Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 4/2011 Kuvat ja teksti: Markku Koskela Mikrobiologian ylilääkäri OYS, Oulu Huom! Käyttäkää yläpalkin suurennusmahdollisuutta 100-400% pesäkekasvun yms. yksityiskohtia tarkastellessanne!!!!
Näyte 13/2011 Puremahaava. Eläimen purema. Löydös: Pasteurella multocida, patogeeni Tehtävät: Bakteerin eristäminen, tunnistaminen ja mikrobilääkeherkkyysmääritys
Näyte 13 / 2011. Puremahaava Oksidaasi+ Viljely lampaanverimaljalle 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk -> Isoja harmaita, kuperia ja limaisia sauvapesäkkeitä, jotka ovat oksidaasi +
Näyte 13 / 2011. Puremahaava Lyhyt gram-sauva Viljely suklaamaljalle 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk -> Harmaita, kuperia, limaisia sauvapesäkkeitä.
Näyte 13 / 2011. Pasteurella multocida - - -, + + -, + + +, - + + RapID NH 0376 Pasteurella multocida 99,9 %
Näyte 14/2011 Eritettä vuotavasta välikorvan ilmastointiputkesta. Kolmevuotiaan lapsen toistuva välikorvatulehdus. Oletettu löydös: Korvakäytävän normaalia flooraa, jossa Streptococcus pneumoniae eli pneumokokki. Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tulosten tulkinta
Näyte 14/2011 Primaariviljely Välikorvaerite Viljely lampaanverimaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. ->Pieniä ja suurempia alfa-hemolyyttisiä streptokokkipesäkkeitä sekä keskisuuria, matalia, valkoisia ja kiiltäviä stafylokokkipesäkkeitä. Optokiinikiekosta ei ole diagnostista hyötyä, koska runsaana kasvava stafylokokki peittää sen ympäristön.
Näyte 14/2011 Primaariviljely Välikorvaerite Viljely lampaanverimaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. ->Pieniä vaaleapesäkkeisiä ja suurempia ruskeapesäkkeisiä alfahemolyyttisiä streptokokkeja stafylokokkipesäkkeiden joukossa.
Näyte 14/2011 Primaariviljely Välikorvaerite Viljely suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. ->Pieniä ja suurempia alfahemolyyttisiä streptokokkipesäkkeitä ja valkoisia stafylokokkipesäkkeitä.
Näyte 13/2011. Pneumokokki Gram+ Optokiinille herkkä (kasvun estorengas) alfa-hemolyyttinen streptokokki eli pneumokokki. ( 1 vrk, +35 C). diplokokki Löydöksen tulkinta: välikorvatulehduksen aiheuttaja
Näyte 13/2011. Streptococcus viridans Optokiinille resistentti (ei kasvun estorengasta) alfa-hemolyyttinen streptokokki. ( 1 vrk, +35 C). Gram+ ketjukokki Löydöksen tulkinta: korvakäytävän normaalia flooraa
Näyte 14/2011 Koagulaasinegatiivinen stafylokokki (Staphylococcus warneri) 1 2 Stafylokokkien Verimaljakasvu 2 vrk. Matalia, valkoisia, kiiltäviä stafylokokkipesäkkeitä. latex-agglutinaatiotesti: 1. Negat (S warneri) 2. Posit (S aureus) Löydöksen tulkinta: korvakäytävän normaalia flooraa
Näyte 15/2011 Kudosnäyte hitaasti paranevasta vadelmapensaan raapaisun aiheuttamasta käden haavasta 48-vuotaalla naisella Löydös: Mycobacterium abscessus, patogeeni. Tehtävät: Bakteerin eristäminen ja tunnistaminen.
Näyte 15/2011 Aerobinen primaariviljely Kudosnäyte käden haavasta 1 vrk 2 vrk Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. -> Hento, juuri näkyvä, harmaan valkoinen kasvu
Näyte 15/2011 Aerobinen primaariviljely Kudosnäyte käden haavasta Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 3-5 vrk. -> Harmaita, kiiltäviä, opalisoivia, vaihtelevan kokoisia pesäkkeitä
Näyte 15/2011. Anaerobinen primaariviljely Kudosnäyte käden haavasta Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA) 2-5 vrk, +35 C. Ei kasvua ts. näytteestä kasvaa obligatorisesti (ehdottomasti) aerobi bakteeri
Näyte 15/2011. Mycobacterium abscessus Gram-värjäys: Vahamaisen pintansa vuoksi huonosti värjääntyvä, epämääräinen gram+/- sauva
Näyte 15/2011. Mycobacterium abscessus Mykobakteerien akridiinioranssivärjäys ja UV-mikroskopointi: Ohuita haponkestäviä, oranssin värisenä fluoressoivia sauvoja Mykobakteerien Ziehl-Neelsen värjäys ja valomikroskopointi: ohuita haponkestäviä, punaisia sauvoja vihreää taustaa vasten
Näyte 15/2011. Mycobacterium abscessus Lajitunnistus mykobakteerien lajispesifisellä PCR-testillä -> Mycobacterium abscessus Lajitunnistus bakteerien DNA-sekvennoinnilla ->Mycobacterium abscessus 99,9% Tällainen bakteeri pitää aina lähettää lajitunnistusta varten sellaiseen referenssilaboratorioon, jolla on bakteerien DNA-sekvennointi käytössä ja tarpeeksi kokemusta sen toimivuudesta!!
Näyte 15/2011. Mycobacterium abscessus Ei tuberkuloosia aiheuttava mykobakteeri eli NTM. Nopeasti (eli alle 7 vrk:ssa) kasvava mykobakteeri Kuuluu M chelonei/m abscessus-ryhmään Esiintyy maaperässä, vedessä, kasveissa. Voi aiheuttaa ihoinfektioita perusterveelle ihmiselle. Infektion taustalla ihorikkeymä tai trauma kuten risun tai piikkisen pensaan pisto. Mikrobiologinen lab dg: infektoituneesta kudoksesta tai märkäeritteestä tehty viljely ja siinä kasvaneen bakteerin lajitunnistus. Mikrobilääkkeet:tobramysiini, imipeneemi, klaritromysiini. Huom! Lääkäri voi pyytää näytteestä vain tavallinen bakteeriviljelyn! Laboratorion tulee tutkia viljelylöydös kunnolla lajitasolle eikä vastata löydöstä esim. difteroidina!
Näyte 16/2011 Punktionäyte 53-vuotiaan miehen keuhkoempyemasta Löydökset: Beta-hemolyyttinen streptokokki, ryhmä F (Streptococcus anginosus), Fusobacterium nucleatum ja Finegoldia magna, kaikki patogeeneja Tehtävät: Bakteerien eristäminen ja tunnistaminen. Tulosten tulkinta.
Näyte 16/2011 Näytteen gram-värjäys Märkää keuhkoempyeemasta Isoja ja pieniä grampositiivisia kokkibakteereita ja neulasmaisia gramnegatiivisia sauvabakteereita. Lisäksi värjäysartefaktaa.
Näyte 16/2011 Aerobinen primaariviljely Märkää keuhkoempyeemasta Viljely lampaanveri- ja suklaamaljalle, 5% CO 2, +35 C, 1-2 vrk. -> Pienipesäkkeinen beta-hemolyyttinen streptokokki
Näyte 16/2011. Beta-hemolyyttinen streptokokki, ryhmä F (Streptococcus anginosus) Beta-hem streptokokkien ryhmämääritys latex-agglutinaatiolla F + C - Pienipesäkkeinen betahemolyyttinen streptokokki verimaljalla Gram+ketjukokki
Näyte 16/2011. Streptococcus anginosus + + -, - - +, - - -, - + -, + - -, - + + +, - - -, - - -, + - -, + - -, - Rapid ID 32 STREP 34027001110 Streptococcus anginosus 93,9 %
Streptococcus anginosus-ryhmä (Ent. Streptococcus milleri-ryhmä) S intermedius, S constellatus ja S anginosus Beta-, alfa- tai ei-hemolyyttisiä streptokokkeja Voivat olla A-,C-,F- tai G-ryhmän beta-hem streptok.! Pienipesäkkeisiä! Toffeekaramellin hajuisia. Kuuluvat ylähengitysteiden normaaliin flooraan Suosivat yhteiseloa anaerobien kanssa: absessit (hampaat, keuhkot, aivot, ym), keuhkoempyemat (märkäkeräymät), yms. Bakteremioita ->Sydämen sisäkalvon ja läppien infektiot, luu- ja nivelinfektiot, jne.
Näyte 16/2011. Anaerobinen primaariviljely Märkää keuhkoempyemasta Anaerobiviljely anaerobiverimaljalla (FAA), 2 vrk, +35 C. Hahmotettavissa oleva estorengas metronidatsolikiekon ympärillä. Anaerobit kasvavat sen ulkopuolella: Kellertäviä kuperia pesäkkeitä Pieniä maljanvärisiä pesäkk. Aerobi ja vaihtoehtoisesti anaerobi beta-hemolyyttinen streptokokki kasvaa anaerobisti koko maljalla
Näyte 16/2011. Anaerobinen primaariviljely FAA-maljakasvu, 2 vrk 1) Iso beta-hemolyyttinen kokkipesäke 2) Kupera, kellertävä pesäke 3) Pieni maljanvärinen pesäke Kaikista: 1. Aerotoleranssitesti 2. Gramvärjäys
Näyte 16/2011. Anaerobinen primaariviljely FAA-maljan jatkoinkubaatio ad 5-7 vrk 1. Valkoinen streptokokkipesäke Metronidatsolikiekon estorenkaan raja 2. Kupera kellertävä pesäke 3. Pieni maljanvärinen pesäke
Näyte 16/2011. Anaerobinen primaariviljely selektiivisillä BBE- ja NV- / KVLB-maljoilla BBE:llä ei kasvua 2-7 vrk:ssa ->Ei Bacteroides fragilis-ryhmän anaerobeja NV / KVLB-maljalla ei kasvua 2-7 vrk:ssa ->Ei Prevotellojen tai Porphyromonasten tyyppisiä anaerobeja
Näyte 16/2011. Anaerobinen primaariviljely EYA-maljalla 2-7 vrk Tavallista pesäkekasvua. Lipaasi negat (pesäkkeiden reunat eivät ole öljymäisiä) Lesitinaasi negat (ei maitomaista samentumaa)
Näyte 16/2011. Anaerobinen primaariviljely grampositiivisia suosivalla PEA-maljalla 2-3 vrk 5-7 vrk Isoja ja pieniä kokkipesäkkeitä. Gramnegatiiviset bakteerit eivät kasva. Myös näistä pesäkkeistä tehtäisiin gramvärjäys ja aerotoleranssitesti.
Näyte 16/2011. Aerotolenranssitesti (2 vrk, +35 C) 1 1 1 2 2 2 3 3 3 Aerobi verimalja Aerobi (5% CO 2 ) suklaamalja Anaerobiverimalja Primaarilta aerobiverimaljalta poimittujen bakteerien aerotoleranssitulokset: 1. Kasvaa kaikilla maljoilla: Aerobi beta-hemolyyttinen streptokokki, joka kasvaa myös anaerobisti. 2. Anaerobi maljanvärinen bakteeri, joka ei kasva aerobisti. 3. Anaerobi kellertäväpesäkkeinen bakteeri, joka ei kasva aerobisti
Näyte 16/2011. Aerotolenranssitestattujen bakteerien pesäkevärjäykset 1. Tavallisen kokoinen grampositiivinen ketjukokki ->tavall. streptokokki 2. Iso grampositiivinen kokki ->Finegoldia magna? 3. Pitkä neulasmainen gramnegatiivinen sauva-> Fusobacterium nucleatum?
Näyte 16/2011. Fusobacterium nucleatum 2-3 vrk Gram-värjäys: Ohuita neulasmaisia gramnegat sauvoja 4 vrk Anaerobiverimaljakasvu (FAA): Tarkkarajainen, kiiltävä, kellertävä pesäkekasvu. EYA-maljakasvu Lesitinaasi neg Lipaasi neg Pikaindoli: posit. (sininen)
Näyte 16/2011. Fusobacterium nucleatum Anaerobien identifikaatiotesti (A I): Kanamysiini (1000 µg) Vankomysiini (5 µg) Kolistiini (10 µg) S R S Lisäksi maljan alaosassa: Metronidatsoli (5 µg) S
Näyte 16/2011. Fusobacterium nucleatum - - -, - - -, - - -, - - -, - - -, - + + RapID ANA II: 000006 Fusobacterium nucleatum (100 %)
Näyte 16/2011. Fusobacterium nucleatum Yhteenveto diagnostisista testeistä Ehdottomasti anaerobinen Ohut, neulasmainen gramnegatiivinen sauva Anaerobiverimaljalla matala, kiiltävä kellertävä keskisuuri (1-2 mm), tarkkarajainen pesäke EYA:lla, lipaasi negat ja lesitinaasi negat Pikaindoli posit (eya-maljalta parhaiten) Anaerobien identifikaatiotesti (AI): Ka S, Va R, Ko S. Kaupallisissa tunnistustesteissä vähän posit reaktioita, lähinnä indolireaktio ja jotain muuta. Katalaasi negat Ei kasva BBE:llä, ei kasva KVLB:llä.
Näyte 16/2011. Finegoldia magna Gram-värjäys: Iso gramposit kokki Anaerobiverimalja (FAA) 3-4 vrk: Pieni (0,5-1 mm), maljanvärinen, tarkkarajainen kokkipesäke Katalaasi: Negat (ei kuohu) Pikaindoli: Negat (väritön)
Näyte 16/2011. Finegoldia magna Anaerobien identifikaatiotesti (AI) Kanamysiini (1000 µg): Vankomysiini (5 µg): Kolistiini (10 µg): SPS S S R R Lisäksi maljan alaosassa: Metronidatsoli (5 µg): S
Näyte 16/2011. Finegoldia magna - - -, - - -, - - -, - + +, - + +, + + - RapID ANA II: 000663 Finegoldia magna (99,9 %)
Näyte 16/2011. Finegoldia magna (Entinen Peptostreptococcus magnus) Yhteenveto diagnostisista testeistä Ehdottomasti anaerobinen Iso grampositiivinen kokki Anaerobiverimaljalla pieni, maljan värinen kokkipesäke Katalaasi negat Pikaindoli negat Anaerobien identifikaatiotesti (AI): Ka S, Va S, Ko R, Sps R. Lajitunnistus kaupallisilla tunnistustesteillä toimii. Ei kasva BBE:llä, ei kasva KVLB:llä. Lipaasi negat ja lesitinaasi negat
Värikästä syksyä 2011