Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 3/2011

Transkriptio

1 Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 3/2011 Kuvat ja teksti: Markku Koskela Mikrobiologian ylilääkäri OYS, Oulu Huom! Käyttäkää yläpalkin suurennusmahdollisuutta % pesäkekasvun yms. yksityiskohtia tarkastellessanne!

2 Näyte 9/2011 Korvakäytäväerite Löydös: Pseudomonas aeruginosa, patogeeni Tehtävät: Bakteerin eristäminen, tunnistaminen ja mikrobilääkeherkkyysmääritys

3 Näyte 9/2011. Pseudomonas aeruginosa Oksidaasi+ Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1 vrk. ->Kooltaan erisuuruisia, metallinhohtoisia, imelän hajuisia ja oksidaasipositiivisia sauvapesäkkeitä -> P. aeruginosa?

4 Näyte 9/2011. Pseudomonas aeruginosa Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 2 vrk. ->Kooltaan erisuuruisia, metallinhohtoisia, vihertävänruskeita, imelän hajuisia ja oksidaasipositiivisia sauvapesäkkeitä ->P. aeruginosa?

5 Näyte 9/2011. Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosan sokerisarja: 1) Glukoosi / kaasu: -/- (putken yläosassa bakteerin tuottamaa pyosyaanipigmenttiä), 2) Indoli - (väritön) 3) liikkuva (koko putki samea) 4) sitraatti + (sininen) 5) urea + (punainen) 6) TSI: pinta punainen (-) / pohja punainen (-)/ pohjassa ei kaasua (-) eli nonfermentatiivinen. H 2 S-reaktio on negatiivinen (ei mustaa putken keskellä).

6 Näyte 9/2011. Pseudomonas aeruginosa + - -, + - -, + - +, - - +, + - +, + + +, API20NE Pseudomonas aeruginosa (99,5%). Oxid Nitraatti on pelkistynyt nitriitiksi ja edelleen kaasuiksi, jolloin kaivo jää värittömäksi sinkin lisäyksenkin jälkeen. P. aeruginosa ei fermentoi glukoosia (nonfermentatiivinen) mutta käyttää sitä hapen läsnäollessa oksidatiivisesti.

7 Näyte 10/2011 Sivelynäyte reiden palovamma-alueelta. Infektioepäily. Oletettu löydös: Stenotrophomonas maltophilia ja Corynebacterium jeikeium, molemmat tyypillisiä kolonisoijia ja mahdollisia patogeeneja Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tulosten tulkinta

8 Näyte 10/2011 Sivelynäyte reiden palovamma-alueelta. Infektioepäily Hyvin pieniä, harmaita pesäkkeitä sauvapesäkkeiden joukossa! Kellertävän harmaa sauvapesäkekasvu (Kts. 200% suurennos!) Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1 vrk.

9 Näyte 10/2011 Sivelynäyte reiden palovamma-alueelta. Infektioepäily Pieniä, kellanharmaita, kuperia pesäkkeitä ->streptokokkeja tai difteroideja? Suuria, oljenkeltaisia, kiiltäviä sauvapesäkkeitä ->Stenotrophomonas maltophilia? Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 2 vrk.

10 Näyte 10/2011 Sivelynäyte reiden palovamma-alueelta. Infektioepäily Viljely PEA- ja Cled-maljoille, 5% CO 2, +35 C, 2 vrk. Corynebacterium sp. eli difteroidi kasvaa puhtaana PEA:lla Stenotrophomonas kasvaa lähes puhtaana CLED:llä

11 Näyte 10/2011 Stenotrophomonas maltophilia Oksidaasi hitaasti ja heikosti + Aerobi verimaljakasvu 2-3 vrk. Matalia, oljenkeltaisia pesäkkeitä Gramnegatiivinen sauva

12 Näyte 10/2011 Stenotrophomonas maltophilia Stenotrophomonas maltophilian sokerisarja: 1) Glukoosi / kaasu: -/- 2) Indoli - (väritön) 3) liikkuva (koko putki on samea) 4) sitraatti - (vihreä) 5) urea - (keltainen) 6) TSI: pinta punainen (-) / pohja punainen (-)/ pohjassa ei kaasua (-) ts.nonfermentatiivinen sauva. H 2 S-reaktio negatiivinen (ei mustaa putkesssa).

13 Näyte 10/2011 Stenotrophomonas maltophilia - - -, - - +, + + +, - + -, + + -, - - +, Oxid API20NE Stenotrophomonas maltophilia (99,7%) S. maltophilia ei pelkistä nitraattia. Positiivinen nitratin pelkistysreaktio on saatu aikaan sinkkijauheella ts. varmistus että bakteeri ei ole pelkistänyt nitraattia edelleen ammoniakiksi, jolloin reaktio jäisi pysyvästi negatiiviseksi. S. maltophilia ei fermentoi glukoosia (nonfermentatiivinen) mutta käyttää sitä hapen läsnäollessa oksidatiivisesti. S. maltophilian tyyppireaktioita: Esc+ ja Gel+, indoli-, urea -

14 Näyte 10/2011 Corynebacterium jeikeium Katalaasi+ (kuohuu) Oksidaasi neg (väritön) Aerobi verimaljakasvu 2 vrk. Pieniä, kiiltäviä, kellertäviä, kuperia pesäkkeitä, jotka ovat katalaasipositiivisia. (Vrt. streptokokit ovat katalaasinegatiivisia!) Lyhyt, monimuotoinen grampositiivinen sauva

15 Näyte 10/2011 Corynebacterium jeikeium Katalaasi + - +, - - -, - - -, + - -, - - -, + - -, + RapID CB Plus Corynebacterium jeikeium (99,9%)

16 Näyte 11/2011 Märkänäyte 76-vuotiaan paksusuolen syöpäpotilaan alavatsan absessista Löydökset: Beta-hemolyyttinen streptokokki, ryhmä C (tarkemmin Streptococcus dysgalactiae ssp. equisimilis), Ochrobactrum anthropi ja Bacteroides vulgatus, kaikki patogeeneja. Tehtävät: Bakteerin eristäminen ja tunnistaminen.

17 Näyte 11/2011 Märkänäyte 76-vuotiaan paksusuolen syöpäpotilaan alavatsan absessista. Beta-hemol streptokokki Pieniä harmaita kiiltäviä pesäkkeitä, jotka ovat oksidaasi + (Kts 200% suurennoksella!) Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1 vrk.

18 Näyte 11/2011 Märkänäyte76-vuotiaan paksusuolen syöpäpotilaan alavatsan absessista. Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1 vrk. Beta-hemol streptokokki ja Ochrobactrum anthropi.

19 Näyte 11/2011 Märkänäyte76-vuotiaan paksusuolen syöpäpotilaan alavatsan absessista. Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 2 vrk. Ochrobactrum anthropi kasvaa maljoilla kellanharmaina, kiiltävinä ja voimakkaasti oksidaasipositiivisina pesäkkeinä. Betahemolyyttinen streptokokki jää sen alle!

20 Näyte 11/2011 Märkänäyte76-vuotiaan paksusuolen syöpäpotilaan alavatsan absessista. Viljely PEA- ja CLED-maljoille, 5% CO 2, +35 C, 2 vrk. Beta-hem streptokokki C PEA:lla Ochrobactrum anthropi Cled:llä Beta-hemolyyttinen streptokokki kasvaa PEA:lla puhtaana mutta hemolyysi ei ole yhtä hyvä kuin veri- tai streptokokkiverimaljalla. Kaikki grampositiiviset bakteerit kasvavat PEA:lla. Huom! Stafylokokit eivät kasva streptokokkiverimaljalla, joten se ei ole hyvä absessinäytteen primaariviljelyyn! Tuhruinen O. anthropin Cled-maljakasvu.

21 Näyte 11/2011 Beta-hemolyyttinen streptokokki, ryhmä C (Streptococcus dysgalactiae ssp. equisimilis) Verimaljakasvu 2 vrk:ssa Katalaasi negat C+ G- Gramposit ketjukokki Beta-hemolyyttisten streptokokkien ryhmämääritys latex agglutinaatiolla

22 Näyte 11/2011 Beta-hemolyyttinen streptokokki, ryhmä C (Streptococcus dysgalactiae ssp. equisimilis) + - +, + - +, + - -, - + -, + - -, , - - +, - - +, + - -, - - -, - Rapid ID 32 STREP Streptococcus dysgalactiae ssp. equisimilis 93,6 % (Huom! S. dysg ssp. equis on PyrA- ja S. pyogenes PyrA+)

23 Streptococcus dysgalactiae ssp. equisimilis Verimaljalla isopesäkkeinen beta-hemolyyttinen streptokokki Voi olla C- tai G-ryhmän streptokokki!! Aiheuttaa ihmiselle nieluinfektioita, iho- ja pehmytkudosinfektioita, bakteremiaa, yms. kuten A- ryhmän beta-hemolyyttinen streptokokkikin. Merkittävä eläinpatogeeni: hevosille nenänielun ja kaulan alueen absesseja, genitaali-infektioita, possuille niveltulehduksia, yms.

24 Näyte 11/2011 Ochrobactrum anthropi Oksidaasi+ Katalaasi + Harmaa, limainen sauvakasvu aerobisti verimaljalla 2 vrk:ssa Gramnegatiivinen sauva

25 Näyte 11/2011. Ochrobactrum anthropi Ochrobactrum anthropin sokerisarja: 1) Glukoosi / kaasu: -/- 2) Indoli - (väritön) 3) liikkuva (koko putki on samea) 4) sitraatti - (vihreä) 5) urea + (punainen) 6) TSI: pinta punainen (-) / pohja punainen (-)/ pohjassa ei kaasua (-) ts nonfermentatiivinen. H 2 S-reaktio on negatiivinen (ei mustaa putken keskellä).

26 Näyte 11/2011. Ochrobactrum anthropi + - -, - + -, - - +, - - -, + + -, - - +, Oxid API20NE Ochrobactrum anthropi (99,9%) Nitraatti on pelkistynyt nitriitiksi. O. anthropi ei fermentoi glukoosia (nonfermentatiivinen) mutta käyttää sitä hapen läsnäollessa oksidatiivisesti.

27 Ochrobactrum anthropi (Holmes et al. Int J Syst Bacteriol 1988:38/4: ) Ochrobactrum = pesäkkeeltään väritön sauva; anthropi = ihminen; ensimmäiset kannat ihmispotilaitten kliinisistä näytteistä. Maaperässä ja kasvien juurissa; satunnaisesti eläinten ja ihmisen normaalissa floorassa. Löytynyt veriviljelyistä ja muista potilasnäytteistä. Ehdottomasti aerobi, oksidaasipositiivinen, nonfermentatiivinen, gramnegatiivinen sauva. Osattava erottaa Pseudomonas aeruginosasta. Lajitunnistus API20NE:llä, Vitek-automaatilla, ym aerobien gramneg sauvojen tunnistusmenetelmillä

28 Näyte 11/2011. Märkänäyte 76-vuotiaan paksusuolen syöpäpotilaan alavatsan absessista. FAA-maljalla kasvaa: 1. Beta-hem streptokokki, joka on vaihtoehtoisesti myös anaerobi. 2. Keskisuuri, harmaa, kiiltävä sauva, joka on mahdollinen anaerobi 3. Ochrobactrum anthropi on ehdottomasti aerobi, joten se ei kasva anaerobisti! Huom! Beta-hemol streptokokki kasvaa niin voimakkaasti, että anaerobi sauva ei ole onnistunut muodostamaan estorengasta metronidatsolikiekon ympärille!! FAA-maljakasvu anaerobiviljelyssä (2 vrk, +35 C)

29 Näyte 11/2011. Märkänäyte76-vuotiaan paksusuolen syöpäpotilaan alavatsan absessista B. vulgatus: värittömiä pesäkkeitä BBE:llä. Vertaa: B. fragilis :mustia pesäkkeitä BBE:lla. BBE-maljalla kasvaa Bacteroides vulgatus, joka on ainoa Bacteroides fragilis-ryhmän anaerobi gramnegatiivinen sauva, joka ei hydrolysoi eskuliinia eli BBE-maljalle ei muodostu mustia pesäkkeitä vaan ne jäävät maljan värisiksi. Se siis sietää sappea, koska se kasvaa BBE-maljalla, mutta eskuliinireaktio on negatiivinen. BBE-maljakasvu anaerobiviljelyssä (2 vrk, +35 C)

30 Näyte 12/2011 Aerotoleranssitesti Aerotoleranssitesti: Verimalja: aerobi; suklaamalja: 5% CO 2, Faa: anaerobi. 1.Vasen yläneljännes: Beta-hemol streptokokki C kasvaa kaikilla maljoilla, koska se on aerobi mutta myös vaihtoehtoisesti (fakultatiivisestgi) anaerobi. 2.Oikea yläneljännes: Ochrobactrum anthropi on ehdottomasti (obligatoorisesti) aerobi, joten se ei kasva anaerobisti. 3. Alapuolisko: Bacteroides vulgatus on ehdottomasti anaerobi, joten se ei kasva aerobisti.

31 Näyte 8/2010. Bacteroides vulgatus Gramnegatiivinen sauva Anaerobien identifikaatiotesti (A I): Kanamysiini R, vankomysiini R, kolistiini R. Metronidatsoli S. Löydös sopii gram-negatiiviseksi Bacteroides fragilis-ryhmän anaerobiksi.

32 Näyte 8/2010. Bacteroides vulgatus - - +, + + -, + + +, + + +, - - +, RapID ANA II Bacteroides vulgatus (99,9 %)

33 Näyte 12/2011 Kudosnäyte tulehtuneesta suoliliepeen imurauhasesta Löydös: Yersinia pseudotuberculosis, patogeeni Tehtävät: Bakteerin eristäminen ja tunnistaminen.

34 Näyte 12/2011 Kudosnäyte tulehtuneesta suoliliepeen imurauhasesta Katalaasi + Oksidaasi neg Gramnegatiivinen sauva Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1 vrk. ->Harmaa, kupera hemolysoimaton pesäkekasvu

35 Näyte 12/2011 Kudosnäyte tulehtuneesta suoliliepeen imurauhasesta Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1 vrk. ->Harmaita, kuperia, rösöreunaisia, hemolysoimattomia pesäkkeitä

36 Näyte 12/2011 Kudosnäyte tulehtuneesta suoliliepeen imurauhasesta Viljely selektiiviselle yersiniamaljalle, aerobi inkub, +35 C, 1 vrk. ->Yersinioille tyypillisiä, punaisia, vaaleareunaisia häränsilmä - pesäkkeitä

37 Näyte 12/2011 Kudosnäyte tulehtuneesta suoliliepeen imurauhasesta Viljely selektiiviselle yersiniamaljalle, aerobi inkub, +35 C, 2 vrk. ->Yersinioille tyypillisiä, punaisia, vaaleareunaisia häränsilmä - pesäkkeitä ei enää näy, vain tumman punaisia pesäkkeitä!

38 Näyte 12/2011. Yersinia pseudotuberculosis Yersinia pseudotuberculosis sokerisarja (1 vrk): 1) Glukoosi / kaasu: +/- 2) Indoli - (väritön) 3) liikkumaton (vain pistoviljelykohta on samea) 4) sitraatti - (vihreä) 5) urea /(+hidas) (hitaasti punertuva!!) 6) TSI: pinta punainen->kellertyvä (-/+hidas) / pohja punainen (-)/ pohjassa ei kaasua (-). H 2 S-reaktio negatiivinen (ei mustaa putken keskellä). Fermentatiivinen sauva.

39 Näyte 12/2011. Yersinia pseudotuberculosis Yersinia pseudotuberculosis sokerisarja (2 vrk): 1) Glukoosi / kaasu: +/- 2) Indoli - (väritön) 3) liikkumaton (vain pistoviljelykohta on samea) 4) sitraatti - (vihreä) 5) urea + 6) TSI: pinta punainen) / pohja keltainen/ pohjassa ei kaasua (-). H 2 S-reaktio negatiivinen (ei mustaa putken keskellä). Fermentatiivinen sauva.

40 Näyte 12/2011. Yersinia pseudotuberculosis + - -, - - -, + - -, - - +, + - -, - - -, Oxid API20E Yersinia pseudotuberculosis (98,6%) Kun inkubaatiota olisi jatkettu vielä ½-1 vrk, olisi saatu myös rhamnoosi+ ja arabinoosi+, jolloin tulos olisi ollut Y. pseudotuberculosis ( 99,9%)

41 Värikkäitä syyspäiviä!