Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 4/2013

Transkriptio

1 Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 4/2013 Kuvat ja teksti: Markku Koskela, ylilääkäri NordLab, Oulu, mikrobiologia Huom! Käyttäkää yläpalkin suurennusmahdollisuutta % pesäkekasvun yms. yksityiskohtia tarkastellessanne!

2 Näyte 31/2013 Koiran purema Oma koira purrut potilasta kuukausi sitten. Löydös: Staphylococcus intermedius, patogeeni Tehtävät: Bakteerin eristäminen, tunnistaminen ja mikrobilääkeherkkyysmääritys

3 Näyte 31/2013 Koiran purema Viljely lampaanverimaljalle ja suklaamaljalle 5% CO 2, 35 C, 1 vrk -> Keskikokoisia, matalia, luonnonvalkoisia, kiiltäviä, betahemolysoivia pesäkkeitä.

4 Näyte 31/2013 Koiran purema Viljely lampaanverimaljalle ja suklaamaljalle 5% CO 2, 35 C, 2 vrk -> Keskikokoisia, luonnonvalkoisia, kiiltäviä pesäkkeitä.

5 Näyte 31/2013 Staphylococcus intermedius Katalaasi + (Kuplii) Aerobinen verimaljakasvu (5% CO 2, 35 C, 1-2 vrk). Keskikokoisia, matalia, pesäkkeitä. Gram-positiivinen ryhmäkokki

6 Näyte 31/2013 Staphylococcus intermedius Stafylokokkien latex-agglutination testi (Murex, Englanti) 1. Negat (S intermedius) 2. Posit (S aureus) Stafylokokkien latex-agglutination testi (Pasteurex, Ranska) 1. Negat (S intermedius) 2. Posit (S aureus)

7 Näyte 31/2013 Staphylococcus intermedius Kanin plasman koagulaasitesti 1. Posit (S intermedius) 2. Posit (S aureus) 3. Negat (S epidermidis) Kasvu SAID-maljalla (biomerieux, Ranska) 1. Vihreä (S intermedius) 2. Vihreä (S aureus)

8 Näyte 31/2013. Staphylococcus intermedius 1. API20Staph Staphylococcus intermedius, kun kyseessä on eläinperäinen stafylokokkilöydös! - + +, + + +, + - -, - + -, + - -, + - +, Vitek 2 NH GP Staphylococcus intermedius

9 Näyte 32/2013 Sivelynäyte tulehtuneesta painehaavasta. Iäkäs VRE-kantaja. Oletettu löydös: Serratia fonticola, Leuconostoc sp ja Candida glabrata, jotka löytyvät viljelyllä painehaavan kolonisoineesta mikrobifloorasta. Näistä S fonticola ja C glabrata ovat tässä tapauksessa mahdollisia patogeeneja. Vankomysiinille luonnostaan resistentti Leuconostoc sp edustaa ihon normaalia flooraa. Se ei ole vankomysiinille resistentti enterokokki (VRE). Tehtävät: Bakteerien ja hiivojen eristäminen ja tunnistaminen. Tulosten tulkinta

10 Näyte 32/2013 Sivelynäyte tulehtuneesta painehaavasta Viljely lampaanverimaljalle, 5% CO 2, 35 C, 1 vrk. 1. Isoja, kellertävän harmaita, kuperia sauvapesäkkeitä. 2. Pieniä, alfahemolyyttisiä pesäkkeitä 3. Pieniä hemolysoimattomia pesäkkeitä (muutama)

11 Näyte 32/2013 Sivelynäyte tulehtuneesta painehaavasta Viljely suklaamaljalle, 5% CO 2, 35 C, 1 vrk. 1. Isoja, kellertävän harmaita, kuperia sauvapesäkkeitä. 2. Pieniä, harmaita, kiiltäviä pesäkkeitä 3. Pieniä harmaita, kuivahkoja pesäkkeitä (muutama)

12 Näyte 32/2013 Sivelynäyte tulehtuneesta painehaavasta 1. Suuria, kellertäviä, kuperia sauvapesäkkeitä. 2. Pieniä, kiiltäviä, kuperia, alfa-hemolyyttisiä kokkipesäkkeitä. Viljely lampaanverimaljalle, 5% CO 2, 35 C, 2 vrk.

13 Näyte 32/2013 Sivelynäyte tulehtuneesta painehaavasta 1. Isoja, valkoisen harmaita sauvapesäkkeitä 2. Pieniä harmaita, reunoiltaan vihertäviä kokkipesäkkeitä 3. Pieniä valkoisia, kuivia, kokkimaisia pesäkkeitä. Viljely suklaamaljalle, 5% CO 2, 35 C, 2 vrk.

14 Näyte 32/2013 Sivelynäyte tulehtuneesta painehaavasta 1 vrk 2 vrk Viljely selektiiviselle streptokokkilampaanverimaljalle, 5% CO 2, 35 C, 1-2 vrk. 1. Pieniä, harmaita, kuperia, alfa-hemolyyttisiä pesäkkeitä. 2. Valkoisen harmaita, kuperia mattapintaisia pesäkkeitä ->pesäkkeestä natiivimikroskopointi (400x): Hiiva

15 Näyte 32/2013 Sivelynäyte tulehtuneesta painehaavasta Aerobiviljely Cled-maljalle, 35 C, 1 ja 2 vrk. 1. Keskikokoisia, keltaisia ts laktoosipositiivisia sauvapesäkkeitä. 2. Näytteen kokkimaiset bakteerit eivät kasva tällä maljalla hyvin!

16 Näyte 32/2013 Sivelynäyte tulehtuneesta painehaavasta Aerobiviljely selektiivisella ja kromogeeniselle hiivamaljalle, (Chromagar Candida, biomerieux, Ranska), 35 C, 1 ja 2 vrk. 1. Keskikokoisia, punertavia ->viinin punaisia, kuivia hiivapesäkkeitä.

17 Näyte 32/2013 Serratia fonticola Kasvu lampaanverimaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1-2 vrk. Gramnegatiivinen sauva

18 Näyte 32/2013 Serratia fonticola Serratia fonticola n sokerisarja: 1) Glukoosi / kaasu: +/- 2) Indoli - (väritön) 3) liikkuva (koko putki on samea) 4) sitraatti - (vihreä) 5) urea - (väritön) 6) TSI: pinta keltainen (+) / pohja keltainen (+)/ pohjassa kaasua (+). H 2 S-reaktio negatiivinen (ei mustaa putken keskellä). Fermentatiivinen sauva ->Api20E

19 Näyte 32/2013. Serratia fonticola 1. API20E Serratia fonticola (97%) + - -, + - -, - - -, - - +, + + +, + - +, Vitek 2 GN Serratia fonticola

20 Näyte 32/2013 Leuconostoc sp Katalaasi negat Aerobikasvu verimaljalla, 35 C, 1-2 vrk. Pieniä, harmaita pesäkkeitä Grampositiivinen ketjukokki

21 Näyte 32/2013 Leuconostoc sp Leuconostoc ei kasva BEmaljalla, mutta mustaa sen kohdan, johon sitä on pesäkkeestä siirrostettu. Eli se on eskuliinipositiivinen. 35 C, 1 vrk. Leuconostoc kasvaa arabinoosimaljalla ja fermentoi sitä ts se on arabinoosipositiivinen

22 Näyte 32/2013 Leuconostoc sp Vankomysiinille resistentti (Kasvaa kiekkoon kiinni)

23 Näyte 32/2013 Leuconostoc sp 1. StrepID32: Leuconostoc sp. (99 %) 2. Vitek 2 GP Leuconostoc pseudomesenteroides

24 Näyte 32/2013 Candida glabrata Aerobikasvu verimaljalla, 35 C, 2 vrk. Pieniä, harmaita pesäkkeitä Aerobikasvu kromogeenisella hiivamaljalla (Chromagar candida, biomerieux, Ranska) 35 C, 2 vrk. Kiiltäviä, viinipunaisia pesäkkeitä

25 Näyte 32/2013 (16/2009). Candida glabrata Ituputkitesti (seerumitesti): C.glabrata neg, C.albicans pos. C.glabrata: pieni hiivasolu

26 Näyte 32/2013 (16/2009). Candida glabrata 1. Api32 Candida (ID 32 C): Candida glabrata (99%) Vitek 2 YST Candida glabrata

27 Näyte 33/2013 Märkää iäkkään naisen pikkulantion absessista. Löydökset: Morganella morganii, Enterococcus faecium ja Clostridium perfringens, patogeeneja. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tulosten tulkinta.

28 Näyte 33/2013 Märkää pikkulantion absessista Näytteen gramvärjäys Grampositiivisia, itiöllisiä sauvoja (klostrideja??). Mitä muuta?

29 Näyte 33/2013 Märkää pikkulantion absessista 1 2 Viljely lampaanverimaljalle, 5% CO 2, 35 C, 1 vrk. 1. Suuria, kellanharmaita, kiiltäviä, hemolysoivia sauvapesäkkeitä. 2. Keskikokoisia, vaaleita kokkimaisia pesäkkeitä.

30 Näyte 33/2013 Märkää pikkulantion absessista 2 1 Viljely suklaamaljalle, 5% CO 2, 35 C, 1 vrk. 1. Harmahtavia sauvapesäkkeitä ja maljalle leviävää sauvakasvua 2. Keskikokoisia, vaaleita pesäkkeitä sauvakasvun alla.

31 Näyte 33/2013 Märkää pikkulantion absessista Viljely Cled-maljalle, 35 C, 1 vrk. 1. Isoja, vihertäviä, laktoosinegatiivisia sauvapesäkkeitä 2. Keskikokoisia, laktoosipositiivisia kokkipesäkkeitä

32 Näyte 33/2013 Morganella morganii Aerobikasvu verimaljalla, 35 C, 1 vrk. Isoja sauvapesäkkeitä. Gramnegatiivisia sauvoja

33 Näyte 33/2013 Morganella morganii Morganella morganii n sokerisarja: 1) Glukoosi / kaasu: -/- 2) Indoli + (punainen) 3) liikkuva (koko putki samea) 4) sitraatti + (sininen) 5) urea + (punainen) 6) TSI: pinta punainen (-) / pohja keltainen (-)/ pohjassa ei kaasua (-). H 2 S-reaktio negatiivinen (ei mustaa putken keskellä). Fermentatiivinen sauva. ->Api20E

34 Näyte 33/2013. Morganella morganii 1. API20E Morganella morganii (99,9%) - - -, + - -, + + +, - - +, - - -, - - -, Vitek 2 GN Morganella morganii

35 Näyte 33/2013 (4/2009). Enterococcus faecium Aerobiviljely BE- ja arabinoosimaljoille, 35 C, 1 vrk. Sappi-eskuliini (BE) + (musta kasvu) Arabinoosi + (keltainen) Gram+ketjukokki

36 Näyte 33/2013 (4/2009). Enterococcus faecium 1. StrepID Enterococcus faecium 2. Vitek 2 GP Enterococcus faecium

37 Näyte 33/2013 Märkää pikkulantion absessista. Näytteen anaerobiviljely Kasvu anaerobisella verimaljalla (FAA), 35 C, 2 vrk. 1. Estorengas metronidatsolille ts. anaerobeja. ->Suuria, matalia, kuivia, pesäkkeitä, joiden ympärillä on kaksoishemolyysirengas. 2. Metronidatsolille resistenttejä pesäkkeitä. Aerotoleranssitestit ja Gramvärjäykset

38 Näyte 33/2013. Aerotoleranssitesti Aerobinen kasvu verimaljalla Kasvu suklaamaljalla, 5% CO 2- Anaerobinen kasvu anaerobisella verimaljalla (FAA) Bakteerit 1 ja 2 ovat aerobeja ja vaihtoehtoisesti anaerobeja, koska ne kasvavat kaikilla maljoilla. (Morganella morgani ja Enterococcus faecium). Bakteeri 3 on ehdottomasti anaerobi, koska se kasvaa vain anaerobimaljalla. Värjäyksessä se oli grampositiivinen itiöllinen sauva.

39 Näyte 33/2013 Clostridium perfringens Anaerobiverimaljakasvu Suuria, matalia, rosoreunaisia ja hemolysoivia pesäkkeitä. FAA 2 vrk Kaksoishemolyysi: Pesäkkeen lähellä on kirkas hemolyysivyöhyke ja siitä kauempana toinen, heikompi hemolyysivyöhyke EYA-maljakasvu: 1)Lesitinaasi posit (vaalea samentuma pesäkkeen lähialueella) 2) Lipaasi negat (Pesäkkeen reuna ei ole öljymäinen) EYA 1-2 vrk

40 Näyte 33/2013 Clostridium perfringens CAMP-koe FAA-maljalla 1) B-streptokokkia viivaviljelynä 2) Clostridium perfringens viivaviljelynä B-streptokokkiviivaa vasten molemmin puolin -> Anaerobi-inkubaatio, 1 vrk. Tulos: RUSETTIHEMOLYYSI (Clostridium perfringens) Grampositiivinen itiöllinen sauva. Itiöt ovat sauvan keskellä, ei pullistumia. Huom! Suuri osa soluista on värjääntynyt gramnegatiivisesti!

41 Näyte 33/2013 Clostridium perfringens Anaerobien identifikaatiotesti (AI) Kanamysiini (K): S (estorengas) Vankomysiini (Va): S (estorengas) Kolistiini (Ct): R (ei estorengasta) Lisäksi alaosassa: Metronidatsoli (MTZ): S (estorengas)

42 Näyte 33/2013 (An/2011) Clostridium perfringens 1. RapID ANA II: Clostridium perfringens (98,9%) + - -, + + +, + - +, + - -, - + +, Vitek 2 ANC Clostridium perfringens

43 Näyte 34/ vuotiaan miehen bronkoskopianäyte. Näytteen värjäyksessä leukosyyttien määrä/ levyepiteelisolujen määrä on yli 5. Löydökset: Prevotella melaninogenica ja Fusobacterium nucleatum. Tehtävät: Bakteerin eristäminen ja tunnistaminen. Tulosten tulkinta.

44 Näyte 34/2013 Bronkoskopianäyte Näytteen gramvärjäys 100x Runsaasti leukosyyttejä mutta vain muutama levyepiteelisolu. (Leuk/levyep >5) (Suurennus 100 x). Gramnegatiivisia sauvoja (Suurennus öljy 1000 x) ja sitten 5x kuvasuurennos

45 Näyte 34/2013 Bronkoskopianäyte Viljely lampaanverimaljalle ja suklaamaljalle, 5% CO 2, 35 C. Lampaanverimaljaa on kasvatettu 2 vrk ja suklaamaljaa 7 vrk. Ei kasvua.

46 Näyte 34/2013 Bronkoskopianäyte Näytteen anaerobiviljely Anaerobikasvu anaerobisella verimaljalla (FAA), 2 vrk, 35 C. Täydellinen kasvun esto metronidatsolikiekon ympärillä ->Vain anaerobeja! ->1. Keskikokoisia, matalia, tarkkarajaisia, keskeltä vaalean ruskeita pesäkkeitä. ->2. Keskikokoisia, kellertäviä korkeita pesäkkeitä. ->3. Muita? ->Aerotoleranssi testit ja gramvärjäykset

47 Näyte 34/2013 Bronkoskopianäyte Näytteen anaerobiviljely 1 2 Anaerobikasvu anaerobisella verimaljalla (FAA), 2 vrk, 35 C. 1. Keskikokoisia, matalia, vaalean ruskeita pesäkkeitä. 2. Keskikokoisia kellertäviä, korkeita pesäkkeitä.

48 Näyte 34/2013. Aerotoleranssitesti Aerobinen kasvu verimaljalla Kasvu suklaamaljalla, 5% CO 2- Anaerobinen kasvu anaerobisella verimaljalla (FAA) Molemmat bakteerit ovat ehdottomasti anaerobeja, koska ne kasvavat vain anaerobiolosuhteissa. Molemmat ovat gramnegatiivisia sauvoja.

49 Näyte 34/2013. Prevotella melaninogenica Anaerobikasvu anaerobisella verimaljalla (FAA), 35 C, 2 vrk (vasen kuva) ja 4 vrk (oikeanpuoleinen kuva). Keskikokoisia pesäkkeitä, jotka tuottavat vähitellen vaalean ruskeaa pigmenttiä pesäkkeen keskeltä alkaen.

50 Näyte 34/2013. Prevotella melaninogenica Lyhyitä Gram-negatiivisia sauvoja Anaerobikasvu selektiivisellä Kanamysiini-Vankomysiini-hemolysoitu ( Laked blood ) verimaljalla (KVLB), 35 C, 2 vrk. Keskikokoisia pesäkkeitä, jotka tuottavat vaalean ruskeaa pigmenttiä. Pigmentin muodostus on nopeampaa ja voimakkaampaa kuin anaerobisella perusverimaljalla kuten FAA:lla.

51 Näyte 34/2013. Prevotella melaninogenica Anaerobien identifikaatiotesti (AI): Kanamysiini (K): R (Ei estorengasta) Vankomysiini (Va): R (Ei estorengasta) Kolistiini (Ct): S (Estorengas) Lisäksi: Metronidatsoli (MTZ): S (Estorengas)

52 Näyte 34/2013 (An/2011) Prevotella melaninogenica 1. RapID ANA II: Prevotella melaninogenica (98 %) - - +, + + -, + + +, + + -, - - +, Vitek 2 ANC Prevotella melaninogenica

53 Näyte 34/2013. Fusobacterium nucleatum Pikaindolitesti positiivinen (Sininen) Anaerobikasvu anaerobiverimaljalla (FAA), 35 C, 2 vrk. Pieniä-keskikokoisia, kellertäviä, kiiltäviä, tarkkarajaisia pesäkkeitä. Gram-negatiivinen neulasmainen sauva

54 Näyte 34/2013. Fusobacterium nucleatum Anaerobien identifikaatiotesti (AI): Kanamysiini (K): S (Estorengas) Vankomysiini (Va): R (Ei estorengasta) Kolistiini (Ct): S (Estorengas) Lisäksi: Metronidatsoli (MTZ): S (Estorengas)

55 Näyte 34/2013 (An/2011) Fusobacterium nucleatum 1. RapID ANA II: Fusobacterium nucleatum (100 %) - - -, - - -, - - -, - - -, - - -, Vitek 2 ANC Fusobacterium nucleatum

56 Kaupunkiin tuotua luontoa. Tyrnimarjapensaita liikenneympyrän koristeina

57 Terveellistä, C-vitamiinipitoista syksyä!