NOPEAT KASETTI-PCR TESTIT Raisa Loginov Dosentti, sairaalamikrobiologi HUSLAB / Kliininen mikrobiologia
Mitä kaikkea tulee huomioida otettaessa käyttöön näitä testejä? Kliinisen mikrobiologian toimilupa Kontaminaation esto Tilat ja henkilökunnan perehdytys Testin käyttöönottoverifiointi Sisäinen ja ulkoinen laadunvarmistus Tulosten siirto laboratoriotietojärjestelmään Testin suorituskyvyn seuranta Ongelmatilanteiden ratkaisu HUSLAB:n kokemukset
Yksittäisen mikrobin tunnistus tai Multiplex-PCR- testejä Respiratoriset paneelit Gastropaneelit Keskushermostopaneelit
Kliinisen mikrobiologian toimilupa Mikrobiologinen vieritestaus on luvanvaraista toimintaa, sitä koskevat samat säädökset, kuin tartuntatautien laboratoriodiagnostiikkaa (tartuntatautilaki ja asetus 10 22.12.2009 / 1543). Mikrobiologian toimilupa edellyttää säännöllistä osallistumista ulkoiseen laaduntarkkailuun (4 kertaa vuodessa) Kliinisen mikrobiologian laboratorion rooli tukilaboratoriona
Kontaminaation esto Erityispiirre kliinisen mikrobiologian nukleiinihappotutkimuksissa PCR:n monistustehokkuus valtava, toisaalta jo yhdenkin virusgenomin löytyminen potilaan näytteestä voi olla kliinisesti merkitsevä. Testit viritetty tavattoman herkiksi Erityistoimenpiteet, joilla huolehditaan kontaminaatioiden estämisestä, jotta diagnostiikka on luotettavaa (väärät positiiviset)
Kontaminaatiot Syynä monistusmenetelmien äärimmäinen herkkyys Kontaminaatiolähteitä: kontaminaatio näytteenottovaiheessa näytteiden ristikontaminaatiot monistetun tuotteen kulkeutuminen puhtaisiin tiloihin reagenssit, ympäristö laitteesta työntekijästä PCR-kierros kohde-dna:n kopiot 1 1 2 2 3 4 4 8 5 16 6 32 7 64 8 128 9 256 10 512 11 1024 12 2048 13 4096 14 8192 15 16384 16 32768 17 65536 18 131072 19 262144 20 524288 21 1048576 22 2097152 23 4194304 24 8388608 25 16777216 26 33554432 27 67108864 28 134217728 29 268435456 30 536870912 31 1073741824 32 2147483648 33 4294967296 34 8589934592 35 17179869184 36 34359738368 37 68719476736 38 137438953472 39 274877906944 40 549755813888
Miten estän kontaminaatiot? Tilasuunnittelu Erillinen näytteenkäsittelytila / laitetila Työskentely biosuojakaapissa Aseptinen työskentely Henkilökunnan perehdytys! Hyvin ohjeistetut puhdistustoimet Hyvin suunniteltu jätteiden hävittäminen
Kaupallisen testin käyttöönoton verifiointi Kaupallinen CE-IVD merkitty testikitti Ei muutoksia Verifioinnin laajuus? Tutkittava virus (esiintyvät viruskannat) Käytettävät näytematrixit Teknologia Laitteisto Ristireaktioiden testaus Multiplex-testit (respiratorinen paneeli / gastropaneeli / keskushermostopaneeli) www.mediuutiset.fi Verifiointi Laajuus min.20+50 Onko testi riittävän herkkä ja spesifinen diagnostiikan tarpeisiin?
Sisäinen ja ulkoinen laadunvarmistus Sisäinen laadunvarmistus: negatiivinen ja positiivinen kontrolli säännöllisesti (Zeptometrix) Muut toimenpiteet: Positiivisuusprosentin seuranta Laitteen antamien virheilmoitusten (INVALID/ NO RESULT / ERROR) seuranta kuukausittain otettavan raportin avulla Ulkoinen laadunvarmistus: Ulkoisen laadunarvioinnin kierrokset (QCMD)
Vastauskäytännöt/ongelmatilanteiden ratkaisu Tulosten siirto laboratoriotietojärjestelmiin (LIS-liitännät) Ohjeistukset ongelmatilanteisiin Miten toimitaan, jos laite antaa tulokseksi: No result, invalid, error Miten toimitaan, jos saadaan positiivinen tulos useammalle virukselle Asiantuntijan rooli
HUSLAB / Kliininen mikrobiologia / Virologia Li-EvirNhO Testi otettu päivystyskäyttöön v. 2013 -INABRSV Testi otettu päivystyskäyttöön epidemiakaudella 2014-2015
HUSLAB / -INABRSV Kaupallisen testin verifiointi hengitystienäytteillä (yht.154 näytettä) Sensitiivisyys Spesifisyys InfA InfA 90% (A(H1N1): 87% / A(H3N2) : 93.3%) 100% InfB 100% 100% RSV 100% 100%
Epidemiakausi 2014-2015 Kaksoisinfektioita todettiin 3kpl (Inf A+RSV/ InfB + RSV / Inf A+B) (0,10%) - Nämä kaksoisinfektiot varmistuivat muilla nukleiinihappomenetelmillä Laitteen antamat virheilmoitukset tietyllä aikavälillä Invalid 53/1800 2.9% error 14/1800 0.78%
Epidemiakausi 2015-2016 Tähän mennessä kaksoisinfektioita 3 kpl (InfA+RSV) / 0,17% Kaikki kaksois-/kolmoislöydökset varmistetaan virka-aikana Yksi kolmoislöydös osoittautui virheelliseksi tulokseksi (selvittelyn alla) Laitteen antamat virheilmoitukset tietyllä aikavälillä Tammi-maaliskuu 2015 invalid 2.9% error 0.8% Helmikuu 2016 invalid 1.9% error 0 %
Epidemiakausi 2015-2016 Epidemiakausi 2015-2016 -INABRSV testin pilotointi HUSLAB/ Hyvinkään sairaalan kliinisen kemian laboratoriossa Tilojen katselmointi Laboratoriohenkilökunnan teoreettinen ja käytännön työn suorittamisen perehdyttäminen (5 työpäivää) Työohjeiden laadinta Verifikaatiopaneeli / verifiointiraportin laadinta Sisäisen ja ulkoisen laadunvarmistuksen järjestäminen Testin suorituskyvyn seuranta Jatkossa ongelmatilanteiden selvittelyyn osallistuminen