Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 2/2015

Transkriptio

1 Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 2/2015 Kuvat ja teksti: Markku Koskela Mikrobiologian ylilääkäri Nordlab Oulu Huom! Käyttäkää yläpalkin suurennusmahdollisuutta % pesäkekasvun yms. yksityiskohtia tarkastellessanne!!!!

2 Näyte 11/2015 Sivelynäyte silmän sidekalvolta. Sidekalvotulehdus 18-vuotiaalla potilaalla. Löydös: Streptococcus pneumoniae, merkittävä patogeeni Tehtävät: Bakteerin eristäminen, tunnistaminen ja mikrobilääkeherkkyysmääritys

3 Näyte 11/2015 Silmän sidekalvonäyte Kasvu lampaanverimaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1 vrk. -> Alfa-hemolyyttinen streptokokki.

4 Näyte 11/2015 Silmän sidekalvonäyte Kasvu suklaamaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1 vrk. -> Alfa-hemolyyttinen streptokokki.

5 Näyte 11/2015 (9/2012). Pneumokokki Gram+diplokokki Optokiinille herkkä (ts. kasvun estorengas) alfa-hemolyyttinen streptokokki eli pneumokokki. ( 1 vrk, 35 C).

6 Näyte 12/2015 Näyte 93-vuotiaan naisen ärtyneestä painehaavasta. Oletettu löydös: Klebsiella oxytoca, Leclercia adecarboxylata ja Pseudomonas luteola (entinen Chryseomonas luteola ), mahdollisia patogeeneja / alueen normaalia flooraa. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tulosten tulkinta

7 Näyte 12/2015 Näyte 93-vuotiaan naisen ärtyneestä painehaavasta. Näyte Lähetetiedoissa ei ollut mainintaa, miten näyte oli otettu? Oliko näytteenottoalue ensin puhdistettu huolellisesti keittosuolaan kastelluilla taitoksilla ja näyte otettu vasta sitten puhdistetun haavan pohjasta joko kudosbiopsiana tai vanutikulla, jolloin löydöksenä olisi haavan infektoimia bakteereita? Vai oliko näyte otettu puhdistamattomasta haavasta, jolloin löydöksenä on myös alueen kolonisoimaa bakteeriflooraa?

8 Näyte12/2015 Näyte painehaavasta Kasvu lampaanverimaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1 vrk. 1. Iso, vaalea, kiiltävä, kupolimainen pesäke. Oksidaasi Keskikokoinen, harmaa, kupolimainen pesäke. Oksidaasi Pieni, harmaa, kiiltävä pesäke. Oksidaasi -.

9 Näyte12/2015 Näyte painehaavasta Kasvu lampaanverimaljalla, 5% CO 2, 35 C, 2 vrk. 1. Iso, vaalea, kiiltävä, kupolimainen pesäke. 2. Keskikokoinen, harmaa, kupolimainen pesäke. 3. Pieni, harmaa, kiiltävä pesäke.

10 Näyte12/2015 Näyte painehaavasta Kasvu suklaamaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1 vrk. 1. Iso, vaalea, kiiltävä, kupolimainen pesäke. 2. Keskikokoinen, harmaa, kupolimainen pesäke. 3. Pieni, harmaa pesäke.

11 Näyte12/2015 Näyte painehaavasta Kasvu suklaamaljalla, 5% CO 2, 35 C, 2 vrk. 1. Iso, vaalea, kiiltävä, kupolimainen pesäke. 2. Keskikokoinen, harmaa, kupolimainen pesäke. 3. Pieni, harmaa pesäke.

12 Näyte12/2015 Näyte painehaavasta. 1 vrk 2 vrk 1 2 Kasvu Cled-maljalla, 35 C, 1 ja 2 vrk. 1. Iso, limainen, laktoosipositiivinen (keltainen) pesäke. 2. Keskikokoinen, matala, laktoosipositiivinen (keltainen) pesäke. 3. Muuta?

13 Näyte12/2015 Näyte painehaavasta. 2 1 Kasvu BBL Chromagar Orientation-maljalla, 35 C, 2 vrk. 1. Iso tumman sinivihreä pesäke. 2. Pienempi ja sinisempi pesäke. 3. Muuta??

14 Näyte 12/2015 (15/2012) 1. Klebsiella oxytoca Verimaljakasvu, 1 vrk, 35 C. Iso, limainen sauvapesäke Lyhyt, paksu, gramnegatiivinen sauva

15 Näyte 12/2015 (15/2012) 1. Klebsiella oxytoca Kasvu CLED-maljalla, 1 vrk. Iso, limainen, laktoosipositiivinen (keltainen) sauvapesäke Kasvu Chromagar Orientationmaljalla, 1 vrk. Iso, limainen, sinivihreä sauvapesäke

16 Näyte 12/ Klebsiella oxytoca Klebsiella oxytoca n sokerisarja: 1) Glukoosi / kaasu: +/+ 2) Indoli + (punainen) 3) liikkumaton (samea vain pistoviljelykohdassa) 4) sitraatti + (sininen) 5) urea + (punainen) 6) TSI: pinta keltainen (+) / pohja keltainen (+)/ pohjassa kaasua (+). H 2 S-reaktio negatiivinen (ei mustaa putken keskellä). Fermentatiivinen sauva ->Api20E

17 Näyte 12/15 (15/2012). 1. Klebsiella oxytoca 1. API20E Klebsiella oxytoca (97%) , - + -, + - +, + - +, + + +, + + +, Oksid 2. Vitek 2 GN Klebsiella oxytoca 90%

18 Näyte 12/ Leclercia adecarboxylata Verimaljakasvu, 1 vrk, 35 C. Limainen sauvapesäke Lyhyt, paksu gramnegatiivinen sauva

19 Näyte 12/ Leclercia adecarboxylata Kasvu CLED-maljalla, 1 vrk. Laktoosipositiivinen (keltainen) sauvapesäke. (Kuin E coli!) Kasvu Chromagar Orientationmaljalla, 1 vrk. Limainen, sinivihreä sauvapesäke

20 Näyte 12/ Leclercia adecarboxylata Leclercia adecarboxylata n sokerisarja: 1) Glukoosi / kaasu: +/+ 2) Indoli + (punainen) 3) liikkuva (kokoputki samea) 4) sitraatti - (vihreä) 5) urea - (väritön) 6) TSI: pinta keltainen (+) / pohja keltainen (+)/ pohjassa kaasua (+). H 2 S-reaktio negatiivinen (ei mustaa putken keskellä). Eli E colin sokerisarja!! Fermentatiivinen sauva ->Api20E

21 Näyte 12/ Leclercia adecarboxylata 1. API20E Leclercia adecarboxylata (82%). oksidaaasi + - -, - - -,- - +, - - +, + - -, + + +, Vitek 2 GN Leclercia adecarboxylata 99%

22 Näyte 12/ Pseudomonas luteola Verimaljakasvu, 1 vrk, 35 C. Pieni sauvapesäke Pitkä gramnegatiivinen sauva

23 Näyte 12/ Pseudomonas luteola Kasvu CLED-maljalla, 1 vrk. Pieni, laktoosinegatiivinen (vihreä) sauvapesäke Kasvu Chromagar Orientationmaljalla, 1 vrk. Limainen, vihreä sauvapesäke

24 Näyte 12/ Pseudomonas luteola Chryseomonas luteola n sokerisarja: 1) Glukoosi / kaasu: +/- (pikkuputki vihreä!!) 2) Indoli - (väritön) 3) liikkuva (kokoputki samea) 4) sitraatti + (sininen) 5) urea - (keltainen) 6) TSI: pinta punainen (-) / pohja punainen (- )/ pohjassa ei kaasua (-). H 2 S-reaktio negatiivinen (ei mustaa putken keskellä). Akinetobakteerin sokerisarja, paitsi akinetobakteeri ei ole liikkuva!! Nonfermentatiivinen sauva ->Api20NE

25 Näyte 12/ Pseudomonas luteola 1. API20NE Pseudomonas luteola (99,9%) , + - +, - + +, + + +, - + +, + - +, oksidaasi Huom! Oksidaasinegatiivinen nonfermentatiivinen sauva!!! 2. Vitek 2 GN Pseudomonas luteola 98%

26 Näyte 12/2015 Puhdasviljelmät Cled-maljalla, 1 vrk Klebsiella oxytoca 2. Leclercia adecarboxylata 1. Chryseomonas luteola

27 Näyte 13/2015 Märkää vatsaontelosta. Umpilisäke puhjennut 12-vuotiaalla pojalla. Löydökset: Bacteroides stercoris ja Bilophila wadsworthia, molemmat merkittäviä patogeeneja. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tuloksen tulkinta.

28 Näyte 13/2015 Märkää vatsaontelosta. 2 1 Näytteen gramvärjäyslöydökset: 1. Pieniä ja ohuita sekä 2 isoja ja paksuja gramnegatiivisia sauvoja

29 Näyte 13/2015. Märkää vatsaontelosta. Aerobi primaariviljely Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalla, 5% CO 2, 35 C, 1-7 vrk. Ei kasvua

30 Näyte 13/2015 Märkää vatsaontelosta. Anaerobinen primaariviljely FAA:lla 2 vrk Pieniä harmmaita pesäkkeitä, jotka ovat herkkiä metronidatsolille: Anaerobeja -> Gramvärjäys ja aerotoleranssitesti

31 Näyte 13/2015 Märkää vatsaontelosta. Anaerobinen primaariviljely BBE-maljalla, 2 vrk, 35 C BBE:llä kasvaa kaksi erilaista pesäkettä 1. Isompi musta pesäke. 2. Pienempi, väritön pesäke

32 Näyte 13/2015 Märkää vatsaontelosta. Anaerobinen primaariviljely KVLB-maljalla, 2 vrk, 35 C KVLB:llä kasvaa kaksi erilaista pesäkettä 1. Isompi ruskea pesäke. 2. Pienempi, väritön pesäke

33 Näyte 13/2015 Aerotoleranssitestit FAA-maljalta Verimalja: aerobi; suklaamalja: 5% CO 2, FAA: anaerobi 1. Vasen puoli: Gramnegatiivinen sauva, joka kasvaa vain anaerobisesti (FAAmalja). Se on ehdottomasti anaerobi. (Bacteroides stercoris) 2. Oikea puoli: Gramnegatiivinen sauva, joka kasvaa vain anaerobisesti (FAAmalja). Se on ehdottomasti anaerobi. (Bilophila wadsworthia)

34 Näyte 13/ Bacteroides stercoris FAA BBE Anaerobinen kasvu anaerobiverimaljalla (FAA) (vasemmalla) ja BBE-maljalla (oikealla), 2-3 vrk, 35 C. B stercoris on 1) sappitolerantti ts se kasvaa BBE-maljalla, ja 2) hydrolysoi eskuliinia eli kasvaa mustina pesäkkeinä.

35 Näyte 13/ Bacteroides stercoris Katalaasi neg (Ei kuohu) Pikaindoli posit (sininen) Lyhyt, ohut, heikosti värjääntyvä gramnegatiivinen sauva

36 Näyte 13/ Bacteroides stercoris Anaerobien identifikaatiotesti (A I): Kanamysiini R, Vankomysiini S (!?) ja kolistiini R. Metronidatsoli S. Huom! Gramnegatiivinen anaerobi mutta vankomysiini S! AI-testi voi johtaa harhaan! Lajitunnistus paremmilla tunnistustesteillä!

37 Näyte 13/ Bacteroides stercoris 1. RapID ANA II Bacteroides stercoris (88 %) - + -, + + +, - + +, + + -, - - -, - - +

38 Näyte 13/ Bilophila wadsworthia FAA BBE Anaerobinen kasvu anaerobiverimaljalla (FAA) ja BBE-maljalla 2-3 vrk, 35 C. B wadsworthia on 1) sappitolerantti ts se kasvaa BBE-maljalla, mutta 2) se ei hydrolysoi eskuliinia ts se kasvaa värittöminä pesäkkeinä.

39 Näyte 13/ Bilophila wadsworthia Katalaasi pos (kuohuu voimakkaasti!) Pikaindoli negat (väritön) Paksu, heikosti värjääntyvä gramnegatiivinen sauva

40 Näyte 13/ Bilophila wadsworthia Anaerobien identifikaatiotesti (A I): Kanamysiini S, Vankomysiini R ja Kolistiini S sekä metronidatsoli S sopien gramnegatiiviseksi anaerobiksi

41 Näyte 13/ Bilophila wadsworthia 1. RapID ANA II Bilophila wadsworthia (60 %) + - -, - - -, - - -, - - -, - - +, - - -

42 Näyte 14/2015 UÄ-ohjattu märkänäyte neutropeenisen potilaan maksa-absessista. Löydökset: Clostridium tertium, merkittävä patogeeni. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tuloksen tulkinta.

43 Näyte 14/2015 Näyte maksa-absessista. Näytteen gramvärjäys: Grampositiivisia itiöllisiä sauvoja. Klostrideja???

44 Näyte 14/2015 Märkänäyte maksa-absessista. 1 vrk 2 vrk Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1 ja 2 vrk. -> Kellertävän harmaita, kuperia pesäkkeitä.

45 Näyte 14/2015 Märkänäyte maksa-absessista Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA) 2 vrk, +35 C. Kasvaa vain yhtä bakteeria, joka on herkkä metronidatsolille ->anaerobi!! Rösöreunaisia sauvapesäkkeitä.

46 Näyte 14/2015 Märkänäyte maksa-absessista Anaerobiviljely EYA-maljalle, +35 C, 2-5 vrk. -> Matalia, rösöreunaisia, lesitinaasi negatiivisia ja lipaasi negatiivisia pesäkkeitä.

47 Näyte 14/2015. Aerotolenranssitesti (2 vrk, +35 C) 1. Verimalja: aerobikasvu 2. Suklaamalja: mikroaerofiilinen (5% CO 2 ) kasvu 3. Anaerobiverimalja (FAA): Anaerobikasvu Aerotoleranssitestin tulokset (2 vrk): 1. Verimaljalla kasvaa hyvin, mutta pieninä pesäkkeinä 2. Suklaamaljalla kasvaa hyvin, mutta pieninä pesäkkeinä 1. Anaerobiverimaljalla (FAA) kasvaa paremmin ja isompina pesäkkeinä kuin aerobimaljoilla. Herkkä metronidatsolille.

48 Näyte 14/2015. Aerotoleranssikasvustojen gramvärjäyslöydökset Aerobikasvun pesäkevärjäys verimaljalta: Grampositiivinen itiötön sauva. 2. Anaerobikasvun pesäkevärjäys anaerobiverimaljalta (FAA): Grampositiivinen itiöllinen sauva. Terminaalisia itiöitä. Huom! Suuri osa on värjääntynyt gramnegatiiviseksi! Tyypilliset Clostridium tertium-pesäkkeiden gramvärjäyslöydökset Suurenna kuvaa nähdäksesi yksityiskohdat!

49 Näyte 14/2015 (7/2012) Clostridium tertium Katalaasi: Negat (ei kuohu) Pikaindoli: Negat (väritön) Anaerobiverimalja (FAA) 2-4 vrk: Keskikokoinen, matala, epätarkkarajainen, kellertävän valkoinen, sauvapesäke EYA-maljalla: Lesitinaasi negat. Lipaasi negat.

50 Näyte 14/2015 (7/2012) Clostridium tertium Anaerobien identifikaatiotesti (AI) Kanamysiini (1000 µg): Vankomysiini (5 µg): Kolistiini (10 µg): S S R Lisäksi Metronidatsoli (Ei näy kuvassa) S

51 Näyte 14/2015 (7/2012) Clostridium tertium 1. RapID ANA II: Clostridium tertium (100 %) - + +, + + +, + - +, - - -, - - +, - - -

52 Aurinkoista kesää!