Nivelreuman serologiset testit: mitä ne kertovat? LT, apulaisylilääkäri Anna-Maija Haapala TAYS Laboratoriokeskus
Sisältö 1. Nivelreuma: etiologia, esiintyvyys, diagnostiikka 2. Nivelreuman serologiset testit 1. Reumafaktori 2. Syklinen sitrullinoitu peptidi, vasta-aineet
Nivelreuma krooninen,systeeminen tulehdustauti niveltulehduksen tärkein muoto prevalenssi n.1 % yleisempi naisilla kuin miehillä (suhde 3:1) esiintyvyys nousee 64-74 ikävuoteen asti harvinainen alle 35 vuotiailla miehillä genetiikka: lähisukulaisilla suurempi riski HLA DR4
ympäristötekijät tupakointi: aiheuttaa reumafaktori positiivisuutta, riskitekijä erityisesti RF positiiviseen nivelreumaan infektiot?? ruokavalio?? lääkitys?? hormonien vaikutus?? koska tauti alkaa? diagnoosi: kliininen diagnoosi ACR kriteerit: reumafaktori Muut serologiset markkerit
Reumafaktori = autovasta-aine, joka reagoi sekä ihmisen että useiden nisäkkäiden IgG molekyylin Fc-osassa olevien rakenteiden kanssa tyypillisesti IgM luokkaan kuuluva, matala affiininen, komplementtia sitova voi olla myös IgA, IgG, IgD ja IgE- luokissa uskotaan olevan patogeneettistä merkitystä myös suojaavia vaikutuksia immuunipuolustuksessa
Todisteita RF:n patogeneettisestä merkityksestä Rf esiintyy nivelreumapotilaiden seerumissa ja nivelnesteessä Taso korreloi taudin aktiviteettiin, hoidettaessa saattaa muuttua negatiiviseksi Rakenteellisia ja toiminnallisia eroja nivelreumassa esiintyvän Rf:n ja muissa tiloissa esiintyvän Rf:n välillä Rf positiivisilla nivelreumapotilailla komplekseja, jotka voivat aktivoida komplementin positiivisuus edeltää taudin puhkeamista
Reumafaktorin määritysmenetelmiä Waaler- Rose- koe reumapotilaan seerumi agglutinoi kanin vastaaineella päällystettyjä lampaan punasoluja Latex- koe Reaktanttina latex-partikkeleihin passiivisesti adsoboitu ihmisen IgG Waaler-Rosea herkempi Hyvin toistettava Yksinkertaisimmillaan kvalitatiivinen
RF:n määritysmenetelmät II Nefelometria ja turbidometria EIA Latex-kokeen sovellutuksia hyvä toistettavuus ja tarkkuus automaation mahdollisuus Kvantiaatio Mahdollistaa myös IgG ja IgA reumafaktorin määrittämisen (kliininen merkitys?)
Suomessa käytetyt menetelmät (LT-kierrokset) kvalitatiivinen latex 39% nefelometria tai turbidometria 44% Waaler-Rose koe 8% kvantitatiivinen latex 7% EIA tekniikka 2%
Viitealue ACR kriteeri (1987):RF tulee määrittää sellaisella testillä, jonka spesifisyys on 95% Viitealue asettuu menetelmästä riippuen välille 10-50 IU/ml kolme negatiivista kolmen vuoden seurantajakson aikana seronegatiivinen
Uusia markkereita Miksi? RF ei spesifinen hoitomuodot kehittyneet hoidon suuntaaminen oikein hoidon aloitus ajoissa Mitä? Antiperinuklaarifaktori Keratiinivasta-aineet Sa proteiini P68 Glukoosi-6- fosfaatti isomeraasi Filaggriinivasta-aineet Sitrulliinivasta-aineet
Keratiinivasta-aine (Kera Ab) IgG luokan vasta-aine, joka kiinnittyy rotan ruokatorven stratum corneum kerroksen keratiiniin (filaggriini) 30-60% nivelreumapotilaista edeltää kliinistä tautia hyvin spesifinen teknisesti hankala
Filaggriinivasta-aine ELISA tekniikka, jossa antigeenina ihosta puhdistettu filaggriini (Palosuo ym 1998) Menetelmiä: Immunoblottaus ELISA, jossa antigeenina synteettinen peptidi rekombinantti filaggriini IgG luokka Ei niin herkkä kuin RF, mutta spesifisempi Antigeenisuudelle tärkeää arginiiniin entsymaattinen muuttuminen sitrulliiniksi (Schekkekens ym 1998)
Sitrulliinipeptidi, vasta-aineet (CCPAb) antigeenina syklinen sitrullinoitu peptidi (synteettinen) IgG luokan vasta-aineet kaupalliset EIA testit
Sitrulliinipeptidi, vasta-aineet (CCPAb) hyvin spesifinen, erityisesti alkavalle nivelreumalle (98%) positiivisuus ei lisäänny iän myötä muissa sidekudossairauksissa pääasiassa negatiivinen menetelmien herkkyys parantunut (68-75%) edeltää alkavaa nivelreumaa jo useita vuosia ennen kliinistä tautia ( mediaani 4.5 v) CCPAb positiivisilla nivelreumapotilailla tauti usein vaikeampi, johtaa erosiiviseen taudinkuvaan yhdistettynä RF:ään ennustearvo vielä suurempi korreloi taudin aktiivisuuteen? onko seurannasta hyötyä?
anti-ccp vasta-aineiden jakauma eri potilasryhmissä (Bizarro et al 2001)
Table 1. Overview of CCP2 sensitivity and specificivossty
Omia kokemuksia Potilaat: 42 RA 41 SLE 38 Sjögrenin Syndrooma 29 kontrollia Menetelmät: kolmen eri valmistajan anti CCP kitit EIA kittejä, IgG luokka Tulokset: herkkyys 71%-76 % spesifisyys 91% - 97%
CCPAb laadunarviointi ulkoista laadunarviointia saatavilla vuodesta 2003 osallistujia yhteensä keskimäärin 20, joista viisi kotimaista käytetyimmät menetelmät: EIA Euro-Diagnostica EIA Inova EIA Euroimmun kvalitatiivisissa tulkinnoissa ei kierroksilla eroja, kvantitaatio ei yhdenmukainen
CCPAb vakiinnuttanut asemansa nivelreuman diagnostiikassa tulossa diagnostiseksi kriteeriksi? ei korvanne reumafaktoria käyttöalue: RF positiivisuuden varmistaminen Alkavan erosiivisen taudin havaitseminen RF negatiiviset nivelreumapotilaat (40% CCPAb positiivisia) avoimia kysymyksiä: miten taso reagoi hoitoihin? seuranta?
Mitä testit kertovat? RF on positiivinen Potilaalla on IgM luokan vasta-aineita IgG: tä kohtaan Potilaalla voi olla reuma Jos reuma -> tauti on vaikeampi kuin RF negatiivisilla Potilaalla voi olla jokin muu sairaus Löydös ohimenevä Potilas voi olla terve Potilaalle voi myöhemmin kehittyä nivelreuma RF on negatiivinen Potilaalla voi olla nivelreuma (30% RA potilaista on seronegatiivisia) Jos potilalla on nivelreuma, taudinkuva on usein lievempi, kuin RF positiivisilla
Mitä testit kertovat? CCPAb positiivinen Potilaalla on hyvin todennäköisesti RA Tauti erosiivisempi kuin potilaalla, jolla CCPAb on negatiivinen Potilaalle voi myöhemmin kehittyä RA CCPAb negatiivinen Ei poissulje nivelreumaa Lievempi taudinmuoto