Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 3/2015

Transkriptio

1 Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 3/2015 Kuvat ja teksti: Markku Koskela Mikrobiologian ylilääkäri Nordlab Oulu Huom! Käyttäkää yläpalkin suurennusmahdollisuutta % pesäkekasvun yms. yksityiskohtia tarkastellessanne!!!!

2 Näyte 21/2015 Sivelynäyte silmän sidekalvolta. Sidekalvotulehdus 5-vuotiaalla potilaalla. Löydös: Haemophilus influenzae, merkittävä patogeeni Tehtävät: Bakteerin eristäminen, tunnistaminen ja mikrobilääkeherkkyysmääritys. Tulosten tulkinta.

3 Näyte 21/2015 Silmän sidekalvoerite. Viljely lampaanverimaljalle ja suklaamaljalle 5% CO 2, 35 C, 1 vrk -> Kasvua vain suklaamaljalla: keskikokoisia, harmaita, kiiltäviä, kuperia pesäkkeitä.

4 Näyte 21/2015 (13/2012) Haemophilus influenzae Satelliittikoe verimaljalla 5% CO 2, 35 C, 1 vrk. Kasvu suklaamaljalla 5% CO 2, 35 C, 1-2 vrk. Harmaita, kuperia, kiiltäviä pesäkkeitä. Hemofiilus kasvaa verimaljalla S aureuksen satelliittina Monimuotoinen gramnegatiivinen sauva

5 Näyte 21/2015 (13/2012) Haemophilus influenzae Kasvufaktorikoe herkkyysmaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1 vrk XV-faktorikiekko on testin sisäisenä kontrollina: sen ympärillä pitää olla kasvua. H influenzae vaatii sekä X- että V-faktorin kasvaakseen eli se kasvaa vain X- ja V-faktorikiekkojen välissä alueella, johon niistä on diffuntoitunut sekä X- että V-faktoria.

6 Näyte 21/2015 (13/2012) Haemophilus influenzae Vitek 2 NH Haemophilus influenzae

7 Näyte 22/2015 Sivelynäyte opiskelijamiehen esinahan rakkulaisesta infektioleesiosta. Oletettu löydös: Koagulaasinegatiivinen stafylokokki (Staphylococcus hominis), alfa-hemolyyttinen streptokokki (Streptococcus viridans) ja Acinetobacter sp. (A lwoffii), genitaalialueen normaalia flooraa. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tulosten tulkinta.

8 Näyte 22/2015 Sivelynäyte esinahan pinnalta Kasvu lampaanverimaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1-2 vrk. 1. Matala, vaalea, kiiltävä stafylokokin näköinen pesäke. 2. Pieni alfa-hemolyyttinen streptokokin näköinen pesäke. 3. Kupolimainen, harmaa, kiiltävä sauvabakteerin näköinen pesäke. Oksidaasi -.

9 Näyte 22/2015 Sivelynäyte esinahan pinnalta Kasvu suklaamaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1 2 vrk. 1. Matala, valkoinen, kiiltävä stafylokokkipesäke. 2. Pieni, harmaa, alfa-hemolyyttinen streptokokkipesäke. 3. Kupolimainen, kiiltävä, harmaa sauvapesäke. Oksidaasi -.

10 Näyte 22/2015 Sivelynäyte esinahan pinnalta. 1 3 Kasvu Cled-maljalla, 35 C, 1-2 vrk. 1. Keltainen, kiiltävä pesäke. 3. Maljan värisiä (laktoosinegatiivisia) sauvapesäkkeitä. Oksidaasi -. Muuta?

11 Näyte 22/2015 Sivelynäyte esinahan pinnalta. 2 3 Kasvu BBL Chromagar Orientation-maljalla, 35 C, 2 vrk. 2. Pieni sinivihreä kokkimainenpesäke. 3. Matala, väritön sauvapesäke. Muuta??

12 Näyte 22/2015 (10/2012) 1. Koagulaasinegatiivinen stafylokokki (S. hominis) Stafylokokkien latexagglutinaatiotesti S hominis - S aureus + Kasvu lampaanverimaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1-2 vrk:ssa. Kellertävän valkoisia, kiiltäviä, matalia pesäkkeitä. Grampositiivinen ryhmäkokki

13 Näyte 22/2015 (15/2010). 2. Alfa-hemolyyttinen streptokokki (Streptococcus viridans) Optokiinille resistentti alfahemolyyttinen streptokokki (ts. ei kasvun estorengasta) ( 1 vrk, 35 C). Grampositiivinen ketjukokki

14 Näyte 22/2015 (22/2014) 3. Acinetobacter lwoffii Kasvu verimaljalla, 1-2 vrk, 35 C. Kiiltäviä, kuperia pesäkkeitä. Gramnegatiivinen kokkimainen sauva. Huom! Näkökentässä on myös diplokokkimuotoinen sauva, mikä tekee vaikeaksi erottaa se gonokokista!!

15 Näyte 22/2015 (22/2014) 3. Acinetobacter lwoffii Acinetobacter lwoffiin sokerisarja: 1) Glukoosi / kaasu: -/- 2) Indoli - (väritön) 3) liikkumaton (kasvu vain pistoviljelykohdassa) 4) sitraatti - (vihreä) 5) urea - (keltainen) 6) TSI: pinta punainen (-) / pohja punainen (-)/ pohjassa ei kaasua (-). H 2 S- reaktio on negatiivinen (ei mustaa putkesssa). Ts. Sokerisarja on mykkä!

16 Näyte 22/2015 (22/2014) 3. Acinetobacter lwoffii 1. API20E Ei tulosta. 2. API20NE Acinetobacter lwoffii (99%) Huom! 2 vrk inkubaatio! 3. Vitek-2 Ei tulosta. 4. Lajitunnistus maldi-tof menetelmillä.

17 Näyte 23/2015. Märkää 43-vuotiaan miehen jalan avomurtumasta. Löydökset: Enterococcus faecalis, Enterobacter aerogenes ja Stenotrophomonas maltophilia, kaikki merkittäviä/mahdollisia patogeeneja. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tuloksen tulkinta.

18 Näyte 23/2015. Märkää jalan avomurtumasta Kasvu lampaanverimaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1-2 vrk. 1. Pieni harmaa kokkimainen pesäke. 2. Iso, harmaa, kupera sauvapesäke. Oksidaasi-. 3. Pieni kupera, kellertävän harmaa, kiiltävä sauvapesäke. Oksidaasi heikko+.

19 Näyte 23/2015. Märkää jalan avomurtumasta Kasvu suklaamaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1-2 vrk. 1. Pieni harmaa kokkimainen pesäke. 2. Iso, harmaa, kupera sauvapesäke. Oksidaasi-. 3. Pieni kupera, kellertävän harmaa, kiiltävä sauvapesäke. Oksidaasi heikko+.

20 Näyte 23/2015. Märkää jalan avomurtumasta. 1 Kasvu streptokokkilampaanverimaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1-2 vrk. 1. Harmaita kokkipesäkkeitä. Katalaasi -.

21 Näyte 23/2015. Märkää jalan avomurtumasta Viljely Cled-maljalla, aerobinen inkubaatio, 35 C, 2 vrk. 1. Pieni harmaa kellertävä (laktoosi+) kokkimainen pesäke. 2. Iso, harmaa, laktoosi?, sauvapesäke. Oksidaasi-. 3. Pieni kupera, vihreä (laktoosi-), sauvapesäke. Oksidaasi heikko+.

22 Näyte 23/2015. Märkää jalan avomurtumasta Kasvu Chromagar Orientation-maljalla, 35 C, 1-2 vrk. 1. Pieni sinivihreä kokkimainen pesäke. 2. Iso, sinivihreä sauvapesäke. Oksidaasi-. 3. Keskikokoinen väritön sauvapesäke. Oksidaasi heikko+.

23 Näyte 23/2015 Märkää jalan avomurtumasta. Anaerobinen primaariviljely FAA:lla 2 vrk 2. Tobramysiinikiekon ympärillä on estorengas -> Myös anaerobisesti kasvavia aerobeja. Estorenkaan sisällä on pesäkkeitä, jotka voivat olla anaerobeja (tai esim. enterokokkeja) -> Aerotoleranssikoe 1. Metronidatsolikiekon ympärillä ei ole estorengasta ->Ei merkkejä anaerobeista.

24 Näyte 23/2015 Märkää jalan avomurtumasta. Anaerobinen primaariviljely BBE-maljalla, 2-7 vrk, 35 C Ei kasvua

25 Näyte 23/2015 Aerotoleranssitestit FAA-maljalta Verimalja: aerobi; suklaamalja: 5% CO 2, FAA: anaerobi 1. Vasen yläneljännes: Grampositiivinen kokki, joka kasvaa kaikilla maljoilla. Se on aerobi, joka kasvaa myös anaerobisesti. (Enterococcus faecalis) 2. Vasen alaneljännes: Gramnegatiivinen sauva, joka kasvaa kaikilla maljoilla. Se on aerobi, joka kasvaa myös anaerobisesti. (Enterobacter aerogenes). 3. Oikea yläneljännes: Gramnegatiivinen sauva, joka kasvaa vain aerobisesti (vm ja sm). Se on ehdottomasti aerobi. (Stenotrophomonas maltophilia).

26 Näyte 23/2015 (3/2013) 1. Enterococcus faecalis Katalaasi negat. Kasvu verimaljalla keskikokoisina, harmaina, kuperina, ei-hemolyyt- tisinä pesäkkeinä. Grampositiivinen ketjukokki

27 Näyte 23/2015 (3/2013). 1. Enterococcus faecalis 1a. Kasvu sappi-eskuliinimaljalla BE-maljalla), 1 vrk, 35 C. Mustia = eskuliinipositiivisia pesäkkeitä. 1b. Kasvu arabinoosimaljalla, 1 vrk, 35 C. Värittömänä = arabinoosinegatiivisia pesäkkeitä (eli se ei hydrolysoi arabinoosia). 2. Vitek 2 GP Enterococcus faecalis

28 Näyte 23/2015 (3/2013) 2. Enterobacter aerogenes Verimaljakasvu, 1 vrk. Gramnegatiivinen sauva Iso, harmaa sauvapesäke

29 Näyte 23/2015 (3/2013) 2. Enterobacter aerogenes 1. API20E Enterobacter aerogenes (96%) , + + -, - - -, + - +, + + +,+ + +, Oksid. 2. Vitek 2 GN Enterobacter aerogenes

30 Näyte 23/2015 (10/2011) 3. Stenotrophomonas maltophilia Oksidaasi hitaasti ja heikosti + Aerobi verimaljakasvu 2-3 vrk. Matalia, oljenkeltaisia pesäkkeitä Gramnegatiivinen sauva

31 Näyte 23/2015 (10/2011) 3.Stenotrophomonas maltophilia Stenotrophomonas maltophilian sokerisarja: 1) Glukoosi / kaasu: -/- 2) Indoli - (väritön) 3) liikkuva (koko putki on samea) 4) sitraatti - (vihreä) 5) urea - (keltainen) 6) TSI: pinta punainen (-) / pohja punainen (-)/ pohjassa ei kaasua (-) ts.nonfermentatiivinen sauva. H 2 S-reaktio negatiivinen (ei mustaa putkesssa).

32 Näyte 23/2015 (10/2011) Stenotrophomonas maltophilia 1. API20NE Stenotrophomonas maltophilia (99,7%) - - -, - - +, + + +, - + -, + + -, - - +, Oxid 2. Vitek 2 GN Stenotrophomonas maltophilia (99%)

33 Näyte 24/2015. Eritettä vatsaontelosta. 68-vuotiaalla syöpäpotilaalla on vatsakalvontulehdus Löydökset: E coli, Bacteroides ovatus ja Clostridium innocuum, kaikki merkittäviä patogeeneka. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tuloksen tulkinta.

34 Näyte 24/2015. Eritettä vatsaontelosta. Näytteen primaarivärjäys Grampositiivisia itiöllisiä sauvoja (Klostideja?) ja 2. gramnegatiivisia sauvoja

35 Näyte 24/2015. Eritettä vatsaontelosta. Näytteen primaarivärjäys Akridiinioranssivärjäys (AO-värjäys): Suoria fluoressoivia sauvabakteereita (ainakin kahta eri kokoa)

36 Näyte 24/2015. Eritettä vatsaontelosta Kasvu lampaanverimaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1-2 (7) vrk. Isoja, harmaita, kuperia sauvapesäkkeitä. Oksidaasi-.

37 Näyte 24/2015. Eritettä vatsaontelosta Kasvu suklaamaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1 2 (7) vrk. -> Isoja, harmaita, kuperia sauvapesäkkeitä. Oksidaasi-.

38 Näyte 24/2015. Eritettä vatsaontelosta Kasvu Cled-maljalla, 35 C, 1-2 vrk. -> Matalia, keltaisia (laktoosi+) sauvapesäkkeitä.

39 Näyte 24/2015. Eritettä vatsaontelosta Kasvu BBL:n Chromagar Orientation-maljalla, aerobinen inkubaatio, 35 C, 1-2 vrk. Viininpunaisia sauvapesäkkeitä.

40 Näyte 24/2015. Eritettä vatsaontelosta Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA) 2 vrk, 35 C. Maljalla kasvaa useita erikokoisia pesäkkeitä. Estorengas metronidatsolille -> Anaerobeja -> Gramvärjäys ja aerotoleranssitesti.

41 Näyte 24/2015. Eritettä vatsaontelosta Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA) 2 vrk, 35 C. Maljalla kasvaa useita erikokoisia pesäkkeitä, ainakin kolme erilaista, joista osa on anaerobeja.

42 Näyte 24/2015. Eritettä vatsaontelosta. Anaerobiviljely BBE-maljalla 2 vrk, 35 C. Mustia pesäkkeitä ->Gramvärjäys ja aerotoleranssitestit

43 Näyte 24/2015. Eritettä vatsaontelosta. Anaerobiviljely PEA-maljalla 2 vrk, 35 C. Pieniä keskikokoisia sauvapesäkkeitä ->Gramvärjäys ja aerotoleranssitestit

44 Näyte 24/2015 Aerotoleranssitestit FAA-maljalta Verimalja: aerobi; suklaamalja: 5% CO 2, FAA: anaerobi 1. Vasen yläneljännes: Gramnegatiivinen sauva, joka kasvaa kaikilla maljoilla. Se on aerobi, joka kasvaa myös anaerobisesti. (Escherichia coli) 2. Oikea yläneljännes: Gramnegatiivinen sauva, joka kasvaa vain anaerobimaljalla (FAA). Se on ehdottomasti anaerobi (Bacteroides ovatus). 3. Vasen alaneljännes: Gramnepositiivinen itiöllinen sauva, joka kasvaa vain anaerobisesti (FAA). Se on ehdottomasti anaerobi. (Clostridium innocuum).

45 Näyte 24/2015 (6/2012) 1. Escherichia coli Verimaljakasvu 1 vrk Cled-maljakasvu 1 vrk: laktoosipositiivinen sauva Gram-värjäys: Lyhyt grampositiivinen sauva

46 Näyte 24/2015 (6/2012) 1. Escherichia coli E colin sokerisarja: 1) Glukoosi +/+(keltainen ja kaasua) 2) Indoli+ (eli punainen) 3) liikkuva (putki kokonaan samea) 4) sitraatti - (vihreä) 5) urea - (keltainen) 6) TSI: pinta keltainen, pohja keltainen ja kaasua, putkessa ei ole mustaa (H 2 S -).

47 Näyte 24/2015 (6/2012) 1. Escherichia coli 1. API20E E coli 99,9% Oksidaasi neg + - +, - - -, - - +, - - +, + - +, + + +, Vitek 2 GN E coli 99%

48 Näyte 24/2015 (12/2012). 2. Bacteroides ovatus FAA 2 vrk Katalaasi + (kuohuu) Pikaindoli + (sininen) Gramnegatiivinen sauva

49 Näyte 24/2015 (12/2012). 2. Bacteroides ovatus Anaerobien identifikaatiotesti (A I): Kanamysiini R, vankomysiini R, kolistiini R. Löydös sopii gram-negatiiviseksi Bacteroides fragilis-ryhmän anaerobiksi.

50 Näyte 24/2015 (12/2012). 2. Bacteroides ovatus 1. RapID ANA II Bacteroides ovatus (99,2 %) - - +, + + +, + + +, + + +, - - -, - - +

51 Näyte 24/2015 (4/2010). 3.Clostridium innocuum FAA-maljakasvu anaerobiviljelyssä (2 vrk, +35 C): Keskisuuria, tarkkarajaisia, hiukan koholla olevia (navallisia), harmaita pesäkkeitä. Haju mieto.

52 Näyte 24/2015 (4/2010). 3.Clostridium innocuum Katalaasi: negat (ei kuohu) Pikaindoli: negat (väritön) Gram-positiivinen itiöllinen sauva. Värjäytyvyys vaihteleva! Terminaalisia itiöitä näkyy vain muutamissa basilleissa.

53 Näyte 24/2015 (4/2010). 3.Clostridium innocuum Anaerobien identifikaatiotesti (A I): Kanamysiini R, vankomysiini S, kolistiini R sopien gram-positiiviseksi anaerobiksi Huom! Vain kohtalaisen herkkä vankomysiinille vrt. pieni vankomysiinin estorengas! (Kanta kasvoi KVLB-maljalla!)

54 Näyte 24/2015 (4/2010). 3.Clostridium innocuum EYA-maljakasvu anaerobisesti 35 C, 2 vrk: Lesitinaasireaktio: negat (ei samentumaa) Lipaasireaktio: negat (ei öljymäisyyttä)

55 Näyte 24/2015 (4/2010). 3.Clostridium innocuum 1. RapID ANA II Clostridium innocuum (99,4 %) - - -, - - +, - - -, - - -, - + +,+ - -

56 Tuottoisia sieniretkiä! Mm herkkutatteja