Gram-värjäykset. Olli Meurman

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1 Gram-värjäykset Olli Meurman

2 Gram-värjäys Gram-positiivinen Kiinnitys (kuumennus/alkoholi) Gram-negatiivinen Kristalliviolettivärjäys Kiinnitys jodilla Värinpoisto alkoholilla Safraniinivärjäys

3 Gram-värjäys Tanskalainen Hans Christian Joachim Gram, myöhemmin farmakologian ja sisätautien professori, kehitti värjäysmenetelmän alkuosan vuonna 1884 työskennellessään Berliinissä Karl Friedländerin laboratoriossa. H C J Gram ( ) C Weigert ( ) Muutamaa vuotta myöhemmin Frankfurtissa työskennellyt saksalainen patologi Carl Weigert kehitti värjäyksen loppuun lisäämällä siihen vastavärjäyksen safraniinilla.

4 Gram-värjäys Jodi muodostaa kristallivioletin kanssa liukenemattomia komplekseja, jotka vapautuvat bakteerisolusta jos soluseinämä vaurioituu. Alkoholikäsittely tekee helpommin reikiä gram-negatiivisten bakteerien seinämään, jossa peptidoglykaanikerros on ohut, kuin gram-positiivisten bakteerien seinämään. Gram-negatiivinen Gram-positiivinen kapseli teikkohappoja proteiineja polysakkarideja } ulkomembraani peptidoglykaani sytoplasminen membraani

5 Gram-positiivisia bakteereita Kokit Stafylokokit Streptokokit Enterokokit Sauvat Korynebakteerit Listeriat Basillukset Peptostreptokokit Klostridit Laktobasillit Aktinomykeetit Propionibakteerit

6 Gram-positiivisia kokkeja Stafylokokki Streptokokki Veriviljelyvärjäyksiä Pneumokokki Enterokokki

7 Corynebacterium Gram-positiivisia sauvoja Listeria Pesäkevärjäyksiä Clostridium Actinomyces

8 Gram-negatiivisia bakteereita Kokit Neisseriat Moraksellat (Branhamellat) Sauvat Enterobakteerit Pseudomonakset Hemofilukset Kampylobakteerit Veillonellat Bakteroidekset Prevotellat Porfyromonakset Fusobakteerit

9 Gram-negatiivisia sauvoja Enterobakteeri (E. cloacae) Pseudomonas Pesäkevärjäyksiä Fusobakteeri (F. necrophorum) Fusobakteeri (F. nucleatum)

10 Gram-värjäykset Mikrobien löytyminen Gramvärjäyksen lähtömateriaali Veriviljely Pesäke Potilasnäyte Lähes varma Varma Epävarma Mikrobimäärä Vaihteleva Suuri Vaihteleva, usein vähäinen Mikrobien ryhmittyminen Mikrobien lajimäärä Normaali Poikkeava Vaihteleva Yleensä yksi Yksi Vaihteleva Häiritsevä tausta Yleensä vähäinen Ei ole Usein runsas

11 S. aureus, pesäkevärjäys Staphylococcus aureus, veriviljely: Eri kokoisia bakteerisoluja

12 Str. pyogenes pesäkevärjäys Streptococcus mitis, veriviljely Str. pyogenes, veriviljely

13 Str. pneumoniae pesäkevärjäys Streptococcus pneumoniae, veriviljely: Selkeästi diplokokkeina esiintyviä bakteereita tai sitten ei

14 Neisseria meningitidis, veriviljely munuaisenmuotoinen diplokokki Neisseria lactamica, pesäkevärjäys

15 Gram-negatiivisia sauvoja veriviljelyssä, vasemmalta Enterobacter cloacae, Pseudomonas aeruginosa, Capnocytophaga canimorsus

16 E. coli ja Enterococcus faecalis. Veriviljelylöydös on useimmiten monomikrobiaalinen, poikkeuksena suolistoperäiset sepsikset

17 C. albicans,pesäkevärjäys Candida albicans, veriviljely: Valerihmaa ja yksittäisiä soluja

18 Morfologian ja ryhmittelyn monimuotoisuutta

19 Escherichia coli on tyypillisenä lyhyt tukevahko sauva, mutta

20 toisinaan E. coli on niin lyhyt, että se on lähes kokkimainen

21 E. coli antibioottihoitoa saaneella. Bakteerin jakaantuminen on häiriintynyt ja johtanut pitkien rihmojen muodostumiseen

22 Haemophilus influenzae veriviljely, ohut gram-negatiivinen sauva Pesäkevärjäys, lyhyt lähes kokkimainen sauva

23 Campylobacter jejuni, veriviljely pitkä korkkiruuvimainen sauva Campylobacter pesäkevärjäys tyypillinen lokinsiipi muoto

24 Bacteroides fragilis, veriviljely lyhyt kokkimainen sauva Pesäkevärjäys, monia muotoja, mukana isoja turvonneita soluja

25 Veriviljely, ei streptokokki vaan Clostridium clostridioforme Pesäkevärjäys, tyypillisiä sikarinmuotoisia lyhyitä sauvoja

26 Gram-värjääntymisen virhelähteitä Gram-positiivinen värjäytyy gram-negatiiviseksi Gram-negatiivinen värjäytyy gram-positiiviseksi ohut valmiste paksu valmiste bakteerin stationaarinen liian kuiva lasi ennen kasvuvaihe värinpoistoa antibioottihoito kristalliviolettia näyte hangattu lasille värinpoistoliuoksessa liika kuumennus kiinnityksessä jodia värinpoistoliuoksessa liian pitkät vesipesut detergenttiä näytteessä vanhentunut jodiliuos vettä värinpoistoliuoksessa

27 Streptococcus pyogenes, joka on menettänyt värinsä. Tällaisia ketjuja muodostavia gram-negatiivisia kokkeja ei ole

28 Clostridium paraputrificum, joka värjäytyy gram-negatiiviseksi. Itiöllisiä gram-negatiivisia bakteereita ei ole

29 Clostridium septicum, joka värjäytyy pääosin gram-negatiiviseksi. Clostridit voivat menettää osan seinämäänsä, jolloin solu voi värjäytyä kokonaan tai osittain gram-negatiiviseksi

30 Escherichia coli, joka värjäytyy gram-positiiviseksi. Paksu kohta valmisteesta, jolloin värinpoisto ei ole ollut riittävä

31 Kliinisestä näytteestä tehdyn Gram-värjäyksen tulkinta 1. onko näyte edustava ja kelvollinen 2. löytyykö mikrobeja 3. ovatko mikrobit gram-positiivisia vai gram-negatiivisia 4. ovatko mikrobit kokkeja vai sauvoja

32 Nivelneste, runsas leukosyyttejä sisältävä tausta, erikokoisia väripallosia. Viljely negatiivinen

33 Kystaneste, niukka tausta, yksi gram-positiivinen kokkipari Viljelystä vastattu S.aureus

34 Vatsaonteloerite, runsas tausta, runsaasti gram-negatiivisia sauvoja. Viljelystä vastattu E.coli ja B.fragilis

35 Krooninen haava, melko runsas tausta, gram-positiivisia kokkeja ja gram-negatiivisia sauvoja. Viljelystä vastattu E.faecalis ja Ps.aeruginosa

36 Aivoabskessi, melko runsas tausta, runsaasti gram-positiivisia sauvoja. Viljelystä vastattu Actinomyces meyeri

37 Aivoabskessi, runsas tausta, runsaasti gram-positiivisia bakteereja. Viljelystä vastattu Streptococcus intermedius

38 Ruokatorvimärkä, melko runsas tausta, yksi värinsä osin menettänyt hiivasolu. Viljelystä vastattu Candida albicans

39 Rintarangan paraspinaaliabskessi, runsas tausta, värittömiä suoria tai hieman kaarevia sauvamaisia muodostumia, jotka

40 poissa fokuksesta näyttävät tummilta, hieman sinertäviltä sauvoilta. Näytteestä viljelty Mycobacterium tuberculosis

41 Useimmiten gram-värjäys on selkeä tulkittava Säännöllisin välein tulee vastaan näytteitä, joista ei uskalla sanoa juuri mitään Silloin tällöin menee kunnolla pieleen

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