Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 2/2012

Transkriptio

1 Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 2/2012 Kuvat ja teksti: Markku Koskela Mikrobiologian ylilääkäri OYS, Oulu Huom! Käyttäkää yläpalkin suurennusmahdollisuutta % pesäkekasvun yms. yksityiskohtia tarkastellessanne!!!!

2 Näyte 5/2012 Märkää poskiontelosta. Aikuisen sinuiitti Löydös: Haemophilus influenzae, patogeeni Tehtävät: Bakteerin eristäminen, tunnistaminen ja mikrobilääkeherkkyysmääritys

3 Näyte 5/2012 Märkää poskiontelosta. Aikuisen sinuiitti Viljely lampaanverimaljalle ja suklaamaljalle 5% CO 2, +35 C, 1 vrk -> Kasvua vain suklaamaljalla: keskikokoisia, matalia, harmaita, kiiltäviä, pesäkkeitä.

4 Näyte 5/2012 Haemophilus influenzae Satelliittikoe verimaljalla 5% CO 2, +35 C, 1 vrk. Kasvu suklaamaljalla 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk: Matalia, harmaita pesäkkeitä. Hemofiilus kasvaa verimaljalla S aureuksen satelliittina Monimuotoinen gramnegatiivinen sauva

5 Näyte 5/2012 Haemophilus influenzae Kasvufaktorikoe herkkyysmaljalla, 5% CO 2, +35 C, 1 vrk XV-faktorikiekko on testin sisäisenä kontrollina: sen ympärillä pitää olla kasvua. H influenzae vaatii sekä X- että V-faktorin kasvaakseen eli se kasvaa vain X- ja V-faktorikiekkojen välissä alueella, johon niistä on diffuntoitunut sekä X- että V-faktoria.

6 Näyte 6/2012 Sivelynäyte nivustaipeen ärhäkän, märkimään alkaneen ihottuma-alueen reunasta Oletettu löydös: Staphylococcus aureus, Escherichia coli ja Candida albicans, patogeeneja Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tulosten tulkinta

7 Näyte 6/2012 Märkää ihottuma-alueen reunasta Valokuvausheijastuma! Viljely lampaanverimaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. -> 1. Matalia, kiiltäviä, kellertäviä ja beta-hemolysoivia pesäkkeitä. -> 2. Isoja, kuperia, limaisia pesäkkeitä -> Muuta?

8 Näyte 6/2012 Märkää ihottuma-alueen reunasta Viljely suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. -> 1. Keskikokoisia, matalia, kellertäviä, kiiltäviä, pesäkkeitä. -> 2. Isoja, kuperia, limaisia pesäkkeitä -> Muita?

9 Näyte 6/2012 Märkää ihottuma-alueen reunasta Viljely ei-selektiiviselle CLED-maljalle, aerobi inkub., +35 C, 2 vrk. -> 1. Keskikokoisia, kellertäviä kokkimaisia pesäkkeitä. -> 2. Isoja, laktoosipositiivisia sauvamaisia pesäkkeitä -> 3. Hitaasti esille tulleita, pieniä, valkoisia pesäkkeitä ->kasvuston natiivimikroskopia: hiivaa ja bakteereita ->kasvuston gramvärjäys:gram+kokkia, gram-sauvaa ja hiivaa

10 Näyte 6/2012 Märkää ihottuma-alueen reunasta 1 vrk 2 vrk Viljely selektiiviselle streptokokkiverimaljalle,5% CO 2,+35 C, 1->2 vrk. -> Valkoisia, kuivia, kuperia pesäkkeitä ->pesäkkeen natiivimikroskopia: hiivapesäkkeitä. Huom! Maljan sisältämä oksoliinihappo estää stafylokokkien ja aerobisten sauvabakteerien kasvun.

11 Näyte 6/2012 Märkää ihottuma-alueen reunasta 1 vrk 2 vrk Viljely selektiiviselle, kromogeeniselle hiivamaljalle, aerobi inkubaatio, 1->2 vrk, +35 C: Aluksi värittömiä (16-20 tuntia) -> vihreitä Candida albicans-pesäkkeitä.

12 Näyte 6/ Staphylococcus aureus S.aureus Koag neg stafylokokki + - Stafylokokkien latexagglutinaatiotesti Matalia, kiiltäviä, kellertäviä ja (tämä kanta: erittäin voimakkaasti) betahemolysoivia S aureus-pesäkkeitä verimaljalla, 5% CO 2, +35 C, 1 vrk. Gram+ ryhmäkokki

13 Näyte 6/ Escherichia coli Verimaljakasvu 1 vrk Cled-maljakasvu 1 vrk: laktoosipositiivinen sauva Gram-värjäys: Lyhyt grampositiivinen sauva

14 Näyte 6/ E.coli E colin sokerisarja: 1) Glukoosi +/+(keltainen ja kaasua) 2) Indoli+ (eli punainen) 3) liikkuva (putki kokonaan samea) 4) sitraatti - (vihreä) 5) urea - (keltainen) 6) TSI: pinta keltainen, pohja keltainen ja kaasua, putkessa ei ole mustaa (H 2 S -).

15 Näyte 6/ E.coli Oksidaasi neg + - +, - - -, - - +, - - +, + - +, + + +, API20E E coli 99,9%

16 Näyte 6/ Candida albicans Hiivakasvu verimaljalla aerobisesti, 1 vrk, +35 C. Kuivahkoja, valkoisia, kuperia pesäkkeitä, (joihin muodostuu ns valejalkoja 2-3 vrk:ssa) Hiivan tunnistaminen Chromagar Candida (biomerieux, Ranska) maljalta (aerobi viljely,2vrk, +35 C): Vihreitä C.albicans pesäkkeitä

17 Näyte 6/2012. Candida albicans Ituputkitesti (seerumitesti), 2 t, +30 C -> natiivimikroskopointi: C.albicans posit. vrt. Candida glabrata negat. Pesäkkeen Gram-värjäys: grampositiivisia hiivasoluja

18 Yhteenveto: Pinnallinen ihoalueen sekainfektio Kyseessä saattaa olla ihorikkeymä, josta on alkanut bakteeri-infektio ja jossa hiiva on lisäpatogeenina tai kyseessä saattaa olla primaaristi ihon hiivainfektio ja siihen liittyvä sekundaarinen bakteeri-infektio. Joka tapauksessa, sekä bakteerit että hiiva on eristettävä ja tunnistettava näytteestä.

19 Näyte 7/2012 Kudosnäyte narkomaanin vasemmasta käsivarresta. Myonekroosiepäily. Löydös: Clostridium tertium, patogeeni. Tehtävät: Bakteerin eristäminen ja tunnistaminen.

20 Näyte 7/2012 Kudosnäyte narkomaanin vasemmasta käsivarresta. Myonekroosiepäily. Näytteen gramvärjäys: Grampositiivisia itiöllisiä sauvoja. Klostrideja???

21 Näyte 7/2012 Kudosnäyte narkomaanin vasemmasta käsivarresta. 1 vrk 2 vrk Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1 ja 2 vrk. -> Kellertävän harmaita, kuperia pesäkkeitä.

22 Näyte 7/2012 Kudosnäyte narkomaanin vasemmasta käsivarresta. Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA) 2 vrk, +35 C. Kasvaa vain yhtä bakteeria, joka on herkkä metronidatsolille ->anaerobi!! Rösöreunaisia sauvapesäkkeitä.

23 Näyte 7/2012 Kudosnäyte narkomaanin vasemmasta käsivarresta. Anaerobiviljely EYA-maljalle, +35 C, 2-5 vrk. -> Matalia, rösöreunaisia, lesitinaasi negatiivisia ja lipaasi negatiivisia pesäkkeitä.

24 Näyte 7/2012. Aerotolenranssitesti (2 vrk, +35 C) 1. Verimalja: aerobikasvu 2. Suklaamalja: mikroaerofiilinen (5% CO 2 ) kasvu 3. Anaerobiverimalja (FAA): Anaerobikasvu Aerotoleranssitestin tulokset (2 vrk): 1. Verimaljalla kasvaa hyvin, mutta pieninä pesäkkeinä 2. Suklaamaljalla kasvaa hyvin, mutta pieninä pesäkkeinä 1. Anaerobiverimaljalla (FAA) kasvaa paremmin ja isompina pesäkkeinä kuin aerobimaljoilla. Herkkä metronidatsolille.

25 Näyte 7/2012. Aerotoleranssikasvustojen gramvärjäyslöydökset Aerobikasvun pesäkevärjäys verimaljalta: Grampositiivinen itiötön sauva. 2. Anaerobikasvun pesäkevärjäys anaerobiverimaljalta (FAA): Grampositiivinen itiöllinen sauva. Terminaalisia itiöitä. Huom! Suuri osa on värjääntynyt gramnegatiiviseksi! Tyypilliset Clostridium tertium-pesäkkeiden gramvärjäyslöydökset Suurenna kuvaa nähdäksesi yksityiskohdat!

26 Näyte 7/2012 Clostridium tertium Katalaasi: Negat (ei kuohu) Pikaindoli: Negat (väritön) Anaerobiverimalja (FAA) 2-4 vrk: Keskikokoinen, matala, epätarkkarajainen, kellertävän valkoinen, sauvapesäke EYA-maljalla: Lesitinaasi negat. Lipaasi negat.

27 Näyte 7/2012 Clostridium tertium Anaerobien identifikaatiotesti (AI) Kanamysiini (1000 µg): Vankomysiini (5 µg): Kolistiini (10 µg): S S R Lisäksi Metronidatsoli (Ei näy kuvassa) S

28 Näyte 7/2012 Clostridium tertium - + +, + + +, + - +, - - -, - - +, RapID ANA II: Clostridium tertium (100 %) (Huom! Positiivisiksi tulkittavien reaktioiden arviointi vaikeaa.)

29 Clostridium tertium Yhteenveto C.tertium on harvinainen ihmisen patogeeni. Se on heikko taudinaiheuttaja. Se ei tuota toksiineja. Mikrobiologisesti se on poikkeava klostridi: Se kasvaa hyvin myös aerobisesti. Aerobiviljelmässä se ei tuota itiöitä ja muistuttaa gramvärjäyksessä laktobasilleja. Anaerobiviljelmässä se on itiöllinen gram+sauva. Erotuksena Basilluksista, se on katalaasi negat. Kun on oivaltanut, että kyseessä on anaerobi, sen lajitunnistus onnistuu perinteisin menetelmin. (Potilastapausviite: Fujitani et al. Anaerobe 13:161-5,2007)

30 Näyte 8/2012 Pahanhajuinen lapsivesi. Ennenaikaiseen synnytykseen johtanut raskaus Löydökset: Streptococcus agalactiae (B-ryhmän betahemolyyttinen streptokokki), pääpatogeeni. Peptostreptococcus anaerobius ja Eggerthella lenta, lisäpatogeeneja. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tulosten tulkinta.

31 Näyte 8/2012 Pahanhajuinen lapsivesi. Ennenaikaiseen synnytykseen johtanut raskaus Näytteen gramvärjäys: Ainakin gram+ketjukokkia. Mitä muuta??

32 Näyte 8/2012. Pahanhajuinen lapsivesi Viljely lampaanverimaljalle, 5% CO2, +35 C, 1-2 vrk. -> Beta-hemolyyttinen streptokokki. Onko muuta?

33 Näyte 8/2012. Pahanhajuinen lapsivesi Viljely suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. -> Harmaita streptokokkipesäkkeitä. Onko muuta?

34 Näyte 8/2012. Pahanhajuinen lapsivesi Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA) 2 vrk, +35 C. Ainakin kahta erilaista bakteeria. Onko enemmän? Mitkä anaerobeja??. Vrt veri- ja suklaamaljakasvuja. Beta-hemol streptokokki kasvaa niin voimakkaasti FAA:llakin, että mahdollista estorengasta metronidatsolikiekon ympärillä ei näy! -> Jatkoinkubaatio tarpeen.

35 Näyte 8/2012. Pahanhajuinen lapsivesi Anaerobiviljely PEA-maljalle, +35 C, 2-3 vrk. -> Ainakin kahdenlaisia pesäkkeitä. Mitkä anaerobeja? ->Aerotoleranssitesti

36 Näyte 8/2012. Pahanhajuinen lapsivesi Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 4-5 vrk. -> Beta-hemolyyttinen streptokokki Onko muuta? Vrt anaerobiviljelmät!!

37 Näyte 8/2012. Pahanhajuinen lapsivesi Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA) 4-5 vrk, +35 C. 1. Metronidatsolille resistentti. B-streptokokki 2. Kellertävä, metronidatsolille herkkä. Anaerobi. 3. Harmaa, metronidatsolille herkkkä tihrukasvu. Anaerobi?

38 Näyte 8/2012. Aerotolenranssitesti (2 vrk, +35 C) Verimalja: aerobikasvu Aerotoleranssitestin tulokset: Suklaamalja: mikroaerofiilinen (5% CO 2 ) kasvu Anaerobiverimalja (FAA): Anaerobikasvu 1. Vm+, Sm+,An-vm (FAA)+ ->Aerobi ja vaihtoehtoisesti anaerobinen bakteeri. 2. Vm-, Sm-, An-vm (FAA)+ ->Anaerobinen bakteeri. 3. Vm-, Sm-, An-vm (FAA)+ ->Anaerobinen bakteeri

39 Näyte 8/2012. Gram-värjäyslöydökset Yhteenveto aerotoleranssitestin ja gramvärjäyksen tuloksista: 1. Aerobi ja vaihtoehtoisesti anaerobinen beta-hemolyyttinen streptokokki. Grampositiivinen ketjukokki. 2. Anaerobinen grampositiivinen keskikokoinen kokkibakteeri (Peptostreptococcus-laji?) 3. Anaerobinen grampositiivinen itiötön sauva

40 Näyte 8/ Beta-hemolyyttinen streptokokki, ryhmä B (Streptococcus agalactiae) Katalaasi negat Gram+dk tai kk Verimaljalla iso pesäke, jonka ympärillä kapea beta-hemolyysivyöhyke B A: negat kontrolli Streptokokki latex-testi

41 Näyte 8/2012. Streptococcus agalactiae + - +, + - +, + - -, + + -, + - -, , - - -, + - +, + - -, + - -, - Rapid ID 32 STREP Streptococcus agalactiae 99,7 %

42 Näyte 8/ Peptostreptococcus anaerobius Gram-värjäys: Keskikokoinen gramposit kokki Anaerobiverimalja (FAA) 3-4 vrk: Keskikokoinen, kellertävän valkoinen, tarkkarajainen kokkipesäke Katalaasi: Negat (ei kuohu) Pikaindoli: Negat (väritön)

43 Näyte 8/ Peptostreptococcus anaerobius Anaerobien identifikaatiotesti (AI) Kanamysiini (1000 µg): Vankomysiini (5 µg): Kolistiini (10 µg): S tai R S R SPS S Lisäksi maljan alaosassa: Metronidatsoli (5 µg): S

44 Näyte 8/ Peptostreptococcus anaerobius - - -, - + -, - - -, - - -, + - +, RapID ANA II: Peptostreptococcus anaerobius (100 %)

45 Näyte 8/ Peptostreptococcus anaerobius Yhteenveto diagnostisista testeistä Ehdottomasti anaerobinen Keskikokoinen grampositiivinen kokki Anaerobiverimaljalla keskikokoinen, kellertävän valkoinen kokkipesäke Katalaasi negat Pikaindoli negat Anaerobien identifikaatiotesti (AI): Ka S, Va S, Ko R, Sps S. Lajitunnistus kaupallisilla tunnistustesteillä toimii. Ei kasva BBE:llä, ei kasva KVLB:llä. Lipaasi negat ja lesitinaasi negat

46 Näyte 8/ Eggerthella lenta Grampositiivinen suora, itiötön sauva Anaerobiverimalja (FAA) 7 vrk: Hidaskasvuinen, pieni, harmaa, tarkkarajainen pesäke. Katso isommalla suurennoksella! Katalaasi: Posit (kuohuu) Pikaindoli: Negat (väritön)

47 Näyte 8/ Eggerthella lenta Anaerobien identifikaatiotesti (AI) Kanamysiini (1000 µg): Vankomysiini (5 µg): Kolistiini (10 µg): S S R Metronidatsoli (5 µg): (Ei näy kuvassa) S

48 Näyte 8/ Eggerthella lenta Pitäisi olla , - - -, - - -, - - -, - - +, RapID ANA II: Eggerthella lenta (12 %) RapID ANA II: Eggerthella lenta (99 %)

49 Näyte 8/ Eggerthella lenta Yhteenveto diagnostisista testeistä Ehdottomasti anaerobinen Suora, itiötön, grampositiivinen sauva Anaerobiverimaljalla hidaskasvuinen (4-7 vrk), pieni, harmaa, tarkkaraijainen pesäke Katalaasi posit Pikaindoli negat Anaerobien identifikaatiotesti (AI): Ka S, Va S, Ko R Lajitunnistus kaupallisilla tunnistustesteillä (voi olla vaikeaa).

50 Mukavaa apilantuoksuista kesää!