Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 4/2011

Transkriptio

1 Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 4/2011 Kuvat ja teksti: Markku Koskela Mikrobiologian ylilääkäri OYS, Oulu Huom! Käyttäkää yläpalkin suurennusmahdollisuutta % pesäkekasvun yms. yksityiskohtia tarkastellessanne!!!!

2 Näyte 13/2011 Puremahaava. Eläimen purema. Löydös: Pasteurella multocida, patogeeni Tehtävät: Bakteerin eristäminen, tunnistaminen ja mikrobilääkeherkkyysmääritys

3 Näyte 13 / Puremahaava Oksidaasi+ Viljely lampaanverimaljalle 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk -> Isoja harmaita, kuperia ja limaisia sauvapesäkkeitä, jotka ovat oksidaasi +

4 Näyte 13 / Puremahaava Lyhyt gram-sauva Viljely suklaamaljalle 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk -> Harmaita, kuperia, limaisia sauvapesäkkeitä.

5 Näyte 13 / Pasteurella multocida - - -, + + -, + + +, RapID NH 0376 Pasteurella multocida 99,9 %

6 Näyte 14/2011 Eritettä vuotavasta välikorvan ilmastointiputkesta. Kolmevuotiaan lapsen toistuva välikorvatulehdus. Oletettu löydös: Korvakäytävän normaalia flooraa, jossa Streptococcus pneumoniae eli pneumokokki. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tulosten tulkinta

7 Näyte 14/2011 Primaariviljely Välikorvaerite Viljely lampaanverimaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. ->Pieniä ja suurempia alfa-hemolyyttisiä streptokokkipesäkkeitä sekä keskisuuria, matalia, valkoisia ja kiiltäviä stafylokokkipesäkkeitä. Optokiinikiekosta ei ole diagnostista hyötyä, koska runsaana kasvava stafylokokki peittää sen ympäristön.

8 Näyte 14/2011 Primaariviljely Välikorvaerite Viljely lampaanverimaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. ->Pieniä vaaleapesäkkeisiä ja suurempia ruskeapesäkkeisiä alfahemolyyttisiä streptokokkeja stafylokokkipesäkkeiden joukossa.

9 Näyte 14/2011 Primaariviljely Välikorvaerite Viljely suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. ->Pieniä ja suurempia alfahemolyyttisiä streptokokkipesäkkeitä ja valkoisia stafylokokkipesäkkeitä.

10 Näyte 13/2011. Pneumokokki Gram+ Optokiinille herkkä (kasvun estorengas) alfa-hemolyyttinen streptokokki eli pneumokokki. ( 1 vrk, +35 C). diplokokki Löydöksen tulkinta: välikorvatulehduksen aiheuttaja

11 Näyte 13/2011. Streptococcus viridans Optokiinille resistentti (ei kasvun estorengasta) alfa-hemolyyttinen streptokokki. ( 1 vrk, +35 C). Gram+ ketjukokki Löydöksen tulkinta: korvakäytävän normaalia flooraa

12 Näyte 14/2011 Koagulaasinegatiivinen stafylokokki (Staphylococcus warneri) 1 2 Stafylokokkien Verimaljakasvu 2 vrk. Matalia, valkoisia, kiiltäviä stafylokokkipesäkkeitä. latex-agglutinaatiotesti: 1. Negat (S warneri) 2. Posit (S aureus) Löydöksen tulkinta: korvakäytävän normaalia flooraa

13 Näyte 15/2011 Kudosnäyte hitaasti paranevasta vadelmapensaan raapaisun aiheuttamasta käden haavasta 48-vuotaalla naisella Löydös: Mycobacterium abscessus, patogeeni. Tehtävät: Bakteerin eristäminen ja tunnistaminen.

14 Näyte 15/2011 Aerobinen primaariviljely Kudosnäyte käden haavasta 1 vrk 2 vrk Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. -> Hento, juuri näkyvä, harmaan valkoinen kasvu

15 Näyte 15/2011 Aerobinen primaariviljely Kudosnäyte käden haavasta Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 3-5 vrk. -> Harmaita, kiiltäviä, opalisoivia, vaihtelevan kokoisia pesäkkeitä

16 Näyte 15/2011. Anaerobinen primaariviljely Kudosnäyte käden haavasta Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA) 2-5 vrk, +35 C. Ei kasvua ts. näytteestä kasvaa obligatorisesti (ehdottomasti) aerobi bakteeri

17 Näyte 15/2011. Mycobacterium abscessus Gram-värjäys: Vahamaisen pintansa vuoksi huonosti värjääntyvä, epämääräinen gram+/- sauva

18 Näyte 15/2011. Mycobacterium abscessus Mykobakteerien akridiinioranssivärjäys ja UV-mikroskopointi: Ohuita haponkestäviä, oranssin värisenä fluoressoivia sauvoja Mykobakteerien Ziehl-Neelsen värjäys ja valomikroskopointi: ohuita haponkestäviä, punaisia sauvoja vihreää taustaa vasten

19 Näyte 15/2011. Mycobacterium abscessus Lajitunnistus mykobakteerien lajispesifisellä PCR-testillä -> Mycobacterium abscessus Lajitunnistus bakteerien DNA-sekvennoinnilla ->Mycobacterium abscessus 99,9% Tällainen bakteeri pitää aina lähettää lajitunnistusta varten sellaiseen referenssilaboratorioon, jolla on bakteerien DNA-sekvennointi käytössä ja tarpeeksi kokemusta sen toimivuudesta!!

20 Näyte 15/2011. Mycobacterium abscessus Ei tuberkuloosia aiheuttava mykobakteeri eli NTM. Nopeasti (eli alle 7 vrk:ssa) kasvava mykobakteeri Kuuluu M chelonei/m abscessus-ryhmään Esiintyy maaperässä, vedessä, kasveissa. Voi aiheuttaa ihoinfektioita perusterveelle ihmiselle. Infektion taustalla ihorikkeymä tai trauma kuten risun tai piikkisen pensaan pisto. Mikrobiologinen lab dg: infektoituneesta kudoksesta tai märkäeritteestä tehty viljely ja siinä kasvaneen bakteerin lajitunnistus. Mikrobilääkkeet:tobramysiini, imipeneemi, klaritromysiini. Huom! Lääkäri voi pyytää näytteestä vain tavallinen bakteeriviljelyn! Laboratorion tulee tutkia viljelylöydös kunnolla lajitasolle eikä vastata löydöstä esim. difteroidina!

21 Näyte 16/2011 Punktionäyte 53-vuotiaan miehen keuhkoempyemasta Löydökset: Beta-hemolyyttinen streptokokki, ryhmä F (Streptococcus anginosus), Fusobacterium nucleatum ja Finegoldia magna, kaikki patogeeneja Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tulosten tulkinta.

22 Näyte 16/2011 Näytteen gram-värjäys Märkää keuhkoempyeemasta Isoja ja pieniä grampositiivisia kokkibakteereita ja neulasmaisia gramnegatiivisia sauvabakteereita. Lisäksi värjäysartefaktaa.

23 Näyte 16/2011 Aerobinen primaariviljely Märkää keuhkoempyeemasta Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. -> Pienipesäkkeinen beta-hemolyyttinen streptokokki

24 Näyte 16/2011. Beta-hemolyyttinen streptokokki, ryhmä F (Streptococcus anginosus) Beta-hem streptokokkien ryhmämääritys latex-agglutinaatiolla F + C - Pienipesäkkeinen betahemolyyttinen streptokokki verimaljalla Gram+ketjukokki

25 Näyte 16/2011. Streptococcus anginosus + + -, - - +, - - -, - + -, + - -, , - - -, - - -, + - -, + - -, - Rapid ID 32 STREP Streptococcus anginosus 93,9 %

26 Streptococcus anginosus-ryhmä (Ent. Streptococcus milleri-ryhmä) S intermedius, S constellatus ja S anginosus Beta-, alfa- tai ei-hemolyyttisiä streptokokkeja Voivat olla A-,C-,F- tai G-ryhmän beta-hem streptok.! Pienipesäkkeisiä! Toffeekaramellin hajuisia. Kuuluvat ylähengitysteiden normaaliin flooraan Suosivat yhteiseloa anaerobien kanssa: absessit (hampaat, keuhkot, aivot, ym), keuhkoempyemat (märkäkeräymät), yms. Bakteremioita ->Sydämen sisäkalvon ja läppien infektiot, luu- ja nivelinfektiot, jne.

27 Näyte 16/2011. Anaerobinen primaariviljely Märkää keuhkoempyemasta Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA), 2 vrk, +35 C. Hahmotettavissa oleva estorengas metronidatsolikiekon ympärillä. Anaerobit kasvavat sen ulkopuolella: Kellertäviä kuperia pesäkkeitä Pieniä maljanvärisiä pesäkk. Aerobi ja vaihtoehtoisesti anaerobi beta-hemolyyttinen streptokokki kasvaa anaerobisti koko maljalla

28 Näyte 16/2011. Anaerobinen primaariviljely FAA-maljakasvu, 2 vrk 1) Iso beta-hemolyyttinen kokkipesäke 2) Kupera, kellertävä pesäke 3) Pieni maljanvärinen pesäke Kaikista: 1. Aerotoleranssitesti 2. Gramvärjäys

29 Näyte 16/2011. Anaerobinen primaariviljely FAA-maljan jatkoinkubaatio ad 5-7 vrk 1. Valkoinen streptokokkipesäke Metronidatsolikiekon estorenkaan raja 2. Kupera kellertävä pesäke 3. Pieni maljanvärinen pesäke

30 Näyte 16/2011. Anaerobinen primaariviljely selektiivisillä BBE- ja NV- / KVLB-maljoilla BBE:llä ei kasvua 2-7 vrk:ssa ->Ei Bacteroides fragilis-ryhmän anaerobeja NV / KVLB-maljalla ei kasvua 2-7 vrk:ssa ->Ei Prevotellojen tai Porphyromonasten tyyppisiä anaerobeja

31 Näyte 16/2011. Anaerobinen primaariviljely EYA-maljalla 2-7 vrk Tavallista pesäkekasvua. Lipaasi negat (pesäkkeiden reunat eivät ole öljymäisiä) Lesitinaasi negat (ei maitomaista samentumaa)

32 Näyte 16/2011. Anaerobinen primaariviljely grampositiivisia suosivalla PEA-maljalla 2-3 vrk 5-7 vrk Isoja ja pieniä kokkipesäkkeitä. Gramnegatiiviset bakteerit eivät kasva. Myös näistä pesäkkeistä tehtäisiin gramvärjäys ja aerotoleranssitesti.

33 Näyte 16/2011. Aerotolenranssitesti (2 vrk, +35 C) Aerobi verimalja Aerobi (5% CO 2 ) suklaamalja Anaerobiverimalja Primaarilta aerobiverimaljalta poimittujen bakteerien aerotoleranssitulokset: 1. Kasvaa kaikilla maljoilla: Aerobi beta-hemolyyttinen streptokokki, joka kasvaa myös anaerobisti. 2. Anaerobi maljanvärinen bakteeri, joka ei kasva aerobisti. 3. Anaerobi kellertäväpesäkkeinen bakteeri, joka ei kasva aerobisti

34 Näyte 16/2011. Aerotolenranssitestattujen bakteerien pesäkevärjäykset 1. Tavallisen kokoinen grampositiivinen ketjukokki ->tavall. streptokokki 2. Iso grampositiivinen kokki ->Finegoldia magna? 3. Pitkä neulasmainen gramnegatiivinen sauva-> Fusobacterium nucleatum?

35 Näyte 16/2011. Fusobacterium nucleatum 2-3 vrk Gram-värjäys: Ohuita neulasmaisia gramnegat sauvoja 4 vrk Anaerobiverimaljakasvu (FAA): Tarkkarajainen, kiiltävä, kellertävä pesäkekasvu. EYA-maljakasvu Lesitinaasi neg Lipaasi neg Pikaindoli: posit. (sininen)

36 Näyte 16/2011. Fusobacterium nucleatum Anaerobien identifikaatiotesti (A I): Kanamysiini (1000 µg) Vankomysiini (5 µg) Kolistiini (10 µg) S R S Lisäksi maljan alaosassa: Metronidatsoli (5 µg) S

37 Näyte 16/2011. Fusobacterium nucleatum - - -, - - -, - - -, - - -, - - -, RapID ANA II: Fusobacterium nucleatum (100 %)

38 Näyte 16/2011. Fusobacterium nucleatum Yhteenveto diagnostisista testeistä Ehdottomasti anaerobinen Ohut, neulasmainen gramnegatiivinen sauva Anaerobiverimaljalla matala, kiiltävä kellertävä keskisuuri (1-2 mm), tarkkarajainen pesäke EYA:lla, lipaasi negat ja lesitinaasi negat Pikaindoli posit (eya-maljalta parhaiten) Anaerobien identifikaatiotesti (AI): Ka S, Va R, Ko S. Kaupallisissa tunnistustesteissä vähän posit reaktioita, lähinnä indolireaktio ja jotain muuta. Katalaasi negat Ei kasva BBE:llä, ei kasva KVLB:llä.

39 Näyte 16/2011. Finegoldia magna Gram-värjäys: Iso gramposit kokki Anaerobiverimalja (FAA) 3-4 vrk: Pieni (0,5-1 mm), maljanvärinen, tarkkarajainen kokkipesäke Katalaasi: Negat (ei kuohu) Pikaindoli: Negat (väritön)

40 Näyte 16/2011. Finegoldia magna Anaerobien identifikaatiotesti (AI) Kanamysiini (1000 µg): Vankomysiini (5 µg): Kolistiini (10 µg): SPS S S R R Lisäksi maljan alaosassa: Metronidatsoli (5 µg): S

41 Näyte 16/2011. Finegoldia magna - - -, - - -, - - -, - + +, - + +, RapID ANA II: Finegoldia magna (99,9 %)

42 Näyte 16/2011. Finegoldia magna (Entinen Peptostreptococcus magnus) Yhteenveto diagnostisista testeistä Ehdottomasti anaerobinen Iso grampositiivinen kokki Anaerobiverimaljalla pieni, maljan värinen kokkipesäke Katalaasi negat Pikaindoli negat Anaerobien identifikaatiotesti (AI): Ka S, Va S, Ko R, Sps R. Lajitunnistus kaupallisilla tunnistustesteillä toimii. Ei kasva BBE:llä, ei kasva KVLB:llä. Lipaasi negat ja lesitinaasi negat

43 Värikästä syksyä 2011