Keliakian laboratoriodiagnostiikka

Transkriptio

1 Keliakian laboratoriodiagnostiikka Labquality Days 2016 Arno Hänninen, LT Dosentti, kliin. mikrobiol. erik. lääkäri Osastonjohtaja, autoimmuunitutkimukset TYKS Mikrobiologia ja genetiikka

2 Keliakia on tauti, jossa viljatuotteiden sisältämä valkuaisaine gluteeni aiheuttaa perimältään alttiille henkilölle ohutsuolitulehduksen, villusatrofian ja kryptahyperplasian. Vaurio korjaantuu gluteenittomalla ruokavaliolla, mutta ilmaantuu uudelleen, jos siirrytään normaaliin ruokavalioon.

3 Keliakiassa ohutsuolen limakalvo reagoi viljan gluteenille: palautuva/uusiutuva limakalvovaurio gluten on off

4 Keliakia tautina Gastrointestinaliset oireet ruuansulatusvaivat laktoosi-intoleranssi ripuli malabsorptio Extraintestinaaliset manifestaatiot verenkuvamuutokset, hypovitaminoosit, maksaentsyymien nousu, osteoporoosi, kynsi- ja hammaskiillevauriot, ihottuma (dermatitis herpetiformis), neurologiset häiriöt, infertiliteetti, suoliston lymfomat Tautiassosiaatiot Tyyppi 1 diabetes, Downin syndroma, autoimmuunityreoidiitti, IgApuutos, Sjögrenin syndrooma

5 Markku Mäki; Freiburg 2013

6 Miksi epäillä keliakiaa ilman selviä vatsaoireita? Keliakia on väestötasolla yleinen tauti Alle 50%:lla on tyypillinen taudinkuva (krooninen ripuli tai muu) Vähäoireinen / hoitamaton keliakia voi johtaa - puutostiloihin - suoliston ulkopuolisiin tautitiloihin - suolistolymfoomaan

7 Keneltä seuloa keliakiaa laboratoriotestein? Kliinisten ja laboratoriolöydösten perusteella Selittämättömät vatsaoireet Laktoosi-intoleranssi Anemia, raudan- tai folaatinpuutos Ihon ja kynsien ongelmat Väsymys, depressio, hermoston oireet Muiden sairauksien tai sukuanamneesin perusteella (vähäoireisiltakin) Eri autoimmuunitautia sairastavilta (T1 diabetes, tyreoidiitit, Sjögren) IgA-puutosta potevilta Keliakiaa sairastavien lähisukulaisilta

8 Keliakian Laboratoriodiagnostiikka Kudostransglutaminaasivasta-aineet Gliadiinipeptidivasta-aineet Endomysiumvasta-aineet Geneettiset testit (HLA-määritys)

9 EMA (endomysiumvasta-aineet)

10

11 Epäsuora immunofluoresenssivärjäys paljastaa seerumissa olevan autovasta-aineen

12 EMA (endomysiumvasta-aineet)

13 EMA (endomysiumvasta-aineet) Positiivinen seerumi värjää napanuoran verisuonen seinän uloimman kolmanneksen alueella sileälihassolujen ulkopinnan ( endomysium )

14 Endomysiumvasta-aineet tunnistavat kudostransglutaminaasia

15 Seerumin IgA-luokan kudostransglutaminaasivasta-ainetasot korreloivat dieettimuutoksiin I II III IV V I. Newly diagnosed untreated CD II. CD patients on GFD III. CD patiens during glutenchallenge IV. CD patients after gluten withdrawal V. Disease controls with normal small bowel mucosa Sulkanen et al. Gastroenterology 1998;115:

16 Transglutaminaasi- ja endomysiumvasta-aineet : keliakiadiagnostiikan kivijalka

17 Gliadiinipeptidivasta-aineet Kudostransglutaminaasi muokkaa gliadiinia Vasta-aineita syntyy deamidoitumisen synnyttämiä gliadiinipeptidejä kohtaan

18 gliadin gliadin Sollid ja Jabri: Current Opinion in Immunology 2005

19 gliadin- Sollid ja Jabri: Current Opinion in Immunology 2005

20 Gliadiinipeptidivasta-aineet 1. Kudostransglutaminaasi (ttg2) muokkaa viljan gluteenin gliadiinipeptideitä uudenlaisiksi rakenteiksi (deamidaatio) 2. Deamidoidut gliadiinipeptidit voivat olla immunogeenisiä geneettisesti alttiille henkilölle 3 Gliadiinipeptidivasta-aineet ovat usein ensimmäinen viite keliakian kehittymisestä 4. Kudostransglutaminaasivasta-aineet kehittyvät usein gliadiinipeptidivasta-aineiden jälkeen

21 Gliadiinipeptidivasta-aineet sopivat etenkin pienten lasten seulontaan

22 Keliakian laboratoriodiagnoosi

23 Keliakian geenitesti Riski sairastua keliakiaan määräytyy ihmisen HLA-geeniperimän mukaan

24 Geenitestissä monistetaan HLA-geenialue DQB1 PCR-reaktiolla ja todennetaan riskialleelit spesifisillä koettimilla DQB1-alleelit *02 ja *0302 tutkitaan monistamalla epäsymmetrisellä PCR:llä HLA-DQB1*geenistä 160 emäsparin pituinen alue, josta detektoidaan tutkittavat alleelit homogeenisesti lantanidileimatuilla koettimilla syklauksen päätyttyä. HLA-DQA1*05-alleeli tutkitaan HLA-DQB1*02-positiivisista näytteistä

25 HLA-DQB1*02 ja DQA1*05 Keliakiariskiin voimakkaasti liittyvä genotyyppi, n. 5-10% sairastuu keliakiaan. 90 % keliakiapotilaista positiivisia genotyypin suhteen.

26 HLA-DQB1*02 ja DQB1*0302 Jos tutkittava on negatiivinen HLA- DQB1*02 ja DQB1*0302 alleelien suhteen, tulos sulkee keliakian lähes kokonaan (yli 99% ) pois. DQB1*0302 löytyy pieneltä osalta (n. 5 %:lta) keliakiapotilaita.

27 Keliakian eri ilmentymismuodot ja transglutaminaasivasta-aineet Markku Mäki; Freiburg 2013

28 Ihokeliakiassa (dermatitis herpetiformis) muodostuu vasta-aineita ihon transglutaminaasia (ttg3) kohtaan. Silti ttg2 (kudos)transglutaminaasivasta-aineita käytetään diagnoosiin

29 Neuronaalinen transglutaminaasi ttg6 ja keliakian neurologiset ilmentymät

30 Epilepsia, neuropatiat ja ataksia gluteiinin aiheuttamina An autoimmune mechanism may contribute to the pathogenesis of coeliac disease, epilepsy, and cerebral calcifications, with serum TG6 autoantibodies and neuronal antibodies found in this case. Johnson et al. Developmental Medicine & Child Neurology 2012

31 Gluteiinisensitiivinen ataksia ja ttg6 vasta-aineet Gluten ataxia can be defined as idiopathic sporadic ataxia and positive serum antigliadin antibodies even in the absence of duodenal enteropathy. One study has identified a novel transglutaminase (ttg6) as a potential new serological marker for gluten ataxia, ttg6-vasta-aineita ja niiden testausta ei ole toistaseksi validoitu neuro keliakian diagnostiikassa but currently the most appropriate definition for gluten ataxia remains that of idiopathic sporadic ataxia with positive AGA ttg2-vasta-aineet ja ataksia oireena riittävät diagnoosiin Ludvigsson et al. The Oslo definitions for coeliac disease and related terms Gut 2013;62:43-52

32 Keliakiadiagnoosi perustuu edelleen kudosnäytteeseen ohutsuolesta

33 Keliakiadiagnoosi perustuu edelleen kudosnäytteeseen ohutsuolesta

34 Laboratoriotestien asema keliakiadiagnostiikassa?

35 Laboratoriotestien asema keliakiadiagnostiikassa: seulontatestinä ennen ohutsuolinäytettä

36 Laboratoriotestien osuvuus suhteessa biopsialla varmennettuun keliakiaan

37 Transglutaminaasivasta-ainetaso korreloi keliakian todennäköisyyden kanssa Von Hauner; Freiburg 2013

38 Lapsipotilaiden kohdalla diagnoosin kriteerit ovat erilaiset

39 Lapsilla biopsianäytteen otto ei ole ehdoton edellytys keliakiadiagnoosille Children and adolescents with the otherwise unexplained symptoms and signs of chronic or intermittent diarrhoea, failure to thrive, weight loss, stunted growth, delayed puberty, amenorrhoea, iron-deficiency anaemia, nausea or vomiting, chronic abdominal pain, cramping or distension, chronic constipation, chronic fatigue, recurrent aphthous stomatitis (mouth ulcers), dermatitis herpetiformis like rash, fracture with inadequate traumas/osteopenia/osteoporosis, and abnormal liver biochemistry. In this group, the diagnosis of CD is based on symptoms, positive serology, and histology that is consistent with CD. If immunoglobulin A anti-tissue transglutaminase type 2 antibody titers are high (>10 times the upper limit of normal), then the option is to diagnose CD without duodenal biopsies by applying a strict protocol with further laboratory tests. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition Issue: Volume 54(1), January 2012, p

40 Keliakian laboratoriodiagnostiikan kulmakivet Testataan oireisia ja riskiryhmiä (Koko väestön seulonta ei ole järkevää) Tärkeimmät testit: Kudostransglutaminaasi-IgA vasta-aineet Endomysiumvasta-aineet Seerumin Ig A pitoisuus: jos matala, niin ttg-igg-testaus Geneettinen testaus täydentää diagnostiikkaa etenkin keliakiariskin poissulkemisessa Gliadiinipeptidivasta-aineet soveltuvat etenkin pikkulasten testaukseen

41 Keliakian laboratoriodiagnostiikan kulmakivet Preanalytiikka: Näyte otettava gluteenipitoisen ruokavalion aikana Menetelmä(t): Käytettävät menetelmät on validoitava ja laatua kontrolloitava: Laadunvalvontakierrokset, referenssiseerumit, sisäinen laaduntarkkailu Laboratorion käyttämä menetelmä ja sen viitearvot tulee olla saatavilla Tulosten vastaaminen ja tulkinta: Laboratoriovastaukset tulee ilmoittaa kvantitatiivisina (ei pos. tai neg.!!) IgA-puutos: IgA pitoisuus määritettävä, jos IgA-luokan vasta-ainetestit negatiiviset

42 Kiitos