Lopullinen piasmidi nimettiin pbnsranef:ksi ja se esitetään kuviossa 4. Esimerkki 3 15 HIV-Nef-ilmentymisen osoittaminen in vitro 3A. Transfektiot Esimerkkien 1 ja 2 pbn-konstruktioiden ilmentymisen testaamiseksi niillä transfektoitiin COS-7-solut käyttämällä elektroporaatiota. 10 gg vertailuplasmidia pbni3-gal ja 10 i.tg plasmidia pbn-nef kotransfektoituna 11.1g:n 20 kanssa plasmidia pcmvf3-gal siirrettiin kukin elektroporaatiolla kolmeen miljoonaan soluun. Käytettiin lohenmaitikantaja-dna:ta. Elektroporaatio tehtiin kapasitanssilla 960 mf ja jännitteellä 260 V. Tehtiin proteiinipitoisuus- ja p-galaktiivisuusmittauksia transfektiotehokkuuden kontrolloimiseksi ja lysaattien määrän kalibroimiseksi Western blot -määrityksessä. 25 3B. Immuunihistokemia ja Western blot -määritys Talteen otetut pbn -konstruktioilla transfektoidut solut lysoitiin käytettäviksi Western blot -määrityksessä. Lyysin jälkeen proteiininäytteet keitettiin näytepuskurissa, käsiteltiin 12-prosenttisessa SDSpolyakryyliamidigeelissä ja siirrettiin sitten 2 grn:n nitroselluloosasuodattimelle, 30 joka suojattiin liuoksella, joka sisälsi 5 % maitoa TBS:ssä. Primaarisena vastaaineena käytettiin hiiren monoklonaalisten anti-nef:ien seosta [V. Ovod et al., AIDS 6 (1992) 25 34], joista kukin laimennettiin suhteessa 1:1000. Sekundaarinen vasta-aine oli biotinyloitu hiiren vastainen vasta-aine laimennettuna suhteessa 1: COS-7-solujen transfektoinnin jälkeen vektorit saivat aikaan voi- makkaan tilapäisen HIV-säätelyproteiini-ilmentymisen detektoituna lysoitujen

15 solujen Western blot määrityksellä 72 tunnin kuluttua. Plasmidilla pbnsranef saadut tulokset esitetään kuviossa 5. Transfektoitujen solujen pitkäaikaisviljelyissä NEF-ilmentyminen kesti 7 viikkoon asti itsereplikoivalla pbnvektorilla transfektoiduissa soluissa. 5 NEF-transfektoituja soluja käytettiin myös sytospin-preparaattien valmistukseen, ne värjättiin hematoksyliinillä ja käytettiin monoklonaalista NEF:n vastaista vasta-ainetta, jota seurasi sekundaarinen biotinyloitu hiiren vastainen vasta-aine, immuunihistokemiallisessa tutkimuksessa Ovodin et al. (supra) kuvaamalla tavalla. Sytospin-levyt osoittivat ilmentymistä, koska positiivinen värjäytyminen nähtiin suuressa määrässä soluja solun sytoplasman täyttävinä jyväsinä. Osassa NEF:ää ilmentävistä soluista esiintyi morfologisia merkkejä solutuhosta, mikä on osoitus apoptoosista. Ilmentymistaso oli silti korkea, vaikka solujen tila oli huononemassa. Esimerkki 4 15 pbnsra- ja pbntk-vektorin HIV-Nef-, HIV-Tat- tai HIV-Revilmentymisen immunogeenisyyden osoittaminen in vivo 4A. Geenitykki DNA saostettiin 1 pm:n kultahiukkasille käyttämällä spermidiiniä ja CaCl 2:a noudattaen käyttöohjeessa Helios Gene Gun Instruction Manual (Bio- 20 Rad Laboratories) esitettyä menettelyä. Kukin patruuna tehtiin 0,5 gg kultaa ja 1 gg DNA:ta sisältäväksi. DNA:n määrää kontrolloitiin spektrofotometrisesti käyttöohjeessa neuvotulla tavalla. lnokuloinnit tehtiin käyttämällä Helios Gene Gun System -järjestelmää (Bio-Rad Laboratories). Heliumpurkauspaine DNA:n viemiseksi kohteeseen säädettiin arvoon 2070 kpa (300 psi). Optimoides- 25 samme pommitusolosuhteita havaitsimme, että 2070 kpa (300 psi) riittää sinkoamaan kultahiukkaset ihoon. 4B. Immunisoinnit Käytettiin 6-8 viikon ikäisiä balb/c-naarashiiriä. Hiiret nukutettiin ja vatsapuolelta poistettiin karvat ennen immunisointeja. 30 Inokuloinnit tehtiin 8 hiiren vatsan iholle päivinä 1, 2, 3, 10, 1 1 ja 12 käyttämällä edellä kuvattua geenitykkiä ja noudattamalla valmistajan ohjeita. Annettiin yhteensä 6 gg pbn-nef:ää hiirtä kohden. Kummastakin ryhmästä lopetettiin neljä hiirtä kanden viikon kuluttua viimeisestä immunisoinnista ja loput neljä hiirtä neljän viikon kuluttua viimeisestä immunisoinnista.. Otettiin see- 35 ruminäytteet Western blot määritystä varten ja kerättiin splenosyyttejä CTLmääritystä varten. Kaikilla kandeksalla hiirellä, jotka oli immunisoitu pbn-nef-

16 vektorilla, ilmeni vasta-ainevaste 2 ja 4 viikon kuluttua (kuvio 6). Reaktion intensiteetti vaihteli Westem blot määrityksessä. 4C. Sytotoksisen T-soluaktiivisuuden mittaaminen immunisoi duissa hiirissä 5 4C1. Efektorisolujen stimulaatio Poistettiin aseptisesti pemat immunisoiduista hiiristä kanden (16 hiirtä) ja neljän viikon (16 hiirtä) kuluttua immunisoinnista. Ne rikottiin Hanksliuoksessa, suodatettiin harson läpi ja poistettiin erytrosyytit. Soluja suspendoitiin sitten /ml seuraavaan kasvualustaan: RPMI-alusta, joka sisältää % naudan sikiöseerumia (FCS; GibcoBRL), 1 % glutamiinia, 100 yksikköä penisilliiniä/ml, 100 (pg streptomysiiniä/ml ja mo1/1 2-merkaptoetanolia. Reagoivia soluja (5.106) viljeltiin 25 ml:n soluviljelypullossa 5 ml:ssa kasvualustaa yhdessä solun kanssa, joilla esiintyy antigeeniä (APC:t; katso jäljempänä) viisi vuorokautta. Soluihin lisättiin ensimmäisenä päivänä 10 yk- 1 5 sikköä/ml rekombinatti-interleukiini-2:a (ril-2) [J. Hiserodt et al., J. Immunol. 135, nro 1 (heinäkuu 1985) 53-59; M. Lagranderie et al., J. Virol. 71, nro 3 (maaliskuu 1997) ; T. Tsuji et al., Immunology 90, nro 1 (tammikuu 1997) 1-6; H. L. Vahlsing et al., Joumal of lmmunological Methods 175 (1994) 11-22; K. Varkila et al., Acta Path. Microbiol. Immunol. Scand. 20 Sect. C 95 (1987) ]. 4C2. Solut, joilla esiintyy antigeeniä Infektoitiin syngeneeisiä P815-mastosytooma (H-2d) soluja muun- netulla lehmänrokkoviruksella Ankara (MVA), joka oli muunnettu ilmentämään HIV-1 LAI:n NEF-geeni (MVA-HIVNEF). MVA on voimakkaasti heikennetty, 25 replikaation suhteen puutteellinen lehmänrokkovirus, joka voi toimi tehokkaana vektorina heterologisten geenien ilmentämiseksi ja tarjoaa poikkeuksellisen korkean biologisen turvallisuustason [G. Sutter et al., J. Virol 68, nro 7 (heinäkuu 1994) ; Sutter et al., Vaccine 12, nro 11 (1994) ; I. Drexler et al., J. Gen. Virol. 79 (1998) ; G. Sutter et al., Proc. 30 Natl. Acad. Sci. USA 89 (1992) ]. Infektoinnit MVA-HIVNEF:Ilä tehtiin infektointikertoimella (MOI) 5 24-syvennyksisissä kuoppalevyissä ( soluja inkuboitiin 15 tuntia lämpötilassa +37 C [A. Carmichael et al., Journal of Virology 70 (1996) ]. Solut pestiin infektoinnin jälkeen kandesti 35 PBS:Ilä (fosfaattipuskuroidulla fysiologisella suolaliuoksella), joka sisälsi 10 % FCS:ää, ja suspendoitiin tähän liuokseen pitoisuudeksi solua/mi. Sitten solua/syvennys). Kun virus oli absorboitunut 1 tunnin lämpötilassa +37 C,

17 solut gammasäteilytettiin annoksella 5000 rad ja pestiin kasvualustalla ennen lisäämistä reagoiviin soluihin. 4C3. Sytotoksisuusmääritykset CTL-aktiivisuus testattiin 'Cr-vapautusmäärityksellä [J. Hiserodt et 5 al., J. Immunol. 135, nro 1 (heinäkuu 1985) 53-59; M. Lagranderie et a/., J. Virol. 71, nro 3 ( maaliskuu 1997) ; K. Varkila et al., Acta Path. Microbiol. Immunol. Scand. Sect. C 95 (1987) ; C. Van Baalen et al., AIDS 7 (1993) ]. Lyhyesti esitettynä P-815-solua infektoitiin MVA-HIVNEF:11ä, kuten kuvattiin edellä solujen yhteydessä, joilla esiintyy anti- 10 geeniä. Solut pestiin infektoinnin jälkeen kerran seerumittomalla kasvualustalla. Kohdesolut suspendoitiin sitten 200 gl:aan seerumitonta kasvualustaa ja lisättiin 100 gci 51 Crä (Amersham)/ solua 1 tunnin ajaksi lämpötilassa 37 C. Kohdesolut pestiin sitten neljästi alustassa ja suspendoitiin pitoisuudeksi solua/ml. Stimuloidut efektorisolut pestiin kerran kasvualustassa en- 15 nen lisäämistään kohdesoluihin. Kohdesoluja siirrostettiin u-pohjaiseen 96- syvennyksiseen kuoppalevyyn (5.10 3) syvennystä kohden ja efektorisoluja lisättiin kolmena rinnakkaisnäytteenä 100 gl:ssa alustaa käyttäen efektori:kohde-suhteita 50, 25 ja 12,5. Spontaania vapautusta varten kohdesoluja siirrostettiin kuuteen syvennykseen :ssa alustaa ja maksimivapautusta 20 varten kuuteen syvennykseen 2,5-prosenttisessa Triton-X-100-liuoksessa. Levyjä sentrifugoitiin lyhyesti, inkuboitiin 4 tuntia lämpötilassa 37 C ja tehtiin supernatanteille laskenta gammalaskurissa. Kohdesolujen prosentuaalinen spesifinen lyysi laskettiin kaavalla (testi- 51 Cr-vapautus - spontaani vapautus)/(maksimivapautus - spontaani vapautus) 100. Prosentuaalisen spesifisen 25 lyysin % katsottiin olevan positiivinen. Yksi esimerkki, joka osoittaa CTL-aktiivisuuden kuudessa kandeksasta pbnsranef:llä immunisoidusta hiirestä, esitetään kuviossa 7. D. Humoraalinen immuunivaste immunisoiduissa hiirissä Jotta saataisiin testatuksi HIV-1:n NEF:n vastaisten vasta-aineiden 30 esiintyminen immunisoitujen hiirten seerumissa, NEF-proteiini käsiteltiin elektroforeettisesti PAGE:11a, siirrettiin nitroselluloosasuodattimille ja detektoitiin vasta-ainereaktiivisuus edellä kuvatulla tavalla. Yhteenveto tuloksista Transfektio- ja immunisointitestien tulokset on koottu taulukkoon Immunisoiduissa hiirissä esiintyvä immuunivaste arvioitiin immuunitäplämäärityksellä (WB) humoraalisen ja sytotoksisten T-lymfosyyttien (CTL) määrityk-

18 sellä soluvälitteisen immuniteetin ollessa kyseessä. Kuten taulukosta nähdään, kaikissa kandeksassa NEF:ää ilmentävällä vektorilla immunisoidussa hiiressä esiintyi sekä humoraalinen että soluvälitteinen immuunivaste. Taulukko 1 5 HIV-1:n NEF-, TAT- ja REV-proteiinien ilmentymisen osoittaminen mainituilla vektoreilla transfektoiduissa COS-7-soluissa immuunitäpiämäärityksellä (Western blotting, WB) tai immuunihistokemiallisesti ja humoraalisen ja soluvälitteisen immuunivasteen indusoitumisen osoittaminen yhdellä vektoreista, pbnsranef:llä, immunisoiduissa hiirissä 10 Transfektio Immunisointi WB Immuunihistokemia WB CTL pbnsratat ND ++ 6/8 6/8 pbntkrev ++ 7/8 7/8 pbnsranef ++ ND 6/8 6/8 Osoitamme tässä tutkimuksessa, että DNA-immunisointi käyttämällä kuvatun kaltaista itsereplikoivaa ilmentämisvektoria voi indusoida selvästi havaittavissa olevan CTL-vasteen hiirissä. Lisäksi saavutettiin humoraa- 15 linen immuunivaste. Edellä esitettyjen tulosten valossa on mandollista olettaa, että pbn-nef-, pbn-rev- ja pbn-tat-plasmidit ilmentävät NEF-, REV- ja TAT-proteiineja in vivo määrinä, jotka riittävät indusoimaan sekä humoraalisen että soluvälitteisen immuunivasteen, joka on välttämätön HIV:n ehkäisemiseksi tai hoitamiseksi.

19 18 Patenttivaatimukset 1. Itsereplikoiva rekombinanttivektori, tunnettu siitä, että se käsittää papilloomaviruksen nukleotidisekvenssejä, jotka koostuvat olennai- 5 sesti ja (i) papilloomaviruksen El-geenistä ja E2-geenistä, (ii) papilloomaviruksen minimaalisesta replikonista ja (iii) papilloomaviruksen minikromosomaalisesta ylläpitoelementistä, 10 heterologisen nukleotidisekvenssin, joka koodittaa HIV- säätelyproteiinia NEF, REV tai TAT tai niiden immunologisesti aktiivista fragmenttia. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen itsereplikoiva vektori, t u n - nettu siitä, että papilloomavirus on naudan papilloomavirus (BPV) Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen itsereplikoiva vektori, tunnettu siitä, että heterologinen nukleotidisekvenssi koodittaa HIV-1:n NEF-proteiinia. 4. Minkä tahansa edeltävän patenttivaatimuksen mukainen itsereplikoiva vektori, tunnettu siitä, että E1 on sra-promoottorin tai tymidiiniki- 20 naasipromoottorin ohjauksessa. 5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen itsereplikoiva vektori, t u n - nettu siitä, että se on kuviossa 2, 3 tai 4 esitetyn kaltainen pbntkrev, pbnsratat tai pbnsranef. 6. Rokote HIV:n vastaista DNA-immunisointia varten, tunnettu 25 siitä, että se käsittää minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-5 mukaista itsereplikoivaa vektoria. 7. Menetelmä minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-5 mukaisen itserepiikoivan vektorin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että menetelmä käsittää seuraavaa: 30 A) insertoidaan heterologinen nukleotidisekvenssi, joka koodittaa HIV-säätelyproteiinia NEF, REV tai TAT tai niiden immunologisesti aktiivista fragmenttia, vektoriin, joka käsittää papilloomaviruksen nukleotidisekvenssejä, jotka koostuvat olennaisesti - (i) papilloomaviruksen El-geenistä ja E2-geenistä, 35 - (ii) papilloomaviruksen minimaalisesta replikonista ja

20 (iii) papilloomaviruksen minikromosomaalisesta ylläpitoelementistä, ja B) transformoidaan isäntäsolu tuloksena olevalla itsereplikoivalla rekombinattivektorilla, 5 C) viljellään isäntäsolua ja D) otetaan talteen mainittu vektori. 8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmä, t u n n e t t u siitä, että isäntäsolu on E. coli -solu. 9. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-5 mukaisen itsereplikoi- 113 van vektorin käyttö HIV:n vastaisen DNA-immunisointirokotteen valmistamiseksi. 10. Isäntäsolu, t u n n ettu siitä, että se käsittää minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-5 mukaista itserepiikoivaa vektoria. 11. Patenttivaatimuksen 10 mukainen isäntäsolu, t u n n e t t u 15 siitä, että se on bakteerisolu tai nisäkässolu.

21 Patentkrav 5 av 1. Självreplikerande rekombinant vektor, kännetecknad av att den innehåller papillomavirus nukleotidsekvenser, vilka väsentiigen består och (i) en papilloma-virus E1 gen och E2 gen, (ii) en minimal repiikon av papillomavirus och (iii) ett minikromosomait upprätthållningselement av papillomavirus, 10 en heterolog nukleotidsekvens, som kodar det regulatoriska protei- net NEF, REV eller TAT eller immunologiskt aktiva fragment därav. 2. Självreplikerande vektor enligt patentkrav 1, känneteckn a d av att papillomaviruset är papillomavirus av nöt (BPV). 3. Sjävreplikerande vektor enligt patentkrav 1 eller 2, k ä n n e- 15 t e c k n a d av att den heterologa nukleotidsekvensen kodar NEF-proteinet av HIV Självreplikerande vektor enligt vilket som helst av de föregående patentkraven, kännetecknad av att E1 kontrolleras av sra-promotorn eller tymidinkinaspromotorn Självreplikerande vektor enligt patentkrav 4, k ä n n et e c k- n a d av att den är den i figur 2, 3 eller 4 angivna pbntkrev, pbnsratat eller pbnsranef. att 6. Vaccin för DNA-immunisation mot HIV, kännetecknat av 25 det innehåller en självreplikerande vektor enligt vilket som helst av patentkraven Förfarande för framställning av en självreplikerande vektor enligt vilket som helst av patentkraven 1-5, kännetecknat av att förfarandet omfattar följande: 30 A) en heterolog nukleotidsekvens, som kodar det regulatoriska proteinet NEF, REV eller TAT eller immunologiskt aktiva fragment därav, sätts in i en vektor som innehåller papillomavirus nukleotidsekvenser som väsentiigen består av - (i) en papilloma-virus E1 gen och E2 gen, 35 - (ii) en minimal repiikon av papillomavirus och

22 (iii) ett minikromosomalt upprätthållningselement av papillomavirus, och B) en värdcell transformeras med den resulterande självreplikerande rekombinanta vektorn, 5 C) värdcellen odias, och D) vektorn tas tillvara. 8. Förfarande enligt patentkrav 7, k ä n n e t e c k n a t av att värdcellen är en E.co/i-cell. 9. Användning av en självreplikerande vektor enligt vilket som helst 10 av patentkraven 1-5 för framställning av ett DNA-immunisationsvaccin mot HIV. 10. Värdcell, kännetecknad av att den innehåller en självreplikerande vektor enligt vilket som helst av patentkraven Värdcell enligt patentkrav 10, kännetecknad av att den 15 är en bakteriecell eller en däggdjurscell.

23 105 '105 Kuvio la,hindm.233 BPVI URR.XbaI, 1236 S,Sa11,1310 AmpR RSV LTR.Sa11,1901 S,Xbal,.1907 am.t1l ,Kpal 6999,HindM 6993,KpnI: Y r pue ep beetagalaktosidaasi beeta-globiiniintroni 4983,XboT

24 Kuvio 1B del 0.18 I I 0.25 cor ac I :0.40 ind III 0,41 Bgl Ap Hind III 6.16 Sph Pst I 6.15 Sai ORI RSV LTR pnp ke beeta-globiini- IVS-p(A) Xho EcoR beeta-gal Sai Xba BamH 1 4,89 Sac

25 Kuvio H/nd III TK BPV ORI RSV LTR EiFtv Ei Xba I HIV Rev CDNA Xho 1 poiy (A) beeta-globiini-ivs-poly)a) LTR puc ORI Neo / Ken R s v 4 0 varhainen BPV E2 LTR / Hlnd 111

26 Kuvio /nd III sr -alfa BPV ORI RSV LTR Xba 1 BPv Ei HIV Tat oona Xha 1 beeta-globiini-ivs-poly(a) oct seq HInd II I poly (A) LTR / gag LTR puc ORI Neo / Ken FI S V 4 o varhainen BPV E2

27 Kuvio 4 105'105 SR-alfa-prom. MInd III 191 RSV LTR CMV prom. HIV N I cona sac I 0 stel BPV Ei sam HI ) beeta-globiini-ivs-p(a) p(a) BPV ORI p(a) LTR hired III 1*320) LTR 1; BPV E2 SV4 varhainen prom. puc ORI Neo / Ken R

28

29 LC) CZ).11.ek,N '0</ et M O 1. II

30 Kuvio A 20,, 18-0 te. 1L , 10 ") e Ei e 1 t elektori/kohde - suhteet B New 6') cn e o tr-:: 4 a) 2 CL. r.$) 0 1Z6 ZG CO elektori/kohde - suhteet

(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT. - (51) Kv.lk.4 "-' A 61K 39/12. (24) Alkupäivä Löpdag 01.06.84

(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT. - (51) Kv.lk.4 -' A 61K 39/12. (24) Alkupäivä Löpdag 01.06.84 (B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT C (45) PAÖntti Myörinetty Paten't - beviljats - (51) Kv.lk.4 "-' A 61K 39/12 (21) Patenttihakemus Patentansökning 842215 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus

Lisätiedot

Miten rokottaminen suojaa yksilöä ja rokotuskattavuus väestöä Merit Melin Rokotusohjelmayksikkö

Miten rokottaminen suojaa yksilöä ja rokotuskattavuus väestöä Merit Melin Rokotusohjelmayksikkö Miten rokottaminen suojaa yksilöä ja rokotuskattavuus väestöä Merit Melin Rokotusohjelmayksikkö 1 ESITYKSEN SISÄLTÖ Miten rokottaminen suojaa yksilöä? Immuunijärjestelmä Taudinaiheuttajilta suojaavan immuniteetin

Lisätiedot

GEENITEKNIIKAN PERUSASIOITA

GEENITEKNIIKAN PERUSASIOITA GEENITEKNIIKAN PERUSASIOITA GEENITEKNIIKKKA ON BIOTEKNIIKAN OSA-ALUE! Biotekniikka tutkii ja kehittää elävien solujen, solun osien, biokemiallisten menetelmien sekä molekyylibiologian uusimpien menetelmien

Lisätiedot

KandiakatemiA Kandiklinikka

KandiakatemiA Kandiklinikka Kandiklinikka Kandit vastaavat Immunologia Luonnollinen ja hankittu immuniteetti IMMUNOLOGIA Ihmisen immuniteetti pohjautuu luonnolliseen ja hankittuun immuniteettiin. Immunologiasta vastaa lymfaattiset

Lisätiedot

Virus-mediated gene delivery for human gene therapy KURT NURMI

Virus-mediated gene delivery for human gene therapy KURT NURMI Virus-mediated gene delivery for human gene therapy KURT NURMI 23.10.2017 Sisältö Lyhyesti geeniterapiasta, yleisimmistä virusvektoreista ja niiden ominaispiirteistä Kliininen käyttö ja ongelmat Johdanto

Lisätiedot

Inieilii!lim 111 1!!!mill

Inieilii!lim 111 1!!!mill Inieilii!lim 111 1!!!mill (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (1 0) FI B SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS PATENT- OCH REGISTERSTYRELSEN (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.11.2002

Lisätiedot

Elimistö puolustautuu

Elimistö puolustautuu Elimistö puolustautuu Tautimikrobit (= patogeenit): Bakteerit (esim. kolera), virukset (esim. influenssa), alkueliöt (esim. malaria), eräät sienet (esim. silsa) Aiheuttavat infektiotaudin Miten elimistö

Lisätiedot

(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT A 61K 37/02, 39/145, C 12N 15/44. (22) Hakemispäivä - Ansökningsdag 29.08.85

(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT A 61K 37/02, 39/145, C 12N 15/44. (22) Hakemispäivä - Ansökningsdag 29.08.85 (B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 85811 C (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5 ' 10 C,1; A 61K 37/02, 39/145, C 12N 15/44 (21) Patenttihakemus - Patentansökning 853320 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus

Lisätiedot

11. Elimistö puolustautuu

11. Elimistö puolustautuu 11. Elimistö puolustautuu Taudinaiheuttajat Tautimikrobit (= patogeenit): Bakteerit (esim. kolera), virukset (esim. influenssa), alkueliöt (esim. malaria), eräät sienet (esim. silsa) Aiheuttavat infektiotaudin

Lisätiedot

Elimistö puolustautuu

Elimistö puolustautuu Elimistö puolustautuu Tautimikrobit (= patogeenit): Bakteerit (esim. kolera), virukset (esim. influenssa), alkueliöt (esim. malaria), eräät sienet (esim. silsa) Aiheuttavat infektiotaudin Mistä taudinaiheuttajat

Lisätiedot

BI4 IHMISEN BIOLOGIA

BI4 IHMISEN BIOLOGIA BI4 IHMISEN BIOLOGIA MITÄ ROKOTUKSIA? Muistatko mitä rokotuksia olet saanut ja minkä viimeiseksi? Miten huolehdit koulun jälkeen rokotuksistasi? Mikrobit uhkaavat elimistöä Mikrobit voivat olla bakteereita,

Lisätiedot

Immuunipuutokset. Olli Vainio OY Diagnostiikan laitos OYS Kliinisen mikrobiologian laboratorio 17.10.2008

Immuunipuutokset. Olli Vainio OY Diagnostiikan laitos OYS Kliinisen mikrobiologian laboratorio 17.10.2008 Immuunipuutokset Olli Vainio OY Diagnostiikan laitos OYS Kliinisen mikrobiologian laboratorio 17.10.2008 Immuunijärjestelm rjestelmän n toiminta Synnynnäinen immuniteetti (innate) Välitön n vaste (tunneissa)

Lisätiedot

SUOIVII FINLAND (21) Patenttihakemus Patentansökning 883876

SUOIVII FINLAND (21) Patenttihakemus Patentansökning 883876 1111111 11111 1111 111111111111111111111111111111111111 F 10000B (B) (11)KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT C (45) Patentti myönnetty Patznt me1de1at 27 01 1997 (51) Kv.lk.6 - Int.c1.6 A 61K 39/09, C 12N

Lisätiedot

Sanna Nikunen ELL 4.10.2012

Sanna Nikunen ELL 4.10.2012 Sanna Nikunen ELL 4.10.2012 Kuuluu heimoon Orthomyxoviridae, joka jaetaan kahteen sukuun; Influenssa A- ja B- virukset sekä influenssa C-virukset A-virukset eläimillä ja ihmisillä, B- virukset harvinaisempia,

Lisätiedot

vauriotyypit Figure 5-17.mhc.restriktio 9/24/14 Autoimmuniteetti Kudosvaurion mekanismit Petteri Arstila Haartman-instituutti Patogeeniset mekanismit

vauriotyypit Figure 5-17.mhc.restriktio 9/24/14 Autoimmuniteetti Kudosvaurion mekanismit Petteri Arstila Haartman-instituutti Patogeeniset mekanismit vauriotyypit Kudosvaurion mekanismit Autoimmuniteetti Petteri Arstila Haartman-instituutti Antigeenin tunnistus HLA:ssa pitää sisällään autoimmuniteetin riskin: jokaisella on autoreaktiivisia lymfosyyttejä

Lisätiedot

1111111111!11,11)11111,11111111111191 1 111 111111 111 11111

1111111111!11,11)11111,11111111111191 1 111 111111 111 11111 1111111111!11,11)11111,11111111111191 1 111 111111 111 11111 (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 111384B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.07.2003 SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS

Lisätiedot

Genetiikan perusteiden harjoitustyöt

Genetiikan perusteiden harjoitustyöt Genetiikan perusteiden harjoitustyöt Molekyylien kloonaus ja siihen liittyvät taidot ja temput, osa 1 Restriktioentsyymit, elektroforeesi Moniste sivulta 24-: Geenien kloonaus CELL 491- Isolating, cloning,

Lisätiedot

Viekirax-valmisteen (ombitasviiri/paritapreviiri/ritonaviiri) riskienhallintasuunnitelman yhteenveto

Viekirax-valmisteen (ombitasviiri/paritapreviiri/ritonaviiri) riskienhallintasuunnitelman yhteenveto EMA/775985/2014 Viekirax-valmisteen (ombitasviiri/paritapreviiri/ritonaviiri) enhallintasuunnitelman yhteenveto Tämä on Viekirax-valmisteen enhallintasuunnitelman yhteenveto, jossa esitetään toimenpiteet,

Lisätiedot

11111111111111! 11,1!111111,1, 1 11! 1 111111 111111 111 1

11111111111111! 11,1!111111,1, 1 11! 1 111111 111111 111 1 11111111111111! 11,1!111111,1, 1 11! 1 111111 111111 111 1 (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSICRIFT (10) FI B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.01.1999 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus

Lisätiedot

KUULUTUSjULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFT 409_22 30. 1;), 10 VII 1969 : Pat,3:it IrL3ddelat. Patenffihakemus Patentansökning 2303/63

KUULUTUSjULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFT 409_22 30. 1;), 10 VII 1969 : Pat,3:it IrL3ddelat. Patenffihakemus Patentansökning 2303/63 SUOMI FINLAND Patentti- ja rekisterihallitus Patent- och registerstyrelsen KUULUTUSjULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFT 409_22 Kv. IkJlnt. Cl. A 61 k 3/60 Uc/KI. 30. 1;), 10 VII 1969 : Pat,3:it IrL3ddelat Patenffihakemus

Lisätiedot

Bioteknologian tutkinto-ohjelma Valintakoe Tehtävä 3 Pisteet / 30

Bioteknologian tutkinto-ohjelma Valintakoe Tehtävä 3 Pisteet / 30 Tampereen yliopisto Bioteknologian tutkinto-ohjelma Valintakoe 21.5.2015 Henkilötunnus - Sukunimi Etunimet Tehtävä 3 Pisteet / 30 3. a) Alla on lyhyt jakso dsdna:ta, joka koodaa muutaman aminohappotähteen

Lisätiedot

(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 83667. (51) Kv.lk.5 - Int.cl.5 C 12N 5/18, A 61K 39/012. (21) Patenttihakemus - Patentansökning 843142

(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 83667. (51) Kv.lk.5 - Int.cl.5 C 12N 5/18, A 61K 39/012. (21) Patenttihakemus - Patentansökning 843142 (B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 83667 _. (51) Kv.lk.5 - Int.cl.5 C 12N 5/18, A 61K 39/012 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus Patent- och registerstyrelsen (21) Patenttihakemus

Lisätiedot

S UOM 1 FI N LAN D 0 KUULUTUSJULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFT 4 5 7 6 6

S UOM 1 FI N LAN D 0 KUULUTUSJULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFT 4 5 7 6 6 S UOM 1 FI N LAN D 0 KUULUTUSJULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFT 4 5 7 6 6 Kv. lk./int. Cl. C 12 k 5/00 (5:» Uc./KI. 30 h 6 Patentti myönnetty Patent meddelat 11 IX 1972 Patenttihakemus Patentansökning 547 /6 9

Lisätiedot

(B) ( 11) KUULUTUS JULKA I SU UTLAGGN I NG S SKR I FT 95871 C 45 ) PaterAti tay3sarletti Patent moddelat 1.0 04 1.036. (51) Kv.lk.6 Int.c1.

(B) ( 11) KUULUTUS JULKA I SU UTLAGGN I NG S SKR I FT 95871 C 45 ) PaterAti tay3sarletti Patent moddelat 1.0 04 1.036. (51) Kv.lk.6 Int.c1. Ii 4, 111 1 111111111111111 1 1111111111111 1 1111111111 1 11111 111111 1 111111 F10000B (B) ( 11) KUULUTUS JULKA I SU UTLAGGN I NG S SKR I FT C 45 ) PaterAti tay3sarletti Patent moddelat 1.0 04 1.036

Lisätiedot

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) F11177898. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats. (51) Kv.lk. - Int.kl.

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) F11177898. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats. (51) Kv.lk. - Int.kl. (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT 1 1 10 111 (10) F18 (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 28.02.2007 SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS PATENT- OCH REGISTERSTYRELSEN (51) Kv.lk.

Lisätiedot

Biologian tehtävien vastaukset ja selitykset

Biologian tehtävien vastaukset ja selitykset Biologian tehtävien vastaukset ja selitykset Ilmainen lääkiksen harjoituspääsykoe, kevät 2017 Tehtävä 2. (20 p) A. 1. EPÄTOSI. Ks. s. 4. Menetelmää käytetään geenitekniikassa geenien muokkaamisessa. 2.

Lisätiedot

SUOMI-FINLAND 0 KUULUTUSJULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFt43094

SUOMI-FINLAND 0 KUULUTUSJULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFt43094 SUOMI-FINLAND 0 KUULUTUSJULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFt Kv. lk./int. Cl. C 1 2 k 7/00 Lk./KI. 30 h 6 CO Patentti myönnetty 11 11971 Patent meddetat Patenttihakemus Patentansökning 2099/66 Hakemispkiivä Ansökningsdag

Lisätiedot

LIITE I VALMISTEYHTEENVETO

LIITE I VALMISTEYHTEENVETO LIITE I VALMISTEYHTEENVETO 1 1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI Purevax Rabies injektioneste, suspensio 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS Yksi 1 ml:n annos sisältää: Vaikuttava aine: Rabies rekombinantti canarypox-virus

Lisätiedot

HPV-rokote tulee rokotusohjelmaan mitä, kenelle, miksi?

HPV-rokote tulee rokotusohjelmaan mitä, kenelle, miksi? HPV-rokote tulee rokotusohjelmaan mitä, kenelle, miksi? Tuija Leino THL Kerron tässä alkavasta rokotusohjelmasta rokotteesta Miksi otettu ohjelmaan? Miltä taudilta suojaudutaan? Miksi otettu ohjelmaan

Lisätiedot

PCR - tekniikka elintarvikeanalytiikassa

PCR - tekniikka elintarvikeanalytiikassa PCR - tekniikka elintarvikeanalytiikassa Listerian, Salmonellan ja kampylobakteerien tunnistus elintarvikkeista ja rehuista 29.11.2012 Eva Fredriksson-Lidsle Listeria monocytogenes Salmonella (spp) Campylobacter

Lisätiedot

Genetiikan perusteiden toisen jakson kaavailua

Genetiikan perusteiden toisen jakson kaavailua Genetiikan perusteiden toisen jakson kaavailua Tiedämme kaiken siitä, miten geenit siirtyvät sukupolvelta seuraavalle solun ja yksilön tasolla Toisen jakson sisältö: Mitä geenit ovat? Miten geenit toimivat?

Lisätiedot

Teabepäeva korraldamist toetab Euroopa Liit Eesti riikliku mesindusprogrammi 2013 2016 raames

Teabepäeva korraldamist toetab Euroopa Liit Eesti riikliku mesindusprogrammi 2013 2016 raames Teabepäeva korraldamist toetab Euroopa Liit Eesti riikliku mesindusprogrammi 2013 2016 raames Eesti mesinike suvine teabepäev Koht ja aeg: Olustvere Teenindus- ja Maamajanduskooli ruumides, 11.07.2015.a.

Lisätiedot

Lääketieteen ja biotieteiden tiedekunta Sukunimi Bioteknologia tutkinto-ohjelma Etunimet valintakoe pe Tehtävä 1 Pisteet / 15

Lääketieteen ja biotieteiden tiedekunta Sukunimi Bioteknologia tutkinto-ohjelma Etunimet valintakoe pe Tehtävä 1 Pisteet / 15 Tampereen yliopisto Henkilötunnus - Lääketieteen ja biotieteiden tiedekunta Sukunimi Bioteknologia tutkinto-ohjelma Etunimet valintakoe pe 18.5.2018 Tehtävä 1 Pisteet / 15 1. Alla on esitetty urheilijan

Lisätiedot

Injektioneste, suspensio. Vaaleanpunertava tai valkoinen neste, joka sisältää valkoista sakkaa. Sakka sekoittuu helposti ravisteltaessa.

Injektioneste, suspensio. Vaaleanpunertava tai valkoinen neste, joka sisältää valkoista sakkaa. Sakka sekoittuu helposti ravisteltaessa. 1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI Trilyme injektioneste, suspensio koirille 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS Yksi annos (1 ml) sisältää: Vaikuttavat aineet: Inaktivoitu Borrelia burgdorferi sensu lato: Borrelia

Lisätiedot

1111111111 1111111111111121p1115113 11111111111

1111111111 1111111111111121p1115113 11111111111 1111111111 1111111111111121p1115113 11111111111 (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (1o) FI B SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS PATENT- OCH REGISTERSTYRELSEN (45) Patentti myönnetty -

Lisätiedot

FIT Biotech Oy - Innovatiivisia lääkehoitoja. Tieteellinen johtaja Santeri Kiviluoto, Fil. tri, KTK

FIT Biotech Oy - Innovatiivisia lääkehoitoja. Tieteellinen johtaja Santeri Kiviluoto, Fil. tri, KTK FIT Biotech Oy - Innovatiivisia lääkehoitoja Tieteellinen johtaja Santeri Kiviluoto, Fil. tri, KTK Tärkeää tietoa Tämä esitys saattaa sisältää tulevaisuutta koskevia lausumia, arvioita ja laskelmia Yhtiöstä

Lisätiedot

(12) PATENTTIJULKAISU (10) FI 117974 13. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats. (51) Kv.Ik. Int.kl.

(12) PATENTTIJULKAISU (10) FI 117974 13. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats. (51) Kv.Ik. Int.kl. (12) PATENTTIJULKAISU 11 M F I 0001 17974B PATENTSKRIFT (10) FI 117974 13 (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.05.2007 SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS PATENT- OCH REGISTERSTYRELSEN

Lisätiedot

111111111111111111 II IIII II II 11111111111111111111

111111111111111111 II IIII II II 11111111111111111111 111111111111111111 II IIII II II 11111111111111111111 F10008 (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSICRIFT (10) FI B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.04.1999 (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 SUOMI-FINLAND (FI)

Lisätiedot

Hevosten rokottaminen. Eläinlääkäri Martti Nevalainen Intervet Oy, osa Schering-Plough konsernia

Hevosten rokottaminen. Eläinlääkäri Martti Nevalainen Intervet Oy, osa Schering-Plough konsernia Hevosten rokottaminen Eläinlääkäri Martti Nevalainen Intervet Oy, osa Schering-Plough konsernia Miksi rokotuttaa hevosia? Pyritään ennaltaehkäisemään tai lieventämään tartuntatauteja, jotka saattavat aiheuttaa

Lisätiedot

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 117514 B. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.11.2006. (51) Kv.lk. - Int.kl.

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 117514 B. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.11.2006. (51) Kv.lk. - Int.kl. (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT III 11 1 1111 111111 1111111111 F 10001 17514B II (10) FI 117514 B SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS PATENT- OCH REGISTERSTYRELSEN (45) Patentti myönnetty

Lisätiedot

Plasmidi-DNA:n eristys bakteerisoluista DNA:n geelielektroforeesi (Proteiinien geelielektroforeesi)

Plasmidi-DNA:n eristys bakteerisoluista DNA:n geelielektroforeesi (Proteiinien geelielektroforeesi) Plasmidi-DNA:n eristys bakteerisoluista DNA:n geelielektroforeesi (Proteiinien geelielektroforeesi) CHEM-A1310 Biotieteen perusteet Heli Viskari 2017 DNA-harjoitustöiden aikataulu, valitse yksi näistä

Lisätiedot

LIITE I VALMISTEYHTEENVETO

LIITE I VALMISTEYHTEENVETO LIITE I VALMISTEYHTEENVETO 1 1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI Nobivac L4 injektioneste, suspensio koirille 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS Yksi 1 ml:n annos sisältää: Vaikuttavat aineet: Inaktivoidut Leptospira

Lisätiedot

LIITE I VALMISTEYHTEENVETO

LIITE I VALMISTEYHTEENVETO LIITE I VALMISTEYHTEENVETO 1 1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI Proteq West Nile injektioneste, suspensio, hevoselle 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS Yksi 1 ml:n annos sisältää: Vaikuttava aine: West Nile rekombinantti

Lisätiedot

ENTSYYMIKATA- LYYSIN PERUSTEET (dos. Tuomas Haltia)

ENTSYYMIKATA- LYYSIN PERUSTEET (dos. Tuomas Haltia) ENTSYYMIKATA- LYYSIN PERUSTEET (dos. Tuomas Haltia) Elämän edellytykset: Solun täytyy pystyä (a) replikoitumaan (B) katalysoimaan tarvitsemiaan reaktioita tehokkaasti ja selektiivisesti eli sillä on oltava

Lisätiedot

DNA RNA proteiinit transkriptio prosessointi translaatio regulaatio

DNA RNA proteiinit transkriptio prosessointi translaatio regulaatio CELL 411-- replikaatio repair mitoosi meioosi fertilisaatio rekombinaatio repair mendelistinen genetiikka DNA-huusholli Geenien toiminta molekyyligenetiikka DNA RNA proteiinit transkriptio prosessointi

Lisätiedot

Bioteknologian perustyökaluja

Bioteknologian perustyökaluja Bioteknologian perustyökaluja DNAn ja RNAn eristäminen helppoa. Puhdistaminen työlästä (DNA pestään lukuisilla liuottimilla). Myös lähetti-rnat voidaan eristää ja muuntaa virusten käänteiskopioijaentsyymin

Lisätiedot

LIITE I VALMISTEYHTEENVETO

LIITE I VALMISTEYHTEENVETO LIITE I VALMISTEYHTEENVETO 1/16 1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI Equilis injektioneste, suspensio, hevoselle 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS Annos (1 ml) sisältää: Vaikuttava(t) aine(et) Hevosen influenssaviruksien

Lisätiedot

PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT FI 109029 B. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.05.2002. (51) Kv.lk.7 - Int.k1.7

PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT FI 109029 B. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.05.2002. (51) Kv.lk.7 - Int.k1.7 II UR IMI ii II F I 0001 09029B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 109029 B SUOMI - FINLAND (FI) (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 15.05.2002 (51) Kv.lk.7 - Int.k1.7 CO7K 14/00, C12N 15/31,

Lisätiedot

LIITE I VALMISTEYHTEENVETO

LIITE I VALMISTEYHTEENVETO LIITE I VALMISTEYHTEENVETO 1 1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI Porcilis ColiClos injektioneste, suspensio sioille 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS Yksi 2 ml:n annos sisältää: Vaikuttavat aineet: Escherichia

Lisätiedot

Menjugate. 22.06.2016, Versio 1 RISKIENHALLINTASUUNNITELMAN JULKINEN YHTEENVETO

Menjugate. 22.06.2016, Versio 1 RISKIENHALLINTASUUNNITELMAN JULKINEN YHTEENVETO Menjugate 22.06.2016, Versio 1 RISKIENHALLINTASUUNNITELMAN JULKINEN YHTEENVETO VI.2 VI.2.1 Julkisen yhteenvedon osiot Tietoa sairauden esiintyvyydestä N. meningitidis -bakteeri voi aiheuttaa infektion

Lisätiedot

Autoimmuunitaudit: osa 1

Autoimmuunitaudit: osa 1 Autoimmuunitaudit: osa 1 Autoimmuunitaute tunnetaan yli 80. Ne ovat kroonisia sairauksia, joiden syntymekanismia eli patogeneesiä ei useimmissa tapauksissa ymmärretä. Tautien esiintyvyys vaihtelee maanosien,

Lisätiedot

SUOMI-FINLAND (22) Hakemispäivä - Ansökningsdag 07.11.85 (FI)

SUOMI-FINLAND (22) Hakemispäivä - Ansökningsdag 07.11.85 (FI) (13) (11) KUULUTUSJULKA I SU UTLAGGN I NGSSKR I FT 84558 C ( 3) T t t y (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5 2:1 A 61K 39/12, C 07K 7/08 (21) Patenttihakemus - Patentansökning 854396 SUOMI-FINLAND (22) Hakemispäivä

Lisätiedot

PERINNÖLLISET TEKIJÄT JA NIIDEN MERKITYS RINTASYÖPÄSAIRASTUMISESSA. Robert Winqvist. SyöpägeneCikan ja tuumoribiologian professori Oulun yliopisto

PERINNÖLLISET TEKIJÄT JA NIIDEN MERKITYS RINTASYÖPÄSAIRASTUMISESSA. Robert Winqvist. SyöpägeneCikan ja tuumoribiologian professori Oulun yliopisto PERINNÖLLISET TEKIJÄT JA NIIDEN MERKITYS RINTASYÖPÄSAIRASTUMISESSA Robert Winqvist SyöpägeneCikan ja tuumoribiologian professori Oulun yliopisto PROFESSORILIITON SYYSSEMINAARI TUTKIMUSTA KAIKKIEN HYÖDYKSI

Lisätiedot

(12) PATENTTI JULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 101936 B. (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 A 61K 39/095, C 12N 15/31, 15/63, 1/20

(12) PATENTTI JULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 101936 B. (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 A 61K 39/095, C 12N 15/31, 15/63, 1/20 11111111111 111 111111111 111 11 11 1 1111111111111111111 1 F1000B (12) PATENTTI JULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 30.09.1998 (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 SUOMI-FINLAND

Lisätiedot

11111111111111 11 [II 1111

11111111111111 11 [II 1111 11111111111111 11 [II 1111 F (000101453B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTS1CRIFT (10) FI 101453 B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 30.06.98 (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 SUOMI-FINLAND (FI) A 61K 39/012,

Lisätiedot

(51) Kv.lk.5 Int.c1.5 C 12P 21/00, C 12N 15/38. (41) Tullut julkiseksi - Blivit offentlig 21.01.84. (32) (33) (31) Etuoikeus - Prioritet

(51) Kv.lk.5 Int.c1.5 C 12P 21/00, C 12N 15/38. (41) Tullut julkiseksi - Blivit offentlig 21.01.84. (32) (33) (31) Etuoikeus - Prioritet (B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 83974 C (51) Kv.lk.5 Int.c1.5 C 12P 21/00, C 12N 15/38 (21) Patenttihakemus - Patentansökning 832632 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus Patent

Lisätiedot

Nivelreuman serologiset testit: mitä ne kertovat? LT, apulaisylilääkäri Anna-Maija Haapala TAYS Laboratoriokeskus

Nivelreuman serologiset testit: mitä ne kertovat? LT, apulaisylilääkäri Anna-Maija Haapala TAYS Laboratoriokeskus Nivelreuman serologiset testit: mitä ne kertovat? LT, apulaisylilääkäri Anna-Maija Haapala TAYS Laboratoriokeskus Sisältö 1. Nivelreuma: etiologia, esiintyvyys, diagnostiikka 2. Nivelreuman serologiset

Lisätiedot

IMMUUNIPUUTOKSET. Olli Vainio Turun yliopisto

IMMUUNIPUUTOKSET. Olli Vainio Turun yliopisto IMMUUNIPUUTOKSET Olli Vainio Turun yliopisto 130204 IMMUNOLOGIA Oppi kehon puolustusmekanismeista infektiota vastaan Immuunijärjestelmä = kudokset, solut ja molekyylit, jotka muodostavat vastustuskyvyn

Lisätiedot

"Geenin toiminnan säätely" Moniste sivu 13

Geenin toiminnan säätely Moniste sivu 13 "Geenin toiminnan säätely" Moniste sivu 13 Monisteen alussa on erittäin tärkeitä ohjeita turvallisuudesta Lukekaa sivu 5 huolellisesti ja usein Vaarat vaanivat: Palavia nesteitä ja liekkejä on joskus/usein

Lisätiedot

LIITE I VALMISTEYHTEENVETO

LIITE I VALMISTEYHTEENVETO LIITE I VALMISTEYHTEENVETO 1 1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI Duvaxyn WNV injektioneste, emulsio, hevoselle 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS 1 ml annos sisältää: Vaikuttava aine: Inaktivoitu Länsi-Niilin virus,

Lisätiedot

Genomi-ilmentyminen Genom expression (uttryckning) Nina Peitsaro, yliopistonlehtori, Medicum, Biokemia ja Kehitysbiologia

Genomi-ilmentyminen Genom expression (uttryckning) Nina Peitsaro, yliopistonlehtori, Medicum, Biokemia ja Kehitysbiologia Genomi-ilmentyminen Genom expression (uttryckning) DNA RNA 7.12.2017 Nina Peitsaro, yliopistonlehtori, Medicum, Biokemia ja Kehitysbiologia Osaamistavoitteet Lärandemål Luennon jälkeen ymmärrät pääperiaatteet

Lisätiedot

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 102382 B. (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6. (21) Patenttihakemus - Patentansökning 903154

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 102382 B. (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6. (21) Patenttihakemus - Patentansökning 903154 1111111111111111 1111 1111 11101 1110 111111111 F1000B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 30.11.1998 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus

Lisätiedot

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT 11111111 1 1111111 111,11111!1,11,1 1,11111!111!11111111111 1 11111111 F (10) FI 116838 B

(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT 11111111 1 1111111 111,11111!1,11,1 1,11111!111!11111111111 1 11111111 F (10) FI 116838 B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT 11111111 1 1111111 111,11111!1,11,1 1,11111!111!11111111111 1 11111111 F (10) FI 116838 B SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERINALLITUS PATENT- OCH REGISTERSTYRELSEN

Lisätiedot

Rokottaminen - käytännön ohjeita pulmatilanteisiin

Rokottaminen - käytännön ohjeita pulmatilanteisiin Rokottaminen - käytännön ohjeita pulmatilanteisiin Th Nina Strömberg Rokotusohjelmayksikkö THL 5.4.2016 1 Rokottamisen muistisäännöt Rokottamisessa ja rokotussarjojen aikatauluttamisessa on tietyt lainalaisuudet,

Lisätiedot

111 11111111 III IIII 1111111111111 11 11111 II III III

111 11111111 III IIII 1111111111111 11 11111 II III III 111 11111111 III IIII 1111111111111 11 11111 II III III F I 000B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 30.06.2000 SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS

Lisätiedot

Tuberkuloosin immunodiagnostiset testit. Dosentti Tamara Tuuminen, kliinisen mikrobiologian erl HY, HUSLAB Labquality 02.11.2007

Tuberkuloosin immunodiagnostiset testit. Dosentti Tamara Tuuminen, kliinisen mikrobiologian erl HY, HUSLAB Labquality 02.11.2007 Tuberkuloosin immunodiagnostiset testit Dosentti Tamara Tuuminen, kliinisen mikrobiologian erl HY, HUSLAB Labquality 02.11.2007 HUSLAB:n testivalikoima ELISPOT= Ly-TbSpot Mittaa IFNγ tuottavien solujen

Lisätiedot

Genomin ilmentyminen Liisa Kauppi, Genomibiologian tutkimusohjelma

Genomin ilmentyminen Liisa Kauppi, Genomibiologian tutkimusohjelma Genomin ilmentyminen 17.1.2013 Liisa Kauppi, Genomibiologian tutkimusohjelma liisa.kauppi@helsinki.fi Genomin ilmentyminen transkription aloitus RNA:n synteesi ja muokkaus DNA:n ja RNA:n välisiä eroja

Lisätiedot

Eeva Seppänen ENDOTELIINI-1-FUUSIOPROTEIININ KLOONAAMINEN JA TUOTTAMINEN

Eeva Seppänen ENDOTELIINI-1-FUUSIOPROTEIININ KLOONAAMINEN JA TUOTTAMINEN Eeva Seppänen ENDOTELIINI-1-FUUSIOPROTEIININ KLOONAAMINEN JA TUOTTAMINEN ENDOTELIINI-1-FUUSIOPROTEIININ KLOONAAMINEN JA TUOTTAMINEN Eeva Seppänen Opinnäytetyö Syksy 2010 Laboratorioalan koulutusohjelma

Lisätiedot

Spesifinen immuniteetti - Lymfosyyttityypit. 3. Puolustuslinja (hankittu ja spesifinen immuniteetti) Kahdenlaisia imusoluja (lymfosyyttejä):

Spesifinen immuniteetti - Lymfosyyttityypit. 3. Puolustuslinja (hankittu ja spesifinen immuniteetti) Kahdenlaisia imusoluja (lymfosyyttejä): Eläinfysiologia ja histologia Luento X Kitarisat Nielurisat. Puolustuslinja (hankittu ja spesifinen immuniteetti) Spesifinen immuniteetti - Lymfosyyttityypit Lymfosyytti Kahdenlaisia imusoluja (lymfosyyttejä):

Lisätiedot

SUOMI FINLAND (21) Patenttihakemus - Patentansökning 860015

SUOMI FINLAND (21) Patenttihakemus - Patentansökning 860015 111111111111111111111111111 1 111111111111111111 1 111111111111111111 1 111 F 0000B (B) (U)KUULUTUBJULKAIBU UTLAGGNINGSSKRIFT '''` Pat: - t :::13cl -J.t 27 C3 12:5 (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5 A 61K 39/00,

Lisätiedot

PAKKAUSSELOSTE 1. MYYNTILUVAN HALTIJAN NIMI JA OSOITE SEKÄ ERÄN VAPAUTTAMISESTA VASTAAVAN VALMISTAJAN NIMI JA OSOITE EUROOPAN TALOUSALUEELLA, JOS ERI

PAKKAUSSELOSTE 1. MYYNTILUVAN HALTIJAN NIMI JA OSOITE SEKÄ ERÄN VAPAUTTAMISESTA VASTAAVAN VALMISTAJAN NIMI JA OSOITE EUROOPAN TALOUSALUEELLA, JOS ERI PAKKAUSSELOSTE Fucithalmic vet. 1% silmätipat, suspensio koirille ja kissoille 1. MYYNTILUVAN HALTIJAN NIMI JA OSOITE SEKÄ ERÄN VAPAUTTAMISESTA VASTAAVAN VALMISTAJAN NIMI JA OSOITE EUROOPAN TALOUSALUEELLA,

Lisätiedot

IMMUNOLOGIAN PERUSTEET Haartman-instituutti

IMMUNOLOGIAN PERUSTEET Haartman-instituutti IMMUNOLOGIAN PERUSTEET Petteri.Arstila@helsinki.fi 2012 Haartman-instituutti Immuunijärjestelmän tarkoituksena on torjua vieraita taudinaiheuttajia. Immuunipuolustus on organisoitu siten, että perifeerisissä

Lisätiedot

Virukset lääketieteen apuvälineinä. Veijo Hukkanen, Veli-Matti Kähäri ja Timo Hyypiä

Virukset lääketieteen apuvälineinä. Veijo Hukkanen, Veli-Matti Kähäri ja Timo Hyypiä Kuvat kertovat Veijo Hukkanen, Veli-Matti Kähäri ja Timo Hyypiä Virusten molekyylitasoinen tuntemus on tehnyt mahdolliseksi hyödyntää viruksia niiden luonnollisessa tehtävässä geenien kuljettimina eli

Lisätiedot

OLLI RUOHO TERVEYDENHUOLTOELÄINLÄÄKÄRI. www.ett.fi. ETT ry

OLLI RUOHO TERVEYDENHUOLTOELÄINLÄÄKÄRI. www.ett.fi. ETT ry OLLI RUOHO TERVEYDENHUOLTOELÄINLÄÄKÄRI www.ett.fi ETT ry VIRUSRIPULIT, HENGITYSTIETULEHDUKSET Ajoittain esiintyviä, erittäin helposti leviäviä V. 2012 tarttuvaa, voimakasoireista koronavirusripulia (?)

Lisätiedot

Pihkauutteen mikrobiologiaa

Pihkauutteen mikrobiologiaa Pihkauutteen mikrobiologiaa 1. Taustaa Lapin ammattiopiston toimeksiannosta tutkittiin pihka / kasvisöljyseoksen antimikrobista tehoa. 2. Tutkimusmenetelmä Antimikrobinen teho arvioitiin sovelletulla agardiffuusiomenetelmällä

Lisätiedot

Virusten leviämistä karjaan voi estää pohjoismaista todistusaineistoa

Virusten leviämistä karjaan voi estää pohjoismaista todistusaineistoa Virusten leviämistä karjaan voi estää pohjoismaista todistusaineistoa Vaali viisaasti vasikkaa koulutus 17.1.2017 Salla Ruuska, Savonia Ammattikorkeakoulu Oy RS- ja koronavirus RS (respiratory syncytial)

Lisätiedot

Farmasian tutkimuksen tulevaisuuden näkymiä. Arto Urtti Lääketutkimuksen keskus Farmasian tiedekunta Helsingin yliopisto

Farmasian tutkimuksen tulevaisuuden näkymiä. Arto Urtti Lääketutkimuksen keskus Farmasian tiedekunta Helsingin yliopisto Farmasian tutkimuksen tulevaisuuden näkymiä Arto Urtti Lääketutkimuksen keskus Farmasian tiedekunta Helsingin yliopisto Auttaako lääkehoito? 10 potilasta 3 saa avun 3 ottaa lääkkeen miten sattuu - ei se

Lisätiedot

I1111111 111111111IlIl 11111111111111111111181111111111i

I1111111 111111111IlIl 11111111111111111111181111111111i I1111111 111111111IlIl 11111111111111111111181111111111i F I00008 111111 il I I Ill (B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 91688. L.-*, 1.-Lu-..IC " _ b./ n * I. - A I... I. 1. n!. : :,.:. (17) :-

Lisätiedot

TARTUNTATAUDIT Ellen, Olli, Maria & Elina

TARTUNTATAUDIT Ellen, Olli, Maria & Elina TARTUNTATAUDIT Ellen, Olli, Maria & Elina ELIMISTÖN PUOLUSTUSKYKY Immuniteetti eli vastutuskyky on elimistön kyky suojautua tarttuvilta taudeilta Jos tauteja aiheuttavat mikrobit uhkaavat elimistöä, käynnistyy

Lisätiedot

Virusriskin vähentäminen elintarviketuotannossa

Virusriskin vähentäminen elintarviketuotannossa Virusriskin vähentäminen elintarviketuotannossa Satu Salo, VTT Expert Services Oy Marjaana Rättö, Irina Tsitko ja Hanna Miettinen, VTT 2 Viruskontaminaation riskinhallintakeinojen kehittäminen ja arvioiminen

Lisätiedot

Virukset ja eliökunta ovat kehittyneet rinnakkain

Virukset ja eliökunta ovat kehittyneet rinnakkain Virologia Miten virukset välttävät isännän puolustuksen? Aimo A. Salmi Virusten kehitystä on edistänyt niiden tarve heikentää elimistön puolustuskykyä. Virusten muuntautuminen on tehokkaampaa kuin niiden

Lisätiedot

Seuraavat E.coli antigeenit. 16 HA yksikköä. 50 HA yksikköä 987P 0,15 µg LTB 0,1 µg (HA = hemagglutiini)

Seuraavat E.coli antigeenit. 16 HA yksikköä. 50 HA yksikköä 987P 0,15 µg LTB 0,1 µg (HA = hemagglutiini) VALMISTEYHTEENVETO 1 ELÄINLÄÄKEVALMISTEEN KAUPPANIMI COLISORB vet. 2 VAIKUTTAVAT AINEET JA APUAINEET JA NIIDEN MÄÄRÄT Kvantitatiivinen koostumus Vaikuttavat aineet Seuraavat E.coli antigeenit vähintään

Lisätiedot

GEENITEKNIIKALLA MUUNNETTUJEN MIKRO-ORGANISMIEN SUUNNITEL- LUN KÄYTÖN TURVALLISUUDEN ARVIOINNISSA HUOMIOON OTETTAVAT TEKIJÄT

GEENITEKNIIKALLA MUUNNETTUJEN MIKRO-ORGANISMIEN SUUNNITEL- LUN KÄYTÖN TURVALLISUUDEN ARVIOINNISSA HUOMIOON OTETTAVAT TEKIJÄT 48 LIITE IV GEENITEKNIIKALLA MUUNNETTUJEN MIKRO-ORGANISMIEN SUUNNITEL- LUN KÄYTÖN TURVALLISUUDEN ARVIOINNISSA HUOMIOON OTETTAVAT TEKIJÄT Geenitekniikalla muunnettujen mikro-organismien suunnitellun käytön

Lisätiedot

Pihkauutteen mikrobiologiaa. Perusselvitys pihkajalosteen antimikrobisista ominaisuuksista

Pihkauutteen mikrobiologiaa. Perusselvitys pihkajalosteen antimikrobisista ominaisuuksista Pihkauutteen mikrobiologiaa Perusselvitys pihkajalosteen antimikrobisista ominaisuuksista Rainer Peltola Täsmätietoa Lapin luonnontuotteista maakunnalle 2016 Pihkauutteen mikrobiologiaa Perusselvitys

Lisätiedot

NaturaPura Ibérica Elokuu 10, 2009 Rua das Australias, No. 1 4705-322 Braga Portugali

NaturaPura Ibérica Elokuu 10, 2009 Rua das Australias, No. 1 4705-322 Braga Portugali NaturaPura Ibérica Elokuu 10, 2009 Rua das Australias, No. 1 4705-322 Braga Portugali VIITATEN: IN VITRO IHOÄRSYTTÄVYYSTESTAUSRAPORTTI Oheisena NaturaPuran toimittaman 100% puuvillakangasmateriaalin in

Lisätiedot

Etunimi: Henkilötunnus:

Etunimi: Henkilötunnus: Kokonaispisteet: Lue oheinen artikkeli ja vastaa kysymyksiin 1-25. Huomaa, että artikkelista ei löydy suoraan vastausta kaikkiin kysymyksiin, vaan sinun tulee myös tuntea ja selittää tarkemmin artikkelissa

Lisätiedot

B-leuk-määritys vieritestimittauksena infektiodiagnostiikassa

B-leuk-määritys vieritestimittauksena infektiodiagnostiikassa 4.2.2009 B-leuk-määritys vieritestimittauksena infektiodiagnostiikassa Ville Peltola Dosentti, lasten infektiolääkäri TYKS Hengitystieinfektioiden lukumäärä vuosittain 7 Infektioita/ vuosi/ henkilö (keskiarvo)

Lisätiedot

HIV-POSITIIVISTEN POTILAIDEN KUOLINSYYT 2000-LUVUN HELSINGISSÄ. 11.2.2015 XVI valtakunnallinen HIV-koulutus Jussi Sutinen Dos, Joona Lassila LL

HIV-POSITIIVISTEN POTILAIDEN KUOLINSYYT 2000-LUVUN HELSINGISSÄ. 11.2.2015 XVI valtakunnallinen HIV-koulutus Jussi Sutinen Dos, Joona Lassila LL HIV-POSITIIVISTEN POTILAIDEN KUOLINSYYT 2000-LUVUN HELSINGISSÄ 11.2.2015 XVI valtakunnallinen HIV-koulutus Jussi Sutinen Dos, Joona Lassila LL Changes in the cause of death among HIV positive subjects

Lisätiedot

Synteettinen biologia Suomessa: Virukset synteettisen biologian työkaluina

Synteettinen biologia Suomessa: Virukset synteettisen biologian työkaluina Synteettinen biologia Suomessa: Virukset synteettisen biologian työkaluina Minna Poranen Akatemiatutkija Helsingin yliopisto FinSynBio-ohjelma Suomen Akatemia Virukset synteettisen biologian työkaluina

Lisätiedot

VERIRYHMÄT JA VERIRYHMÄVASTA-AINEET

VERIRYHMÄT JA VERIRYHMÄVASTA-AINEET VERIRYHMÄT JA VERIRYHMÄVASTA-AINEET Raskaudenaikaiset veriryhmäimmunisaatiot 2018 Kati Sulin Biokemisti 12.4.2018 Sisältö Veriryhmät ABO Rh-veriryhmäjärjestelmä Sikiön veriryhmämääritykset äidin verinäytteestä

Lisätiedot

LIITE I VALMISTEYHTEENVETO

LIITE I VALMISTEYHTEENVETO LIITE I VALMISTEYHTEENVETO 1 1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI Equilis West Nile injektioneste, suspensio hevoselle 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS Yksi annos (1 ml) sisältää: Vaikuttava aine: Inaktivoitu

Lisätiedot

HLA alueen geenit ja niiden funktiot. Maisa Lokki, dosentti Transplantaatiolaboratorio Haartman Instituutti

HLA alueen geenit ja niiden funktiot. Maisa Lokki, dosentti Transplantaatiolaboratorio Haartman Instituutti HLA alueen geenit ja niiden funktiot Maisa Lokki, dosentti Transplantaatiolaboratorio Haartman Instituutti 29.1.2014 Vieras versus oma Immuunijärjestelmä puolustaa elimistöä haitallisia organismeja vastaan

Lisätiedot

PAKKAUSSELOSTE. Nobilis CAV P4 vet Injektiokuiva-aine ja liuotin, suspensiota varten kanoille

PAKKAUSSELOSTE. Nobilis CAV P4 vet Injektiokuiva-aine ja liuotin, suspensiota varten kanoille PAKKAUSSELOSTE Nobilis CAV P4 vet Injektiokuiva-aine ja liuotin, suspensiota varten kanoille 1. MYYNTILUVAN HALTIJAN NIMI JA OSOITE SEKÄ ERÄN VAPAUTTAMISESTA VASTAAVAN VALMISTAJAN NIMI JA OSOITE EUROOPAN

Lisätiedot

HIV. ja ikääntyminen

HIV. ja ikääntyminen HIV ja ikääntyminen LUKIJALLE Tämä esite tarjoaa lukijalleen tietoa ikääntymisen vaikutuksista elämään hiv-positiivisena. Esite on tehty yhteistyössä HUS:n Infektiosairauksien poliklinikan ja Hiv-tukikeskuksen

Lisätiedot

TaLO-tapaukset Virusoppi. Vastuuhenkilöt: Tapaus 1: Matti Varis Tapaus 2: Veijo Hukkanen Tapaus 3: Sisko Tauriainen Tapaus 4: Ilkka Julkunen

TaLO-tapaukset Virusoppi. Vastuuhenkilöt: Tapaus 1: Matti Varis Tapaus 2: Veijo Hukkanen Tapaus 3: Sisko Tauriainen Tapaus 4: Ilkka Julkunen TaLO-tapaukset Virusoppi Vastuuhenkilöt: Tapaus 1: Matti Varis Tapaus 2: Veijo Hukkanen Tapaus 3: Sisko Tauriainen Tapaus 4: Ilkka Julkunen TaLO-tapaus 1 Uusi uhkaava respiratorinen virusinfektio Tapaus

Lisätiedot

PAKKAUSSELOSTE. VPRIV 200 yksikköä infuusiokuiva-aine, liuosta varten VPRIV 400 yksikköä infuusiokuiva-aine, liuosta varten velagluseraasi alfa

PAKKAUSSELOSTE. VPRIV 200 yksikköä infuusiokuiva-aine, liuosta varten VPRIV 400 yksikköä infuusiokuiva-aine, liuosta varten velagluseraasi alfa PAKKAUSSELOSTE VPRIV 200 yksikköä infuusiokuiva-aine, liuosta varten VPRIV 400 yksikköä infuusiokuiva-aine, liuosta varten velagluseraasi alfa Lue tämä pakkausseloste huolellisesti, ennen kuin aloitat

Lisätiedot

Suomalaista bioteknologiaa kansainväliseen lääkehoitoon. FIT Biotech Oy toimitusjohtaja Kalevi Reijonen Osakesäästäjien Keskusliitto 28.10.

Suomalaista bioteknologiaa kansainväliseen lääkehoitoon. FIT Biotech Oy toimitusjohtaja Kalevi Reijonen Osakesäästäjien Keskusliitto 28.10. Suomalaista bioteknologiaa kansainväliseen lääkehoitoon. FIT Biotech Oy toimitusjohtaja Kalevi Reijonen Osakesäästäjien Keskusliitto 28.10.2015 Tärkeää tietoa Tämä esitys saattaa sisältää tulevaisuutta

Lisätiedot

Nimi sosiaaliturvatunnus. Vastaa lyhyesti, selkeällä käsialalla. Vain vastausruudun sisällä olevat tekstit, kuvat jne huomioidaan

Nimi sosiaaliturvatunnus. Vastaa lyhyesti, selkeällä käsialalla. Vain vastausruudun sisällä olevat tekstit, kuvat jne huomioidaan 1. a) Mitä tarkoitetaan biopolymeerilla? Mihin kolmeen ryhmään biopolymeerit voidaan jakaa? (1,5 p) Biopolymeerit ovat luonnossa esiintyviä / elävien solujen muodostamia polymeerejä / makromolekyylejä.

Lisätiedot

RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS (RSV)

RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS (RSV) RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS (RSV) Infektioiden torjuntapäivät 8.11.2018 Espoo, Dipoli 8.11.2018 Respiratory syncytial virus/ Niina Ikonen 1 RS-VIRUS Virus eristettiin 1956 Aiheuttaa vuosittaisia epidemioita

Lisätiedot