Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 1/2012 Kuvat ja teksti: Markku Koskela Mikrobiologian ylilääkäri OYS, Oulu Huom! Käyttäkää yläpalkin suurennusmahdollisuutta 100-400% pesäkekasvun yms. yksityiskohtia tarkastellessanne!!!!
Näyte 1/2012 Absessimärkä. 12-vuotiaan lapsen kurkkupaise Löydös: Streptococcus pyogenes, (A-ryhmän beta-hemolyyttinen streptokokki), patogeeni Tehtävät: Bakteerin eristäminen, tunnistaminen ja mikrobilääkeherkkyysmääritys
Näyte 1/2012 Absessimärkä. 12-vuotiaan lapsen kurkkupaise Viljely lampaanverimaljalle 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk -> Pieniä, valkoisen harmaita ja kuperia kokkipesäkkeitä, joiden ympärillä on iso ja kirkas beta-hemolyysivyöhyke.
Näyte 1/2012 Absessimärkä. 12-vuotiaan lapsen kurkkupaise Viljely suklaamaljalle 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk -> Pieniä, valkoisen harmaita, kuperia kokkipesäkkeitä.
Näyte 1/2012 Streptococcus pyogenes eli A-ryhmän beta-hemolyyttinen streptokokki A + G - Grampositiivinen ketjukokki Beta-hem streptokokkien ryhmämääritys latex-agglutinaatiolla
Näyte 2/2012 Poskionteloerite. Varusmiehen äkillinen poskiontelotulehdus. Varuskunnassa influenssaepidemia. Oletettu löydös: Haemophilus influenzae ja Neisseria meningitidis (meningokokki), patogeeneja. Alfa-hemolyyttinen streptokokki (Streptococcus mitis) edustaa ylähengitysteiden normaalia flooraa. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tulosten tulkinta
Näyte 2/2012 Poskionteloerite Viljely lampaanverimaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1 vrk. -> Isoja, kuperia, limaisia pesäkkeitä, jotka ovat oksidaasi + -> Pieniä, alfa-hemolyyttisiä streptokokkipesäkkeitä.
Näyte 2/2012 Poskionteloerite Viljely suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. -> Keskikokoisia, matalia, harmaita pesäkkeitä. (oksidaasi heikko+!!) -> Isoja, kuperia, limaisia pesäkkeitä ->oksidaasi + -> Pieniä, alfa-hemolyyttisiä streptokokkipesäkkeitä
Näyte 2/2012 Haemophilus influenzae Satelliittikoe verimaljalla 5% CO 2, +35 C, 1 vrk. Kasvu suklaamaljalla 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk: Matalia, harmaita pesäkkeitä. Hemofiilus kasvaa verimaljalla S aureuksen satelliittina Monimuotoinen gramnegatiivinen sauva
Näyte 2/2012 Haemophilus influenzae Kasvufaktorikoe herkkyysmaljalla, 5% CO 2, +35 C, 1 vrk XV-faktorikiekko on testin sisäisenä kontrollina: sen ympärillä pitää olla kasvua. H influenzae vaatii sekä X- että V-faktorin kasvaakseen eli se kasvaa vain X- ja V-faktorikiekkojen välissä alueella, johon niistä on diffuntoitunut sekä X- että V-faktoria. Löydöksen tulkinta: poskiontelotulehduksen aiheuttaja
Haemophilus influenzae Sekundaariset bakteeri-infektiot ovat tavallisia influenssavirusinfektion jälkitauteja. Haemophilus influenzae-bakteeria pidettiin yhtenä mahdollisena influenssan aihauttajana ennen kuin taudin todelliset aiheuttajat, influenssavirukset keksittiin. Bakteerille jäi harhaanjohtava nimi.
Näyte 2/2012 Neisseria meningitidis Puhdasviljelmät veri- ja suklaamaljoilla 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. Isoja, kuperia, limaisia pesäkkeitä. Oksidaasi + Gramnegatiivinen diplokokki
Näyte 2/2012 Neisseria meningitidis + + -, + - -, + - -, - - - RapID NH: 3110 Neisseria meningitidis (99,99 %) Löydöksen tulkinta: poskiontelotulehduksen aiheuttaja
Näyte 2/2012 Alfa-hemolyyttinen streptokokki Puhdasviljelmä verimaljalla ja optokiinikoe, 5% CO 2, +35 C, 1 vrk. Vihreitä, alfa-hemolyyttisiä streptokokkipesäkkeitä, jotka ovat resistenttejä optokiinille. Löydöksen tulkinta: ylähengitysteiden normaalia flooraa
Näyte 3/2012 Näyte tulehtuneesta jalan ihon hiertymästä. Ylipainoinen 67-vuotias nainen, joka on matkustellut Intiassa. Löydös: Actinomadura madurae, patogeeni. Tehtävät: Bakteerin eristäminen ja tunnistaminen.
Näyte 3/2012 Näyte tulehtuneesta jalan ihon hiertymästä 1 vrk 2 vrk Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1 ja 2 vrk. -> Hento, juuri näkyvä kasvu vasta 2 vrk inkubaation jälkeen
Näyte 3/2012 Näyte tulehtuneesta jalan ihon hiertymästä Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 4 vrk. -> Matalia, valkoisia, kiiltäviä pesäkkeitä. (Huom! Eri kasvuvaiheessa olevat pesäkkeet ovat erinäköisiä!)
Näyte 3/2012 Näyte tulehtuneesta jalan ihon hiertymästä Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 7 vrk. -> Syömähammasmaisia pesäkkeitä on alkanut muodostua.
Näyte 3/2012 Näyte tulehtuneesta jalan ihon hiertymästä Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA) 2-7 vrk, +35 C. Ei kasvua. Ehdottomasti aerobi bakteeri.
Näyte 3/2012 Actinomadura madurae Oksidaasi negat Grampositiivinen pitkä, haaroittuva sauva Katalaasi +
Näyte 3/2012 Actinomadura madurae Lajitunnistus bakteerien DNA-sekvennoinnilla referenssilaboratoriossa Perinteiset bakteerien tunnistuskokeet: Sokerisarja: mykkä (jotku kannat ovat indoli+) Kaupalliset testisarjat (RapID CB Plus, jne) eivät anna oikeaa nimeä. Modifioitu happovärjäys apuna erotettaessa mykobakteereista (hapon kestäviä) ja nokardioista (osittain happoa kestäviä). Actinomadura ei kestä happoa.
Actinomadura madurae Yhteenveto Bakteerin nimi on peräisin Intiassa Maduran provinssissa kuvatusta jalkainfektiosta ( Madura foot, Vincent 1894). Kuuluu ns aerobeihin aktinomyketteihin Nocardia-, Rhodococcus- yms bakteerien kanssa. Muistuttaa mykobakteereita. Kasvavat parhaiten aerobisesti; osa ei kasva anaerobisesti lainkaan. (vrt Actinomyces-suvun bakteerit, jotka kasvavat paremmin anaerobisti, osa kuten A israeli vain anaerobisti) Aerobi grampositiivinen haaroittuva sauvabakteeri. Ennen se luettiin kuuluvaksi sieniin. Aiheuttaa tropiikissa kroonisia, hitaasti kehittyviä, invasiivisia ihoinfektioita (aktinomyketoomia). Periaatteessa turistikin voi saada taudin; harvinaista. Bakteeri tarttuu maaperästä, ei ihmisestä toiseen. Taudin diagnoosi: anamneesi, kliininen kuva, infektoituneen kudoksen PAD.
Actinomadura madurae Yhteenveto Mikrobiologinen diagnoosi: bakteerin eristäminen näytteestä viljelyllä. A madurae kasvaa aerobisti verimaljalla tai sienimaljalla (Sabouraud) 3-5 vrk:ssa nahkamaisiksi harmaiksi tai kellanruskeiksi pesäkkeiksi. Gram-värjäys: Grampositiivinen haaroittuva sauva. (Kts kuvat s. 24) Modifioitu Ziehl-Neelsenin happovärjäys apuna erotettaessa mykobakteereista, nokardioista jne. A. madurae on happoa kestämätön sauva. (Kts kuvat s. 25) Bakteerin lajitunnistus geenitekniikalla. Muuten tavallisista, perinteisistä bakteriologian testeistä ei ole apua.
Gramvärjäytyvyys Actinomadura vrt. Nocardia vrt. Mycobacterium Actinomadura madurae Nocardia asteroides Mycobacterium abscessus Bakteerien värjääntyvyys riippuu niiden soluseinän koostumuksesta, mm. sen mykolihappopitoisuudesta. Actinomaduralla sitä ei ole lainkaan ja se värjääntyy grampositiiviseksi hyvin. Nocardia-lajeilla mykolihappoa on jonkin verran ja ne värjääntyvät grampositiivisiksi kohtalaisen hyvin. Mykobakteerien soluseinässä on paljon mykolihappoa ja ne värjääntyvät huonosti Gramilla.
Modifioitu Ziehl-Neelsen happovärjäytyvyys Actinomadura vrt. Nocardia vrt. Mycobacterium Aktinomadurat Eivät kestä happoa Nokardiat Osittain hapon kestäviä sauvoja Mykobakteerit Haponkestäviä sauvoja Bakteerin soluseinän koostumuksesta riippuen ne kestävät eri tavoin myös happoa ja emästä. Mykobakteereilla on mykolihappopitoinen soluseinä ja ne ovat happoa kestäviä. Nokardiat ovat osittain happoa kestäviä. Aktinomadurat eivät kestä happokäsittelyä. (Kts isommalla suurennoksella!!)
Näyte 4/2012 Märkää aivoabsessista. Löydökset: Actinomyces odontolyticys, Finegoldia magna ja Streptococcus constellatus (betahemolyyttinen streptokokki, ryhmä F). Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tulosten tulkinta.
Näyte 4/2012 Märkää aivoabsessista Viljely lampaanverimaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1 vrk. -> Beta-hemolyyttinen streptokokki -> Hyvin pieniä hemolysoimattomia pesäkkeitä
Näyte 4/2012 Märkää aivoabsessista Viljely suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1 vrk. -> Harmaita streptokokkipesäkkeitä -> Hyvin pieniä pesäkkeitä (kts isompi suurennos)
Näyte 4/2012 Märkää aivoabsessista Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 2-3 vrk. -> Beta-hemolyyttinen streptokokki -> Hyvin pieniä kuperia, hemolysoimattomia pesäkkeitä
Näyte 4/2012 Märkää aivoabsessista Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 4-5 vrk. -> Beta-hemolyyttinen streptokokki -> Hyvin pieniä hemolysoimattomia pesäkkeitä
Näyte 4/2012 Märkää aivoabsessista Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA) 2 vrk, +35 C. Ei selvää estorengasta metronidatsolikiekon ympärillä, mutta maljalla kasvaa kolme erilaista pesäkettä. Niistä yksi, maljan värinen, ei kasva aerobiviljelmissä veri- ja suklaamaljoilla!!
Näyte 4/2012 Märkää aivoabsessista 3 2 1 Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA) 4-5 vrk, +35 C. Ainakin kolme erilaista pesäkettä! Mikä niistä on anaerobi?
Näyte 4/2012. Aerotolenranssitesti (4 vrk, +35 C) 1 2 3 Verimalja: aerobikasvu Aerotoleranssitestin tulokset: Suklaamalja: mikroaerofiilinen (5% CO 2 ) kasvu Anaerobiverimalja (FAA): Anaerobikasvu 1. Vm+, Sm+, An-vm (FAA)+ ->Aerobi ja vaihtoehtoisesti anaerobinen bakteeri. 2. Vm+, Sm+, An-vm (FAA)+ ->Aerobi ja vaihtoehtoisesti anaerobinen bakteeri. 3. Vm-, Sm- ja vain An-vm (FAA)+ ->Anaerobinen bakteeri
Näyte 4/2012. Gram-värjäyslöydökset 1 2 3 Yhteenveto aerotoleranssitestin ja gramvärjäyksen tuloksista: 1. Aerobi ja vaihtoehtoisesti anaerobinen alfa-hemolyyttinen streptokokki. Grampositiivinen ketjukokki. 2. Aerobi ja vaihtoehtoisesti anaerobinen grampositiivinen (haaroittuva) itiötön sauva (Actinomyces-laji?) 3. Anaerobinen grampositiivinen iso kokkibakteeri (F magna?)
Näyte 4/2012. 1. Beta-hemolyyttinen streptokokki, ryhmä F (Streptococcus constellatus) Streptokokkilatex-agglutinaatio F+ G - Pienipesäkeinen betahemolyyttinen streptokokki verimaljalla Gram+ketjukokki
Näyte 4/2012. Streptococcus constellatus + - -, - - +, - - -, - + -, + - -, - + + -, - - -, - - -, + - -, + - -, - Rapid ID 32 STREP 14023001110 Streptococcus constellatus 99,9 %
Streptococcus anginosus-ryhmä Entinen Streptococcus milleri-ryhmä S intermedius, S constellatus ja S anginosus Beta-, alfa- tai ei-hemolyyttisiä streptokokkeja Voivat olla A-,C-,F- tai G-ryhmän beta-hem streptok.! Pienipesäkkeisiä. Toffeekaramellin hajuisia. Kuuluvat ylähengitysteiden normaaliin flooraan Suosivat yhteiseloa anaerobien kanssa: absessit (hampaat, keuhkot, aivot, ym.), keuhkoempyemat (märkäkeräymät), yms. Bakteremioita -> Sydämen sisäkalvon ja läppien infektiot, luu- j nivelinfektiot, jne.
Näyte 4/2012 2. Actinomyces odontolyticus 2 vrk 2 vrk 4 vrk Puhdasviljely lampaanveri- ja suklaamaljoille (5% CO 2, +35 C) ja anaerobiselle verimaljalle (FAA, anaerobinen inkubaatio, +35 C ), 2-4 vrk. Hidas, pienipesäkkeinen kasvu. Paras kasvu anaerobisesti. Kuperia, kiiltäviä vaalean harmaita pesäkkeitä.
Näyte 4/2012 Actinomyces odontolyticus + + -, + + +, - - +, - - +, - - +,+ - - RapID CB Plus Actinomyces odontolyticus 3744410 (97 %)
Actinomyces odontolyticus Yhteenveto Actinomyces odontolyticus kuuluu suun normaaliin flooraan, josta käsin se voi olla mukana nenän sivuonteloiden ja keuhkojen sekainfektioissa, jopa aivoabsesseissa. Actinomyces-suvun bakteerien tavoin se kasvaa veripitoisilla maljoilla mutta paremmin anaerobisti kuin mikroaerofiilisesti (5% CO 2 ) tai aerobisti. (Vrt näytteessä 3 oleva aerobi aktinomykeetti: Actinomadura madurae) Actinomyces-lajit ovat metronidatsolille resistenttejä. A odontolyticus: lyhyt grampositiivinen itiötön sauva. Lajitunnistus kaupallisilla biologisilla testeillä kohtalaisen hyvin. Tarkempi lajitunnistus geenitekniikalla.
Näyte 4/2012. 3. Finegoldia magna Gram-värjäys: Iso gramposit kokki Anaerobiverimalja (FAA) 3-4 vrk: Pieni (0,5-1 mm), maljanvärinen, tarkkarajainen kokkipesäke Katalaasi: Negat (ei kuohu) Pikaindoli: Negat (väritön)
Näyte 4/2012. Finegoldia magna Anaerobien identifikaatiotesti (AI) Kanamysiini (1000 µg): Vankomysiini (5 µg): Kolistiini (10 µg): SPS S S R R Lisäksi maljan alaosassa: Metronidatsoli (5 µg): S
Näyte 4/2012. Finegoldia magna - - -, - - -, - - -, - + +, - + +, + + - RapID ANA II: 000663 Finegoldia magna (99,9 %)
Näyte 4/2012. Finegoldia magna (Entinen Peptostreptococcus magnus) Yhteenveto diagnostisista testeistä Ehdottomasti anaerobinen Iso grampositiivinen kokki Anaerobiverimaljalla pieni, maljanvärinen kokkipesäke Katalaasi negat Pikaindoli negat Anaerobien identifikaatiotesti (AI): Ka S, Va S, Ko R, Sps R. Lajitunnistus kaupallisilla tunnistustesteillä toimii. Ei kasva BBE:llä, ei kasva KVLB:llä. Lipaasi negat ja lesitinaasi negat
Kevätrentukoita rantakarikkeessa