Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 1/2014

Transkriptio

1 Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 1/2014 Kuvat ja teksti: Markku Koskela Mikrobiologian ylilääkäri NordLab Oulu Huom! Käyttäkää yläpalkin suurennusmahdollisuutta % pesäkekasvun yms. yksityiskohtia tarkastellessanne!!!!

2 Näyte 11/2014 Sivelynäyte istukasta Löydös: Listeria monocytogenes, merkittävä patogeeni Tehtävät: Bakteerin eristäminen, tunnistaminen ja mikrobilääkeherkkyysmääritys

3 Näyte 11/2014 Sivelynäyte istukasta Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, 35 C, 1-2 vrk. ->Keskikokoinen, kiiltävä, harmaanvalkoinen, kupera, hemolysoimaton (tämä kanta!!) pesäke.

4 Näyte 11/2014 (16/2010) Listeria monocytogenes 1 2 Katalaasitesti: 1. Listeria monocyt. Posit 2. Negatiivinen kontrolli (Beta-hem streptokokki B) Pesäkkeen gramvärjäys: Lyhyt grampositiivinen sauva

5 Näyte 11/2014 (16/2010): Listeria monocytogenes Aerobinen viljely listerialle selektiiviselle Palcam-maljalle (35 C, 1 vrk) -> Vihertävän harmaita, eskuliinipositiivisia (pesäkkeen ympäristö mustuu) pesäkkeitä.

6 Näyte 11/2014 (16/2010). Listeria monocytogenes 30 C 35 C Sateenvarjomainen liikkuvuus 30 C:ssa

7 Näyte 11/2014 (16/2010). Listeria monocytogenes 1. RapID CB Plus: Listeria monocytogenes (vain 42%) + - -, + + +, + - -, - + -, + - -, - - -, + Katalaasi 2. Vitek 2 GP: Listeria monocytogenes

8 Näyte 11/2014 (16/2010). Listeria monocytogenes - + +, + - +, + - -, - 3. API Listeria: 6510 Listeria monocytogenes ( 99 %)

9 Näyte 12/2014 Sivelynäyte vartalolta Karstainen ihottuma alkoholistilla Oletettu löydös: Streptococcus pyogenes, merkittävä patogeeni, Pseudomonas stutzeri, mahdollinen patogeeni, Bacillus sp., ympäristökontaminantti. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tulosten tulkinta

10 Näyte 12/2014 Sivelynäyte vartalolta Karstainen ihottuma alkoholistilla Kasvu lampaanveri- ja suklaamaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1 vrk. 1. Pieniä, beta-hemolyyttisiä streptokokkipesäkkeitä. 2. Keskikokoisia, kiiltäviä, harmaita, kuperia sauvapesäkkeitä. 3. Isoja, kuivia, harmaita, matalia pesäkkeitä.

11 Näyte 12/2014 Sivelynäyte vartalolta Karstainen ihottuma alkoholistilla 2. Oksidaasi+ 3. Oksidaasi heikko+ Kasvu lampaanverimaljalla, 5% CO 2, 35 C, 2 vrk. 1. Beta-hemolyyttisiä streptokokkipesäkkeitä 2. Kiiltäviä, kartiomaisia sauvapesäkkeitä, jotka ovat oksidaasi+. 3. Kuivia, mattapintaisia pesäkkeitä, jotka ovat heikosti oksidaasi+.

12 Näyte 12/2014 Sivelynäyte vartalolta Karstainen ihottuma alkoholistilla Kasvu suklaamaljalla, 5% CO 2, 35 C, 2 ja 4 vrk. 1. Pieniä, harmaita streptokokkipesäkkeitä. 2. Isoja, kuperia, punertavia pesäkkeitä. 3. Suuria, matalia, mattapintaisia pesäkkeitä.

13 Näyte 12/2014 Sivelynäyte vartalolta Karstainen ihottuma alkoholistilla Kasvu streptokokkiverimaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1-2 vrk. Harmaita streptokokkippesäkkeitä, joiden ympärillä on voimakas beta-hemolyysivyöhyke.

14 Näyte 12/2014 Sivelynäyte vartalolta Karstainen ihottuma alkoholistilla Kasvu Pea-maljalla, 5% CO 2, 35 C, 2 vrk. 1. Harmaita streptokokkipesäkkeitä, jotka eivät hemolysoi tällä maljalla!!!. 2. Suuria, matalia, mattapintaisia pesäkkeitä.

15 Näyte 12/2014 Sivelynäyte vartalolta Karstainen ihottuma alkoholistilla Kasvu Cled-maljalla, 35 C, 1-2 vrk. 3. Suuria, matalia, laktoosinegatiivisia (vihreitä) pesäkkeitä 2. Keskikokoisia, laktoosinegatiivisia (vaaleanvihreitä) pesäkkeitä. 1. Pieniä laktoosinegatiivisia (tummanvihreitä) kokkimaisia pesäkkeitä.

16 Näyte 12/2014 Sivelynäyte vartalolta Karstainen ihottuma alkoholistilla Kasvu BBL Chromagar Orientation-maljalla 35 C, 1-2 vrk. 3. Suuria, matalia, tumman sinisiä pesäkkeitä. 2. Keskikokoisia, värittömiä pesäkkeitä 1. Pieniä, sinisiä pesäkkeitä.

17 Näyte 12/2014 (1/2012). 1.Streptococcus pyogenes Grampositiivinen ketjukokki A + G - Kasvu verimaljalla, 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. -> Pieniä, valkoisen harmaita ja kuperia kokkipesäkkeitä, joiden ympärillä on iso ja kirkas beta-hemolyysivyöhyke. Beta-hem streptokokkien ryhmämääritys latex-agglutinaatiolla

18 Näyte 12/ Pseudomonas stutzeri Oksidaasi+ Kasvu verimaljalla, 1 ja 4 vrk, 35 C. Kuivia, kiiltäviä pesäkkeitä, joista muodostuu (4 vrk:ssa) poimuilevia kukkamaisia pesäkkeitä. Suklaamaljalla punertavina pesäkkeinä. Gramnegatiivinen sauva

19 Näyte 12/ Pseudomonas stutzeri Pseudomonas stutzerin sokerisarja: 1) Glukoosi / kaasu: -/- 2) Indoli - (väritön) 3) liikkuva (koko putki on samea) 4) sitraatti + (sininen) 5) urea - (keltainen) 6) TSI: pinta punainen (-) / pohja punainen (-)/ pohjassa ei kaasua (-) ts.nonfermentatiivinen sauva. H 2 S-reaktio on negatiivinen (ei mustaa putkesssa).

20 Näyte 12/ Pseudomonas stutzeri 1. API20NE Pseudomonas stutzeri (99,9%). Oksidaasi - - -, - - -, - - +, - - +, - + +, + - +, Vitek V2 GN Pseudomonas stutzeri

21 Näyte 12/ Bacillus sp. Aerobi kasvu verimaljalla, 1 vrk, 35 C. Suuria, kuivia, mattapintaisia pesäkkeitä. Grampositiivinen itiöllinen sauva Vitek V2 BCL Bacillus megaterium

22 Näyte 13/2014 Märkää posken ihon absessista. Kulkukissa on purrut pienokaista poskeen. Löydös: Pasteurella multocida ja Fusobacterium russii, merkittäviä patogeeneja. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tuloksen tulkinta.

23 Näyte 13/2014 Märkää posken ihon absessista. Natiivinäytteen gramvärjäys Näytteen gramvärjäyslöydökset: Gramnegatiivisia sauvoja

24 Näyte 13/2014 Märkää posken ihon absessista. Aerobinen primaariviljely Kasvu lampaanveri- ja suklaamaljoilla, 5% CO 2, 35 C, 2 vrk. Isoja, harmaita, kiiltäviä, kuperia pesäkkeitä.

25 Näyte 13/2014 (4/2011) 1. Pasteurella multocida Oksidaasi+ Kasvu lampaanverimaljalla 5% CO 2, 35 C,1-2 vrk. Harmaita, kuperia sauvapesäkkeitä, jotka ovat oksidaasi + Gramnegatiivisia kokkisauvoja

26 Näyte 13/2014 (4/2011). 1. Pasteurella multocida 1. RapID NH 0776 Pasteurella multocida (99,9 %) - - -, + + +, + + +, Vitek 2 GN Pasteurella multocida

27 Näyte 13/2014 Märkää posken ihon absessista. Anaerobinen primaariviljely Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA) 2 vrk, +35 C. Metronidatsolikiekon ympärillä on estorengas ->anaerobeja! Myös aminoglykosidikiekon (tässä tobramysiinikiekko) ympärillä on estorengas, koska maljalla anaerobisesti kasvava aerobi on sille herkkä. Maljalla kasvava todellinen anaerobi on tobramysiinille resistentti ja kasvaa tobramysiinikiekon estorenkaan alueella, josta se on helppo viljellä puhtaaksi.

28 Näyte 13/2014 Märkää posken ihon absessista. Anaerobinen primaariviljely Anaerobikasvu anaerobiverimaljalla (FAA) 2 vrk, 35 C. Anaerobikasvua metronidatsolikiekon estorenkaan ulkopuolella, tobramysiinikiekon estorenkaan sisällä ->Aerotoleranssitesti ja gramvärjäys Estorenkaitten ulkopuolella kahta erilaista pesäkettä, joista myös aerotoleranssitesti ja gramvärjäys

29 Näyte 13/2014 Märkää posken ihon absessista. Anaerobinen primaariviljely Anaerobiviljely EYA-maljalle 2-5 vrk, 35 C. 1. Pieniä, vaaleita pesäkkeitä, jotka ovat sekä lipaasinegatiivisia että lesitinaasinegatiivisia. ->Aerotoleranssitesti ja gramvärjäys

30 Näyte 13/2014 Aerotoleranssitestit FAA-maljalta Verimalja: aerobi; suklaamalja: 5% CO 2, FAA: anaerobi 1.Ylempi puolisko: Gramnegatiivinen sauva, joka kasvaa kaikilla maljoilla. Se on aerobi ja fakultatiivisesti anaerobi (Pasteurella multocida). 2.Alempi puolisko: Gramnegatiivinen sauva, joka kasvaa vain anaerobisti. Se on metronidatsolille herkkä. Se on ehdottomasti anaerobi (Fusobacterium russii).

31 Näyte 13/ Fusobacterium russii Katalaasi negat. (Ei kuohu) Anaerobikasvu FAA-maljalla,35 C, 3 vrk. Kiiltäviä, kellertäviä, kuperia pesäkkeitä Pikaindoli negat (väritön) Ero F nucleatumiin!!

32 Näyte 13/ Fusobacterium russii Anaerobien identifikaatiotesti (A I): Kanamysiini S, vankomysiini R, kolistiini S. Metronidatsoli S. Löydös sopii gramnegatiiviseksi anaerobiksi. Sukkulamainen Gramnegatiivinen sauva (Pyöristyneet kärjet!)

33 Näyte 13/ Fusobacterium russii 1. RapID ANA II Ei oikeaa nimeä - - -, - - -, - - -, + - -, + - -, Rapid ID 32A Ei oikeaa nimeä

34 Näyte 13/ Fusobacterium russii 3. Vitek V2 ANC Fusobacterium nucleatum!? 4. Maldi-tof menetelmät: Ei testattu 5. DNA sekvenointi: Fusobacterium russii

35 Näyte 14/2014. Revisioleikkauksen yhteydessä otettu kudosnäyte 77-vuotiaan diabeetikon amputoidusta oikean jalan tyngästä. Löydös: Enterobacter cloacae, Hafnia alvei ja Bacteroides fragilis, kaikki merkittäviä patogeeneja. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tuloksen tulkinta.

36 Näyte 14/2014. Kudosnäyte jalan tyngästä. Natiivinäytteen gramvärjäys Gramvärjäyslöydös: Gramnegatiivisia sauvoja

37 Näyte 14/2014. Kudosnäyte jalan tyngästä. Aerobi primaariviljely Kasvu lampaanveri- ja suklaamaljoilla, 5% CO 2, 35 C, 1-2 vrk. Isoja, harmaita, kuperia saivamaisia pesäkkeitä. Montako erilaista??

38 Näyte 14/2014. Kudosnäyte jalan tyngästä. Aerobi primaariviljely 1 2 Kasvu Cled-maljalla, 35 C, 1 vrk. Kahta erilaista laktoosinegatiivista sauvapesäkettä

39 Näyte 14/2014. Kudosnäyte jalan tyngästä. Aerobi primaariviljely 1 2 Kasvu BBL Chromagar Orientation-maljalla, 35 C, 1 vrk. Kahta erilaista sauvamaista pesäkettä: Iso sininen ja pieni väritön.

40 Näyte 14/2014 (16/2009). 1. Enterobacter cloacae Kasvu verimaljalla 1 vrk, 35 C. Gramnegatiivinen sauva

41 Näyte 14/2014 (16/2009). 1. Enterobacter cloacae Enterobacter cloacaen sokerisarja: 1) Glukoosi / kaasu: +/+ (keltainen / pikkuputkessa on kaasua 2) Indoli - (väritön) 3) liikkuva (koko putki on samea) 4) sitraatti + (sininen) 5) urea + (punainen) 6) TSI: pinta punainen, pohja keltainen, runsaasti kaasua = fermentatiivinen. H 2 S-reaktio on negat ts. ei mustaa vyöhykettä putkessa.

42 Näyte 14/2014 (16/2009). 1. Enterobacter cloacae 1. API20E: Enterobacter cloacae ( 92 %) + + -, - + -, - - -, + - +, + - +, + + +, Vitek 2 GN: Enterobacter cloacae

43 Näyte 14/ Hafnia alvei Kasvu verimaljalla, 1 vrk, 35 C. Gramnegatiivinen sauva

44 Näyte 14/ Hafnia alvei Hafnia alvein sokerisarja: 1) Glukoosi / kaasu: +/(+) (keltainen / pikkuputkessa on hiukan kaasua 2) Indoli - (väritön) 3) liikkumaton (kasvu pistoviljelykohdassa) 4) sitraatti (vihreä) 5) urea - (keltainen) 6) TSI: pinta punainen, pohja keltainen, ei kaasua. Fermentatiivinen bakteeri. H 2 S-reaktio on negat ts. ei mustaa vyöhykettä putkessa. ->API20E

45 Näyte 14/ Hafnia alvei 1. API20E: Hafnia alvei (98 %) + - +, + - -, - - -, - - +, + - -, + - -, Vitek 2 GN: Hafnia alvei

46 Näyte 14/2014. Kudosnäyte jalan tyngästä. Anaerobinen primaariviljely Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA) 2 vrk, 35 C. Metronidatsolikiekon ympärillä on estorengas ->anaerobeja!

47 Näyte 14/2014. Kudosnäyte jalan tyngästä. Anaerobinen primaariviljely Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA) 2 vrk, +35 C. Metronidatsolikiekon ympärillä on estorengas ->anaerobeja! Kolme erilaista pesäkettä. Mikä niistä on anaerobi? ->Aerotoleranssitesti ja gramvärjäys

48 Näyte 14/2014. Kudosnäyte jalan tyngästä. Anaerobinen primaariviljely Anaerobiviljely BBE-maljalle 2 vrk,35 C. Keskikokoisia, harmaanvalkoisia, kiiltäviä, kuperia pesäkkeitä, joiden ympärillä on laaja musta vyöhyke, joka johtuu positiivisesta eskuliinireaktiosta.

49 Näyte 14/2014 Aerotoleranssitestit FAA-maljalta Verimalja: aerobi; suklaamalja: 5% CO 2, FAA: anaerobi 1.Vasen yläneljännes: Gramnegatiivinen sauva, joka kasvaa kaikilla maljoilla. Se on aerobi ja fakultatiivisesti anaerobi (Havnia alvei). 2.Oikea yläneljännes: Gramnegatiivinen sauva, joka kasvaa kaikilla maljoilla. Se on aerobi ja fakultatiivisesti anaerobi (Enterobacter cloacae). 3. Vasen alaneljännes: Gramnegatiivinen sauva, joka kasvaa vain anaerobisella verimaljalla (FAA-malja). Se on metronidatsolille herkkä. Se on ehdottomasti anaerobi (Bacterioides fragilis).

50 Näyte 14/2014 (8/2010). 3. Bacteroides fragilis Bacteroides-bile-esculin (BBE) -maljakasvu anaerobisesti 35 C, 2 vrk. B fragilis kasvaa maljalla eli sietää sappea ja mustina pesäkkeinä eli hydrolysoi eskuliinia ts BBE+.

51 Näyte 14/2014 (8/2010). 3. Bacteroides fragilis Gram - sauva Anaerobien identifikaatiotesti (A I): Kanamysiini R, vankomysiini R, kolistiini R sopien gramnegatiiviseksi Bacteroides fragilis-ryhmän anaerobiksi

52 Näyte 14/2014 (8/2010). 3. Bacteroides fragilis 1. RapID ANA II Bacteroides fragilis (99,6 %) - + -, + + +, + + +, + + +, - + +, Vitek 2 ANC Bacteroides fragilis

53 Rattoisaa ja värikästä kevättä!