Uusien automatisoitujen hengitystieinfektio-poc-testien luotettavuusedut

Transkriptio

1 Uusien automatisoitujen hengitystieinfektio-poc-testien luotettavuusedut Vertailututkimusten toteutus Janne O. Koskinen FT, infektiotautien in vitro diagnostiikka Tutkimuksesta ja tuotekehityksestä vastaava johtaja ArcDia International Oy Ltd Turku, Finland , Labquality

2 2/26 Uusien automatisoitujen hengitystieinfektio-poc-testien luotettavuusedut Perinteinen POC-metodologia Perustuvat immunokromatografiaan tai agglutinaatioon Spesifisyys, nopeus Analyyttinen herkkyys Tulos altis tulkinnalle ja riippuu käyttäjän kokemustasosta Käyttöarvoa rajoittaa kyky tarjota tulos korkeintaan muutamalle taudinaiheuttajalle kerrallaan

3 3/26 Uusien automatisoitujen hengitystieinfektio-poc-testien luotettavuusedut Uudet POC-metodologiat Automatisoidulla tulosluennalla varustettuja tarkka ja nopea diagnostiikka terveydenhuoltoyksikössä Immunokromatografiaperiaate tulos-sekä kontrolliviivan vahvuuden automaattinen määrittäminen perustuen valon heijastukseen tai fluoresenssiin esim. suomalainen ReaScan -testi (Reagena Oy) Uuden teknologian tuotteet maripoc -testi (ArcDia International Oy, Turku Suomi) täysin automatisoitu POC-testijärjestelmä, IVD-CE Q4/2010 mahdollistaa nopean monianalyyttisen (10 kpl) diagnostiikan Kvantitatiivinen immunoreaktion mittaaminen

4 4/26 Uusien automatisoitujen hengitystieinfektio-poc-testien luotettavuusedut Uudet POC-metodologiat Mittauksen tai koko analyyttisen prosessin automatisointi tuo selkeitä etuja visuaaliseen tuloksenluentaan verrattuna tulos ei ole tulkinnanvarainen (subjektiivinen) parantunut analyyttinen herkkyys tulosten autoverifiointija matriisiefektienkompensointi (kontrolliviivaan tai taustaan verrattuna) mahdollisuus (semi)kvantitatiiviseen tulokseen (bakteerit) PDMS/LIMS-kytkettävyys

5 5/26 Uusien automatisoitujen hengitystieinfektio-poc-testien luotettavuusedut ReaScan -testi Ständi O48 Testin suoritusaika 15 min Jos haluat tehdä todellisia vieritestejä - ReaScan

6 6/26 Uusien automatisoitujen hengitystieinfektio-poc-testien luotettavuusedut maripoc -testijärjestelmä Monipatogeeninen POC-antigeenitesti hengitystieinfektioiden nopeaan testaukseen random-access - testijärjestelmä Ständi F23

7 7/26 maripoc -analyytit maripoc respi 9 parameter test from nasopharyngeal swab maripoc pharyn 2 parameter test from throat swab Influenza A virus Influenza B virus Respiratory syncytial virus Human metapneumovirus Parainfluenza virus 1 Parainfluenza virus 2 Parainfluenza virus 3 Streptococcus pneumoniae Adenovirus Group A streptococci maripoc combi combines both respi and pharyngitis tests Analyyttivalikoiman laajennus: mycoplasma, EBV, rhinoviruses, enteroviruses, coronavirus, etc.

8 8/26 maripoc -testin suoritus Näytteenotto Copan Flocked swab - nukkatikulla

9 9/26 maripoc -testin näytteenkäsittely Add bar code

10 10/26 Testaa näyte maripoc :lla Laboratorio-osaamista tai teknisiä taitoja ei tarvita muutaman minuutin opastuksella hoitohenkilöstö voi suorittaa testejä

11 11/26 Automatisoitu tuloksenluenta 20 minutes for preliminary results - 3/4 positive samples reported 2 hours for final results -also low positive and negative samples reported Autoverification of test results

12 12/26 maripoc suorituskyky To make a long story short: maripoc mahdollistaa laboratoriotasoisensuorituskyvyn POC-analytiikassa Koskinen JO et al.j ClinMicrob. 2007;45:

13 13/26 Uusien automatisoitujen hengitystieinfektio-poc-testien luotettavuusedut maripoc -laadunvarmistus Mikropartikkelit (Ø 3 µm) immunoreaktioiden kiintokantajina reaktioastian seinät passiivisia Yksi valmistuserä vasta-aineilla päällystettyjä MP:ta testiä QA-otos homogeenisestä suspensiosta edustaa täysin koko erää ELISA-tekniikassa kiintokantajan testaaminen johtaa kuopan menettämiseen, testattua kuoppaa ei voi enää toimittaa Leimattu koetinvasta-aine valmistuserä testiä Reagenssit annostellaan ja kuivataan testichipin kuoppiin Annostelun onnistuminen varmistetaan Valmiiden chippien toiminta varmistetaan otantatestauksella Fluoresenssi mitataan yksittäisten mikropartikkeleiden pinnalta Microsphere solidphase, Ø 3 µm pieces per well

14 14/26 Uusien automatisoitujen hengitystieinfektio-poc-testien luotettavuusedut maripoc -laadunvarmistus Autoverifiointi (kelpuuttamisrajat) laserin taajuus matriisin ja spesifisen signaalin tasot fluoresenssimittauksen hyötysuhde ja mitatut mikropartikkelit kontrollien (+/-) tulokset ja signaalitasot Mikäli hyväksymisehdot eivät täyty, tulosta ei raportoida

15 Uusien automatisoitujen hengitystieinfektio-poc-testien luotettavuusedut maripoc -laadunvarmistus Autoverifiointi (kelpuuttamisrajat) laserin taajuus matriisin ja spesifisen signaalin tasot fluoresenssimittauksen hyötysuhde ja mitatut mikropartikkelit kontrollien (+/-) tulokset ja signaalitasot Mikäli hyväksymisehdot eivät täyty, tulosta ei raportoida

16 16/26 Vertailututkimusten tekeminen infektiotauti-poc-testeille Vertailututkimustentekeminen Ajankohtaista erityisesti,kun uusi diagnostinen testi on tullut markkinoille yksikkö on ottamassa käyttöön itselleen uutta tuotetta taudinaiheuttajasta ilmenee uusia kantoja Luotettavien ja vertailukelpoisten tulosten saamiseksi tutkimuksen suunnittelu tulisi tehdä huolellisesti ja oikein

17 17/26 Vertailututkimusten tekeminen infektiotauti-poc-testeille Vertailututkimustensuunnittelu Noudata aina valmistajan tuotteesta antamaa ohjeistusta, kuten näytemateriaali (nukkatikkunäyte imulima) näytteenottopaikka (nenänielu nenän etuosa) näytteenottotapa (hipaisu limakalvon hankaaminen) näytteenottoon käytetty välineistö (valmistaja/tuotekoodi) Äärimmäisen tärkeää noudattaa näytteenkäsittely ja laimennosohjeistusta liian pieni laimennos/tilavuus matriisin häiriötekijät, spesifisyys, testin epäonnistuminen liian suuri laimennos vääristynyt kliininen herkkyys

18 18/26 Vertailututkimusten tekeminen infektiotauti-poc-testeille Vertailututkimustensuunnittelu Jos PCR-vertailu, selvitä voiko PCR:n tehdä antigeenitestin ylijäämänäytteestä -> näytteenotosta johtuvan vaihtelun minimointi automatisoiduissa analysaattoreissa carry over -riskin suuruus PCR:n suuren herkkyyden takia (PCR vaatii suuremman pesutehokkuuden kuin antigeenitestaus) Älä suspensoi näytettä viruskuljetusnesteeseen antigeenitestiä varten ellei valmistaja sitä erikseen suosita näyte laimenee tarpeettomasti kuljetusneste saattaa häiritä automatisoitua mittausta Näytteiden lähetys huomioi, että eri testimenetelmillä on erilaisia vaatimuksia näytteiden säilyvyydelle (selvitä)

19 19/26 Vertailututkimusten tekeminen infektiotauti-poc-testeille Vertailututkimustensuunnittelu Jos vertailtavat testit tehdään samassa yksikössä testit tehtävä toisistaan riippumattomasti, toisen testin tulos ei saa vaikuttaa toisen testin tulkintaan Tapausesim. imulimanäytteen validointi maripoc:iin imulimanäytteistä suurin osa olikin itseasiassa nenähuuhtelunäytteitä (washing vs. aspirate) SUOSITUS: Tee selkeät ja riittävän tarkat ohjeet. Valvo niiden noudattamista osallistuvissa yksiköissä/osastoissa.

20 20/26 Vertailututkimusten tekeminen infektiotauti-poc-testeille TapausesimerkkiH1N1v Pandemian alussa arvioitiin (viranomaisten toimesta), että pikatestien herkkyys sikainfluenssalle olisi lähtökohtaisesti heikompi kuin kausi-influenssalle Hyvin suunnitelluille testeille, mittaavat evolutiivisesti konservoituneita antigeeneja, oletus ei kuitenkaan pitänyt paikkaansa Ol. merkittävä osa raportoiduista erittäin heikoista herkkyyksistä johtui siitä, että näytettä oli laimennettu vertailututkimusta varten pikatestin normaalikäyttöön verrattuna Usein nukkatikkunäyte oli suspensoitu virusnäyte-kuljetusliuokseen tv. ja jaettu eri testeihin (pikatesti, viljely, PCR. etc.) katsotaan mitä tapahtuu Muita selittäviä tekijöitä? Ginocchio CC. et al., J Clin Virol. 2009;45(2): & 2009;45(3): Chan KH. et al., J Clin Virol. 2009;45(3): Vasoo S. et al., Clin Infect Dis. 2009;49(7): MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2009;58(30): Ganzenmueller T. et al., J Med Microbiol. 2010;59(Pt 6): Welch DF. J Clin Microbiol. 2010;48(1):22-5.

21 21/26 Vertailututkimusten tekeminen infektiotauti-poc-testeille Näytteenlaimentamisenvaikutus Pos. näytteiden määrä 100 % näytteistä 99 % näytteistä 50 % näytteistä X 10 laim. 80 % näytteistä Laimentaminen vääristää suorituskykyeroja PCR-testin herkkyys Antigeenitestin herkkyys Näytteen viruspitoisuus

22 Vertailututkimusten tekeminen infektiotauti-poc-testeille Näytteenlaimentamisenvaikutus Pos. näytteiden määrä 99 % näytteistä 50 % näytteistä X 10 laim. Laimentaminen vääristää suorituskykyeroja PCR-testin herkkyys Antigeenitestin herkkyys Näytteen viruspitoisuus

23 23/26 Vertailututkimusten tekeminen infektiotauti-poc-testeille Näytteenlaimentamisenvaikutus Sama efekti, jos yhdellä näytetikulla otetaan näytettä useammasta paikasta samaa testiä varten (esim. kurkusta ja sitten nenänielusta)

24 24/26 Vertailututkimusten tekeminen infektiotauti-poc-testeille Referenssitestinvalinta Uudet automatisoidut testit voivat olla selvästi perinteisiä pikatestejä tai viljelyä herkempiä SSAC 2010, Tukholma, oral presentation Koskinen & Vuorinen et al. Highly sensitive multianalyte antigen test for pharyngitis maripoc pharyn StreptA - ja ReaScan -testit Uuden testin löytämät useammat positiiviset näytteet eivät välttämättä seurausta huonosta spesifisyydestä vaan paremmasta analyyttisestä herkkyydestä Referenssitestin ja GS:n määritteleminen tehtävä huolella

25 25/26 Vertailututkimusten tekeminen infektiotauti-poc-testeille Referenssitestinvalinta i. Mitä informaatiota halutaan ja miten se saadaan: herkkyys, spesifisyys, käytettävyys, kädet-kiinni-aika? ii. Mikä on tarkoituksenmukainen referenssitesti (ei välttämättä GS) onko uusi testi korvaamassa keskuslabran testiä (-> PCR tai IFA) vai yksikössä tehtävää pikatestiä (-> LF, PCR varmistus)? onko uuden testin herkkyys oletettavasti merkittävästi suurempi kuin totunnaisesti käytetyn referenssitestin? pyyhkäisyviljely liuokseensuspensioviljely (?) vertaa ja tutki eri menetelmien suorituskyky ennen aloittamista

26 26/26 Vertailututkimusten tekeminen infektiotauti-poc-testeille Konsultoi testin valmistajaa, hyödyntäkää valmistajan osaamista ja kokemusta

27 27/26 Yhteenveto Uudet POC-metodologiat mahdollistavat uudentasoisen laadunhallinnan pikatestauksessa NopeanjaherkänRTI diagnostiikantarveon suurija edelleenkasvamassaantibiottiresistenttiongelmien& virusspesifisten lääkkeiden saatavuuden parantuessa Heinonen & Heikkinen Terho et al. CID 2010;51(8): Varmista, että saat hyödynnettyä testin koko potentiaalin Näytteenotto on kaikkein tärkein vaihe testiä Pollock NR. et al., Clin Infect Dis. 2009;49(6):e66-8.