Malarian käytännön diagnostiikka

Transkriptio

1 Malariadiagnostiikka ja ameebojen toteaminen - tunnistusseminaari Labquality-päivät Sakari Jokiranta, dos., erik. lääk. Bakteriologian ja immunologian osasto Haartman-instituutti, Helsingin yliopisto ja Yhtyneet Medix Laboratoriot Oy Malarian käytännön diagnostiikka 1. Onko malaria? 2. Mikä laji? vaikuttaa hoitoon: P. falciparum: resistenssiongelma, vakavampi tauti P. vivax ja P. ovale: maksamuotojen häätö lisälääkkeellä 3. Parasitemian aste? parasitemian aste ei suoraan korreloi taudin vaikeuteen falciparum-malaria voi olla tappava, vaikka parasitemia-aste olisi alle 0.1% perifeerisessä veressä J ki 1

2 Näytteenotto sormenpääverinäyte sively- ja paksupisaravalmiste voidaan tehdä myös EDTA-verestä mutta tulkintaa haittaavat muuntuneet verihiutaleet päivystystilanteessa näyte otetaan välittömästi muussa tapauksessa mielellään kuumepiikkien aikana J ki Näytteen käsittely Sivelyvalmiste vetolasina käytetään toista objektilasia tai peitinlasia lasi ilmakuivataan paksuus on sopiva, kun kirjan tekstin näkee lukea näytteen läpi J ki 2

3 Malaria-diagnostiikan porrastus Päivystävä laboratorio: Näytteenotto, 1-2 sivelynäytteen värjäys ja mikroskopointi välittömästi Mahdollisesti pikatesti lyhentämään mikroskopointia Sively- ja paksupisaralasien lähetys arkipäivänä referenssilaboratorioon myös negatiivisista näytteistä Referenssilaboratorio: Sively- ja paksupisaravärjäykset ja mikroskopointi arkipäivisin Positiivisten tulosten soitto lähettävään yksikköön J ki Sivelyvalmisteen mikroskopointi Sivelyvalmiste mikroskopoidaan 100x (tai 60x) - objektiivilla Vähintään näkökenttää on skopoitava, ennen kuin näytettä voi sanoa negatiiviseksi Jos pikatesti on käytössä, voi mikroskopointia oleellisesti lyhentää (esim. 5 minuuttiin) Yksikin plasmodi on patologinen löydös, josta on heti ilmoitettava hoitavalle lääkärille Yksi negatiivinen näyte ei poissulje malariaa! J ki 3

4 Sivelyvalmisteen mikroskopointi Huomiota kiinnitetään punasolujen sisäisiin rakenteisiin: rengasrakenteet mitkä tahansa kaksoisvärjäytyneet (sini-punaiset) punasolun sisäiset rakenteet infektoituneiden punasolujen koko voi olla epätavallinen infektoituneiden punasolujen muoto voi olla epätavallinen Punasolujen ulkopuolisista rakenteista ei tarvitse välittää Parasitemia-astetta arviotaessa lasketaan infektoituneiden solujen osuus kaikista punasoluista J ki P. falciparum P. vivax P. ovale (vas) P. malariae (oik) Kuvat: 4

5 Plasmodium falciparum Pieni rengas Renkaita usein >1 Normaalikokoinen punasolu Nähdään harvoin periferisessä veressä Sirppimäiset gametosyytit Kuvan lähde: Coatney GR, Collins WE, Warren M, Contacos PG. The Primate Malarias. U.S. Department of Health, Education and Welfare, Bethesda, 1971 Kommentit: Plasmodium vivax Suurentunut solu Rengas suurehko Schuffnerin pilkut Ameebamaisia trofotsoiitteja Suuria pyöreitä gametosyyttejä Kuvan lähde: Coatney GR, Collins WE, Warren M, Contacos PG. The Primate Malarias. U.S. Department of Health, Education and Welfare, Bethesda, 1971 Kommentit: 5

6 Suoliston parasiitit Alkueläimet: Patogeenit: Giardia lamblia, Entamoeba histolytica, Cryptosporidium parvum Harvinaiset: Cyclospora cayetanensis, Isospora belli, Dientamoeba fragilis, mikrosporidiat, Non-patogeenit Madot Sukkulamadot Imumadot Heisimadot Ulosteen parasiittinäytteet Ulostenäyte Formaliiniuloste Tuoreuloste PVA-uloste F-ParaO Jodivärjäys Alkueläinten kystat Madonmunat F-CrypVr Ziehl-Neelsen värj. Cryptosporidium Cyclosp., Isosp. F-GiCrAg Antigeeninosoitus Giardia ja Cryptosporidium F-EhisdisAg Antigeeninosoitus Entamoeba histolytica ja E. dispar F-StronVi Viljely Strongyloides ster. ja koukkumadot F-AmebVr Trikromivärjäys Alkueläinten trof. ja kystat 6

7 Formaliininäyte Edut: Huonot puolet Voidaan tutkia madonmunat ja Varsin epäherkkä ilman konsentrointia alkueläinten kystat helposti ja halvalla Konsentroitunakin herkkyys vain kohtalainen Voidaan tehdä F-CrypVr jatkotutkimuksena E. histolyticaa ja E. disparia ei voida erotella Voidaan tehdä joitakin Agosoituksia Alkueläinten trofotsoiitteja ei voida havaita (Ameebat Säilyy hyvin ja ripulinäytteessä) vaarattomasti Luullaan yleisesti kattavan kaikki suoliston alueen parasiitit Jodivärjäyksen mikroskopointi Madonmuna-diagnostiikan haasteena on havaita yksittäinen muna, löydön tunnistus on oheismateriaalin kanssa yleensä helppoa Alkueläinten kystiin perustuvan diagnostiikan haasteena ei niinkään ole löytää yksittäistä kystaa vaan pystyä tunnistamaan lajit ja tunnistamaan, onko kyseessä alkueläin vai hiiva/roska Näytettä tulee mikroskopoida sekä 100- että 400-kertaisella suurennoksella ja riittävän kattavasti/kauan 7

8 Mikroskopia-löydöksiä Giardia lamblia Entamoeba coli Blastocystis hominis Diphyllobothrium latum Ascaris lumbricoides Strongyloides stercoralis Trichuris trichiura Malarian tunnistusseminaari 8

9 Mikä rakenne? Malaria Ei osaa sanoa Ei malaria Mikä rakenne? Plasmodium Trombosyytti Jokin muu 9

10 Mikä rakenne? Plasmodium falciparum Plasmodium vivax Ei parasiitti Suolistoparasiittien tunnistusseminaari 10

11 Mikä rakenne? Alkueläin Madonmuna Ei parasiitti Mikä rakenne? Trichuris trichiura Taenia sp. Ascaris lumbricoides 11

12 Mikä rakenne? Strongyloides stercoralis Enterobius vermicularis Ascaris lumbricoides Mikä rakenne? Entamoeba-laji Blastocystis Roska 12

13 Mikä rakenne? Entamoeba histolytica Entamoeba coli Entamoeba hartmanni Mikä rakenne? Giardia lamblia Entamoeba histolytica Muu parasiitti 13