Labqualitypäivät Riitta Karttunen. HUSLAB, kl. Mikrobiologia Virologian ja immunologian osasto

Transkriptio

1 Syfiliksen laboratoriodiagnostiikka ato od ag ost a Labqualitypäivät Riitta Karttunen HUSLAB, kl. Mikrobiologia Virologian ja immunologian osasto

2 Aiheet suora bakteerin osoitus tai nukleiinihappotestiosoitus vasta-ainetestit treponematestit (Trpa, TPHA, FTAAbs) ei-treponematestit vasta-aineiden nousu tilattavat testit kliinisiä ongelmakohtia (reinfektio, neurosyfilis, kongenitaalinen syfilis) neuvolanäytteet

3 Suora bakteerin/nukleiinihapon osoitus Pimeäkenttämikroskopointi (dark field microscopy) näyte: limakalvo nähdään liikkuvia oikean näköisiä spirokeettoja tehdään klinikassa ik (bedside), vaatii kokemustak Nukleiinihapon osoitus erilaisia menetelmiä näyte: limakalvo, iho, likvor, plasma ei standardimenetelmää/kaupallista mahdollisia käyttöjä: nopeampi diagnoosi primaarissa infektiossa kuin serologinen onko infektio parantunut antibiootilla? neurosyfilis (likvornäytteen testaus), kongenitaalinen syfilis

4 Vasta-ainetestitainetestit käytetty laboratoriodg perustuu vasta-aineisiin eli serologiaan serologiset testit: tit treponematestit: mittaavat treponemaspesifejä vasta- aineita (Trpa, TPHA, blot, FTAAbs, IgG/IgM-vastaaineet) ei-treponematestit: mittaavat ei-treponemaspesifejä vasta-aineita, jotka syntyvät infektion yhteydessä (itse vasta-aineet ovat spesifejä, vaikkakaan niiden antigeeniä ei tunneta tarkkaan)

5 Treponematestit käyttö: yhdessä ei-treponematestin kanssa infektion toteamiseen vasta-aineet t jäävät ät hoidon jälkeen positiivisiksi, i ik i tosin taso voi laskea kuukausien kuluttua treponematestit eivät sovellu yksinään uusintainfektion selvittämiseen voivat jäädä positiiviseksi loppuelämän ajan tai voivat laskea tai jopa muuttua negatiivisiksi ei tiedetä mistä nämä eri reaktiot johtuvat

6 Trpa (EIA) eri valmistajilla erilaisia i i antigeenejä (1 useita) voidaan automatisoida, testi sopii seulontaan HUSLAB: S-Trpa (Diasorin) rekombinantti proteiini: TpN17 mittaa IgG, IgM ja IgA pos 0.9 positiiviset varmistettava toisella spesifillä testillä (TPPA) geeliputkien fuugaus

7 TPHA/TPPA hemagglutinaatio (TPHA), partikkeliagglutinaatio (TPPA) kaupallinen antigeeni pos 80 mittaa sekä IgG:tä ja IgM:ää voidaan tehdä IgM/IgG-fraktioista: pos 16 perinteinen menetelmä, paljon kokemusta

8 FTA-Abs perinteinen menetelmä (immunofluoresenssi) herkkä mutta voi olla epäspesifi kaupalliset lasit (Bio-Merieux): i päällystetty tt spirokeeteilla ill seerumi absorpoidaan apatogeenisellä kannalla tehdään 1 laimennoksella semikvantitatiivinen, tulos ilmoitetaan pos/neg mittaa sekä IgG:tä ja IgM:ää testin tärkein käyttö: voidaan tehdä IgM/IgG-fraktioista g seerumi fraktioidaan käyttämällä proteiini G:tä tärkeä varmistaa että fraktiot onnistuneet: IgM-fraktio, ei ole IgG:tä ilman absorptiota epäspesifi

9 FTA-Abs-testi: positiivinen seerumi

10 Ei-treponematesti t ti = kardiolipiini ii i (S-kardAb) vastaa VDRL- ja RPR-testejä käytössä VDRL-antigeeni (Oxoid, Dade-Behring) ag sisältää kardiolipiinia, lesitiiniä ja kolesterolia flokkulaatio, tuloksena titteri, pos 1 tulos mittaa taudin aktiivisuutta onnistunut hoito laskee titteriä voi olla negatiivinen ensimmäisessä näytteessä uudelleen nousu hoidon jälkeen ja titterin laskun jälkeen osoittaa usein reinfektiota BFP = biological false positive- tulos, harvinainen

11 Vasta-aineiden nousu ensimmäisellä vastaanottokäynnillä vasta-aineita 70-95%:lla IgM-vasta-aineeet IgG-vasta-aineet + 2 viikon sisällä infektiosta viikolla infektiosta Treponematestit hieman nopeammin positiivisia kuin kardiolipiinitesti

12 Potilastapaus: primaari syfilis days VDRL TPHA Trpa =kard nd

13 Tilattavat t testit tit 2032 S-KardAb 4942 S-TrpaAb 4759 S-TPHA 4171 S-FTAAbs 3497 S-FTAIgM: sisältää KardAb, TPHA, FTAAbs, - jos FTAAbs ja TPHA positiivinen, tehdään jatkot IgG- ja IgM-fraktioista

14 Kliinisiä ongelmakohtia Reinfektio kuinka tehdä laboratoriodiagnoosi? mikä on riittävä ä nousu kardiolipiinitasossa? ii it laboratorio pyrkii päättelemään, onko kyseessä reinfektio seuraukset: uusi tartuntatauti-ilmoitus ilmoitus (laboratorio, kiinikko) usein treponematestitulos nousee myös IgM-vasta-aineet voivat tulla positiivisiksi reinfektiossa HIV-positiiivisten testien tulokset voivat poiketa

15 Neurosyfilis voi esiintyä kaikissa syfiliksen vaiheissa laboratoriodiagnostikka: spirokeetan osoitus likvorista kehittelyn alainen Intratekaalinen vasta-ainesynteesin osoitus lasketaan indeksi seerumin ja likvorin TPHA-tulosten ja kokonais- IgG-tietojen avulla jos indeksi > 2, intratekaalinen synteesi osoitettu =neurosyfilis tarvitaan samanaikainen seeruminäyte likvorin kokonais-igg ja kokonais-igm, ovatko koholla muu aivoestevauriota aiheuttava tauti otettava huomioon poikkeava intratekaalinen synteesi voi jatkua pitkään hoidon jälkeen

16 Kongenitaalinen syfilis neuvolaseulonta näyte: raskauden 1. kolmannes aikaisemmin kaikki tutkittu THL:ssä viime vuosina usea keskussairaalapiiri kotiuttanut omaan laboratorioon 3 testin kokonaisuus: HBsAg, HIVAgAb, TrpaAb tarkoitus estää kongenitaalinen syfilis Suomessa vain vähän tapauksia jos yhtään symptomaattinen vs asymptomaattinen; eroavat laboratoriodiagnoosiin suhteen, symptomaattinen tapaus: vasta-aineet positiiviset ja korkealla tasolla asymptomaattinen: kaivattaisiin lisäksi PCR-testiä

17 Neuvolanäytteet t HUSLAB aloitti testauksen V 2009 n näytettä seulontatestinä tehdään Trpa (Diasorin) positiiviset vahvistetaan toisella treponematestillä (TPHA tai blotti) lisäksi tehdään kardiolipiinivasta-aineet Diasorinin i i testin antamat raja-arvoiset toistetaan ja tehdään usein toisella EIA-testillä (Enzygnost)

18 Näyte Trpa (neg <0.9) TPHA blotti kard neg <1 nimi (S=suom) tulos va pos vanha inf=v TT /- <1 Pos V <1 Pos V > <1? Pos V > Pos V <1 S Pos V ? <1 S Neg ? S Neg / 0.8 <80 <1 S Neg / <80 - <1 S Neg / 0.8 <80 <1 S Neg n=6208 n=5 (10)

19 Omia tuloksia näytemäärä: ei tiedä potilasmäärää (IE 13771, IS 10654) vasta-ainepositiivisia itii i i 320 akuutti syfilis: 20 tapausta (laboratorion arvio), 6 % 3/20 HIV-positiivisia, 1/20 HB-kantaja 19/20 miehiä 4/20 uusintainfektioita, 1/4 HIV-positiivinen 18/20 suomalaisnimisiä keski-ikä 41 v kardiolipiini vaihteli TPHA > Trpa 18 - <70 kliiniset tiedot puuttuvat: 2 neurosyfilis, 1 iriitti (oire minkä vuoksi tuli hoitoon)