Labquality Kudos- ja märkänäytteiden bakteeriviljely 2006-2010 Markku Koskela OYS/Mikrobiologian laboratorio
5-vuotisseurantajakson kertymä 20 bakteeriviljelykierrosta 80 potilasnäytettä 40 Pu-BaktVi2; 20 herkkyysmääritystä 40 Pu-BaktVi1; 19 näytteessä anaerobeja
Bakteeriviljelynäytteet (80 kpl) Iho- tai haavamärkänäyte 28 kpl (35%) Hengitystieperäinen näyte 24 kpl (30%) Suolistoperäinen näyte 12 kpl (15%) Keskushermostoperäinen 5 kpl ( 6%) Muut 11 kpl (14%)
Elatusalustavalinnat Kaikki näytteissä olleet bakteerit ja hiivat kasvoivat lampaanverimaljalla, suklaamaljalla tai anaerobiverimaljalla. Patogeenin löytyminen sekaviljelmästä saattoi edellyttää selektiivistä maljaa (Streptokokki VM, Gc-malja,Pea,Cled, BBE,NV,EYA; Sab, kromog.hiivamalja) Erillisestä rikastusviljelystä ( tioputki ) saattoi olla hyötyä.
Onnistunut hajotusviljely 40 näytettä, joissa >2 bakteeria 10 näytettä, joissa patogeeni normaalin flooran joukossa 1 näyte pelkkää (hengityst.) normaaliflooraa 15 näytettä, joissa aerobi ja anaerobi bakteeri 26 näytettä, joissa >2 aerobia bakteeria 7 näytettä, joissa >2 anaerobia bakteeria
2008/näyte 6: Lapsen välikorvaerite rykalvossa olevasta ilmastointiputkesta Kuiva,valkoinen ja kupera difteroidipesäke. Oksid.neg. Kuiva, keltainen ja kupera mikrokokki pesäke. Oksid.neg 22/22 OK Kiiltävä,kupera, hiukan vaalean punerva ja agarilla luisteleva M.catarrhalis-pes. Oksidaasi posit.
2008/näyte 14: Lapsen märkärupi. Normaalin flooran joukossa A-ryhmän beta-hem streptokokki Sekä hyvin että heikommin 1 vrk:ssa verimaljalla +35 C:ssa hemolysoivia beta-hem.streptokokkipesäkkeitä stafylokokkipesäkkeitten lomassa. Hyvä hajotusviljely!!! 21/21 OK
Näyte 8/2010 Sappirakkosyöpää sairastavan potilaan märkäinen sappirakkoerite Viljely lampaanverimaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. Voimakkaasti leviävä sauva (Proteus?). Onko muuta?
Näyte 8/2010 Sappirakkosyöpää sairastavan potilaan märkäinen sappirakkoerite Viljely CLED-maljalle, 5% CO 2, +35 C, 1 vrk. 1) Proteus? 2) Laktoosipositiivinen sauva?
Näyte 8/2010 Sappirakkosyöpää sairastavan potil. märkäinen sappirakkoerite FAA-maljakasvu anaerobiviljelyssä (2 vrk, +35 C): Metronidatsolikiekon ympärillä estorengas? ->Anaerobeja?
Näyte 8 / 2009. Vatsaontelomärkä. E.coli, Clostridium sporogenes ja Prevotella disiens Anaerobiviljely FAAmaljalla +35 C, 2 vrk Clostridium sporogenes -huntuileva, leviävä -rasvaisen kiiltävä Prevotella disiens -pieni tarkkarajainen -vähitellen ruskehtava pigmentti Prevotella disiensin löysi vain 7/15
Onnistunut hajotusviljely ja riittävän pitkä inkubaatioaika Pu-BaktVi2: yleensä riitti 2 vrk, mutta hitaasti kasvavat pseudomonakset yms. vaativat pitemmän (ad 5 vrk) kasvatuksen. Pu-BaktVi1: tarvittaessa 7-10 vrk inkubaation. Sekä hitaasti kasvavia aerobeja että anaerobeja!!!!
2008/4 Aivoabsessi. Aerobit S epidermidis ja Actinomyces naeslundi sekä anaerobi Prevotelle melaninogenica. 2vrk inkubaatio Suklaamaljalla 5% CO 2 :ssa kuivia, erikokoisia aktinomykes-pesäkkeitä Anaerobiverimaljalla isompia, vaaleita pesäkkeitä ja kellertävää tihrukasvua
2008/4 Aivoabsessi. Aerobit S epidermidis ja Actinomyces naeslundi sekä anaerobi Prevotelle melaninogenica. 5 vrk inkubaatio Suklaamaljalla kuivia syömähampaan näköisiä aktinomykes-pesäkkeitä Prevotella melaninogenica FAA:lla ruskehtava, korkea, kiiltävä pesäke.
Näyte 11/2010 Märkää munasarja-absessista Viljely anaerobille lampaanverimaljalle (FAA), anaerobinen inkubaatio, +35 C, 2 ja 7 vrk. 2 vrk 7 vrk Klebsiella pneumoniae Actinomyces israeli: Valkoisia, kuivia, syömähampaan näköisiä pesäkkeitä.
Näyte 11/2010 Märkää munasarja-absessista Viljely anaerobille lampaanverimaljalle (FAA), anaerobinen inkubaatio, +35 C, 7 vrk. (Toinen FAA-maljahajoitusviljelmä). Valkoisia, kuivia, syömähampaan näköisiä aktinomykes-pesäkkeitä Klebsiella-pesäkkeiden seassa!
Potilastiedot ja näyte: esimerkkejä Pienveneonnettomuus ja reiden haava: S aureus (potilaan iholta) ja Brevundimonas diminuta (vedestä) Puutarhatyöntekijän pistohaava: Pseudomonas aeruginosa ja Clostridium novyi (maaperästä) Surfaaja saanut tropiikissa jalkaan haavan: Actinomadura madurae (tropiikin hiekasta) Sushibaarin pitäjän käden haava: Vibrio vulnificus (tuontikalasta tai äyriäisestä)
2008/10: Sushibaarin pitäjän käden haava. Vibrio vulnificus (tartunta kalasta tai äyriäisestä) Vibrio vulnificus: Runsas kasvu; suuria limaisia ja harmaanvihertäviä pesäkkeitä verimaljalla aerobisesti 18 tunnissa. Oksidaasi + (19/20)
Potilastiedot ja näyte: esimerkkejä immuunipuutteisen potilaan löydöksistä Immuunipuutteisen duodeniitti: S aureus, Clostridium tertium ja hiiva (potilaan suolen normaalista floorasta) 82-vuotiaan (ikä!), diabeetikon (perussairaus) säärihaava: Bacillus cereus, Clostridium septicum ja enterokokki Syöpäpotilaan (perusairaus) yskös: Rhodococcus equi
Mikrobien tunnistaminen Kuvallisessa palautteessa tavallisten lajitunnistustestien löydökset Kirjallisessa palautteessa taulukoituna kierrokselle osallistuneiden laboratorioiden saamat kaupallisten lajitunnistustestien tulokset vertailtavaksi 1-2 patogeenin osalta.
Mikrobien tunnistaminen Viljely posit vai negat Bakteereja. Onko anaerobeja? Onko sienikasvuakin? Hiivoja? Homeita? Sukutasolle: Koag neg stafylokokki, Bacteroides fragilis ryhmä,actinomyces sp Lajitasolle: Staphylococcus aureus, E coli, Fusobacterium necrophorum; Candida albicans. E rhusiopathiae, A madurae, M abscessus
Näyte 3/2010. Staphylococcus lugdunensis S.lugdunensis agglutinoituu stafylokokkilatex-testeillä kuten S.aureus, Staphaurex Remel Europe Ltd, UK Mutta S.lugdunensis ei koaguloi kanin plasmaa eli se on koagulaasinegatiivinen stafylokokki. Pasteurex TM Staph Plus, Bio-Rad, Ranska Kanin plasman koagulaasi: S lugdun negat S aureus posit
Näyte 3/2010. Staphylococcus lugdunensis S aureus S lugdunensis Kasvu S aureuksen identifikaatiomaljalla (SAID, biomerieux, Ranska) 1 vrk:ssa, +35 C:ssa.: S aureus vihreä ja S lugdunensis valkoisen harmaa
Näyte 3/2010. Staphylococcus lugdunensis - + +, + + -, + - -, - + -, + - -, + - +, - - - API20Staph: 6312150 Staphylococcus lugdunensis ( 97 %) 15/ 16
Näyte 10/2010 Haemophilus influenzae S aureus Satelliitti+ Kasvu suklaamaljalla, 5% CO 2,, +35 C, 1 vrk Pieni monimuotoinen gram-sauva 21/22 Kasvufaktorit: X ja V +
Näyte 6/2010 Lääkinnälliseen käyttöön tarkoitettu vesi Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 2 vrk. Keskikokoisia, tarkkarajaisia, kuperia, kiiltäviä, kellertävän harmaita sauvapesäkkeitä
Näyte 6/2010. Ralstonia pickettii Oksidaasi + Gram neg sauva Viljely Cled-maljalle aerobisesti, +35 C, 2 vrk. ->Keskisuuria, tarkkarajaisia, kuperia, terävänapaisia, kiiltäviä, vihreitä, laktoosinegatiivisia sauvapesäkkeitä
Näyte 6/2010. Ralstonia pickettii 1 2 3 4 5 6 Ralstonia pickettiin sokerisarja: 1) Glukoosi / kaasu: -/- 2) Indoli - (väritön) 3) liikkuva (koko putkii samea) 4) sitraatti + (sininen) 5) urea + (punainen) 6) TSI: pinta punainen (-) / pohja punainen (-)/ pohjassa ei kaasua (-) eli nonfermentatiivinen. Lisäksi H 2 S-reaktio negatiivinen eli putkessa ei näy mustaa aluetta keskellä.
Näyte 6/2010. Ralstonia pickettii + - -, - - -, - - +, + - -, - - +, + - +, + - + Oxid API20NE 1041455 Ralstonia pickettii ( 95,1 %) 18/ 21
Näyte 15/2010. Anaerobinen primaariviljely Märkää otsaontelosta Yksittäispesäkkeitä anaerobiverimaljakasvuston (FAAmalja) hajotusviljelmän lopussa ( hännässä ), 2 vrk Ruskea, matala, kiiltävä, metronidatsolille herkkä pesäke ->anaerobi? Harmaa, matala, mattapintainen metronidatsolille herkkä pesäke ->anaerobi? Valkoinen, kupera pesäke ->todennäköisesti sama streptokokkipesäke, joka aerobimaljoilla kasvaa alfa-hemolyyttisenä.
Näyte 15/2010. Fusobacter necrophorum Anaerobien identifikaatiotesti (A I): Kanamysiini S, vankomysiini R, kolistiini S
Näyte 15/2010. Fusobacterium necrophorum Pikaindoli + Positiivinen lipaasireaktio EYA-maljalla hitaasti (3-5 vrk)
Näyte 15/2010. Fusobacterium necrophorum - - -, - - -, - - -, + - -, - - -, - - + RapID ANA II: 000104 Fusobacterium necrophorum (99,8 %). 13/ 16
Näyte 15/2010. Prevotella melaninogenica FAA 3 vrk: Ruskeapigmenttisiä pesäkkeitä
Näyte 15/2010. Prevotella melaninogenica Anaerobien identifikaatiotesti (A I): Kanamysiini S, vankomysiini R, kolistiini S
Näyte 15/2010. Prevotella melaninogenica - - +, + + -, + + +, + + -, - - +, - - - RapID ANA II: 437340 Prevotella melaninogenica (98,4 %). 12/ 16
Näyte 11/2010. Actinomyces israelii Anaerobien identifikaatiotesti (A I): Kanamysiini S, Vankomysiini S, Kolistiini R sopien grampositiiviseksi anaerobiksi Metronidatsoli R Tyypillistä aktinomykeksen kaltaiselle gram-posit. anaerobille
Näyte 11/2010. Actinomyces israelii Anaerobinen kasvu anaerobiverimaljalla 7 vrk:ssa, +35 C:ssa: Valkoisia syömähampaita Gram+haarautuva sauva Katalaasi neg
Näyte 11/2010. Actinomyces israelii - + +, + + +, + - -, - + +, + + +, - - - RapID ANA II 671670 Actinomyces israelii (99,7 %) 8/ 17
Yhteenveto lajitunnistuksista Tavallisten aerobien ja anaerobien lajitunnistus onnistuu hyvin Harvinaisten aerobien lajitunnistuksessa luontaista arkuutta?! Tärkeiden anaerobien (Actinomyces israelii, Fusobacterium necrophorum, yms) lajitunnistus vaikeaa ->harjoittelemisen paikka!!! Tukilaboratorion lajitunnistusvalmius??!!
Yhteenveto Suomalaiset laboratoriot ovat menestyneet kudos- ja märkänäytteiden bakteeriviljelykierroksilla 2006-2010 hyvin. Myös jatkossa huomioitava riittävän monipuolinen elatusalustavalikoima, tarpeeksi pitkät inkubaatiot ja hyvä lajitunnistusvalmius! Kiitos!