Ituepidemia ja VTEC -tutkimukset elintarvikkeista. Saija Hallanvuo Mikrobiologian tutkimusyksikkö

Transkriptio

1 Ituepidemia ja VTEC -tutkimukset elintarvikkeista Saija Hallanvuo Mikrobiologian tutkimusyksikkö Ajankohtaista laboratoriorintamalla /

2 EHEC-ITUEPIDEMIAN VAIHEITA: Vahva signaali epidemiasta Saksassa Kuluttajien ohjeistus: Pohjois-Saksassa vältettävä kurkkuja, tomaatteja, salaattia Varautuminen mahdollisiin tutkimuksiin alkaa Evirassa Toukokuu Kesäkuu Kurkkujen STEC löydös EI ole epidemiatyyppiä (O104) Epäilykset kohdistuvat luomuituihin (Ala-Saksilainen tuottaja). Evira tiedottaa: ituja ei Suomessa Uusi kuluttajien ohjeistus: vältettävä raakoja ituja Suomalainen Saksassa matkustanut varmistuu tartunnan kantajaksi - toipuu ECDC: 2508 EHEC-tapausta, 817 HUS tapausta, 36 kuolemaa (EU) Kesäkuu tapauksen rypäs löytyy Ranskasta. Epäillään ituja, jotka kasvatettu siemenseoksesta: sinappi, rucola ja sarviapila Evirassa sovitaan näytteenotosta (kohdistuen kaikkiin ituihin) Heinäkuu Saksassa jäljitys egyptiläiseen sarviapilan siemenerään, 49 kuollutta, 4100 sairastunutta (EU) Suomesta löytyy sittenkin epäilyksenalaisia sarviapilan siemeniä - ensimmäiset näytteet Eviraan Epidemia julistetaan päättyneeksi Itututkimukset (yht. 198) päättyvät Evirassa. Näytteistä ei todettu STEC -bakteereita EFSA kumoaa itujen kuumennuskehoituksen ja idätyskiellon

3 Ihmiselle patogeeniset E. colit Tartunnan alkuperä on aina uloste Voidaan jaotella kliinisten oireiden tai bakteerin ominaisuuksien mukaan

4 Ihmiselle patogeeniset E. colit Kliininen jaottelu: EHEC aiheuttaa paksusuolentulehduksen ja veriripulin, joka voi johtaa hemolyyttis-ureemiseen syndroomaan (HUS)

5 Ihmiselle patogeeniset E. colit: Jaottelu bakteerin ominaisuuksien mukaan: Aiheuttaa tyypilliset vauriot suolen limakalvon soluissa > LEE geenit > AEEC (Attaching and effacing E. coli) Vaurioita verisuonten sisäpinnalla > stx geenit > STEC (Shigatoksinen E. coli) Shigatoksinen = Verotoksinen (STEC = VTEC; stx = vtx) AFFSA s Opinion 15th July 2008

6 Ihmiselle patogeeniset E. colit: Epätyypilliset EHEC:it, myös Saksan epidemiakanta Tyypilliset EHEC:it, myös O157

7 ilmoitettuja sairastapauksia ilmaantuvuus Ihmiselle patogeeniset E. colit: non-o157 tapauksia/vuosi O157 tapauksia/vuosi EHEC ilmaantuvuus/ milj. asukasta/vuosi kotimaisten EHEC tartuntojen ilmaantuvuus / milj. asukasta/ vuosi 0

8 Ihmiselle patogeeniset E. colit ja tutkimukset: Non O157 EHEC:it Tärkeimmät serotyypit: O26, O111, O103 ja O145 Vastaavat noin puolesta EHEC -sairastumisista Saksan epidemiatyyppi O104 Tutkimisen tärkeys Viimeistään Saksan epidemia opetti Tuoretuottajat heränneet tutkituttamaan koko ryhmää, ei pelkkää O157:aa Kasvisvälitteisiä EHEC epidemioita esiintynyt lisääntyvässä määrin

9 Reaaliaikainen PCR tutkimus: Näytteestä etsitään kolmea bakteerin taudinaiheuttamiskykyyn liittyvää geeniä: Toksiinigeenit vtx1, vtx2 ja intimiiniä koodaava eae (Saksan variantilla oli näistä ainoastaan vtx2) Positiivinen tulos johtaa bakteerikannan eristysyritykseen IMS käsittelyn kautta (tai ilman) Sopii laboratorioille, joilla valmius reaaliaikaiseen PCR:ään ja kokemusta EHEC analytiikasta (akkreditoitu viljelymenetelmä) Huomioitava matriisien PCR:ää estävä vaikutus > validointi lisätyillä näytteillä, reaktion sisäinen kontrollointi

10 VTEC tutkimukset nyt ja tulevaisuudessa: Tilanne tällä hetkellä: ISO 16654:2001 NMKL 164:2005 Useat kaupalliset PCR kitit elintarvikkeille Tähtäävät O157 eristämiseen tai toteamiseen Tavoitetila tulevaisuudessa: Käytössä prcen ISO/TS standardi EFSA julkaissut vuonna 2009: Elintarvikkeita koskevat osiot löytyvät sivulta 22 ja liitteistä Tähtää VTEC bakteerien toteamiseen ja eristämiseen (serotyypit: O157, O26, O111, O103 ja O145)

11 VTEC bakteerien toteaminen: Näyte 25g Vertailu O157:n toteamiseen: 225 ml PPV (homog. 5 min) ))mmin)16mgnovobi(homogenisointi,stomach er) Rikastus h 37 ±1 C mtsb liemi (selektiivisempi) lämpötila 41,5 C Rikastuslientä 1 ml, DNA:n eristys ja realtime PCR positiivinen PCR-tulos sekä vtx ja eae geenien suhteen negatiivinen PCRtulos; raportoidaan ei todettu VTEC IMS käsittely O157 spesifinen Serotyyppispesifinen Real-time PCR (5 eri PCRää) positiivinen PCR-tulos vtx, eae ja serotyyppispesif. sekvenssien suhteen Kohdebakteerin eristys pakastetusta rikasteliemestä (IMS avulla) ja/tai viljelemällä suoraan rikasteesta TBX, RMAC, CT-SMAC ja CHROMagar STEC, isolaatin varmistus vtx:illä, eae ja serotyyppispesif. PCR:llä. Tulosten raportointi serotyypeittäin Muut VTEC - bakteerit kuin O157 eivät tule esiin!