Yersinioiden laboratoriodiagnostiikka: viljely ja fenotyypitys Suolistobakteerilaboratorio Bakteeri- ja tulehdustautien osasto Kansanterveyslaitos
Yersinioosit ja kotimaiset salmonelloosit Ilmoitetut tapaukset vv. 1995-2004 1000 800 600 400 200 0 Y. enterocolitica Y. pseudotuberculosis Kotimaiset salmonellatapaukset 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 Lähde: Tartuntataudit Suomessa 1995 2004, KTL B12/2005
Yersinia-suku: 11 lajia +1 Y. pestis historiallinen ruttobakteeri Y. pseudotuberculosis Y. enterocolitica Y. intermedia Y. frederiksenii Y. kristensenii Y. aldovae Y. enterocolitican Y. rohdei kaltaiset lajit Y. mollaretii BT 3A Y. bercovieri BT 3B Y. ruckeri kalapatogeeni, taksonomia epäselvä Y. alecksiciae sp. nov. LDC+ Y. kristensenii Lähde: Sprague ja Neubauer Int J Syst Evol Microbiol, 2005
Yersinialajien erottelu IND VP CIT MUC SUC RHA CEL MEL ESC SBS FUC enterocolitica v + - - + - + - v v v mollaretii [3A] - - + + + - + - v + - bercovieri [3B] - - - + + - + - v - + rohdei - - + - + - + v - +? intermedia + + + + + + + + + + v frederiksenii + + +h + + + + - + + + kristensenii +h - - v - - + - v + v aldovae - + +h v - + - - - - v +h = hidas (ad 7 vrk) v = vaihteleva Kasvatus +25 o C, 48 h Lähteet: Wauters G. Kirjassa The Procaryotes, 2002. http://link.springer-ny.com/link/service/books/10125/ Bockemühl & Wong, MCM 8th ed.
Yleisiä ominaisuuksia Psykrotrofeja elintarviketurvallisuus 0 o C 45 o C laboratoriodiagnostiikka 25 o C 28 o C 35 o C 37 o C kasvavat jääkaapissa kasvulämpötilan optimi kasvatus dg-tunnistustesteissä 22 o C 30 o C värekarvat + liikkuvuus + 35 o C 37 o C värekarvat - liikkuvuus - Ureaasi + (Y. pestis -, Y. ruckeri -) Lämpötilasäädeltyjä ominaisuuksia adaptaatio isäntään pyv-virulenssiplasmidi patogeeneilla + 37 o C: autoagglutinaatio, Ca 2+ -riippuvuus, CR-absorptio virf, yada Kromosomaalisia virulenssigeenejä ail, inv, ysta Y. enterocolitica = heterogeeninen ryhmä primaaripatogeeneja ja ympäristön apatogeeneja (opportunisteja)
Y. enterocolitica Testi Bioryhmät 1A 1B 2 3 Eskuliini + - - - - - Pyrat amidaasi + - - - - - Salisiini + - - - - - Lipaasi + + - - - - Indoli + + (+) - - - Ksyloosi + + + + - v Trehaloosi + + + + + - NO 3 NO 2 + + + + + - Dnaasi - - - - + + pyv (testaus 37 o C) - + + + + + 4 25 o C 24-48 h Lähteet: Wauters G. Kirjassa The Procaryotes, 2002. http://link.springer-ny.com/link/service/books/10125/ Bockemühl & Wong, MCM 8th ed. 5
Y. enterocolitican bioseroryhmät Bio- Sero- Ekologia Taudin ryhmä ryhmiä aiheuttajia 1A O:5, O:6,30, O:7,8, O:18, O:46, Ympäristö, elintarvikkeet, vesi, Ei a serotyypittymättömiä kantoja sika, ihmisten ja eläinten uloste 1B O:8, O:4, O:13a,13b, O:18, Sika (O:8, USA), ympäristö Kyllä O:20, O:21 2 O:9, O:5,27 Sika (O:9 Eurooppa, O:5,27 USA Kyllä ja Japani), kissa, koira 3 O:1,2,3, O:5,27 Sika (O:5,27), chinchilla (O:1,2,3), Kyllä kissa, koira 4 O:3 Sika (ympäri maailman) Kyllä 5 O:2,3 Jänis, vuohi, (Eurooppa) Kyllä a Voivat olla opportunistisia patogeeneja Lähde: Bottone 1999, Microbes and Infection
Diagnostiikan ongelmia 1 Lajien tunnistaminen - API 20E tunnistaa Y. enterocolitica-, kristensenii-, frederiksenii/intermedia-, pseudotuberculosis-, pestis-lajit tarkoitettu inkuboitavaksi 36 o C ± 2 o C Y. enterocolitica 99 % sakkaroosi + sakkaroosi-neg Y. enterocolitica 4/O:3 Y. kristensenii 2 %:lla suomalaisista sioista Fredrikson-Ahomaa ym. Int J Food Microbiol, 2002 inkubointi 25 o C - 30 o C, tulokset apuna biotyypityksessä
Yersinialajien erottelu IND VP CIT MUC SUC RHA CEL MEL ESC SBS FUC enterocolitica v + - - + - + - v v v mollaretii - - + + + - + - v + - bercovieri - - - + + - + - v - + rohdei - - + - + - + v - +? intermedia + + + + + + + + + + v frederiksenii + + +h + + + + - + + + kristensenii +h - - v - - + - v + v aldovae - + +h v - + - - - - v +h = hidas (ad 7 vrk) v = vaihteleva Kasvatus +25 o C, 48 h Lähteet: Wauters G. Kirjassa The Procaryotes, 2002. http://link.springer-ny.com/link/service/books/10125/ Bockemühl & Wong, MCM 8th ed.
Diagnostiikan ongelmia 2 Serotyypitys >70 seroryhmää, vain BT1B, BT2 - BT5 primaaripatogeeneja Denka Seiken (Japani): O:3, O:5, O:8, O:9 laatuongelmia O:5-kannat BT 1A Reagensia (Ruotsi): O:3, O:9 monoklonaalisia Sifin (Saksa): O:3, O:5, O:8, O:9, O:27 OK toistaiseksi Samoja Ag muilla lajeilla O:3 Y. mollaretii O:8 Y. bercovieri ja Y. enterocolitica BT1A O:9 Y. frederiksenii
KTL:n pilottitutkimuksia 300 peräkkäistä Y. enterocolitica kantaa lähetetty serotyypitykseen serotyypitys 170 (57 %) ei serotyypittynyt Hallanvuo & Siitonen, KTL-lehti 2002 biotyypitys 150 kantaa (88 %) BT 1A 20 kantaa patog. bioryhmiin 67 serotyypittymätöntä Y. enterocolitica-kantaa 56 kantaa (82 %) BT 1A 1 kanta BT 3 11 kantaa (16 %) NBT sekvensointi Hallanvuo ym. 2005, käsikirjoitus Y. mollaretii 5 Y. mollaretii 5 Y. bercovieri 1 Y. rohdei
Yersiniaviljely ulostenäytteestä CIN 22 / 22 - lämpötila 7 huone (1: 22 o C) 5 huone + 30 o C/35 o C 5 35 o C 4 30 o C 1? - aika 13 1 + 1 vrk 3 1 5 2 1? Rikastus 11 ei 9 aina, +4 o C:ssa 5vrk 7 vrk, (1: 2 vko) 2 F-YersVi Tunnistus API 20E sisältyi useimmilla (15? kasvatus 35 o C) 4 lisäksi TSIA-putki Seroryhmitys 6 antiseerumit 3, 5, 8, 9 6 3, 9 / 3, 8, 9 / 1-2, 3, 5, 8, 9
Yersiniatutkimushanke 2006 - Ulosteviljelyn yersinialöydös: kliinisesti merkitsevä vai harmiton ympäristöbakteeri? Hankkeessa: KTL, HY, EELA Rikastusviljelyn merkitys? Onko Y. enterocolitican kaltaisilla kannoilla kl. merkitystä? Yersinioosin lähteet (muut kuin sianliha)? Tartuntojen alkuperämaa? Jälkitaudit? Tarkoitus ottaa yhteyttä osaan laboratorioista Kanta 1 PV ja primaari CIN?? KTL/suba - bio-/serotyypitykset vastaus laboratoriolle - tiedot potilaasta KTL/infe - kyselylomake potilaalle - genotyypitykset
Vuonna 200(8?) Tulokset analysoitu Laboratorioille suositus F-BaktVi1-tutkimuksen yersiniaviljelystä (- suositus tyypityksistä)