HERKKIEN TROPONIINIMÄÄRITYSTEN HÄIRIÖTEKIJÄT Tanja Savukoski Biokemian laitos / Biotekniikka tanja.savukoski@utu.fi
SISÄLTÖ Sydäninfarktin kriteerit Troponiinimääritykset Sydäninfarktispesifisyyden lasku ü Muut sydänlihasvauriot ü Endogeeniset häiriötekijät Heterofiilistyyppiset vasta-aineet Troponiiniautovasta-aineet de Lemos 2013, JAMA
SYDÄNINFARKTIN KRITEERIT ESC/ACC/AHA/WHF-työryhmä MERKKIAINEPITOISUUDEN DYNAAMINEN MUUTOS Sydänperäinen troponiini (ctn) T tai I + ISKEMIAOIREET EKG-MUUTOKSET KUVANTAMISELLA TODETTU VAURIO 99. persentiili
TROPONIINIMÄÄRITYKSET Ensimmäiset ctn-määritykset 80-luvun lopussa ja 90-luvun alussa 1 000 100 000 kertaa parempi analyyttinen herkkyys, jopa 0.1 1 ng/l Useita kaupallisia ctni-määrityksiä, ctnt-määrityksiä vain kahdelta valmistajalta (tiukat patentit) ü http://www.ifcc.org/ifcc-scientific-division/documents-of-thesd/troponinassayanalyticalcharacteristicspreviousversions/ ü Yhtenäistäminen ja standardointi puuttuvat!
TROPONIINIMÄÄRITYKSET Useampi vasta-aineen sitoutumiskohta eli epitooppi Voidaan mitata kaksipuoleisilla immunometrisillä määrityksillä Mab: ctni A C B Fab Fc
TROPONIINIMÄÄRITYKSET Useampi vasta-aineen sitoutumiskohta eli epitooppi Leimavasta-aine Voidaan mitata kaksipuoleisilla immunometrisillä määrityksillä ctni A Y Sitojavasta-aine C B
TROPONIINIMÄÄRITYKSET Useampi vasta-aineen sitoutumiskohta eli epitooppi Voidaan mitata kaksipuoleisilla immunometrisillä määrityksillä
HERKÄT TROPONIINIMÄÄRITYKSET Epäherkät (conventional, low-sensitivity) vs. herkät (sensitivecontemporary, medium-sensitivity) ja erittäin herkät (highsensitivity, hs) hs-määrityksen kriteerit: 1) 99. persentiilin CV 10% 2) ctn-pitoisuudet mitattavissa (>LoD) vähintään 50% terveistä Entistä pienempien sydänlihasvaurioiden luotettava havainnointi, mikä nopeuttaa sydäninfarktin toteamista ja poissulkemista ü Erityisesti hyötyä potilaan hakeutuessa hoitoon pian oireiden alkamisesta sekä haasteellisissa potilasryhmissä
HERKÄT TROPONIINIMÄÄRITYKSET Ka. CV 10 %! 50 % LoD Jarolim 2014, Clin Chem Lab Med
HERKÄT TROPONIINIMÄÄRITYKSET Epäherkät (conventional, low-sensitivity) vs. herkät (sensitivecontemporary, medium-sensitivity) ja erittäin herkät (highsensitivity, hs) hs-määrityksen kriteerit: 1) 99. persentiilin CV 10% 2) ctn-pitoisuudet mitattavissa (>LoD) vähintään 50% terveistä Entistä pienempien sydänlihasvaurioiden luotettava havainnointi, mikä nopeuttaa sydäninfarktin toteamista ja poissulkemista ü Erityisesti hyötyä potilaan hakeutuessa hoitoon pian oireiden alkamisesta sekä haasteellisissa potilasryhmissä
SYDÄNINFARKTISPESIFISYYDEN LASKU Sydänspesifisyys sydäninfarktispesifisyys Koholla olevia (>99. persentiili) pitoisuuksia usein muissakin akuuteissa ja kroonisissa sairauksissa sekä jopa terveissä henkilöissä esim. liikuntasuorituksen jälkeen Matalat pitoisuudet herkempiä myös erilaisille endogeenisille häiriötekijöille Thygesen et al. 2012, Nat Rev Cardiol
HÄIRIÖTEKIJÖIDEN VAIKUTUSMEKANISMIT Y Leimavasta-aine ctni A C B Y Y Sitojavasta-aine Väärä positiivinen Y Väärä negatiivinen
HÄIRIÖTEKIJÖIDEN VAIKUTUSMEKANISMIT Leimavasta-aine ctni A C B Y Sitojavasta-aine Väärä positiivinen Y Väärä negatiivinen
HETEROFIILISTYYPPISET VASTA-AINEET Sitoutuvat määrityksissä käytettyihin analyyttisiin vasta-aineisiin Noin 10 40 %:lla 1) Heterofiiliset vasta-aineet ü Matala-affiniteettisia, multispesifisiä 2) Anti-eläin vasta-aineet (human anti-animal antibodies, HAA) ü Korkea-affiniteettisia, spesifisiä ( tunnettu altistuminen) ü Esim. anti-hiiri vasta-aineet (human anti-mouse antibodies, HAMA) 3) Reumatekijät (reumatic factors, RF) ü Autovasta-aineita, IgG- tai IgA-spesifisiä
HETEROFIILISTYYPPISET VASTA-AINEET Heterogeenisiä; luokka, spesifisyys, affiniteetti ja pitoisuus Fc! Väärä positiivinen tai väärä negatiivinen
MITEN NÄITÄ VOIDAAN VÄHENTÄÄ Blokkausvasta-aineet määrityspuskurissa ü ü Tarjoavat vaihtoehtoisia/kilpailevia sitoutumiskohtia heterofiilistyyppisille vastaaineille Esim. naudan gammaglobuliinit, hiiren vasta-aineet (natiivi tai denaturoitu), kaupalliset reagenssit Kimeeriset vasta-aineet Carter. 2001, Nat Rev Cancer (c)
MITEN NÄITÄ VOIDAAN VÄHENTÄÄ Vasta-ainefragmentit ü Entsymaattiset ü Rekombinanttiset
MITEN NÄITÄ VOIDAAN VÄHENTÄÄ Abbottin Architect hs-ctni ja Rochen hs-ctnt Abbott Roche Sitojavasta-aine Mab Fab Leimavasta-aine cmab cfab
MITEN NÄITÄ VOIDAAN VÄHENTÄÄ Mab + 1) Mab 2) Fab2 3) Fab 4) cfab & Mab Samat standardit & analyyttiset herkkyydet
TROPONIINIAUTOVASTA-AINEET Sitoutuvat ctn:i:hin tai ctnt:hen Noin 5 20 %:lla Heterogeenisiä; luokka, spesifisyys, affiniteetti ja pitoisuus 30 IFCC:n suositus 110 ctn 30 ng/ml Autovasta-aine+ n=10 5 ng/ml Odotettu nousu 35-5 = 30 ng/ml Recovery 100%
TROPONIINIAUTOVASTA-AINEET Väärä negatiivinen Väärä positiivinen Autovasta-aine+ n=16
MITEN NÄITÄ VOIDAAN VÄHENTÄÄ Radiometerin AQT90 FLEX ctni (2+1) ja Turun yliopiston tutkimuskäyttöön tarkoitettu ctni (3+1) 30 Keskiosa IFCC:n suositus 110 N C ctnaab
MITEN NÄITÄ VOIDAAN VÄHENTÄÄ Autovasta-aine Autovasta-aine+ n(lr)=49, autovasta-aine+ n(mr)=17, autovasta-aine+ n(nr)=66
www.hytest.fi MÄÄRITYSVASTA-AINEET
YHTEENVETO Perinteisten blokkausvasta-aineiden lisäksi, heterofiilistyyppisten vasta-aineiden aiheuttamia häiriöitä voidaan vähentää kimeerisillä vasta-aineilla ja/tai vasta-ainefragmenteilla Humanisoidut vasta-aineet Troponiiniautovasta-aineiden aiheuttamia häiriöitä voidaan vähentää uudentyyppisillä määritysvasta-ainevalinnoilla Häiriötekijän ominaisuudet ja pitoisuus, ctn:n pitoisuus & määritys Vaikutus ctn-tulokseen Häiriöiden minimoiminen etukäteen!
KIRJALLISUUTTA https://www.doria.fi/handle/10024/103710 & https://www.doria.fi/handle/10024/99057
KIITOS! Tanja Savukoski Biokemian laitos / Biotekniikka tanja.savukoski@utu.fi