NOPEAT KASETTI-PCR TESTIT

Transkriptio

1 NOPEAT KASETTI-PCR TESTIT Raisa Loginov Dosentti, sairaalamikrobiologi HUSLAB / Kliininen mikrobiologia

2 Mitä kaikkea tulee huomioida otettaessa käyttöön näitä testejä? Kliinisen mikrobiologian toimilupa Kontaminaation esto Tilat ja henkilökunnan perehdytys Testin käyttöönottoverifiointi Sisäinen ja ulkoinen laadunvarmistus Tulosten siirto laboratoriotietojärjestelmään Testin suorituskyvyn seuranta Ongelmatilanteiden ratkaisu HUSLAB:n kokemukset

3 Yksittäisen mikrobin tunnistus tai Multiplex-PCR- testejä Respiratoriset paneelit Gastropaneelit Keskushermostopaneelit

4 Kliinisen mikrobiologian toimilupa Mikrobiologinen vieritestaus on luvanvaraista toimintaa, sitä koskevat samat säädökset, kuin tartuntatautien laboratoriodiagnostiikkaa (tartuntatautilaki ja asetus / 1543). Mikrobiologian toimilupa edellyttää säännöllistä osallistumista ulkoiseen laaduntarkkailuun (4 kertaa vuodessa) Kliinisen mikrobiologian laboratorion rooli tukilaboratoriona

5 Kontaminaation esto Erityispiirre kliinisen mikrobiologian nukleiinihappotutkimuksissa PCR:n monistustehokkuus valtava, toisaalta jo yhdenkin virusgenomin löytyminen potilaan näytteestä voi olla kliinisesti merkitsevä. Testit viritetty tavattoman herkiksi Erityistoimenpiteet, joilla huolehditaan kontaminaatioiden estämisestä, jotta diagnostiikka on luotettavaa (väärät positiiviset)

6 Kontaminaatiot Syynä monistusmenetelmien äärimmäinen herkkyys Kontaminaatiolähteitä: kontaminaatio näytteenottovaiheessa näytteiden ristikontaminaatiot monistetun tuotteen kulkeutuminen puhtaisiin tiloihin reagenssit, ympäristö laitteesta työntekijästä PCR-kierros kohde-dna:n kopiot

7 Miten estän kontaminaatiot? Tilasuunnittelu Erillinen näytteenkäsittelytila / laitetila Työskentely biosuojakaapissa Aseptinen työskentely Henkilökunnan perehdytys! Hyvin ohjeistetut puhdistustoimet Hyvin suunniteltu jätteiden hävittäminen

8 Kaupallisen testin käyttöönoton verifiointi Kaupallinen CE-IVD merkitty testikitti Ei muutoksia Verifioinnin laajuus? Tutkittava virus (esiintyvät viruskannat) Käytettävät näytematrixit Teknologia Laitteisto Ristireaktioiden testaus Multiplex-testit (respiratorinen paneeli / gastropaneeli / keskushermostopaneeli) Verifiointi Laajuus min Onko testi riittävän herkkä ja spesifinen diagnostiikan tarpeisiin?

9 Sisäinen ja ulkoinen laadunvarmistus Sisäinen laadunvarmistus: negatiivinen ja positiivinen kontrolli säännöllisesti (Zeptometrix) Muut toimenpiteet: Positiivisuusprosentin seuranta Laitteen antamien virheilmoitusten (INVALID/ NO RESULT / ERROR) seuranta kuukausittain otettavan raportin avulla Ulkoinen laadunvarmistus: Ulkoisen laadunarvioinnin kierrokset (QCMD)

10 Vastauskäytännöt/ongelmatilanteiden ratkaisu Tulosten siirto laboratoriotietojärjestelmiin (LIS-liitännät) Ohjeistukset ongelmatilanteisiin Miten toimitaan, jos laite antaa tulokseksi: No result, invalid, error Miten toimitaan, jos saadaan positiivinen tulos useammalle virukselle Asiantuntijan rooli

11 HUSLAB / Kliininen mikrobiologia / Virologia Li-EvirNhO Testi otettu päivystyskäyttöön v INABRSV Testi otettu päivystyskäyttöön epidemiakaudella

12 HUSLAB / -INABRSV Kaupallisen testin verifiointi hengitystienäytteillä (yht.154 näytettä) Sensitiivisyys Spesifisyys InfA InfA 90% (A(H1N1): 87% / A(H3N2) : 93.3%) 100% InfB 100% 100% RSV 100% 100%

13 Epidemiakausi Kaksoisinfektioita todettiin 3kpl (Inf A+RSV/ InfB + RSV / Inf A+B) (0,10%) - Nämä kaksoisinfektiot varmistuivat muilla nukleiinihappomenetelmillä Laitteen antamat virheilmoitukset tietyllä aikavälillä Invalid 53/ % error 14/ %

14 Epidemiakausi Tähän mennessä kaksoisinfektioita 3 kpl (InfA+RSV) / 0,17% Kaikki kaksois-/kolmoislöydökset varmistetaan virka-aikana Yksi kolmoislöydös osoittautui virheelliseksi tulokseksi (selvittelyn alla) Laitteen antamat virheilmoitukset tietyllä aikavälillä Tammi-maaliskuu 2015 invalid 2.9% error 0.8% Helmikuu 2016 invalid 1.9% error 0 %

15 Epidemiakausi Epidemiakausi INABRSV testin pilotointi HUSLAB/ Hyvinkään sairaalan kliinisen kemian laboratoriossa Tilojen katselmointi Laboratoriohenkilökunnan teoreettinen ja käytännön työn suorittamisen perehdyttäminen (5 työpäivää) Työohjeiden laadinta Verifikaatiopaneeli / verifiointiraportin laadinta Sisäisen ja ulkoisen laadunvarmistuksen järjestäminen Testin suorituskyvyn seuranta Jatkossa ongelmatilanteiden selvittelyyn osallistuminen

16