PTH -määrityksen ongelmat

Transkriptio

1 PTH -määrityksen ongelmat Helene Markkanen, kliin.kemian erik.lääk Parathormonin määrityksen ongelma Menetelmien välillä: - korrelaatiot hyvät - tasoerot Kirjallisuudessa esitettyjen viitearvojen ja päätösrajojen käytössä huomioitava menetelmä. 1

2 Cantor et al. Clin Chem 2006 Lack of comparability of intact parathyroid hormone measurements among commercial assays for end-stage renal disease patients: implication for treatment decisions Cantor et al. Clin Chem 2006 Lack of comparability of intact parathyroid hormone measurements among commercial assays for end-stage renal disease patients: implication for treatment decisions Elecsys PTH (intact) 1999v on standardisoitu Nicholsin IRMA-menetelmää vastaavaksi; kansainvälistä vakiota ei ollut. 2

3 PTH = paratyroideahormoni = lisäkilpirauhashormoni = parathormoni Ongelmakohtia: - hormoni itsessään - preanalyyttiset tekijät näyteputki - menetelmä - viitearvot - päätösrajat Lisäkilpirauhaset - 4 kpl, paino mg/kpl - Erittävät parathormonia verenkiertoon. Duodecim-kuvat 3

4 Parathormoni (PTH) Säätelee kalsiumin aineenvaihduntaa; veren kalsiumin pitoisuus matala PTH eritys lisääntyy veren kalsiumin pitoisuus korkea PTH eritys laskee PTH -vaikutus hypokalsemiassa Luusto: kalsium verenkiertoon Munuaiset: kalsium ei erity virtsaan, kalsium verenkiertoon - 1,25-(OH) 2 D 3 vitamiinin muodostus munuaisissa vaikutus suolistossa, kalsium imeytyy paremmin 4

5 PTH - Ca PARATHORMONI - sairaudet Hyperparatyreoosi 1. Primaarinen (PTH -> Ca korkea) adenooma yleisin 2. Sekundaarinen - munuaisten vajaatoiminnassa (Ca matala) - muu hypokalsemia (esim. D-vitamiinipuutos) 3. Tertiaarinen sekundaarisesta (Ca koholla) Hypoparatyreoosi kaulan alueen leikkaus; erilaisia harvinaisia syitä 5

6 Parathormoni Aminoterminaalinen (N- ) Karboksiterminaalinen (C- ) Fig 2. Parathyroid hormone (PTH) molecule. The carboxy-terminal half of the molecule (amino acids 39-84) is the target of most anti-pth antibodies. The biologic activity of the molecule is located in the amino-terminal half (amino acids 1-34). Signal antibodies in the third-generation assay are directed against amino acids 1-4. Rodgers SE et al 2011 Parathormoni, PTH Prepro-PTH (115 ah) -> pro-pth (90 ah) -> PTH (84 ah) 84 aminohappoa, peptidihormoni = intakti Molekyylipaino 9.5 kd Intakti-PTH, puoliintumisaika 2-4 min; fragmenteilla pidempi N-terminaalisia ei eritetä; C-terminaalisia fragmentteja eritetään, ja etenkin maksassa (70%), myös munuaisissa (20%) endoproteaasit pilkkovat intaktia PTH:ta N-terminaalisessa osassa (1-34 ah) biologinen aktiivisuus C-terminaalisia fragmentteja: vähemmän terveellä vrt. kroon.munuaisten vajaatoim. 6

7 Preanalyyttiset tekijät Näyteputki: seerumi vs EDTA-plasma - Immulite 2000: EDTA-plasma: ng/l seerumi: ng/l - plasma on eniten käytetty Säilytysolosuhteet - seerumi pakkasnäytteenä (tehdään harvoin) plasma säilyy paremmin huoneenlämmössä PTH - menetelmät 1. sukupolven menetelmät, 60-luvulla - radioimmunologiset (RIA) 2. sukupolven menetelmät, 80-luvulla - immunometriset 3. sukupolven menetelmät, 90-luvulta - immunometriset, vasta-aine 1-7 ah 7

8 1. Sukupolven menetelmät RIA, v Yksi vasta-aine; polyklonaaliset vasta-aineet C-terminaalialue (53-84 ah/39-84ah) tai keskialue (44-68 ah) PTH 1-84, mutta myös fragmentteja tuli mitattua Fragmenteilla pidempi puoliintumisaika Munuaisinsuffisienssi: korkeita pitoisuuksia! 2. Sukupolven menetelmät käytössä Immunoradiometrinen (IRMA), v intakti PTH menetelmä Intakti PTH fragmentti ristireaktio n % Non-PTH (1-84): PTH (7-84) Allegro intact PTH, IRMA, Nichols Institute 2 vasta-ainetta; kiinteän faasin vasta-aine, ah ja leimattu vasta-aine Allegrossa ah Elecsys ah 26-32/ah C-terminaalialueen vasta-aine: 39-84, 44-84, 55-64, Herkkyys ja nopeus parempi IRMA, myöh. ei radioakt. immunokemiluminometrinen nykyisin analysaattorit 8

9 PTH 7-84 vaikutus päinvastoin kuin 1-84ah: S-Ca laskee Fig 2. The ability of various commercial first-generation intact PTH immunometric assays to detect PTH Considerable variability is apparent and may contribute to variations in PTH values between different laboratories. Martin KJ, Olgaard K. American Journal of Kidney Diseases, Vol 43, no 3,2004 Immunometriset menetelmät 2. sukupolven 3. sukupolven 9

10 3. Sukupolven menetelmät Immunometrinen; mittaa koko PTH:n muutos vasta-aineissa V Scantibodies Laboratory, whole PTH WHOLE, Ca-PTH, BioIntact, 1-84 PTH Toinen vasta-aine: ah Muutos: toinen vasta-aine: 1-4 tai 1-5 ah, ei siis mittaa 7-84 PTH:ta Biointakti-PTH Kesällä 2011 Rochen biointakti-pth markkinoille Munuaisten vajaatoiminnassa? - selvitämme nefrologien kanssa yhteistyössä olisiko hyötyä? 10

11 70 60 Modular Analytics E170 (Roche) y = 0,79x + 2,3 R² = 0,94 n = 39 PTH (ng/l) [PTH biointact] PTH (ng/l) [PTH Intact] Standardisointi Kansainvälinen referenssipreparaatti, WHO 79/500 vuonna 1981 puhdistettu ihmisen PTH Menetelmät kalibroitu synteettistä 1-84 PTH vastaan WHO ensimm. kansainvälinen standardi, rekombinantti PTH 1-84, ihmisen; IS 95/646 11

12 Yksiköt pg/ml * = pmol/ml = pmol/l pmol * 9.43 = pg/ml PTH, viitearvot D-vitamiinitaso Kalsiumtaso Munuaisten toiminta Ikä BMI; matala D-vit. ja korkea PTH rotu 12

13 PTH-vastausten käyttö Endokrinologit suhteuttavat: Ca ja D-vit Nefrologeilla on erilaisia suosituksia: 2003: PTH ng/l (17-33 pmol/l) 2009: 2-9 x viiteyläraja; noin ng/l (17-66 pmol/l) Torres PU 2006, Kidney International Nichols Allegro PTH the gold standard method - ei enää käytössä 13

14 Almond A et al, Annals of Clinical Biochemistry 2012, 49, Roche Elecsys E170 lähimpänä Nichols Allegro IRMA Ongelman syyt PTH intakti, fragmentit vasta-aineet Näytemuoto: plasma/seerumi Menetelmän standardisointi PTH tulos suhteutettava kalsium- ja D-vitamiiniarvoon 14

15 Parathormoni on malliesimerkki Hoitosuositukset - laboratoriotulokset/menetelmämuutokset Yhteistyö kliinikoiden kanssa mm. menetelmämuutoksen aikana - hoitosuositukset Pelkkä informaatio muuttuneista viitearvoista ei riitä erilaiset asiakkaat Kiitos... 15

16 S- / P- PTH, viitearvoja Suomessa menetelmä viitearvot Hki HUSLAB Elektrokemiluminometria (ECLIA) Roche, Modular E170 P ng/l Kuopio Islab ECLIA Roche, cobas e 601 S ng/l Tampere Fimlab Immunokemiluminometrinen Roche, cobas e 601 P pmol/l reag.valm. Turku TYKSLAB Immunoelektrokemiluminenssi Roche, Modular E170 P ng/l Oulu OYS-Lab. Kemiluminometrinen Siemens/ADVIA Centaur P ng/l YhtMedix Immunoluminometrinen Siemens/Immulite 2000 P pmol/l (10-75 ng/l) Vita ECLIA/Labor Dr. Kramer & Kramer P pmol/l (15-65 ng/l) Kotka Sairaalalab. ECLIA Roche, cobas e 601 P ng/l Jyväskylä KESLAB ECLIA Roche, Modular E170 P ng/l Seinäjoki Sairaalalab. ECLIA Roche, cobas e 411 P pmol/l Imatra Etelä-Karjala ECLIA Siemens, ADVIA Centaur Pori SatakunnanKS ECLIA Siemens, ADVIA Centaur Entiset HUSLAB:n viitearvot 8-73 ng/l Roche: ng/l; pmol/l; viitearvot samat S / P (suos.) 16

17 fp PTH Uudella immunometrisellä määritysmenetelmällä mitattuna PTH:n tulostaso on noin 50% matalampi verrattuna aikaisempaan menetelmään (Nkl). Vertailusuoran yhtälö on y(meis) = 0,52x(Nkl) + 11 (ng/l). S FGF-23 - immunometriset menetelmät - intakti tai intakti+c-term.fragmentti - ennustaa munuaissairauden nopeaa progressiota - dialyysipotilailla; abnormaali luustonmtb, vasemman kammion hypertrofia, vaskul. kalsifikaatio, lisääntynyt kuolleisuus - dialyysipotilaiden näytteiden ajo - menetelmän uudelleen validointi kesken Fig. 2 A simplified schema of the development of secondary hyperparathyroidism. egfr, estimated glomerular filtration rate; FGF-23, fibroblast growth factor 23; PTH, parathyroid hormone. 17