Oraalimikrobiologian laboratoriodiagnostiikkaa. Heini Torkko Tissari,, Pentti Kuusela)

Transkriptio

1 Oraalimikrobiologian laboratoriodiagnostiikkaa Heini Torkko (Päivi Tissari,, Pentti Kuusela)

2 Laboratorio? mikä? missä? onko nimettyä yhteyshenkilöä öä? näytteenotto-ohjeet? ohjeet? tutkimuksen kulun ja vastaamisen aikataulu? oman toimintaympärist ristön n mahdolliset ohjeet yhteydenotto tarvittaessa!!!

3 Esimerkiksi HUSLABin Kliinisen mikrobiologian ohjeet internetissä HUS > HUSLAB > Tutkimusohjekirja, asiantuntijaluettelo ja näytteenoton käsikirja > Bakteriologia - näytteenotto-ohjeetohjeet Virologia - näytteenotto-ohjeetohjeet myös s vapaa tekstihaku

4 Bakteriologian osasto Tehtyjä tutkimuksia noin (2011) Tutkimusnimikkeitä noin 100

5 Bakteriologian tutkimusmää ääriä 2011 U-BaktJVi MRSAVi B-BaktViBaktVi Pu-BaktVi BaktVi Ps-StrVi+JVi GcVi Li-BaktVi SienVi TbVrVi F-Para-O F- HepyAg Ts-HepyVi F-BaktVi F-SalmVi F-CldiVTx F-CldiTy ParodVi 1800

6 Joulu Marras Loka Syys ParodVi Kesä Heinä Elo Kuukausi Touko Huhti Maalis Helmi Tammi Lkm

7 Oraalimikrobiologiset näytteetn *parodontologiset näytteet *endodontiset näytteet *suun hiivasieninäytteet *märkänäytteet hammasper.. infektioista -sairaalaperäiset iset (Töö öölö, Kirurg.. sairaala) -avohoitoperäisetiset (HL:n vastaanotolta)

8

9 Näytteenotto / parodontologia anaerobiampulli VMGA-pullo - säilyttää anaerobioosin hyvin - bakteerien alkuperäiset määm ääräsuhteet säilyvät t melko hyvin supragingivaaliplakin poisto syvimmmät ja tulehtuneimmat taskut näyte kyretillä tai paperinastalla

10 Näytteenotto / endodontia anaerobiampulli VMGA-pullo kanavan puhdistus, tyhjänä useita vrk HUOM! Steriilin alueen näyten kruunun eristys kofferdam hampaan ja kanavan desinfektio paperinastalla juurikanavasta /aspiroimalla absessista

11 Näytteenoton merkitys Suuri! huono näyte n huono viljelytulos tehostaa parodontiitin varhaista toteamista vaikuttaa hoitopää äätöksiin helpottaa hoitotavan valintaa auttaa työnjaon suunnittelussa (HL/EHH/EHL) motivoi potilasta kertoo onko juurikanavassa infektio

12 Oraalinäytteiden viljely parodontologiset näytteet: näytepullon lämmittl mmittäminen minen (->5( min, 35C) näytteen homogenisointi (vortex( ->1 min) kvantitatiivinen laimennossarja näytteen pipetointi maljan keskelle näytteen levitys kulmasauvalla anaerobien sulkeminen anaerobiastiaan aerobimaljat hiilidioksidikaappiin

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

23

24

25

26

27

28 Parodontopatogeenien taksonomiaa Haemophilus->Actinobacillus >Actinobacillus-> Aggregatibacter Bacteroides->Porphyromonas Bacteroides->Tannerella Bacteroides->Prevotella Peptostreptococcus->Micromonas >Micromonas-> Parvimonas Wolinella->Campylobacter

29 Aggregatibacter actinomycetemcomitans mikroaerofiilinen (kapnofiilinen) kasvatusaika 3 vrk, 5% CO 2, o C TBV (tryptic( soy+bacitracin+vancomycin) semiselektiivinen kasvualusta: gram-pos ei kasva; suolistosauvat, akinetobakteerit, pseudomonaksen kaltaiset, apatogeeniset neisseriat,, hiiva kasvavat pesäke tähtimt htimäinen inen / kukkamainen katalaasi+ (NO 3 +)

30 Aggregatibacter actinomycetemcomitans

31

32

33

34 P.gingivalis, T.forsythia, P.intermedia -ryhmä, P.micra, C.rectus obligaatti anaerobi kasvatusaika ->7vrk, AnO 2, o C Brucella hevosen veri + K-vit + hemiini non-selektiivinen kasvualusta: keitetty hevosen veri lisää haettujen parodontopatogeenien pigmentaatiota; NF:n prevotellat, fusobabteerit, veillonellat,, anaerobiset +kokit ( peptostreptokokit( peptostreptokokit ) ym,, sekä fakultatiiviset viridansit,, laktobasillit, aktinomykeetit, kapnosytofagat kasvavat

35 Porphyromonas gingivalis -obligaatti anaerobi -pigmentoiva:: lähes l väritön->->lähes musta -CAAM:+ mittaa trypsiinin kaltaista entsyymiaktiviteettia katsotaan UV-valossa valossa->sinertävä fluoresenssi -ei autofluoresenssia -ind:+, MUG:- (B-galaktosidaasi) -gram.neg kokkobasilli -pahan hajuisia aineenvaihduntatuotteita

36

37 Parodontopatogeenien viitearvot Aggregat. actinomycetemcomitans 0.01% Porphyromonas gingivalis 0.1% Tannerella forsythia 5% Prevotella intermedia 5% Parvimonas micra 3% Campylobacter rectus 2% Slots & v. Winkelhoff 1993

38

39 Herkkyysmää ääritys ei tehdä parodontopatogeeneille rutiinisti herkkyyden oletusarvo tiedossa: yleisesti perusterveiden kannat herkkiä ß-laktamaasituottajat penr (Prevotella intermedia ryhmä) toistuvat löydl ydökset, huono vaste hoidolle ->herkkyysmääritys perusteltu

40 Herkkyysmää ääritys 2 endodontisten näytteiden löydl ydöksille sekä muille suun alueen näytteiden n löydl ydöksille tehdää ään n herkkyysmää ääritys rutiinisti -yleensä enintää ään n viidelle runsaimmin kasvavalle tai merkityksellisimmiksi katsotuille löydl ydöksille -syljen normaalifloora ->ei herkkyyttä -selvä kontaminaatio ->ei herkkyyttä

41 Herkkyysmää ääritys 3 Aggregatibacter actinomycetemcomitans ampisilliini amoksisilliini+klavulaanihappo atsitromysiini doksisykliini

42 Herkkyysmää ääritys 4 Anaerobit / avohoidon näytteetn ytteet metronidatsoli penisilliini amoksisilliini+klavulanihappo atsitromysiini klindamysiini doksisylkliini

43 Herkkyysmää ääritys 5 Anaerobit / sairaalapotilaiden näytteetn ytteet penisilliini metronidatsoli klindamysiini doksisykliini imipeneemi piperasilliini+tatsobaktaami amoksisilliini+klavulaanihappo

44

45 Vastaustapa Paron näyte: -parodontopatogeenit prosenttiosuuksineen -bakteerien kokonaismää äärä -ei yleensä herkkyysmää äärityksiä Endon näyte / muu suun märkm rkänäyte: -kaikki (merkittävät) t) löydl ydökset -semikvantitatiivinen +/++/+++ -herkkyysmääritykset

46 Bakteriologinen vastaus

47 Bakteriologinen vastaus

48 10VV05063 Potilas, Pekka 56V XXXXXX-YYYY HASSIPÄ: MH :00 veri (AER/MH) #M //# löydös 483 STREP.MUTANS T Kasvaa molemmissa pulloissa. kiekko MIC kiekko Ampisill S Vankomys S Erytromy S Genta-hi S Imipenem S Kefaloti S Keftriax 0.064=S Kefuroks 0.047=S Klindamy S Penisill S 0.047=S MIC

49 KIITOS!