AUTOVASTA-AINEET NIVELREUMASSA. Marja-Kaisa Koivula Sairaalakemisti, FT, dosentti

HTML
DOWNLOAD

Koko: px

Aloita esitys sivulta:

Download "AUTOVASTA-AINEET NIVELREUMASSA. Marja-Kaisa Koivula Sairaalakemisti, FT, dosentti"

Hannu-Pekka Nurmi
9 vuotta sitten
Katselukertoja:

1 AUTOVASTA-AINEET NIVELREUMASSA Marja-Kaisa Koivula Sairaalakemisti, FT, dosentti

2 Esityksen sisältö Johdanto Mitä uudelta niveltulehduspotilaalta tutkitaan? Käypähoito-suositus ja ACR/EULAR:n kriteerit Nivelreuman autovasta-aineet Autovasta-aineet Autovasta-aineita mittaavat testit Sitrullinisaatio Uudet biokemialliset merkkiaineet 2

3 Mitä uudelta niveltulehduspotilaalta tutkitaan? Lasko, CRP Virtsan perustutkimukset PVK+T, valkosolujen erittelylaskenta Nivelnesteanalyysi (solut, kiteet, bakteeriviljely, tarvittaessa gramvärjäys) Vasta-aineet Reumatekijä (RF) CCP-vasta-aineet Tumavasta-aineet Eri infektioihin liittyvät vasta-aineet 3

Nivelnesteanalyysi (solut, kiteet, bakteeriviljely, tarvittaessa

4 Nivelreuman kriteerit ACR/EULAR:n mukaan 4

5 Nivelreuman autovasta-aineet

6 Nivelreuman (RA) autovastaaineet Autovasta-aineet Autovasta-aineita mittaavat testit Reumatekijä (RF) CCP-vasta-aineet MCV-vasta-aineet Sitrullinisoituneisiin kollageeneihin sitoutuvat vastaaineet Mitä sitrullinisaatio on? 6

7 Autovasta-aineet Autoimmuunisairauksissa Autovasta-aineet ovat omia soluja tai niiden rakenteita tunnistavia vasta-aineita. Löytyy kaikissa vasta-aineluokissa. Diagnostiikassa hyödyllisistä autovasta-aineista suurin osa kuuluu IgG-luokkaan. Merkki autoimmuunitaudista tai käynnissä olevasta immunologisesta tapahtumasta. taudin aktiivisuus ja hoitovasteen seuranta Suhteutettava aina kliiniseen tilanteeseen 7

Diagnostiikassa hyödyllisistä autovasta-aineista suurin osa kuuluu IgG-luokkaan.

8 Reumatekijä (P -RF / S -RF) Yleensä IgM-luokan autovasta-aine IgG-molekyylin Fcosaa kohtaan Epäspesifinen: koholla monissa tulehdustaudeissa, maligniteeteissa ja terveillä vanhoilla ihmisillä Tuoreessa RA:ssa löytyy n. 2/3-osalla potilaista Positiivinen löydös niveltulehduspotilaalla viittaa RA:an, muttei ole diagnoosin edellytys. Esiintyy myös systeemisissä reumataudeissa ja vaskuliiteissä. Muodostaa immunokomplekseja. 8

9 Reumatekijän määrittäminen Määritysmenetelmä julkaistu 1940 (Waaler) RIA ELISA Automaattiset S/P RF määritysmenetelmät Turbidometria Nefelometria 9

10 Reumatekijä ennustaa myös terveiden nivelreumariskiä N=9700 ( v) Nielsen ym / / Marja-Kaisa Koivula

11 RF on koholla 5-10 %:lla terveillä Palosuo ym / / Puhujan nimi tähän

12 Sitrulliinipeptidivasta-aineet CCP-vasta-aineet MCV-vasta-aineet Sitrullinisoituneisiin kollageeneihin sitoutuvat vasta-aineet

13 CCP-vasta-aineet (S -CCPAb) cyclic citrullinated peptides Tunnistavat sitrulliinia sisältäviä proteiineja. Tuoreessa nivelreumassa %:lla potilaista; yleistyvät ajan myötä (70 %:lla 2 v sairastuneista) Löytyy jopa 40 %:lla seronegatiivisilta RA-potilailta Esiintyy harvoin muissa tiloissa kuin RA:ssa Sekä RF- että CCP-vasta-aineet ennakoivat erosiivista tautia. 13

Tuoreessa nivelreumassa 40 60 %:lla potilaista; yleistyvät ajan myötä (70 %:lla 2 v

14 CCP-antigeeni Testi perustuu elimistölle vieraisiin peptideihin (7 erilaista peptidiä). Varsinainen immunoreaktion aiheuttaja on elimistössä ja seerumissa olevat vasta-aineet ristireagoivat menetelmän antigeenin kanssa. 14

Varsinainen immunoreaktion aiheuttaja on elimistössä ja

15 CCP-vasta-ainemenetelmät 3 eri sukupolvea: CCP1, CCP2 ja CCP3 CCP1: sensitiivisyys % CCP2 ja CCP3: synteettisten peptidien seos; sensitiivisyys 80 % ja spesifisyys 96 % Useita kaupallisia automaattisia CCP2-menetelmiä Kaupallinen CCP3-ELISA CCP2- ja CCP3-menetelmillä ei merkittävää kliinistä eroa. CCP3-menetelmällä voidaan mitata IgG- ja IgA-vastaaineita. 15

kaupallisia automaattisia CCP2-menetelmiä Kaupallinen CCP3-ELISA CCP2- ja CCP3-menetelmillä

16 Kaupallisia S CCPAb menetelmiä Phadia 250 EliA CCP (Thermo Scientific), CCP2 Mittausalue: 0,4-340 U/ml Vastausrajat: < 7 U/ml, 7-10 U/ml ja > 10 U/ml Architect i1000sr/i2000sr Anti-CCP (Abbott), CCP2 Mittausalue: 0,5-500 U/ml Vastausrajat: < 5 U/ml ja > 5 U/ml (5-72 U/ml) Elecsys 2010 Anti-CCP (Roche), CCP2 Mittausalue: U/ml Vastausrajat: < 17 U/ml ja > 17 U/ml Immulite 2000, Anti-CCP IgG (Siemens), CCP2 Mittausalue: 1,5-200 U/ml Vastausrajat: < 5 U/ml ja > 5 U/ml ELISA (Inova Diagnostics), CCP3 Mittausalue: / / U/ml Vastausrajat: < 20 U/ml, U/ml ja 60 U/ml

Anti-CCP (Roche), CCP2 Mittausalue: 8-500 U/ml Vastausrajat: < 17 U/ml ja > 17 U/ml Immulite 2000, Anti-CCP IgG (Siemens), CCP2 Mittausalue:

17 S CCPAb menetelmien vertailua CCP1 vs. CCP2 Avouac ym Elrefaei ym. 2012

18 S CCPAb menetelmien vertailua ImmunoCAP 250 (Phadia), CCP2 Architect i2000sr (Abbott Laboratories), CCP2 ELISA (Inova Diagnostics), CCP3 Elrefaei ym

19 S CCPAb menetelmien vertailua Immulite 2000(XPi) platform (Siemens), CCP2 ImmunoScan ELISA ( Eurodiagnostica), CCP2 ImmunoCAP 250 (Thermofisher), CCP2 Modular system (Roche Diagnostics), CCP2 Noordegraaf ym

20 CCP-vasta-aineet ovat spesifisiä RA:lle Palosuo ym / / Puhujan nimi tähän

21 CCP-va:t ennustavat eroosivista tautia van der Helm-van Mil ym

22 Reumatekijän ja CCP-vastaaineiden esiintyminen Duodecim 2008;124:

23 MCV-vasta-aineet mutated citrullinated vimentin Kaupallinen (Orgentec Diagnostic): ELISA Spesifinen (~80 %) ja herkkä (~60 %) Mittaa kvantitatiivisesti IgG-luokan autovasta-aineita. Koholla jo ennen RA:n puhkeamista Koholla myös muilla niveltulehduspotilailla Esiintyy psori- ja spondyloartriteissa 23

24 MCV-vasta-aineiden sensitiivisyys Np = 917 Nc = Damjanovska ym. 2010

25 Sitrulliinisoituneisiin kollageeneihin sitoutuvat vasta-aineet 1. RA-potilailla on autovasta-aineita sitrullinisoituneisiin tyypin I ja II kollageenien C-telopeptideihin. 2. Löydetyille vasta-aineille on kehitetty erilaisia detekointimenetelmiä. 3. Löydetyt autovasta-aineet ovat spesifisiä C- telopeptidien sitrulliinille. 4. Anti-CCP ja anti-mcv sekä löydetyt vastaaineet mittaavat eri asiaa, mutta niillä on synenergiaa ja ne ennustavat yhdessä puhkeavaa RA:aa. 25 / / Marja-Kaisa Koivula

26 26

27 27

28 Mitä sitrullinisaatio on? Esityksen nimi ja esittäjä

29 Arginiini muuttuu sitrulliiniksi 29

30 Arginiinin muuttuminen sitrulliiniksi muuttaa proteiinin rakennetta ja varausta 30

31 Sitrulliini autoantigeenina In vivo sitrullinisoituvia proteiineja: filaggriini, fibriini, fibrinogeeni, α-enolaasi, hyaliini, keratiini, kollageeni, vimentiini, histonit, myeliini (MStaudissa) 30 %:lla terveiltä henkilöiltä löytyy nivelistä sitrullinisoituneita proteiineja. 31

32 Uudet biokemialliset merkkiaineet nivelreumassa

33 Uudet biokemialliset merkkiaineet 33

34 Sitrulliinisaatio vs. karbamylaatio Willemze ym

35 Sitrulliini vs. homositrulliini Sitrulliini Ureidoryhmä PAD-entsyymin avulla Proteiinin/peptidin emäksisestä arginiinista (R) Reaktio vaatii Ca 2+ Immunogeeninen Homositrulliini Ureidoryhmä Karbamyylireaktiossa Lysiinin (K) vapaasta aminoryhmästä Spontaani reaktio Immunogeeninen 35 / /

36 Tupakointi on nivelreuman itsenäinen vaaratekijä Teoria: Homositrulliinin muodostumista Turunen ym / /

37 Homositrulliini-löydöksiä Sitrulliinin detektiomenetelmät reagoivat myös homositrulliinin kanssa, koska rakenteet ovat homologisia. Proteiinit, jotka sisältävät homositrulliinia aiheuttavat kaneilla vasta-aineita, jotka sitoutuvat myös sitrulliiniin. Homositrulliinivasta-aineet ristireagoivat anti- CCP:n, anti-mcv:n ja sitrullinisoitujen kollageenien telopeptidien kanssa. 37 Turunen ym. 2010

38 Homositrulliini- löydöksiä (2) RA-potilaan nivelistä on löydetty sitrullinisoitunutta ja karbamyloitua proteiinia. RA-potilailta on löydetty kahdesta eri aineistosta vasta-aineita, jotka sitoutuvat homositrulliinia sisältäviin tyypin I ja II kollageenien C-telopeptideihin. Automaattinen CLIA-menetelmä (Häyrynen et al ja Turunen et al. 2015) 38

39 Miten homositrulliinia detektoidaan? Aminohappoanalyysi Proteiinien sekvenssointi HPLC (Holm ym. 2006) Western blot 39

40 Lähteet Nivelreuman Käypähoito-suositus (päivitetty ) Aletaha ym. Rheumatoid Arthritis Classification Criteria Arthritis Rheum 2010;62(9): Plant ym. Arthritis Rheum. 2000;43: Nielsen ym. BMJ Sep 6;345:e5244 Julkunen & Miettinen. Duodecim 2008;124: Avouac ym. Ann Rheum Dis. 2006;65(7): Elrefaei ym. J.Clin.Immunol. 2012;32:131-7 Noordegraaf ym. Clin Chem Lab Med Jan 12. [Epub ahead of print] Palosuo ym. Ann Rheum Dis. 2003;62:261-3 van der Helm-van Mil ym. Arthritis Res Ther. 2005;7:R949 R958 Damjanovska ym. Ann Rheum Dis. 2010;69:730-2 Koivula ym. Ann Rheum Dis. 2005;64: Koivula ym. Rheumatology (Oxford). 2008;47:656-9 Åman ym. Rheumatology (Oxford). 2000;39: Hakala ym. Scand J Rheumatol. 2008;37:90-3 Young-Min ym. Arthritis Rheum. 2007;56: Willemze ym. Neth J Med. 2012;70:392-9 Turunen ym. Arthritis Rheum. 2010;62: Shi ym. PNAS 2011;108: Holm ym. Anal Biochem. 2006;352:68-76 Häyrynen / ym. Clin / Chem Lab Med Nov 11. [Epub ahead of print]. Turunen ym. Arthritis Res Ther Jan 9;17(1):2. [Epub ahead of print]

41 41

Samankaltaiset tiedostot

Nivelreuman serologiset testit: mitä ne kertovat? LT, apulaisylilääkäri Anna-Maija Haapala TAYS Laboratoriokeskus

Nivelreuman serologiset testit: mitä ne kertovat? LT, apulaisylilääkäri Anna-Maija Haapala TAYS Laboratoriokeskus Sisältö 1. Nivelreuma: etiologia, esiintyvyys, diagnostiikka 2. Nivelreuman serologiset