Tuberkuloosin immunodiagnostiset testit Dosentti Tamara Tuuminen, kliinisen mikrobiologian erl HY, HUSLAB Labquality 02.11.2007
HUSLAB:n testivalikoima ELISPOT= Ly-TbSpot Mittaa IFNγ tuottavien solujen määrää puhdistetusta valkosolufraktiosta stimulaation jälkeenj QuantiFeron Gold in Tubes = B-IFNB IFNγ Mittaa totaali IFNγ kokoverestä stimulaation jälkeenj
ELISPOT
ELISPOT
Comparison of QF and Sanguin EIAs 1,4 1,2 1 OD 0,8 0,6 OD/QF OD/SG 0,4 0,2 0 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6 IFNg (IU/ml)
Meidän n politiikka Suomi on TB:n osalta matalan insidenssin maa Vääriä positiivisia IGRA -tuloksia ei saa olla Ly-TbSpot ja B-TbIFNg testeissä cut-off tasot on nostettu 3 tulkintakategoria: Ei-reaktiivinen Raja-arvoinen arvoinen Reaktiivinen
Menetelmien sisäinen inen laaduntarkkailu Ly-TbSpot Tarkka solujen laskenta Avdia solulaskimella 2 rinnakkaista/antigeeni PPD ylimää ääräisenä positiivisena kontrollina Sisäinen inen kontrolli: PPD:lle reagoivan henkilön n soluja jokaisen uuden ELISPOT lotin kanssa B-TbIFN γ Parannettu EIA menetelmä > jyrkempi kalibraatiokuvaaja Sisäinen inen kontrolli: keinotekoinen IFN γ - näyte jokaisen sarjan kanssa, taso lähelll hellä cut- off aluetta
Menetelmien ominaisuudet Menetelmät t eivät t erota latenttia TB -infektiota aktiivista taudista! Molemmat menetelmät t osoittavat vain onko elimistöss ssä M. tuberculosis- bakteerin spesifisille ESAT-6 6 ja CFP-10 proteiineille herkistyneitä lymfosyytteja
Mitä IRGA-testeist testeistä tänään tiedetää ään? QF ja ELISPOT ovat spesifisimpiä kuin ihotestit. Aktiivin TB:n ja LTBI:n diagnostiikassa QF herkkyys on sama kuin ihotestillä, mutta ELISPOT on herkempi. Lalvani A. Chest: 2007; 131: 1898-1906 1906
Mitä ei tiedetä? IGRA- menetelmien toimivuus lapsipotilailla Immunosupprimoiduilla Vanhuksilla Menetelmien oikeata toistettavuutta TST vs. IGRA- menetelmien prognostista arvoa (liian vähän n julkaistu pitkittäisi isiä tutkimuksia) Reaktiivisten efektorisolujen nousu ja poistumiskinetiikka Mitä tarkoittavat diskordanssitulokset TST+/IGRA- ja IRGA+/TST- Menzies et al, Annals of Internal Medicine, 2007; 146:340-354 354
LY-TbSpot validointitulokset (n = 69) Herkkyys 80.9% Spesifisyys 100% (?) Positiivinen ennustearvo 100% Negatiivinen ennustearvo 87.8% Pre-test probability 42% Accuracy (todenperäisyys) 92%
INFγ -release (IGRA) menetelmät lapsipotilailla, vertailu Mantoux n testiin 48 prospektiivisesti kerättyj ttyjä näytteitä Ikä: mediaani 9 v, max 17 v, min 0 v Demografia: Suomalaisia 17, ulkom.. syntyperää 31 poikia 28, tyttöjä 20
ELISPOT ja Mantoux n testi ELISPOT Herkkyys 81.8% Spesifisyys 100% PPV 100% NPV 94.9% Pretest probability 22.9% Accuracy 95.8% Mantoux n testi Herkkyys 100% Spesifisyys 90.6% PPV 76.9% NPV 100% Pretest probability 23.8% Accuracy 92.8%
ELISPOT and TST correlation ELISPOT (max) reac t cell/1 mil PBMC 600 500 400 300 200 100 ELISPOT and QuantiFeron correlation n =7 r = 0,92 0 0,0 5,0 10,0 15,0 20,0 25,0 QuantiFeron (IFN g) IU/ml ELISPOT(max) reactive cell/1 mil PBMC ELISPOT (max) reactive cell/1 mil PBMC 600 n = 42 500 r = 0,68 400 300 200 100 0 0 5 10 15 20 25 30 TST (max) mm 600 n = 42 500 r = 0,71 400 300 200 100 ELISPOT and TST correlation 0 0 5 10 15 20 25 30 TST(min) mm
HUSLAB:n suositukset IRGA -testien käytk ytöstä
Kontaktien etsintä,, laaja altistus tuberkuloosille, esim. lastentarha, Menetelmä B-TbIFNγ (halvempi, kuljetus helpompi) Tulkinta Mikäli ei kuulu riskiryhmiin => positiivinen tulos merkitsee äskettäistä kontaktia koulu Toimenpide LTBI hoito nykysuosituksien mukaan
Altistus tai TB:n viittaavat oireet, lapsi Menetelmä Paino < 40 kg B-TbIFNγ (pieni näytetilavuus) Paino > 40 kg Ly-TbSpot (herkempi) Tulkinta Positiivinen tulos merkitsee aina joko aktiivia TB tai LTBI Toimenpide Hoito nykysuosituksien mukaan
Epäselv selvä infektio tai TB -epäily, aikuinen, ei immunosupprimoitu Menetelmä Ly-TbSpot (herkempi) B-TbIFNγ (jos kuljetus > 4t; jos voimakas tausta Ly-TbSpot TbSpot- testissä) Tulkinta Negatiivinen tulos melko hyvin sulkee pois TB -altistuksen, positiivinen tulos ei välttämätt selitä oireita Toimenpide Kliininen arvio ja hoitopää äätös s ottaen huomioon kuvantamis- ja muut laboratoriotulokset
TB altistuksen selvitys ennen immunomodulatoristen hoitojen Menetelmä Tulkinta Positiivinen tulos viittaa suurella toden. aiempaan M. tuberculosis kontaktiin. Negatiivinen tulos ei poissulkeva aloittamista Toimenpide Ly-TbSpot (herkempi, epäselvi selviä tuloksia indeterminate on vähemmän n kuin B-TbIFNγ- testissä) Mikäli immunomodulatorisia hoitoja aloitetaan Ly- TbSpot positiivisilla henkilöill illä,, TB (re( re) aktivaation riski on otettava huomioon
Erikoistilanteet CNS TB epäily Ly-TbSpot (herkkyys voi olla puutteellinen, negatiivinen tulos ei poissulkeva) Tb pleuriitti - INFγ pleuraeksudaateista - Spesifisyys n. 95% (n=100) Askitesneste,, TB? Ly-TbSpot tai B-TBINFB TBINFγ jos kuljetus on hankalaa) Ly-TbSpot askites- nesteestä ei toistaiseksi kokeiltu
TB-Net Eurooppalainen verkosto Perustettu 2006 Pääprojekteja IGRA vs. TST immunosuprimoiduilla potilailla IGRA menetelmät t kontaktien etsinnäss ssä Värjäysnegatiivisten TB diagnostiikka IGRA menetelmien avulla TB:n pleuriitin diagnostiikka Uudet antigeenit aktiiviin TB:n ja LTBI:n erottelussa