Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 4/2015

Transkriptio

1 Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 4/2015 Kuvat ja teksti: Markku Koskela Mikrobiologian ylilääkäri Nordlab Oulu Huom! Käyttäkää yläpalkin suurennusmahdollisuutta % pesäkekasvun yms. yksityiskohtia tarkastellessanne!!!!

2 Näyte 31/2015 Sivelynäyte istukasta. Löydös: Streptococcus agalactiae (B-ryhmän beta-hemo- lyyttinen streptokokki), merkittävä patogeeni Tehtävät: Bakteerin eristäminen, tunnistaminen ja mikrobilääkeherkkyysmääritys. Tulosten tulkinta.

3 Näyte 31/2015 Sivelynäyte istukasta. Viljely lampaanverimaljalle, 5% CO 2, 35 C, 1-2 vrk. -> Beta-hemolyyttinen streptokokki.

4 Näyte 31/2015 Sivelynäyte istukasta. Viljely suklaamaljalle, 5% CO 2, 35 C, 1-2 vrk. -> Harmaita streptokokkipesäkkeitä.

5 Näyte 31/2015 (8/2012). Beta-hemolyyttinen streptokokki, ryhmä B (Streptococcus agalactiae) Katalaasi negat Gram+dk tai kk Verimaljalla iso pesäke, jonka ympärillä kapea beta-hemolyysivyöhyke. B A: negat kontrolli Streptokokki latex-testi

6 Näyte 31/2015 (8/2012). Streptococcus agalactiae 1. Rapid ID 32 STREP Streptococcus agalactiae 99 % + - +, + - +, + - -, + + -, + - -, , - - -, + - +, + - -, + - -, - 2. Vitek-2 GP Streptococcus agalactiae 99 %

7 Näyte 32/2015 Sivelynäyte 52-vuotiaan naisen ärhäkästä kainalon tulehdusleesiosta. Oletettu löydös: Staphylococcus aureus ja Candida albicans, patogeeneja ja Corynebacterium sp. (difteroidi), ihon normaalia flooraa. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tulosten tulkinta.

8 Näyte 32/2015 Sivelynäyte kainalon tulehdusleesiosta. 1 2 Kasvu lampaanverimaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1-2 vrk. 1. Matala, vaalea, kiiltävä stafylokokin näköinen pesäke. 2. Pieni, kuiva, harmaa pesäke. 3. Muita?

9 Näyte 32/2015 Sivelynäyte kainalon tulehdusleesiosta Kasvu suklaamaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1 2 vrk. 1. Matala, valkoinen, kiiltävä stafylokokkipesäke. 2. Kuiva, harmaa, valejalkainen hiivan näköinen pesäke. 3. Hyvin pieni, kuiva harmaa pesäke.

10 Näyte 32/2015 Sivelynäyte kainalon tulehdusleesiosta. 2 3 Kasvu streptokokkiverimaljalla, 35 C, 1-2 vrk. 2. Kuivia, harmaita hiivan näköisiä pesäkkeitä.. 3. Pieniä harmaita pesäkkeitä.

11 Näyte 32/2015 (1/2011). 1. Staphylococcus aureus S.aureus Koag neg stafylokokki + - Stafylokokkien latexagglutinaatiotesti Matalia, kiiltäviä, kellertäviä ja betahemolysoivia S aureus-pesäkkeitä verimaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1 vrk.

12 Näyte 32/2015 (2/2010). 2. Candida albicans Ituputkitesti (seerumitesti), 2 t, 30 C -> natiivimikroskopointi: C.albicans posit. vrt. Candida glabrata negat. Pesäkkeen Gramvärjäys: hiivasoluja

13 Näyte 32/2015 (2/2010). 2. Candida albicans Hiivan tunnistaminen kromogeenimaljalla: Chromagar Candida (biomerieux, Ranska), aerobisesti 35 C, 2 vrk. Aluksi vihertäviä ( 1vrk) -> Vihreitä (2 vrk) C.albicans pesäkkeitä

14 Näyte 32/2015 (10/2011) 3. Corynebacterium sp. Katalaasi+ (kuohuu) Oksidaasi neg (väritön) Aerobi verimaljakasvu, 2-3 vrk, 35 C. Pieniä, harmaan valkoisia (->kellertäviä), kiiltäviä, kuperia pesäkkeitä, jotka ovat katalaasipositiivisia. (Vrt. streptokokit ovat katalaasinegatiivisia!) Lyhyt, monimuotoinen grampositiivinen sauva

15 Näyte 33/2015. Märkää otsaontelosta. Otsaontelotulehdus 36-vuotiaalla autonkuljettajalla. Löydökset: Aggregatibacter actinomycetemcomitans (ent. Actinobacillus actinom. ja sitä ennen Haemophilus actinomycetemcomitans) ja Fusobacterium nucleatum, molemmat merkittäviä patogeeneja. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tuloksen tulkinta.

16 Näyte 33/2015. Märkää otsaontelosta. 2 vrk 4 vrk Kasvu lampaanverimaljalla, 5% CO 2, 35 C, 2 ja 4 vrk. 1. Hyvin pieniä harmaita kokkimaisia pesäkkeitä.

17 Näyte 33/2015. Märkää otsaontelosta. Kasvu suklaamaljalla, 5% CO 2, 35 C, 2 ja 4 vrk. 1. Hyvin pieniä harmaita kokkimaisia pesäkkeitä

18 Näyte 33/2015 (7/2009). 1. Aggregatibacter actinomycetemcomitans Satelliittikoe negatiivinen. Kasvaa verimaljalla yksinkin! Gramnegat lyhyt sauva.

19 Näyte 33/2015 (7/2009). 1. Aggregatibacter actinomycetemcomitans 1. RapID NH: 3130 Haemophilus actinomycetemcomitans

20 Näyte 33/2015. Märkää otsaontelosta. Anaerobinen primaariviljely FAA:lla 2 vrk Metronidatsolikiekon ympärillä on erittäin iso estorengas ->Anaerobeja Estorenkaan ulkopuolella keskisuuria, kellertävän harmaita pesäkkeitä ->Aerotoleranssitesti ja gramvärjäys.

21 Näyte 33/2015 Aerotoleranssitestit FAA-maljalta Verimalja: aerobi; suklaamalja: 5% CO 2, FAA: anaerobi 1. Yläpuolisko: Gramnegatiivinen sauva, joka kasvaa kaikilla maljoilla. Se on aerobi, joka kasvaa myös anaerobisesti. (A actinomycetemcomitans) 2. Alapuolisko: Gramnegatiivinen sauva, joka kasvaa vain anaerobimaljalla. Se on ehdottomasti anaerobi. (Fusobacterium nucleatum).

22 Näyte 33/2015 (16/2011). 2. Fusobacterium nucleatum 2-3 vrk Gram-värjäys: Ohuita neulasmaisia gramnegat sauvoja 4 vrk Anaerobiverimaljakasvu (FAA): Matala, tarkkarajainen, kiiltävä, kellertävä pesäkekasvu. EYA-maljakasvu Lesitinaasi neg Lipaasi neg Pikaindoli : posit. (sininen)

23 Näyte 33/2015 (16/2011). 2. Fusobacterium nucleatum Anaerobien identifikaatiotesti (A I): Kanamysiini (1000 µg) Vankomysiini (5 µg) Kolistiini (10 µg) S R S Lisäksi maljan alaosassa: Metronidatsoli (5 µg) S

24 Näyte 33/2015 (16/2011). 2. Fusobacterium nucleatum 1. RapID ANA II: Fusobacterium nucleatum (100 %) - - -, - - -, - - -, - - -, - - -, Vitek Fusobacterium nucleatum (97 %)

25 Näyte 34/2015. Punktionäyte 57-vuotiaan miehen pleuraempyemasta. Löydökset: Steptococcus anginosus (beta-hemolyyttinen streptokokki ryhmä F), Enterococcus casseliflavus ja Peptostreptococcus anaerobius kaikki merkittäviä patogeeneja. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tuloksen tulkinta.

26 Näyte 34/2015. Märkää pleuraempyemasta. Näytteen primaarivärjäys. 1. Grampositiivisia kokkeja, montako erilaista?

27 Näyte 34/2015. Märkää pleuraempyemasta. 1 2 Kasvu lampaanverimaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1-2 vrk. 1. Pieniä beta-hemolyyttisiä pesäkkeitä. 2. Keskikokoisia, harmaita, osin alfa-hemolyyttisiä pesäkkeitä.

28 Näyte 34/2015. Märkää pleuraempyemasta. 2 1 Kasvu suklaamaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1 2 vrk. 1. Pieniä, harmaita pesäkkeitä. 2. Keskikokoisia, vihertävän harmaita pesäkkeitä.

29 Näyte 34/2015 (16/2011). 1. Beta-hemolyyttinen streptokokki, ryhmä F (Streptococcus anginosus) Streptokokkilatex-agglutinaatio F+ G - Pienipesäkkeinen betahemolyyttinen streptokokki verimaljalla Gram+ketjukokki

30 Näyte 34/2015 (16/2011). 1. Streptococcus anginosus 1. Rapid ID 32 STREP Streptococcus anginosus 93,9 % + + -, - - +, - - -, - + -, + - -, , - - -, - - -, + - -, + - -, - 2. Vitek-2 GP Streptococcus constellatus 90 %

31 Näyte 34/2015 (7/2011). 2. Enterococcus casseliflavus Katalaasi negat Sappi-eskuliini (BE) + Arabinoosi+ Gramposit ketjukokki

32 Näyte 34/2015 (7/2011). 2. Enterococcus casseliflavus Liikkuvuustesti 1 2 Liikkuvuustesti on käyttökelpoinen lisätesti erotettaessa E faecium (liikkumaton) E casseliflavuksesta (liikkuva) ja E gallinarumista (liikkuva). Liikkuvuustesti voidaan tehdä ns liikkuvuusputkessa (Motility test medium). Tutkittava enterokokkikanta viljellään siihen pistoviljelynä. Putkea inkuboidaan +35 C:ssa 1-2 vrk. Tulostus oheisen kuvan mukaan. 1. E casseliflavus on liikkuva samentaen koko liikkuvuustestiputken. 2. E faecium on liikkumaton kasvaen vain pistoviljelykohdassa.

33 Näyte 34/2015 (7/2011). 2. Enterococcus casseliflavus 1. Rapid ID 32 STREP Enterococcus casseliflavus 99,9 % + + +, - + -, + + +, + + +, , + + +, - - -, + + +, + + +, - 2. Vitek-2 GP Enterococcus casseliflavus 97 %

34 Näyte 34/2015. Märkää pleuraempyemasta Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA) 2 vrk, 35 C Maljalla ei ole selvää estorengasta metronidatsolikiekon ympärillä, mutta maljalla kasvaa pesäkkeiltään ainakin kolme erilaista bakteeria. 1) Pieni beta-hemolyyttinen, 2) isompi vihertävä ja 3) valkoisen harmaa bakteeri. ->Aerotoleranssitestit ja gramvärjäykset.

35 Näyte 34/2015 Aerotoleranssitestit FAA-maljalta Verimalja: aerobi; suklaamalja: 5% CO 2, FAA: anaerobi 1. Vasen yläneljännes: Grampositiivinen kokki, joka kasvaa kaikilla maljoilla. Se on aerobi, joka kasvaa myös anaerobisesti. (Streptococcus anginosus) 2. Oikea yläneljännes: Grampositiivinen kokki, joka kasvaa kaikilla maljoilla. Se on aerobi, joka kasvaa myös anaerobisesti. (Enterococcus casseliflavus). 3. Alapuolisko: Gramnepositiivinen ketjukokki, joka kasvaa vain anaerobisesti (FAA). Se on ehdottomasti anaerobi. (Peptostreptococcus anaerobius).

36 Näyte 34/2015 (8/2012). 3. Peptostreptococcus anaerobius Keskikokoinen gramposit kokki Anaerobiverimalja (FAA) 3-4 vrk: Keskikokoinen, kellertävän valkoinen, tarkkarajainen kokkipesäke Katalaasi: Negat (ei kuohu) Pikaindoli: Negat (väritön)

37 Näyte 34/2015 (8/2012). 3. Peptostreptococcus anaerobius Anaerobien identifikaatiotesti (AI) Kanamysiini (1000 µg): Vankomysiini (5 µg): Kolistiini (10 µg): S tai R S R SPS S Lisäksi maljan alaosassa: Metronidatsoli (5 µg): S

38 Näyte 34/2015 (8/2012). 3. Peptostreptococcus anaerobius 1. RapID ANA II: Peptostreptococcus anaerobius (100 %) - - -, - + -, - - -, - - -, + - +, Vitek-2 ANC Peptostreptococcus anaerobius (99 %)

39 Hyvää Uutta Vuotta 2016