Immunosuppressiivisten. lääkeaineiden analytiikka MS:lla. Outi Itkonen sairaalakemisti, dos. Erikoiskemian prosessivastaava HUSLAB 10.2.

Transkriptio

1 Immunosuppressiivisten lääkeaineiden analytiikka MS:lla Outi Itkonen sairaalakemisti, dos. Erikoiskemian prosessivastaava HUSLAB

2 Elinluovutuksissa ja - siirroissa ennätysvuosi 2016 Elimiä saatiin 132 luovuttajalta 24 / miljoona asukasta Vuonna 2016 yht. 399 elinsiirtoa 262 munuaissiirtoa 61 maksansiirtoa 27 haimansiirtoa (ennätys) 30 sydänsiirtoa (joista 4 lasta) 18 keuhkonsiirtoa 1 kehonosasiirto (kasvot)

3 Suomessa tehdyt elisiirrot Yhteensä noin 4500 potilasta

4 Hyljintäreaktio Hyperakuutti hyljintä on minuuttien sisällä tapahtuva reaktio HLA estetään sopivuuskokein Akuutti hyljintä 3 vrk 3 kk T-soluvälitteinen reaktio voidaan hoitaa tehokkaasti hyljinnänestolääkityksellä

5 Hyljintäreaktio Krooninen hyljintä on pidemmällä aikavälillä ilmenevä reaktio mekanismit epäselviä hoitona uusi siirre 3-4%

6

7 Lähde: British Society for Immunology

8 Hyljinnänestolääkitys APC, MHC-II, B7 kalsineuriinin aktivaatio CyA, Tacro IL-2 IL-2R vasta-aine TOR Sirolim, Everoli cyclin/cdk T-solujen proliferaatio MMF, azathioprine

9 Siklosporiini A CyA, syklosporiini g/mol käyttö RA Crohnin tauti nefroottinen syndrooma immunosuppressio elinsiirroissa psoriasis, jne haittavaikutukset munuais- ja maksatoksinen, haimatulehdus, kouristukset, mahahaava, kuumeilu, pahoinvointi, verenpaine, jne tavoitetaso µg/l

10 Takrolimuusi fujimycin, FK g/mol käyttö mahahaava dermatologiassa immunosuppressio elinsiirroissa haittavaikutukset tulehdukset, sydänvaurio, verenpaine, maksa- ja munuaistoksisuus, syöpäalttius, DM, jne terapeuttinen alue 5 15 µg/l

11 Sirolimuusi rapamysiini g/mol käyttö immunosuppressio elinsiirroissa lymphangioleiomyomatoosi haittavaikutukset hyperkolesterolemia, vatsakivut, päänsärky, verenpaine, trombosytopenia, anemia, jne. vain heikosti munuaistoksinen

12 Everolimuusi sirolimuusin 40-O-(2-hydroksietyyli)-derivaatta MW Käyttö immunosuppressio elinsiirroissa munuaissyöpä muiden syöpien hoito Haittavaikutukset sydän- ja hengityselimet, septinen shokki, stomatiitti, tulehdukset, anemia.

13 Tutkimusmäärät Tutkimus kpl (2016) B -CyA (3606) B -Tacro (4360) B -Sirolim (8840) 441

14 Monitoroinnin haasteet kapea terapeuttinen alue vakavat haittavaikutukset annoksen ja lääkealtistuksen suhde eivät korreloi yksilökohtainen farmakokinetiikka potentiaaliset eri lääkeaineiden vuorovaikutukset Mitatut CyA pitoisuudet munuaisen siirtopotilaiden veressä (n=18) kun annos oli 102 ± 18 mg kahden viikon käytön jälkeen. Kawai et al., J Pharmacol Exp Therap 1998;287:

15 Monitoroinnin haasteet suuret näytevolyymit kliininen tarve nopealle vastausajalle haastava näytemateriaali toksiset vaikutukset hankala erottaa kliinisestä taudista esim. munuaistoksisuus vs. munuaisen hyljintä tai viruksen aiheuttama nefropatia menetelmän suorituskyvyn oltava johdonmukaisesti robusti (elinaikainen monitorointi) tulostasoerot eri menetelmien välillä mahd. ristireaktiot metaboliittien kanssa

16 Seger et al., Ther Drug Monit 2016;38l:

17 Lääkeaine Metodologia Valmistaja Mittausepävarm Bias (%) Spesifisyys (RR%) CyA LC-MS/MS useita kaupallisia 10% referenssi spesifinen in-house Emit 2000 Siemens Healthcare Diagnostics 20% -8 14% 7% CEDIA PLUS Thermo Scientific 16% -7 18% 20% ACMIA Siemens Healthcare Diagnostics 9% 13 28% 6% CMIA Abbott Laboratories 15% 17 23% <3% ADVIA Siemens Healthcare Diagnostics 9% % 15% ECLIA Roche Diagnostics <10% 9 % AM1 2%, muut n.d. Tacro LC-MS/MS useita kaupallisia 10% referenssi spesifinen in-house Emit 2000 Siemens Healthcare Diagnostics 17% 1 10% 10% ACMIA Siemens Healthcare Diagnostics 9% 7 % 99% CMIA Abbott Laboratories 10% 7 % <3% ECLIA Roche Diagnostics <15% 5 % n.d. QMS Thermo Scientific <8% 13 % <8% Seger et al., Ther Drug Monit 2016;38l:

18 EQA B -CyA B -Tacro ACI/LGC

19 EQA CyA: LCMS 160, CMIA 110, ECLIA 20, ACMIA 30, EMIT 25, CEDIA 40 Tacro: LCMS 180, CMIA 155, ECLIA 20, ACMIA 30, EMIT 20 Sirolimus: LCMS 160, CMIA 60 Everolimus: LCMS 130, QMS 40 UK-NEQAS PT scheme

20 LC-MS/MS menetelmä räkitys ja sekoitus 15 min automaattinen korkin poisto viivakoodin luku primääriputkesta (robotti) pipetointi: näyte, saostaja+istd (robotti) ravistelu 5 min ja sentrifugointi 10 min

21 LC-MS/MS menetelmä moniajo-lc-ms/ms propyylisyano-kromatografia, 600 µl/min vesimetanoligradientti (NH 4 COOH) 3.2 min MS/MS -detektio CyA m/z , ISTD Tacro m/z , ISTD Sirolim m/z , ISTD Everoli m/z , ISTD kaupalliset kalibraattorit ja QA-näytteet

22 Moniajo eli multiplexing

23

24

25 CyA Tacro Sirolim Everoli

26 Menetelmän ominaisuudet Ominaisuus CyA Tacro Sirolim Everoli Sarjan sisäinen CV <3.6% <4.5% <5.3% <5.6% Sarjojen välinen CV <3.6% <9.5% < 8.2% <7.4% Kokonaisvariaatio <4.7% <10.5% <9.2% <9.3% Lineaarisuus (µg/l) LOD (µg/l) LOQ (µg/l) Saanto 93-96% % 81-97% % Matriisiefekti 1-21% 16-26% 17-21% 16-26%

27 B -CyA 1000 B CyA Immunometria = -10,4 + 1,24 MS n = Immunometria (µg/l) MS (µg/l)

28 B -Tacro B Tacro Immunometria = 0,17 + 1,2 MS n = Immunometria (µg/l) MS (µg/l)

29 B -Sirolim B Sirolim Immunometria = 0, ,275 MS n = Immunometria (µg/l) MS (µg/l)

30 Yhteenveto menetelmä on spesifinen ja tarkka mittausalue kattaa hyvin terapeuttiset alueet

31 Yhteistyössä Anna Becker, tutkija, FM Esa Hämäläinen, oyl, dos. Ursula Turpeinen, kemisti, dos. Janne Backman, yl, prof. Seija Mäki-Mikkilä, lh Renja Vehviläinen, lh Outi Itkonen, kemisti, dos. HUSLAB Erikoiskemian henkilökunta, HUSLAB virologian henkilökunta, HUSLAB NVO Kiitos!