LC-MS JA MASSASPEKTROMETRIAN MONET KÄYTTÖTARKOITUKSET KLIINISESSÄ KEMIASSA

Transkriptio

1 LC-MS JA MASSASPEKTROMETRIAN MONET KÄYTTÖTARKOITUKSET KLIINISESSÄ KEMIASSA Outi Itkonen Sairaalakemisti, dos. HUSLAB O. Itkonen 1

2 LC-MS LC: nestekromatografia näytteen komponenttien erottaminen toisistaan kemiallisten ominaisuuksiensa perusteella kvantitatiivinen MS: massaspektrometria näytteen komponenttien erottaminen toisistaan massa/varaus suhteen (m/z) perusteella kvantitatiivinen spesifisyys ja herkkyys 2

3 KROMATOGRAFIA molekyylien erottaminen toisistaan partition perusteella, eli miten ne jakautuvat kahden eri faasin välillä jakautuminen on tasapainotila, dynaaminen prosessi liikkuva faasi on nestettä nestekromatografia (LC) 3

4 MASSASPEKTROMETRI mittaa ionien massa/varaus (m/z) suhdetta kvalitatiivinen ja kvantitatiivinen CoQ10 IS 4

5 IONILÄHDE ionisoi näytteen ESI, APCI, APPI, MALDI... 5

6 MASSA-ANALYSAATTORI kvadrupoli (Q), lentoaika-analysaattori (TOF), orbiloukku tandemmassaspektrometri (QQQ), hybridims (QTOF, ) Skimmer Q0 Q1 Q2 Q3 LIT Orifice LINAC TM Exit Lens Curtain Plate collision cell 6

7 DETEKTORI elektronimonistin fotodetektori 7

8 8

9 MRM, SRM Q1 q2 Q3 CEM 9

10 LC-MS SOVELLUTUKSIA KLIINISESSÄ KEMIASSA 10

11 MITÄ MITATAAN? steroidihormoneja lääkeaineita biogeenisiä amiineja vitamiineja peptidejä 11

12 MITEN MITATAAN? kaupallisia kittejä in-house menetelmiä 12

13 MITEN MAAILMALLA? 13

14 SIROLIMUUSI veren sekoitus ja annostelu + ISTD + saostus sentrifugointi supernatantin injisointi 12 s. välein C18 cartidge 96 kaivoa - 20 min vastaukset valmiina klo näytettä / pv 14

15 MONIAJO 4-plexing 15

16 4-PLEXING Printing Time: 10:11:09 PM Printing Date: Tuesday, May 18, 2010 XIC of +MRM (2 pairs): 698.0/354.0 Da ID: hepcidin from Sample 23 (31) o... Max. 2.7e4 cps. 3.8e4 3.5e4 3.0e e4 Printing Time: 10:11:09 PM Printing Date: Tuesday, May 18, e4 XIC of +MRM (2 pairs): 698.0/354.0 Da ID: hepcidin from Sample 23 (31) o... Max. 2.7e4 cps. 1.5e4 3.8e4 3.5e4 1.0e4 3.0e e4 Printing Time: 10:11:09 PM 0.0 Printing Date: Tuesday, May 18, e4XIC of +MRM (2 pairs): 698.0/354.0 Da ID: hepcidin Time, minfrom Sample 23 (31) o... Max. 2.7e4 cps. 3.8e4 1.5e4 3.5e4 *Installation 1.0e4 3.0e e e Time, Printing min 10:11:09 Time: PM 6.15 Printing Date: Tuesday, May 18, e4 1.0e4 3.5e e e4 *Installation 1.5e4XIC of +MRM (2 pairs): 698.0/354.0 Da ID: hepcidin from Sample 23 (31) o Time, min 6.15 Max. 2.7e4 cps. 10 min 2.0e4 *Installation 1.5e4 1.0e Time, min esim levyä TESTO:ja per päivä *Installation 16 4 x 10 min

17 25-OH VITAMIN D2 JA D3 VIIDELLE KUOPPALEVYLLE: 16-kanavainen automaatilla 100 µl näytettä d6-25(oh)d3 ja d3-25(oh)d2 96-kanavainen automaatilla 100 µl asetonia 450 µl etyyliasetaatti orgaanisen faasin siirto uutto 4x TAD lisäys, 300 µl ºC kuivatus N 2 (Turbovap) liuotus150 µl 50% MeOH-0.1% FA yhdistä eri TAD-johdokset = YKSI KUOPPALEVY 17

18 D-VITAMIN 20-PLEXING LOD <4.91 nmol/l for 25(OH)D 2 LOD <1.33 nmol/l for 25(OH)D 3 LOQ 10 nmol/l for 25(OH)D 2 LOQ 5 nmol/l for 25(OH)D levyä päivässä yksi levy = 480 näytettä.siis >3500 näytettä päivässä! Netzel BC et al., Clin Chem 2011;57:

19 MITEN MEILLÄ? 19

20 STEROIDIHORMONIT Näytteen esikäsittely Lisätään sisäistä standardia Neste-neste -uutto eetterillä tai dikloorimetaanilla Orgaanisen faasin haihdutus Jäännöksen liuotus LC-ajoliuokseen LC: käänteisfaasikromatografia ESI MRM 20

21 S -17HPROG 17HPROG ISTD Vakiosuora Potilasnäyte 21

22 STEROIDIHORMONIT du -Kors-V S -Estroni Sa -Korsol S -DHEA S -11-DOK S -Aldos S -17HProg du -Aldos S -17HPregnlo S Estdio du -THF/TFE S E1-sulfaatti S -Testo S -Adioni S -Pregnlo S -DHTesto S -Prog 22

23 BIOGEENISET AMIINIT Seeruminäyte ISTD kiintofaasiuutto LC-MS/MS S Metnor, Normet ja 3-MT S MOMA S Serotoniini S -5-HIAA 23

24 MUUTA B -syklosporiini A S hepsidiini S -D-25 S klotsapiini/norklotsapiini tuotekehityshankkeita moniajo 24

25 VARIANTTIEN TUNNISTUS S TATI wt, P55S, N34S näyte + ISTD immunocapture LC-MS mutation score = wttati/total TATI Mutation score 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 wt-tati N34S-TATI he N34S-TATI ho 25

26 - HERKKÄ, TARKKA, SPESIFINEN - SOPII MONILLE ANALYYTEILLE - PROSESSI PITKÄLLE AUTOMATISOITAVISSA - VAATII IN-HOUSE OSAAMISTA - MYÖS KAUPALLISIA SOVELLUTUKSIA 26

27 KIITOS! 27