BAL-menetelmä: laboratorion näkökulma. OYS Patologian osasto Sytologian laboratorio Leena Seppälä 2017

Transkriptio

1 BAL-menetelmä: laboratorion näkökulma OYS Patologian osasto Sytologian laboratorio Leena Seppälä 2017

2 Keuhkohuuhtelunäytteiden määrä huuhtelunäytettä, joista 58 oli ns. asbesti-balleja - Pneumocystis jirovecii pyyntöjä oli 118, joista positiivisia oli 4 (+1)

3 Näytteitä lähettävät: Bronkoskopia (os.40 alaisuudessa) Teho I Korvaleikkaussali Oulaskankaan keuhkopkl

4 Näytteen laatu: Tuore fiksoimaton keuhkohuuhtelunäyte Jos näyte on tartuntavaarallinen, se otetaan 70%:n alkoholiin 1:1

5 Näytteen kuljetus: muovinen näytepullo jäämurskan sekaan kuljetusastiaan toimitetaan välittömästi lähetin mukana sytologian laboratorioon mukana Weblab-pyyntö/lähete

6 Pyyntö/lähete Lähetteessä tulee olla: ongelman määrittely onko aikaisemmin tehty Baltutkimusta erityistoivomukset huuhtelupaikat, -määrät ja saaliit huuhtelun suorittamiseen liittyvät ongelmat tiedot potilaan tupakoinnista

7 Ilman erillistä pyyntöä tehtävät TUTKIMUKSET (Bl-BAL-1) solujen kokonaismäärä elävien solujen osuus (viabiliteetti) lieriöepiteelisolujen osuus (bronkuskontaminaatio) tulehdussolujen jakauma (erittelylaskenta), MGG ja papa esitarkastajan arviointi näytteestä Patologin lausunto

8 Eri pyynnöstä esim. asbestikappaleiden osoittaminen pneumocystis jiroveciin osoittaminen (oma lähete) CD4,CD8 (flow-sytometria) CMV PAS,PASM ORO

9 Näytteen käsittely Punnitaan näyte: - kokonaismäärä millilitroina lähetteeseen (vähennetään muovipullon paino pois) Sekoitetaan näyte huolella, mutta varoen, ennen näytteen käsittelyä

10 Pipetoidaan: -Trypan Blue-väriä 100 µl µl näytettä (ei alkoholifiksoidusta näytteestä) -2 ml 96% etanolia + 2 ml näytettä (toinen 2+2 varalle) -yksi 4 ml putki tuorenäytettä sytospin-valmisteita varten (asb.määritystä varten 2x5 ml+5 ml)

11 Kokonaissolumäärän laskeminen Trypan Blue-värjäyksestä annetaan värin vaikuttaa n. 5min solulaskenta tehdään Bürkerin kammiossa

12 Bürkerin kammio Koko kammio = 3 x3 A-ruutua Yksi A-ruutu = 16 B-ruutua A-ruutua rajaa kolminkertainen viiva, B-ruutua kaksinkertainen viiva

13 Solujen laskeminen A-ruudusta lasketaan ruudun sisällä olevien solujen lisäksi A- ruudun ylä- ja vasemmalla rajalla olevat solut (tummat solut). Ala- ja oikealla rajalla olevat solut (vaaleat solut) jätetään laskematta.

14 Kammiosta lasketaan elävät (värittömät) ja kuolleet (siniset) solut 10:sta A-ruudusta (ei punasoluja) Tulos: 2x elävien ja kuolleiden solujen lukumäärä = solumäärä x E6/l - samalla lasketaan elävien solujen %-osuus (=elävien solujen määrä/kokonaissolumääräx100)

15 Fiksoimattomasta näytteestä Tehdään sytospin-valmisteita eri värjäyksiä varten, määrä solurikkauden mukaan: Solumäärät: alle 100 pipetoidaan 400 µl pipetoidaan 200 µl pipetoidaan 100 µl

16 Sytospinsentrifuugi ja tarvittavaa välineistöä

17 BAL-NÄYTTEEN SYTOLOGISEEN TUTKIMUKSEEN KUULUU: o Solutyyppien erittelylaskenta o Vierasesinepartikkeileiden tai mikrobien tunnistus o Maligniteettiluokka Nämä tehdään sekä fiksoimattomasta että fiksoidusta näytteestä

18 - Fiksoimattomasta näytteestä VÄRJÄTÄÄN May-Grünwad-Giemsa Näytteestä lasketaan 200 solua ja solumäärä ilmoitetaan täysinä prosenttilukuina tulehdussolujen jakauma (%) lieriöepiteelisolujen osuus (%) sekä annetaan sytologinen arvio Berliininsinivärjäys Muu pyydetty värjäys (PAS, PASM jne.)

19

20 Alkoholifiksoidusta näytteestä tehdään sytotek-valmiste, joista värjätään pääsääntöisesti Papanicolaou (2 ml+2 ml) lieriöepiteelisolujen osuus tulehdussolujen jakauma sytologinen arvio

21

22 ASBESTI-BAL (Bl-BAL-2) Berliininsinivärjäystä varten: - Fiksoimattomasta näytteestä tehdään sytospin-valmisteita (4x400 µl) - Fiksoidusta näytteestä (2x5 ml näytettä+5 ml alkoholia) tehdään sytotek-valmisteita - Asbestikappaleiden määrä lasketaan kaikilta värjätyiltä valmisteilta ja ilmoitetaan kpl/11.6ml näytettä

23

24 Pneumocystis jirovecii-määritys BAL-näytteestä ( -PncaVr) Tuoreesta tai tartuntavaarallisen näytteen kyseessä ollessa alkoholifiksoidusta näytteestä tehdään 8 sytospin-valmistetta. - 2 lasia värjätään MGG:lla - 6 lasia + positiivinen kontrolli värjätään Methenamiinihopeavärjäyksellä

25

26

27 Esitarkastaja katsoo näytelasit ja antaa oman arvionsa näytteistä Patologi antaa lopullisen lausunnon näytteistä sytologisten tutkimusten valmistuttua

28 BAL-näytteen haasteet laboratoriolle - Bal-näyte keskeyttää muut työt - Tuorenäyte - Veriset näytteet haasteellisia - Vaatii päivystysvalmiuden, syto, histo, patologi (klo ) - Erikoispöydän työntekijän hallittava pneumocystiksen värjääminen - Pienet erittäin hennot asbestikappaleet