KONTROLLIKIRJASTO. Anita Naukkarinen ylisolubiologi kliinisen patologian yksikkö KYS-Kuvantamiskeskus

Transkriptio

1 IMMUNOHISTOKEMIAN KONTROLLIKIRJASTO Anita Naukkarinen ylisolubiologi kliinisen patologian yksikkö KYS-Kuvantamiskeskus

2 KONTROLLIEN MERKITYS KONTROLLEILLA VARMENNETAAN IMMUNOHISTOKEMIALLISISSA VÄRJÄYKSISSÄ: SPESIFISYYTTÄ EI VÄÄRÄÄ POSITIIVISTA TULOSTA HERKKYYTTÄ EI VÄÄRÄÄ NEGATIIVISTA TULOSTA

3 VÄÄRÄ POSITIIVINEN TULOS TAUSTAVÄRJÄYTYMISEN Ä SYITÄ: AG-spesifin AB:n epäpuhtaus, liian suuri pitoisuus, inkubaatioaika, lt Liian voimakas esikäsittely Varaukselliset kudososat normaaliseerumi Endogeeninen leimamolekyyli läsnä PEROKSIDAASI H 2 O 2 ALKAALINEN FOSFATAASI LEVAMISOLE BIOTIINI BLOKKAUS, POLYMEERIMETODI Inkubaatio kromogeenissa Riittämättömät pesut Nekroottinen, autolyyttinen kudos

4 OIKEA POSITIIVINEN TULOS VÄÄRÄSSÄ PAIKASSA SPESIFI TAUSTA Antigeenia on kudoksessa muuallakin kuin mistä haluamme sen identifioida Hankalat esimerkit: κ, λ, immunoglobuliinit Tuma-antigeeneja antigeeneja voi olla myös sytoplasmassa tai värjäyksen lopputuotetta voi diffundoitua sinne (esim. ER, PR, cyclin D1)

5 TUMAPOSITIIVISUUTTA SYTOPLASMASSA ER - OK ER - TAUSTAA

6 VÄÄRÄ NEGATIIVINEN TULOS SYITÄ: Riittämätön/väärä/liiallinen fiksaatio Jokin reagenssi puuttuu tai sen pitoisuus on liian alhainen AG-spesifi AB on huono, liian laimea, sen inkubaatioaika, -lt Riittämätön/väärä esikäsittely Kromogeeni liukenee käytettyihin liuottimiin Detektiosysteemi ei ole tarpeeksi herkkä

7 ESIKÄSITTELYN VAIKUTUS TTF-1 (1:200) MW: sitraatti, ph 6 MW: EDTA, ph 8

8 POSITIIVINEN KONTROLLI = TUTKITTAVAA ANTIGEENIA TUNNETUSTI SISÄLTÄVÄ KUDOS IDEAALI: Sisäinen kontrolli tai muu kudos, joka on prosessoitu ja esikäsitelty identtisesti tutkittavan kudoksen kanssa omat in house kontrollit parhaita MENETTELYTAPOJA: Positiivinen kontrollileike samalla lasilla tutkittavan leikkeen kanssa 1 positiivinen kontrolli/tutkittava AG värjäyssarjassa Positiivista kontrollia käytetään aina, kun jokin komponentti värjäysjärjestelmässä muuttuu

9 POSITIIVINEN KONTROLLI JA NÄYTE SAMALLA LASILLA ESTROGEENI- JA PROGESTERONIRESEPTORIVÄRJÄYKSET

10 NEGATIIVINEN KONTROLLI OPTIMAALINEN NEGATIIVINEN KONTROLLI ON KÄSITELTY IDENTTISESTI TUTKITTAVAN NÄYTTEEN KANSSA VAIHTOEHTOJA: Kudos,,joka ei sisällä tutkittavaa antigeenia Tutkittavassa näytteessä AG-spesifi AB korvataan puskurilla tai Ig:lla (Absorptiokontrolli = AG-spesifi AB absorboidaan puhdistetulla AG:lla)

11 MONIKUDOSBLOKIT KONTROLLEINA MONIKUDOSBLOKKI TOIMII SEKÄ POSITIIVISENA ETTÄ NEGATIIVISENA KONTROLLINA MONIKUDOSBLOKKEJA VOI RAKENNELLA ERI TAVOIN ERI VÄRJÄYKSILLE SOPIVAKSI (Sören Nielsenin esimerkkejä): MB1: UMPILISÄKE, MAKSA, NIELURISA, HAIMA MB2: AIVO, POIKKIJUOVAINEN LIHAS, IHO, MELANOMA MB3: KEUHKO, ETURAUHANEN, ISTUKKA, KILPIRAUHANEN MB4: KATEENKORVA, HODGKININ LYMFOOMA, LUUYDIN, NIELURISA ERINOMAISIA VASTA-AINEEN TESTAUKSESSA MONIKUDOSBLOKIN NÄYTTEET OVAT ERI AIKOINA JA MAHDOLLISESTI ERI TAVOIN FIKSOITUJA JA PROSESSOITUJA

12 MONIKUDOSBLOKIT Tarja Kauppinen, ISY, 2010

13 MUITA KONTROLLEJA Solulinjakontrollit voivat olla positiivisia tai negatiivisia kontrolleja kaupallisesti saatavissa Fiksaation kontrollointi: vimentiini klooni 9 tunnistaa epitoopin, joka on herkkä formaldehydille (Battifora 1991) Immunoautomaatin lämpölevyn lt:n kontrollilasit (Ventana) Laaduntarkkailukierrokset kontrollilaseineen

14 POSITIIVISIA KONTROLLEJA Tonsilla (nielurisa) sopii kontrolliksi mm.: CD1a, CD3, CD4, CD8, CD20, CD23, CD43, CD45 CD57, CD79a CD31, F8 CD138, MUM1 CD68, lysotsyymi, syy α-1-antitrypsiini a κ, λ, immunoglobuliinit Ki-67 Pansytokeratiini, HMW sytokeratiini ERCC1 (excision repair cross complementing)

15 POSITIIVISIA KONTROLLEJA Haima: NSE Kromograniini Synaptofysiini Insuliini, glukagoni, somatostatiini Haiman polypeptidi Maksa: Pansytokeratiini LMW sytokeratiini Hepatosyytti-AB Sikiön maksa: AFP

16 POSITIIVISIA KONTROLLEJA Lihas: Desmiini, SMA, SMM Dystrofiinit Spektriini Sarkoglykaanit Emeriini Dysferliini Aivo: GFAP Neurofilamentti MAP-2 Hu, NeuN Prostata: PSA p63 AMACR HMW sytokeratiini androgeenireseptori Istukka: PLAP HCG EGFR Inhibiini

17 POSITIIVISIA KONTROLLEJA Normaalikudosten sijaan on useissa diagnostiikan immunohistokemiallisissa värjäyksissä käytettävä kasvainkudosta tai muuten patologista kudosta kontrollina Esimerkkejä: Alzheimerin taudissa AT8 ja β-amyloidi aivojen hippocampuksessa p53 useissa syövissä, esim. GI-kanavan adenoca WT1 Wilmsin tuumorissa ja synoviaalisarkoomassa CD5 ja CYCD1 manttelisolulymfoomassa

18 SUOMALAISET KONTROLLIT KYSELYYNI VASTASI 4 YO-SAIRAALAN JA 4 KESKUS- SAIRAALAN PATOLOGIAN LABORATORIOTA VÄRJÄYKSIÄ VUOSITTAIN POSITIIVISIA KONTROLLEJA LEIKATAAN VARASTOON 2-8 VIIKOKSI 2 LABRAA SÄILYTTÄÄ KONTROLLILASEJA JÄÄKAAPISSA KONTROLLIEN ETSIMINEN LEIKKAAMINEN JA KONTROLLIEN ETSIMINEN, LEIKKAAMINEN JA VARASTOINTI VIE LABROILTA 10-25% IMMUNOHISTO- KEMIAAN KÄYTETTÄVÄSTÄ AJASTA

19 SUOMALAISET KONTROLLIT IMMUNOPEROKSIDAASIVÄRJÄYKSET KAIKKI TEKEVÄT VÄRJÄYKSET KONEESSA KAIKKI KÄYTTÄVÄT POSITIIVISIA KONTROLLEJA 2 LABRAA KÄYTTÄÄ MONIKUDOSBLOKKEJA SEKÄ POSITIIVISINA ETTÄ NEGATIIVISINA KONTROLLEINA, LISÄKSI YKSITTÄISIÄ LEIKKEITÄ 2 LABRALLA ON POSITIIVINEN KONTROLLILEIKE JÄRJESTELMÄLLISESTI JOKA LASILLA 4 LABRAA KONTROLLOI YKSITTÄISILLÄ POSITIIVISILLA LEIKKEILLÄ, USEIN 1 KONTROLLI/AG VÄRJÄYSSARJASSA 3 LABRAA KÄYTTÄÄ VARSINAISIA NEGATIIVISIA KONTROLLILEIKKEITÄ

20 SUOMALAISET KONTROLLIT IMMUNOFLUORESENSSIVÄRJÄYKSET SUORIA IF-VÄRJÄYKSIÄ TEKEE 6 LABORATORIOTA, JOISTA TÄYSIN KONEELLISESTI 2 POLYVALENTTISEN (α-iga+igg+igm+κ+λ) AB:N LISÄKSI POSITIIVISIA KONTROLLEJA EI KÄYTETÄ

21 KONTROLLIKIRJASTO Kontrollikirjasto tarkoittaa systemaattista värjäyskontrollien kirjanpitoa, kontrollimateriaalin etsintää ja sen järjestyksessä säilyttämistä sekä kontrollien käytön ajan tasalla pitämistä jatkuvalla päivityksellä Täysin systematisoitua kontrollikirjastoa ei laboratorioillamme ole Tarvitaan hyvä ätietokoneohjelma t (esim. Filemaker) ja resurssit systeemin luomiseksi ja ylläpitämiseksi

22 KIITOKSET! Pirkko Hirsimäki Mervi Jumppanen Marja Kangasniemi Mia Kero Antero Laasonen Minnamaija Lintunen Reino Pitkänen Leena Salmelainen Timo Väisänen