Ulosteen bakteeriviljely 1 (F-BaktVi1) Markku Koskela, OYS, mikrobiologia Eveliina Tarkka, Huslab, bakteriologia

Transkriptio

1 Ulosteen bakteeriviljely 1 (F-BaktVi1) Markku Koskela, OYS, mikrobiologia Eveliina Tarkka, Huslab, bakteriologia

2 Tässä kuvakoosteessa on esitetty F-BaktVi1:n normaaleita ja patologisia maljaviljelynäkymiä ja esimerkkejä patogeenien tunnistamisesta OYS:n mikrobiologian laboratorion (OML) ja Huslabin bakteriologian laboratorion käytäntöjen avulla. Tämä kuvakooste toimii myös liitteenä Markku Koskelan ja Eveliina Tarkan Moodissa 5/2009 julkaisemaan artikkeliin epideemisen bakteeriripulin diagnostiikasta Suomessa.

3 Normaali ulosteviljelmä XLD-maljalla Pääkasvuna E.coli: keskisuuri keltainen pesäke Vähemmistönä satunnaisesti mm. Klebsiella: iso keltainen, limainen pesäke

4 Salmonella-epäily XLD-maljalla Värittömiä ja/tai mustanapaisia pesäkkeitä: Salmonellat Proteukset Citrobacter-lajit, ym. ->Jatkotutkimukset lyhyt sokerisarja esim. Urea ja TSI (OML) tai Urea, SIM, gluk/kaasu (Huslab) ->API20E ->serotyypitys, ym.

5 Shigella-epäily XLD-maljalla Pieniä, keskisuuria maljan värisiä (punaisia) tai kellertäviä pesäkkeitä: Shigellat Proteus,Morganella (H 2 S neg) Hafnia, E.coli (laktoosi neg), yms. Pseudomonas (Huom! Oksid+) Jatkotutkimukset: sokerisarja ->Api20E ->serotyypitys THL:lla

6 Normaali seleniittirikasteen jatkoviljelmä Önöz-maljalla Niukka E.colin yms kasvu, kun seleniittirikastus on onnistunut hyvin! E.coli: sinertäviä, violetteja tai punertavia pesäkkeitä Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter, yms: isompia, kellertäviä pesäkkeitä

7 Normaali seleniittirikasteen jatkoviljelmä Önöz-maljalla Proteukset: suklaanvärisiä tai ruskeita ja likaisen mustanharmaanapaisia (H 2 S-posit. kannat)

8 Salmonella-epäily seleniittirikasteesta Önöz-maljalla Salmonellat: Värittömiä tai (kirkkaan) mustanapaisia pesäkkeitä Jotkut Enterobacter- yms kannat: kellertävän ruskeita Jatkotutkimukset: lyhyt sokerisarja ->API20E ->serotyypitys ->tarkemmat tutkimukset THL:lla

9 Salmonellojen alustava tunnistus urea- ja TSI-putkilla (lyhyt sokerisarja, OML) 1 2 Salmonella ja Citrobacter: 1) Urea negatiivinen (keltainen) 2) TSI-putki: pinta punainen pohja keltainen pohjalla on kaasua H 2 S on positivinen eli putken keskiosa on musta

10 Salmonellojen erottaminen proteuksista urea- ja TSI-putkilla (OML) 1 2 tai Proteukset (useimmat): 1) Urea positiivinen (punainen) 2) TSI: pinta punainen pohja keltainen pohjassa on kaasua (määrä vaihtelee) H 2 S positiivinen eli musta (osa proteuksista)

11 Esimerkkinä Salmonellan lajitunnistus API20E:llä - + +, + + +, - - -, + - +, + + +, + - +, Salmonella spp. 99,9%

12 Shigellan sokerisarja (OML) Shigella sonnein sokerisarja: 1) Glukoosi / kaasu: +/ (keltainen, pikkuputkessa ei ole kaasua) 2) Indoli (eli väritön) 3) liikkumaton (kasvu vain pistoviljelykohdassa) 4) sitraatti - (vihreä) 5) urea- (keltainen) 6) TSI: pinta punainen, pohja keltainen, pohjassa ei ole kaasua ja H2S-reaktio negatiivinen.

13 Campylobacter-viljely selektiivisellä maljalla, +42 C, kampylokaasut, 2 vrk Matalia, vähitellen koko maljan alueelle levittäytyviä, harmaita ja metallinhohtoisia pesäkkeitä: Campylobacter jejuni tai C. coli. Huom! Maljalla ei yleensä kasva muita bakteereita!

14 Campylobacter-viljely selektiivisellä maljalla, +42 C, kampylokaasut, 2 vrk Jatkotutkimuksia: Katalaasi+, oksidaasi+ Gram negat vibrio S-muotoinen Hippuraatin hydrolyysi: C.jejuni: posit (violetti) C.coli: negat (väritön) Neg Pos Katso 150%:lla!!

15 Selektiivinen yersiniaviljely Yersinia enterocolitica CIN-maljalla 2 vrk,+20 C ->punaisia pesäkkeitä, joiden ympärillä vaalea reunus ( härän silmä ) ->jatkoinkubaatiossa pesäkkeet muuttuvat persikan värisiksi!! Jatkotutkimukset: Sokerisarja ->API20E ->tarkemmat tutkimukset THL:lla

16 Yersinian sokerisarja (OML) Yersinia enterocolitican sokerisarja: 1) Glukoosi / kaasu: +/ (keltainen, pikkuputkessa ei ole kaasua) 2) Indoli +(eli punainen) 3) liikkumaton (kasvu vain pistoviljelykohdassa) 4) sitraatti - (vihreä) 5) urea + (aluksi punertava ->hitaasti (2 vrk) punaiseksi) 6) TSI: pinta keltainen, pohja keltainen, pohjassa ei ole kaasua ja H2S-reaktio negatiivinen.

17 Shigella flexneri XLD-maljalla (Huslab) Huomioi tyypilliset alustan väriset pesäkkeet XLD-maljalla

18 Shigella flexnerin sokerisarja (Huslab) glu+/kaasu:- ONPG:- mot:- urea:- mannitoli+

19 Salmonella XLD-maljalla (Huslab) S.Typhimurium Salmonellat kasvavat XLD-maljalla tyypillisesti mustakeskustaisina pesäkkeinä. S.typhi Huomaa: vain osassa pesäkkeistä näkyvissä rikkivedyn tuotosta johtuva musta keskusta.

20 Salmonellan sokerisarja (Huslab) glu+/kaasu+ ONPG:- H2S+ urea:- glu+/kaasu:- ONPG:- H2S+ urea:- Salmonella Typhimurium Salmonella typhi Huomaa heikompi rikkivedyn tuotto! Joskus S.typhi voi olla jopa rikkivetynegatiivinen.

21 Yersinia enterocolitica (Huslab) Huomioi tyypilliset punakeskustaiset Y.enterocoliticapesäkkeet CIN-maljalla

22 Y.enterocolitican sokerisarja (Huslab) Y.enterocoliticalle tyypillinen sokerisarja. Huomaa putken samenemisena näkyvä liikkuvuus (eli motiliteetti) huoneenlämmössä kasvatettaessa. glu+/kaasu:- ONPG+ mot:- mot:+ urea+ +35 o C +22 o C