Ulostepatogeenien diagnostiikka. Alueellinen koulutus Kaisu Rantakokko-Jalava Tyks Mikrobiologia ja genetiikka

Transkriptio

1 Ulostepatogeenien diagnostiikka Alueellinen koulutus Kaisu Rantakokko-Jalava Tyks Mikrobiologia ja genetiikka

2 Bakteeriripulit, vanhaa ja uutta diagnostiikkaa Perinteinen bakteeriripuli (turistiripuli) Uudemmat tai harvinaisemmat aiheuttajat Ruokamyrkytys Antibioottiripuli, Sairaalasyntyinen ripuli Tärkeimmät aiheuttajat Salmonellat Shigellat Yersiniat Kampylobakteerit Patogeeniset E. colit : EHEC* (EPEC, EAEC, EIEC) Vibrio* Plesiomonas/Aeromonas(*) Ym. Lisäksi toksiineja tuottavat Bacillus cereus Cl. perfringens S. aureus Clostridium difficilen toksiinit Perinteinen tutkimus F-BaktVi 1 Erikoisviljelyt* F-BaktVi3 - F-BaktVi 2 / F-Clditoksiininosoitus Uutta diagnostiikkaa Viljely + PCR (F-BaktViP) Kaupalliset menetelmät kattavat vaihdellen F-CldiVi Seulonta: (GDH+) PCR

3 F-BaktViP Ulosteen bakteeriviljely ja PCR yhdistelmä HUSLABissa Salmonellat, shigellat, patog. yersiniat, kampylobakteerit, Vibrio cholerae ja ripuli-e. colit Turussa Kaupallinen testi (Mobidiag Oy), samat patogeenit Testi mahdollisesti vaihtuu Salmonella spp., Shigella spp., Campylobacter spp., shiga-toksiinit ++ Vibrio spp., ETEC, yersinia, Aeromonas PCR on herkempi kuin viljely, poikkeuksena mahd. salmonellat

4 Antibioottiripuli Clostridium difficilen toksiinien aiheuttama ripuli (< pseudomembranoottinen koliitti) Usein 2 viikon aikana mikrobilääkehoito Tarttuu itiöiden avulla kosketustartuntana C. difficileä esiintyy vastasyntyneillä, mutta ei heillä aiheuta tautia (koska toksiinin reseptorit puuttuvat) hypervirulentit ribotyypit 027 ja 078

5 Antibioottiripulin diagnostiikka F-CldiVi Korvannut F- BaktVi2:n Kasvavan kannan toksiinintuotto varmistetaan PCR:llä F-CldiTx Suora toksiinin osoitus ulosteesta epäherkkä (<70% verrattuna viljelyyn) Korvattu GDH + varmistus toksiinintuotosta PCR l. toksiini-geenin osoitus suoraan ulosteesta

6 GDH Cdiff seulontatestinä GDH on entsyymi, jota esiintyy C. difficilen soluseinässä sekä toksiinia tuottavissa että ei-tuottavissa kannoissa Koska ripulin aiheuttaa nimenomaan toksiini, täytyy lisäksi varmistaa jotenkin se, että bakteeri pystyy tuottamaan toksiinia Paras tapa olisi lisätä ulosteen supernatantti soluviljelmään ja katsoa onko sillä sytotoksista vaikutusta, mutta se on rutiinikäyttöön liian hidas Nopein tapa on katsoa löytyykö ulosteesta C. difficile -bakteerin toksiinigeeniä 90% GDH-positiivisissa näytteissä löytyy myös toksiinigeeni

7 C. difficile -seulonta Seulonta negat GDH Vidaksella - + Seulonta negat PCR - + Seulonta posit Vastaus Positiivinen Negatiivinen Tulkinta Näytteessä on C. difficile, jonka kyky tuottaa toksiinia on varmistettu PCR:llä Näytteessä ei todeta C. difficilen antigeenia tai Näytteessä on C. difficilen antigeeni, mutta kanta ei tuota toksiinia

8 I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII 2013 I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII 2014 I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII 2015 I II III IV V VI VII VIII Toksiinitesti vaihdettu seulontaan VSSHP: C. difficile löydökset/kk

9 C. difficile diagnostiikasta Monissa paikoissa C. difficile tutkitaan nykyään pelkästään PCR-menetelmällä Edut: nopea ja herkkä diagnostiikka Mutta: ylidiagnostiikan riski C. difficile on melko yleinen myös oireettomilla ja varsinkin laitospotilailla, joten herkällä menetelmällä voidaan saada liikaa positiivisia, varsinkin jos testiä tilataan/tehdään, vaikka uloste ei olisi näyteastian muotoon asettuvaa

10

11 Virusripulit Rotavirus rokotusten myötä lähes hävinnyt Norovirus vuosittaiset epidemiat tammi-toukokuussa Ruoka- ja vesivälitteiset epidemiat Sapovirukset Erit. lasten ripuliviruksia Astrovirukset Adenovirukset 40 ja 41

12 Ripulivirusten diagnostiikkaa F-NoroAg Herkkyys melko huono, joten esim. osastoepidemiaepäilyissä otettava useita näytteitä, jotta saadaan edes joku kiinni Negatiivinen tulos ei sulje pois! F-NoroNhO Tulossa Tyksin valikoimaan, myös päivystyksenä Haussa laajemmin ripuliviruksia tunnistava PCR-paneeli

13 Suolistoparasiittien aiheuttamat ripulit Pidempi itämisaika ja pitkäaikaisempaa oireilua kuin virus- ja bakteeriripuleissa Erityisesti matkan jälkeen Giardia: ripuli, ylävatsakipu, pahoinvointi, ilmavaivat, vatsan turvotus Entamoeba histolytica: (veri)ripuli Cryptosporidium: vesiripuli Ei voida todeta F-Para-O tutkimuksessa, vaatii erikoisvärjäyksen (F-CrypVr) voidaan todeta myös Cyclospora ja Isospora belli

14 Suolistoparasiitteja mikroskoopissa hiiva Giardia lamblia Cryptosporidium, Ziehl-Nielsen ja värjäämätön Entamoeba histolytica/disparin kysta Cyclospora cayetanensis, Ziehl- Nielsen värjäys Dientamoeba fragilis, trikromiväärjäys

15

16 Duodecim 2012

17 37 tapausta

18

19 Ulosteen parasiitti-pcr Syksyllä otetaan käyttöön PCR, joka tunnistaa tärkeimmät ulosteparasiitit Giardia lamblia Cryptosporidium Entamoeba histolytica Näyte voi olla tuoreulostetta (tai formaliinifiksattu) Ei totea madonmunia

20 Ulosteen parasiittilöydökset 5/14-5/15 1A. Patogeeniset alkueläimet Löydöksiä Tutkimusnimike Giardia lamblia 38 F-Para-O Entamoeba histolytica/dispar* 23 Jatkoon tarv. F-EhistAg Cryptosporidium# 2 F-CrypVr Cyclospora (cayetanensis)# - F-CrypVr Isospora belli# - F-CrypVr Dientamoeba fragilis - F-AmebVr yht. 63 1B. Apatogeenit alkueläimet Blastocystis hominii 572 F-Para-O sivulöydös Entamoeba dispar/ coli /haatmannii Iodamoeba bütsclii Chilomastix mesnili yht. 700 *yl. 90% on apatogeeni E. dispar #immuunipuutteisilla rajua/pitkittynyttä/toistuvaa ripulia

21 Ulosteen parasiittilöydökset 5/14-5/15 2. Madot tai madonmunat Löydöksiä Tutkimusnimike Sukkulamadot *Kihomadot (erillinen tutkimus) F-Enve-O *Koukkumadot (Ancylostoma) 4 F-Para-O *Suolinkainen (Ascaris lumbricoides) *Trichuris trichiura *Strongyloides **Muut sukkulamadot 1 Heisimadot (Diphyllobotrum, Taenia, Hymenolepis) Imumadot *Echinococcus granulosus **Muut imumadot (Schistosoma, Clonorchis) yht. 33

22 Yhteenveto Ulostediagnostiikka on siirtymässä perinteisistä viljely-, antigeeninosoitus ja mikroskopia-menetelmistä PCR-paneeleihin Rinnakkainen käy ö PCR-seulonta, viljely valikoiden Parhaimmillaan epidemiatilanteissa, jolloin voidaan nopeasti kattaa iso joukko patogeeneja PCR-tutkimus parantaa herkkyyttä Shigella, EHEC Cryptosporidium Ripulitaudit rajoittuvat usein itsekseen, näyte kannattaa ottaa jos vaikuttaa hoitoon Erityisryhmät Tietyt elintarvike- ja terveydenhuollon työntekijät F-BaktViP -tutkimusta voidaan käyttää (juridiikka vaatii viljelyosoitusta) Immuunipuutteiset