!111!1119!
|
|
- Niilo Korhonen
- 8 vuotta sitten
- Katselukertoja:
Transkriptio
1 !111!1119! (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI B SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus Patent- och registerstyrelsen (73) Haltija - Innehavare (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 A 61K 39/02, 39/09, 31/70 (21) Patenttihakemus - Patentansökning (22) Hakemispäivå - Ansökningsdag (24) Alkupäivä - Löpdag (41) Tullut julkiseksi - Blivit offentlig (32) (33) (31) Etuoikeus - Prioritet US P 1. American Cyanamid Company, One Cyanamid Plaza, Wayne, NJ 07470, USA, (US) (72) Keksijä - Uppfinnare 1. Porro, Massimo, 97 Via Selvapiana, Rapolano Terme, Siena 53040, Italy, (IT) (74) Asiamies - Ombud: Kolster Oy Ab, Iso Roobertinkatu 23, Helsinki (54) Keksinnön nimitys - Uppfinningens benåmning Menetelmä konjugoidun oligosakkaridin valmistamiseksi Förfarande för framstållning av en konjugerad oligosackarid (56) Viitejulkaisut - Anförda publikationer (57) Tiivistelmå - Sammandrag Keksintö kohdistuu parannettuun menetelmään oligosakkaridikonjugaattirokotteiden valmistamiseksi. Lisäksi keksinnön mukaisesti tuotetaan oligosakkaridirokotteita, jotka aiheuttavat monospesifisen ja homogeenisen immuunivasteen kapselipolysakkarideille. Eräs keksinnön spesifinen suoritusmuoto tuottaa rokotteita, joilla aikaansaadaan immuniteetti Streptococcus pneumoniae -bakteerin yleisimpiä serotyyppejä vastaan. Föreliggande uppfinning avser ett förbät-- trat förfarande för framställning av oligoxackaridkonjugatvaccin. Uppfinningen avser även framställning av oligosackaridvaccin, vilka uppvisar ett monospecifikt och homogent immungensvar gentemot kapsulär polysackarid. En specifik utföringsform enligt uppfinningen ger vaccin som inducerar immunitet gentemot mot vanliga serotyper av Streptococcus pneumoniae.
2 1 Menetelmä konjugoidun oligosakkaridin valmistamiseksi Sisällysluettelo Johdanto Keksinnön tausta 2.1. Streptococcus Pneumoniaen aiheuttamat taudit 2.2. Pneumokokkirokotteet 2.3. Konjugoidut rokotteet Intaktit kapselipolysakkaridit rokotteen antigeenina Kantajaproteiinien käyttö hapteenien antiseerumin valmistamiseksi Konjugaatteja sisältävät rokotteet Menetelmä konjugaattirokotteiden valmistamiseksi Keksinnön lyhennelmä 3.1. Lyhenteet ja määritelmät Kuvioiden suppea kuvaus Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus 5.1. Oligosakkaridien valmistaminen 5.2. Oligosakkaridien aktivointi 5.3. Oligosakkaridien konjugointi proteiineihin 5.4. Glykokonjugaattien immunokemiallinen luonnehdinta 5.5. Rokotteen formulointi ja antomuoto 5.6. Oligosakkaridikonjugoitujen rokotteiden käyttökelpoisuus Esimerkki: Monivalenttikonjugoidun pneumokokkioligosakkaridirokotteen kehittäminen 6.1. Polysakkaridin valmistaminen 6.2. Polysakkaridin hydrolysoiminen
3 S. Pneumonmiae -tyyppi 6A:n polysakkaridin hydrolysoiminen S. Pneumoniae -tyyppi 14:n polysakkaridin hydrolysoiminen S. Pneumoniae -tyyppi 19F:n polysakkaridin hydrolysoiminen S. Pneumoniae -tyyppi 23F:n polysakkaridin hydrolysoiminen S. Pneumonie -oligosakkaridihapteenien immunokemiallinen luonnehdinta S. Pneumoniaen oligosakkaridien päätypelkistinyksikön aktivoiminen Aktivoidun oligosakkaridin konjugoiminen CRM 197 -proteiiniin CRM 197 -proteiinin valmistaminen Aktivoitujen oligosakkaridien konjugoiminen Konjugoinnin tehokkuuden vertailu, kun liittäjänä on käytetty adipiinihapon sukkinimidyylidiesteriä tai meripihkahaponsukkinimidyylidiesteriä S. Pnemoniaen glykokonjugaattien immunogeenisyys Oligosakkaridit, joiden ketjun pituus on DP 10-20, ovat suboptimaalisesti immunogeenisiä Immuunivaste glykokonjugaateille on monospesifinen ja homogeeninen
4 3 1. Johdanto Käsillä oleva keksintö koskee parannettua menetelmää oligosakkaridin ja kantajaproteiinin kovalenttisen konjugaattin valmistamiseksi. Lisäksi huomattakoon, että 5 keksinnön mukaan valmistetaan oligosakkaridirokotteita, jotka saavat aikaan monospesifisen ja homogeenisen immuunivasteen kapselikopolysakkarideille. Keksinnön spesifinen suoritusmuoto tuottaa rokotteita, jotka indusoivat immuniteetin vallitseville Sterptococcus pneumoniaen sero- 10 tyypeille, mikä saattaa olla tärkeätä niin lapsipotilaiden kuin myöskin vanhojen potilaiden ja sellaisten potilaiden kohdalla, joilla on alentunut immuniteetti heikosta kunnosta tai sairaudesta johtuen (kuten esimerkiksi AIDS-potilailla) Keksinnön tausta 2.1. Streptococcus pneumoniaen aiheuttamat taudit Pneumokokki (Streptococcus pneumoniae) on gram-positiivinen kapseloitunut kokki, joka tavallisesti kasvaa parittain tai lyhyinä ketjuina. Diplokokkimuodolla ovat 20 vierekkäiset reunat pyöristyneet ja vastakkaiset päät hei- kosti terävät antaen sille lansetin muodon. Pneumokokit voidaan jakaa eri serotyyppeihin kapselia muodostavien monimuotoisten polysakkaridien perusteella. On voitu tunnistaa 84 eri serotyyppiä käsittelemällä 25 niitä tyyppispesifisillä antiseerumeilla, Neufeldin reaktiolla. Kaikki aiheuttavat ihmiselle tauteja, mutta tyyppejä 1, 3, 4, 7, 8 ja 12 tavataan yleisimmin kliinisessä käytännössä. Tyypit 6, 14, 19 ja 23 aiheuttavat usein pneumonian ja välikorvan tulehduksen lapsilla, mutta ovat 30 aikuisilla harvinaisempia (Austrian, "Harrison's Principles of Internal Medicine", Petersdorf et al., eds. 10. painos, McGraw Hill Book Co., New York (1983) ss ). Pneumokokki on selvästi yksi kolmesta lasten keuhkokuumeen, verenmyrkytyksen ja aivokalvontuleh- 35 duksen ensisijaisesta aiheuttajasta (mcmillan, Core text-
5 4 books of Pediatrics, Kaye et al., eds. toinen painos (1982), s. 498, J.B. Lippincott Co, Philadelphia) Pneumokokkirokotteet Potilaat, joilla on jokin krooninen systeemisai- 5 raus, kuten sydäntauti, krooninen keuhkoihin ja keuhkoputkeen liittyvä tauti, maksatauti, munuaisen vajaatoiminta ja sairaus ovat yksilöitä, joilla on keskimääräistä suurempi riski kehittää pneumokokki-infektioita. Näiden henkilöiden rokottaminen pneumokokki-infektiota vastaan on 10 suositeltavaa. Tähän tarkoitukseen on saatavilla kaksikymmentäkolme rokotetta (Pneumovax R Merck, Sharp & Dohme, Pnulmmune R, Lederle Laboratories), jotka sisältävät pneumokokkityyppien 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F, ja 15 33F kapselipolysakkaridia (jotka käsittävät serotyyppejä tai ryhmiä, jotka aiheuttavat 90 % Yhdysvaltojen ja muun maailman vakavista pneumokokkitaudeista). Tämän rokotteen teho lapsiin on kyseenalainen, koska alle kuuden vuoden ikäisillä lapsilla kyky osoittaa immunologista vastetta 20 eri kapseliantigeeneille kehittyy eri aikaan johtuen immuunijärjestelmän kypsymisen luonteesta ja suoja voi olla lyhytaikaisempi kuin aikuisilla havaittu. (Harrison et al., ibid). Vaikka suhteellisen harvojen pneumokokkiserotyyppien uskotaan olevan useinten lasten pneumokokki- 25 infektioiden aiheuttajia (Gray et al., J. Infect Disease 140, (1979) ), ovat ne tyyppejä, joilla humaanin vasta-ainevasteen kypsyminen rokotteina käytettyjä puhdistettuja kapselipolysakkarideja vastaan on hitain (Anderson ja Betts, Pediatric Infec. Dis. J. 8 (1978) S50 - S53; 30 Borgono et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 157 (1978) ) Konjugoidut rokotteet Humaanilasten immuunivaste Haemophilus influenzae b -polysaakkaridille on saavutettu liittämällä kapselian- 35 tigeeni kantajaproteiiniin, jolloin muodostetaan "konju-
6 5 goitu" rokote; oletetaan kantajaproteiinin indusoineen T-lymfosyytin avustajaominaisuudet ja saaneen aikaan immuniteetin kehittymisen (Robbins et al., "Bacterial Vaccines" Germanier (1984) ss , ed. Academic 5 Press, New York). Katso myös: Cruse ja Lewis, Karger, Basel, (1989) ss Pneumokokkirokotteiden valmistamista käsitellään vastaavasti Intaktit kapselipolysakkaridit rokotteen antigeenina 10 Eri tutkijat ovat eristäneet ja puhdistaneet intaktikapselipolymeerejä, jotka voivat olla käyttökelpoisia rokotteissa tai rokotteina. Esimerkiksi US-patentissa esitetään menetelmä immunologisesti aktiivisen polyribosyyliribitolifosfaatin (PRP) eristämiseksi ja 15 puhdistamiseksi H. influenze b:n kapselipolymeeristä. Lisäksi US-patentti käsittelee H. influenzen polysakkaridiuutteita, joiden todettu molekyylipaino on yli D ja jotka pääasiallisesti koostuvat galaktoosista, glukoosista ja mannoosista ja sisältävät pienen 20 määrän osamiineja. Monet tutkijat ovat formulaateissa käyttäneet hyväkseen näitä ja muita kapselipolymeerejä saadakseen aikaan parempia immunovasteita. Esimerkiksi US-patentissa kuvataan rokote, joka sisältää puhtaan intakti 25 PRP:n ja kokosolu Bordetella pertussis -rokoteformulaatin. Tämä lisääntyneen immunogeenisyyden saavuttaminen johti nuorten nisäkkäiden anti-prp- ja anti-pertussis-vastaaineiden kohonneisiin tasoihin Kantajaproetiinien käyttö hapteenien anti- 30 seerumin valmistamiseksi Kantajaproteiinit voivat tehdä enemmänkin kuin korostaa konjugoitujen kapselipolymeerien immunogeenisyytta; ne voivat myöskin saattaa hapteenit immunogeenisiksi. Hapteenit määritellään molekyyleiksi, jotka voivat spesifi- 35 sesti sitoutua vasta-aineeseen tai lymfosyyttireseptoriin,
7 6 mutta jotka eivät itse indusoi immuunivastetta (s.o. ne eivät ole immunogeenisia). Immuunivasteen aikaansaamiseksi pienten/alhaisen molekkyylipainon tai heikosti immunogeenisten molekyylien, joita kutsutaan hapteeneiksi, tulee 5 yleensä ensin liittyä suurempaan molekyyliin tai kantajaan, joka yleensä on heterologinen proteiini. Hapteenikantaja-kompleksin injisoiminen eläimeen saa aikaan B-lymfosyyttien vasta-aineiden tuotannon, joista jotkut pystyvät spesifisesti sitoutumaan vapaaseen, situotumattomaan 10 hapteenimolekyyliin. Varhaisimpia tutkittuja hapteeneja olivat atsoväriyhdisteet, kuten aniliini ja o-aminobentsoehappo. Landsteiner ja Lampl (Z. Immun. Forsch. 26 (1918) 293) liittivät näitä yhdisteitä diatsotoimalla seerumin proteiinei- 15 hin. Kun näitä keinotekoisesti valmistettuja atso-proteiineja injisoitiin, muodostivat kanit presipitaatiovastaaineita, jotka olivat spesifiset liitetylle kemialliselle osalle. Muita hapteeniyhdisteiden esimerkkejä ovat dinit- 20 rofenoli, josta tulee immunogeeninen, kun se dinitrofenyyli(dnp)ryhmänä liitetään naudan seerumialbumiiniin tai naudan gammaglobuliiniin (BGG), ja lysergiinihappodietyyliamidi. Myös formaldehydi on osoittanut hapteenikäyttäytymistä; henkilöt, joita on altistettu eri tuotteista tai 25 laboratoriosta saaduille formaldehydihöyryille, ovat herkistyneet tälle yhdisteelle seuraksena niiden endogeenisesta makromolekyylimuodostuksesta in vivo. Hapteenitoiminta ei rajoitu pieniin orgaanisiin molekyyleihin, ja polypeptidihormonit aina insuliinin ko- 30 koon asti ovat usein heikosti, jos lainkaan, immunogeenisiä. Jotta näille hormoneille saataisiin korkeat vasta-ainetiitterit, on siis tarpeen konjugoida ne kantajamolekyyliin (tai luoda suurempia molekyylejä ristiinsitomalla yhteen useita näitä polypeptidejä).
8 7 Kantajamolekyylin osuus on erityisen kiinnostava siitä syystä, että kantaja toimii enemmän kuin pelkästään siirtäjänä. Ovary ja Benaceraff (Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 114 ( 1963) ) osoittivat tämän ruiskuttamal- 5 la kaniin DNP-BCG:tä. Useiden immunogeenisten aineiden ruiskuttaminen eläimiin synnyttää altistuksen immunologisen "muistin". Kun myöhemmin annetaan toinen ruiske, saadaan näin paljon rajumpi immuunivaste. Näin, kun Ovary ja Benaceraff ruiskuttivat uudelleen DNP-BCG:tä, saatiin voi- 10 makas sekundaarinen vasta, jonka seurauksena oli DNP:n ja BCG:n vasta-aineden selvästi kohonneet tasot. Mutta kun toinen ruiske annettiin DNP-muna-albuminiilla, havaittiin paljon heikompi anti-dnp-vasta-ainevaste. Ero vasteessa johtui niin sanotusta kantaja-efektistä, ja se ilmeisesti 15 liittyy avustaja-t-lymfosyytteihin. Alustavat merkit viittaavat siihen, että kaikki proteiinit eivät ole yhtä tehokkaita annetun hapteenin kantajaproteiineja. Robbins et al. (Infect. Immun. 40, ) esittävät tuloksia kokeellisista proteiini- 20 polysakkaridikonjugaattirokotteista, joissa sama polysakkaridihapteeni oli konjugoitu eri proteiinikantajiin ja vasta-ainevaste hapteenille määritettiin. Havaittiin merkittäviä eroja muodostetun anti-hapteenivasta-aineen määrässä, mikä osoittaa kantajan keskeistä tehtävää. 25 Kiinnittäen erityisen huomion pneumokokkirokotteisiin Lin ja Lee (Immunology 46 (1982) 333) tutkivat immuunivastetta, kun aikuiset ja nuoret hiiret altistettiin tyyppi 6A- ja 19F-polysakkarideille samoin kuin proteiinin konjugoidulle 19F:lle. Hiirille, jotka olivat saaneet 19F 30 polysakkaridi-proteiinikonjugaatteja, aiheutettiin merkittävästi korkemmat IgM ja IgG2-vasta-ainetiitterit kuin kontrolliryhmälle, joka oli saanut pelkästään 19F-polysakkaridia.
9 Konjugaatteja sisältävät rokotteet Muut tutkijat ovat tutkineet kapselipolymeerien konjugoimista kantajaproteiineihin tarkoituksena edistää vasta-aineen muodostumista niin sanotun "kantaja-efektin" 5 avulla. Esimerkiksi Scheerson et al. (Journal. of Experimental Medicine 152 (1980) ) kuvaa H. influenzae b:n polymeeri-proteiinikonjugaatteja, joilla osoittautui olevan kyky suoda immuniteetti H. influenzae b:n aiheuttamia tartuntatauteja vastaan. Viitteessä esitetään kapseli- 10 polymeerien iästä riippuvaa vaikutusta lapsiin ja pyritään voittamaan tämä ikäriippuvuus konjugoimalla intakti kapselipolymeeri useihin eri proteiineihin, m.m. seerumialbumiineihin, Limulus polyphemus hemocyanin- ja difteriatoksiiniin. Konjugointimenetelmässä tarvitaan liittämisainet- 15 ta, kuten esimerkiksi adipiinidihydratsidia. Geyer et al., Med. Microbiol. Immunol. 165 (1979) , konjugoi tiettyjä Klebsiella pneumoniaen kapselipolysakkaridin fragmentteja nitrofenyylietyyliamiinisitojaan pelkistävän aminoinnin avulla, ja saatu sokerijoh- 20 dos liitettiin sitten proteiineihin atsosidoksella. Mclnterin US-patentti , jonka hakemus on jätetty , koskee Escherichia colin heikennetysti myrkyllistä lipopolysakkaridia, joka on kovalenttisesti halosyylihalidireaktion välityksellä sidottu proteiinian- 25 tigeeniin. Jennings et al.'n US-patentti , jonka hakemus on jätetty ja patentti myönnetty koskee polysakkaridi-proteiinikonjugaattien valmistusta pelkistävän aminoinnin avulla. 30 Anderson (Infection and Immunity 39 (1983) ) käsittelee Haemophilus influenzae tyyppi b:n kapselipolysakkaridin oligosakkaridien ja CRM 197 :n, joka ei ole myrkyllinen, mutta on difteriatoksiinin antigeenisesti identtinen variantti, välistä konjugointia.
10 9 Snippe et al. (Infection and Immunity 42 (1983) ) käsittelee puolisynteettistä rokotetta Streptococcus pneumoniae -tyyppi 3:a vastaan, jossa kapselipolysakkaridi S3:sta osittaisella happohydrolyysillä eristetty 5 heksasakkaridi oli sidottu steryyliamiinin pelkistävän aminoinnin avulla ja sitten liitetty liposomeihin. Saadun konjugaatti/liposomirokotteen todettiin antavan suojan S. pneumoniae -tyyppi 3:a vastaan hiirissä. Tsay et al.'n US-patentti , jonka hakemus 10 on jätetty ja patentti myönnetty , koskee bakteereja, joissa gram-negatiivisen bakteerin myrkyttömäksi tehty polysakkaridi on kovalenttisesti sidottu saman gram-negatiivisen bakteerilajin myrkyttömäksi tehtyyn proteiiniin 4-12 hiililiitoksella. 15 Gordonin US-patentti , jonka hakemus on jätetty ja patentti myönnetty , koskee patogeenisten bakteerien, kuten Haemophilus influenzae b, Streptococcus pneumonieae, Neisseria meningitidis ja Escherichia coli, polysakkaridimolekyylien ja T-soluista 20 riippuvien antiageenien, kuten kurkkumätä- ja jäykkäkouristustoksoidien välisiä konjugaatteja. Andersonin ja Clementsin US-patentti , jonka hakemus on jätetty ja myönnetty ja Andersdonin US-patentti , jonka hakemus on 25 jätetty ja patentti myönnetty , koskevat kapselipolymeerien fragmenttien kovalenttista kiinnittymistä bakteerien toksiineihin, toksoideihin tai sidososasiin pelkistävän aminoinnin avulla. Porro et al.'n US-pantentti , jonka hake- 30 mus on jätetty ja patentti myönnetty , -;. koskee glykoproteiinikonjugaattirokotteita, joilla on tri- valentti immunogeeninen vaikutus ja joita ovat gram-positiivisen ja gram-negatiivisen bakteerin kapselipolysakkaridien antigeeniset determinantit samoin kuin joko CRM 197, 35 tetanustoksoidi tai hinkuyskätoksiini.
11 Menetelmä konjugaattirokotteiden valmista- miseksi Konjugaattirokotteiden, joissa kapselipolysakkaridihapteenit sidotaan kantajaproteiineihin, valmistaminen 5 käsittää seuraavat vaiheet: (i) valmistetaan kapselipolysakkaridi, (ii) jos käytetään polysakkaridifragmenttia, erotetaan se intaktipolysakkaridista, (iii) aktivoidaan sakkaridi tai saatetaan se konju- 10 goitiin soveltuvaksi, s.o. luodaan kohdat, jotka pystyy kovalenttisesti sitoutumaan proteiiniin, (iv) sakkaridi konjugoidaan proteiiniin. Taulukossa 1 esitetään eri tunnettuja menetelmiä näiden neljän vaiheen suorittamiseksi.
12 Taulukko I Viite Polysakkaridin Polysakkaridin Polysakkaridin Konjugointi valmistaminen pilkkominen aktivointi proteiiniin US-patentti nro Aldehydiryhmien Pelkistävä ami , Jennings, luomiseksi käy- nointi syanibooanomus jätetty tetty perjodi- rihydridillä , myönnet- happoa ty US-patentti nro Aldehydiryhmien 4-12 hiilen osuus , Tsay et luomiseksi käy- sidotaan proteiial., anomus jätet- tetty perjodi- niin kondensoivan ty , happoa aineen, esim. karmyönnetty bodi-imidin läsnäollessa 2) Polysakkaridi sidotaan proteiiniin, johon on derivatoitu 4-12 hiilen osuus Schiffin emäsreaktion välityksellä pelkistävän aineen, esim. syaniboorihydridin läsnäollessa US-patentti nro Polysakkaridit Syanogeenibro- Konjugointi , Gordon, säädetty lämpö- midi hiiliatomin välikeanomus jätetty käsittelyllä sillan avulla samal , myönnet- molekyyliko- la tavalla, kuin se ty koon olisi proteiinin adi :n D:n piinihappohydratsidivälille johdoksessa
13 Taulukko I (jatkuu) Viite US-patentti nro , Anderson ja Clements, anomus jätetty , myönnetty Polysakkaridin Polysakkaridin Polysakkaridin Konjugointi valmistaminen pilkkominen aktivointi proteiiniin Lukuisia menetelmiä käytetty Konjugointi peltuottamaan antigeenisiä frag- kistävän aminoinmentteja, joissa on vähintäin nin avulla syaniyksi pelkistyvä pää, esimer- boorihydridin läskiksi osittainen hapettava pilk- näollessa (noin kominen perjodaatilla, hydrolyy- 2-3 viikkoa) si glykosidaaseilla tai happohydrolyysi Luku 6.5. yllä: Tanskalainen Happohydrolyysi 0,1 N HC1:ssa Konjugointi CMR. -ään Streptococcus Pneu- tyyppi 6A, 10 minuuttia 100 C:ssa luomaan fosfaattipuskur iss a moniaen kapselin Eli & Lilly Co pelkistäviä fragmentteja natriumsyaniboorihydpolymeerifragment- ridiä käyttäen 18 vrk:n tien konjugoiminen ajan 37 C:ssa CRM :ään 197 I1 US-patentti nro ', Porro ja Costantino, anomus jätetty , myönnetty Happohydrolyysi Aktivoitu tuo- Konjugointi toksoidiin 100 C:ssa 6 - malla primaari- orgaanisen liuottimen, 40 tuntia. So- sia aminoryhmiä esim. dimetyylisulfokpivilla haptee- terminaalisiin sidin läsnäollessa neilla on pelkistyviin ryh :n D mole- miin (esim.'käytkyylipaino täen syanoboorihydridiä), jota seuraa esterien konversio (esim. adipiinihåppojohdosten läsnäollessa CD
14 Taulukko I (jatkuu) Polysakkaridin Polysakkaridin Polysakkaridin Konjugointi Viite valmistaminen pilkkominen aktivointi proteiiniin Streptococcus Happohydrolyysi Aktivoitu ammo- Konjugointi pneumoniae -tyyp- 100 C:ssa 39 niakkisella pus- CRY1 1,07 :ään pi 6A tuntia kurilla natrium- dime.eyylisyaniboorihydri- sulfoksidin din läsnäollessa läsnäolles- (primaaristen sa huoneenaminoryhmien lämpötilassa liittämiseksi) 15 tunnin kanden viikon ajan ajan; konvertoitu 4 tunnin ajan vastaaviksi monofunktionaalisiksi estereiksi dimetyylisulfoksidin vesiliuoksessa, joka sisältää adipiinihapon disukkinimidyyliesteriä O O ON
15 14 3. Keksinnön lyhennelmä Käsillä oleva keksintö koskee bakteerien kapselipolysakkarideista saatujen oligosakkaridien kovalenttista liittämistä kantajaproteiineihin uutta menetelmää käyttäen. Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksessa 1 esitetään. Tämä menetelmä mandollistaa glykokonjugaattien tehokkaan,synteesin huomattavasti suuremmilla tuotantonopeuksilla kuin tähän asti käytetyt menetelmät. Keksinnön 10 glykokonjugaatteja voidaan käyttää rokoteformulaatioissa ja ne ovat osoittautuneet immunogeenisiksi. Tässä suoritusmuodossa käsillä oleva keksintö koskee sellaisten glykokonjugaattien valmistamista, jotka sisältävät Streptococcus pneumoniaen kapselipolysakkari- 15 deista saatuja oligosakkarideja. Keksinnön menetelmän tuloksena voidaan tehokkaasti tuottaa korkeita saantoja S. pneumoniaen glykokonjugaatteja, joita voi käyttää rokoteformulaatioissa erityisesti pediatrisessa käytännössä, jossa suuri osa merkittävistä sairauksista liittyy 20 S. pneumoniae -infektioon. Immunogeenisten konjugaattien on todettu olevan vähemmän iästä riippuvia kuin kapselipolymeerit yksinään ja ne ovat käyttökelpoisia hyvin nuorten lämminveristen nisäkkäiden aktiiviseen immunisointiin vastaavien kapseloituneiden bakteerien aiheuttamia systeemi- 25 infektioita vastaan. Tämän lisäksi keksinnössä on havaittu, että keksinnön glykokonjugaatit yllättäen saavat aikaan monospesifisen ja homogeenisen immuunivasteen, joka voi edullisesti kumota autoimmuunireaktioiden muodostumisen ja niihin 30 liittyvät rokotuksen jälkeiset oireet. On tärkeätä, etteivät keksinnön mukaisesti valmistetut immunogeeniset konjugaatit sisällä potentiaalisesti myrkyllisiä sidosaineita, kuten adipiinidihydratsidia tai p-nitrofenyylietyyliamiinia, joita on käytetty konjugoita- 35 essa hiilihydraatti proteiiniin.
16 Lyhenteet ja määritelmät CRM137 kurkkumätätoksiinin kanssa antigeenisesti ristireagoiva myrkytön proteiini DMSO dimetyylisulfoksidi 5 DP polymerointiaste (degree of polymeriz.) MIC SD pienin inhiboiva väkevyys (minimun inhib. conc.) substituointiaste (subst. degree) SIDEA adipiinihapon sukkinimidyyliesteri SIDES meripihkahapon sukkinimidyyliesteri Kuvioiden suppea kuvaus Kuvio 1: Oligosakkaridiproteiinikonjugaattisynteesin yleinen menettely A. Hydrolysoidaan hapolla suurimolekyyliset polysakkaridit, jotta saataisiin oligosakkarideja, joiden 15 keskimääräinen molekyylipaino on 2,5 x 10'. B. Oligosakkaridit aktivoidaan (1) saattamalla ne reagoimaan diaminoetaanin [H 2N(CH 2 ) 2NH 2 ) kanssa ph 9:ssä, pelkistetään pyridiiniboorihydridillä (PyBH 3 ), sitten (2) annetaan reagoida sukkinimidyylidiesterin ja adipiinihapon 20 (SIDEA) kanssa dimetyylisulfoksidissa (DMSO). C. Aktivoidut oligosakkaridit yhdistetään kantajaproteiiniin lysiinijäännösten avulla. sessä Kuvio 2: Räätälöidyn välikkeen käyttö yhdistämi- 25 A. Edellisen Porro et al.'n (Mol. Immunol. 22 (1985) ) kuvaaman menetelmän mukaisesti muodostettu glykokonjugaatti, jossa on amidisidos (nuoli) oligosakkaridin ja adipiinihapon neljän hiilen sitojan välillä. Välikkeen pituus on noin 10,4 Ä. 30 B. Käsillä olevan keksinnön mukaisesti muodostettu glykokonjugaatti, jossa kanden hiilen jäännös (nuoli, valmistettu diaminoetaanin avulla) ja amidisidos ovat oligosakkaridin ja SIDES:in kanssa reagoimalla saatujen meripihkahapon kanden hiilen sitojien välissä. Välikkeen koko- 35 naispituus on noin 10 Ä.
17 16 C. Käsillä olevan keksinnön mukaisesti muodostettu glykokonjugaatti, jossa kanden hiilen jäännös (nuoli, valmistettu diaminoetaanin avulla) ja amidisidos ovat oligosakkaridin ja SIDEA:n kanssa reagoimalla saadun adipiini- 5 hapon neljän hiilen jäännöksen välissä. Välikkeen koko- naispituus on noin 14,5 A. Kuvio 3:. CRM,:n konjugointi aktivoituihin oligosakkarideihin, hyötysyhteen vertailu käytettäessä adipiinihappo- tai meripihkahappojohdosvälikkeitä. Konjugaatioi- 10 den reaktiotuotteiden SDS-polyakryyliamidigeelielektrofo- reesi (värjäys hopealla) A. Kaista 1: Molekyylipainostandardit (92,5 K, 66,2 K, 45,0 K, 31,0 K, 21,5 K). Kaista 2: CRM 197 (1 pg) referenssi. 15 Kaista 3: Konjugoitu oligosakkaridi 6A-CRM197, jossa on meripihkahappovälike (2 pg) (suhde 1 : 1, monoesteri/- CRM,:n kokonaisaminoryhmät 50 % DMSO:ssa). Kaista 4: Konjugoitu oligosakkaridi 6A-CRM 197, jossa on meripihkahappovälike (2 pg) (suhde 1 : 2, monoesteri/- 20 CRM 197 :n kokonaisaminoryhmät 50 % DMSO:ssa). Kaista 5: Konjugoitu oligosakkaridi 6A-CRM 197, jossa on adipiinihappovälike (2 pg) (suhde 1 : 2, monoesteri/- CRM 7 :n kokonaisaminoryhmät 50 % DMSO:ssa). Kaista 6: Konjugoitu oligosakkaridi 14-CR/4 197, jossa 25 on meripihkahappovälike (2 pg) (suhde 1 : 4, monoesteri/- CRM" 7 :n kokonaisaminoryhmät 50 % DMSO:ssa). Kaista 7: Konjugoitu oligosakkaridi 19F-CRM197, jossa on meripihkahappovälike (2 pg) (suhde 1 : 4, monoesteri/crm 197 :n kokonaisaminoryhmät ilman 50 % DMSO:ta). 30 Kaista 8: Konjugoitu oligosakkaridi 23F-CRM 197, jossa on meripihkahappovälike (2 pg) (suhde 1 : 2, monoesteri/crm 197 :n kokonaisaminoryhmät 50 % DMSO:ssa). Kaista 9: CRM 197 (1 pg) referenssi.
18 17 B. Kaista 1: CRM 197 (1 pg) referenssi. Kaista 2: CRM 197 (1 pg eri valmiste-erästä kuin kaista 1:ssä) referenssi. Kaista 3: Konjugoitu oligosakkaridi 23F-CRM 197, jos- 5 sa on adipiinihappovälike (2 pg) (suhde 1 : 2, monoesteri/crm197 :n kokonaisaminoryhmät 50 % DMSO:ssa). Kaista 4: Molekyylipainostandardit (92,5 K, 66,2 K, 45,0 K, 31,0 K, 21,5 K). Kaista 5: Konjugoitu oligosakkaridi 23F-CRM 197, jos- 10 sa on adipiinihappovälike (2 pg) (suhde 1 : 2, monoesteri/crm 197 :n kokonaisaminoryhmät 50 % DMSO:ssa). Kaista 6: CRM 197 (1 pg eri valmiste-erästä kuin kaista 1:ssä) referenssi. Kaista 7: Konjugoitu oligosakkaridi 6A-CRM 197, jossa 15 on adipiinihappovälike (2 pg). C. Kaista 1: Molekyylipainostandardit (92,5 K, 66,2 K, 45,0 K, 31,0 K, 21,5 K). Kaista 2: CRM 197 (1 pg) referenssi. Kaista 3: Konjugoitu oligosakkaridi 6A-CRM 197, jossa 20 on adipiinihappovälike (2 pg). Kaista 4: Konjugoitu oligosakkaridi 14-CRM 197, jossa on adipiinihappovälike (2 pg). Kaista 5: Konjugoitu oligosakkaridi 19F-CRM 197, jossa on adipiinihappovälike (2 pg). 25 Kaista 6: Konjugoitu oligosakkaridi 23F-CRM 197, jossa on adipiinihappovälike (2 pg). Kaista 7: Molekyylipainomarkkerit (92,5 K, 66,2 K, 45,0 K, 31,0 K, 21,5 K). Kuvio 4: Kanin IgG-vaste S. pneumoniae -oligosak- 30 karidi 6A-CRM 197 konjugaateille. Kapselipolysakkarideihin indusoidun IgG-isotyypin affinitettiarvo, inhibitio- ELISA-analyysi. A. Tyyppi 6A kapselipolysakkaridi. B. Tyyppi 6A oligosakkaridi (DP = 10) vapaana tai 35 CRM,:ään konjugoituna.
19 18 C. Tyyppi 14 oligosakkaridi (DP = 12), joka on aktivoitu molekyylivälikkeellä tai konjugoitu CRM 197 :ään. 5. Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus Käsillä oleva keksintö koskee bakteerien kapselipo- 5 lysakkarideista saatujen oligosakkaridien kovalenttista liittämistä kantajaproteiineihin; keksinnön menetelmä luo uusia glykokonjugatteja uudella menetelmällä. Esityksen selventämiseksi, kuitenkaan mitään rajoittamatta, keksinnön yksityiskohtainnen kuvaus jaetaan 10 seuraaviin osiin: 15 dinta Rokotteen formulointi ja antomuoto Oligosakkaridikonjugaattirokotteiden käyttö- (v) (vi) kelpoisuus. (i) Oligosakkaridien valmistaminen (ii) Oligosakkaridien aktivointi (iii) Oligosakkaridien konjugointi proteiiniin (iv) Glykokonjugaattien immunokemiallinen luonneh Oligosakkaridien valmistaminen 20 Suuren molekyylipainon kapselipolysakkaridia voi ostaa kaupallisesti (Amerikkalainen tyyppikokoelma, ATCC, Rockville, MD) tai sitä voi saada Porro et al.'n (J. Biol. Stand. 11 (1983) 65-71) kuvaamilla menetelmillä. Mitä tahansa polysakkaridia voi käyttää, esimerkiksi, mutta 25 tähän rajoittumatta, niitä joita saadaan seuraavien bakteerien kapseleista: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Neisseria meningitis, Escherchia coli, Salmonella typhi, Streptococcus mutans, Cryptococcus neoformans, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus ja 30 Pseudomonas aeruginosa. Kapselipolymereistä voi lukuisilla menetelmillä muodostaa antigeenisia fragmentteja, joilla on vähintään yksi pelkistyvä pääte, riippuen kyseisen kapselipolymeerin rakenteellisista ominaisuuksista. Rajattu hapettava pilk- 35 kominen perjodaatilla (tai vastaavilla reagensseilla)
20 19 tuottaa aldehydipäätteitä; tämä menettely rajoittuu polymeereihin, joiden ketjumaisessa jäännöksessä on läheisyydessä dihydroksiryhmiä. Glykosidisidoksen hydrolyysi tuottaa pelkistävän sokeripäätteen. Tällainen hydrolyysi 5 voidaan mitä spesifisinten suorittaa entsymaattisesti glykosidaasien avulla, mutta tämä tapa rajoittuisi suhteellisen harvoihin kapselipolynmeereihin, esimerkiksi Streptococcus pneumoniae 8 -bakteeriin, jolle tunnetaan glykosidaaseja. Happohydrolyysiä käytetään tavallisesti glykosi- 10 disidosten hydrolyysiin. Tämän tavan käyttökelpoisuus olisi rajoitettu, jos polymeeri sisältää hapolle herkkiä haarasidoksia, jotka ovat antigeenispesifisyydelle tärkeät. Keksinnön spesifisessä suoritusmuodossa S. pneumoniae -tyyppi 6A -bakteerin kapselipolysakkaridi voidaan 15 hydrolysoida noin 10-2 M etikkahapossa noin 100 C:ssa noin 30 tunnin aikana; S. pneumoniae -tyyppi 14:n kapselipolymeeri voidaan hydrolysoida noin 0,5 M trifluorietikkahapossa noin 70 C:ssa noin 7 tunnissa; S. pneumoniae -tyyppi 19 F:n polysakkaridi voidaan hydrolysoida noin 10-2 M 20 etikkahapossa noin 50 C:ssa noin 48 tunnissa ja S. pneumoniae -tyyppi 23 F:n polysakkaridi voidaan hydrolysoida noin 0,25 M trifluorietikkahapossa noin 70 C:ssa noin 3 tunnissa. Keksinnön mukaisesti proteiineihin konjugoitavat 25 oligosakkaridit sisältävät edullisesti kolmesta kuuteen toistuvaa yksikköä (tai kymmenestä kolmeenkymmeneen monosakkaridijäännöstä), ja edullisemmin kolmesta neljään toistuvaa yksikköä (tai noin viisitoista monosakkaridijäännöstä), koska tämän pituiset glykokonjugaattei- 30 hin sisällytetyt oligosakkaridit ovat osoittautuneet optimaalisesti immunnogeenisiksi Oligosakkaridien aktivointi Oligosakkaridit voidaan aktivoida pelkistävällä aminointimenmetelmällä, ja sen jälkeen antamalla reagoida 35 kaksifunktioisen molekyylin, kuten diesterin kanssa, kui-
21 20 tenkaan tähän rajoittumatta. Keksintö pääpiirteittäin esitetään kuviossa 1 ja kaulukossa II, joka vertaa käsillä olevan keksinnön menetelmää Porro et al.'n (Mol. Immunol. 22 (1985) ) kuvaaman menetelmän kanssa. Huomatta- 5 koon, että edellisessä menmetelmässä aktivointiin käytettiin 7-14 vrk; käsillä olevassa keksinnössä aika on lyhentynyt 15 minuutiksi. Huomattakoon myös, että edellisen menetelmän pelkistämiseen käytetty aika oli 7-14 vrk; nykyisen menetelmän mukaan tämä on lyhentynyt 48 tunniksi. 10 Näinollen käsillä oleva keksintö vaatii vrk vähemmän lopputulokseen kuin aikaisempi menetelmä. Tämä on tärkeä etu, koska hiilihydraattien käsittely kohonneissa lämpötiloissa, kuten 50 C:ssa, voi johtaa niiden hajoamiseen.
22 21 Taulukko II 5 S.pneumoniaen oligosakkaridien pelkistyvän pääteyksikön kemiallinen aktivointi Parametrit Aikasempi menetelmä Nykyinen menetelmä Tuotu ryhmä NH 2 NH(CH 2 )NH 2 10 Reagenssi(pH) Ammoniakkipuskuri(9) Diaminoetaani(9) Aktivointi- 50 C 100 C lämpötila Aktivointiaika 7-14 vrk 15 minuuttia Pelkistin Na-syaniboorihyd- Pyridiiniboraani 15 ridi Pelkistys- 50 C 50 C lämpötila Pelkistysaika 7-14 vrk 48 tuntia Saatu tuote Oligo-NH 2 Oligo-NH(CH 2 ) 2NH 2 20 Aktivoiva kaksi- SIDEA SIDES tai SIDEA funkt. välike Reaktiolämpö- 25 C 4 C tila Reaktioaika 4 tuntia 2 tuntia 25 Saatu tuote Oligo-NH-monoesteri Oligo-NH(CH 2 ) 2NH- Reaktion hyöty % 70 % suhde monoesteri 30 SIDEA = adipiinihapon sukkinimidyylidiesteri SIDES = meripihkahapon sukkinimidyylidiesteri Keksinnön menetelmän mukaisesti oligosakkaridin pelkistyvän pääteyksikön pelkistävä aminointi suoritetaan 35 käyttäen molekyyliä, jossa on kaksi aminoryhmää. Keksinnön edullisessa suoritusmuodossa pelkistävä aminointi toteute-
23 22 taan antamalla annetun oligosakkaridimoolimäärän reagoida 10-kertaisesti molaarisen ylimääräisen diaminoetaaniliuoksen kanssa 0,2 M KH 2 PO4 :ssä noin ph 9:ssä noin C:ssa, ja edullisesti 100 C:ssa noin 1-60 minuu- 5 tissa, ja edullisesti noin 15 minuutissa. Tämän jälkeen voidaan lisätä pyridiiniboraanimäärä, joka molaarisesti vastaa 25-kertaisesti valmisteen oligosakkaridin molaarista pitoisuutta, ja reaktion annetaan tapahtua noin C:ssa, edullisesti noin 50 C:ssa noin 1-72:ssa ja 10 edullisesti 48 tunnissa. Pelkistävästä aminointireaktiosta saatu tuote voidaan sitten saattaa reagoimaan kaksifunktioisen molekyylin kanssa, jonka kumpikin toiminnallinen ryhmä pystyy reagoimaan aktivoidun oligosakkaridin kumman tahansa terminaali- 15 sen aminoryhmän kanssa sekä kantajaproteiinien rakenteessa esiintyvien aminoryhmien kanssa siten, että kaksifunktioinen molekyyli pystyy sitomaan yhteen oligosakkaridin ja kantajaproteiinin. Keksinnön edullisessa suoritusmuodossa kaksifunktioinen ryhmä on diesteri, ja on nimenomaan adi- 20 piinihapon diesteri, jonka on voitu osoittaa liittyvän tehokkaampaan proteiinin glykosylaatioon. Keksinnön edullisessa spesifisessä suoritusmuodossa annetaan oligosakkaridin, jolle on suoritettu pelkistävä aminointi kuten yllä kuvattu, reagoida edelleen meripihkahapon tai edullisemmin 25 adipiiniihapon sukkinimidyylidiesterin kanssa; tämä reaktio voidaan parhaiten suorittaa aminoidun oligosakkaridin kanssa, jonka molaarinen pitoisuus (aminoryhmien suhteen) vastaa noin viidettä osaa SIDEAn (tai SIDESin) molaarisesta pitoisuudesta, dimetyylisulfoksidiliuoksessa (DMSO) 30 noin 0-25 C:ssa, ja edullisesti noin 4 C:ssa noin 0,5-5, ja edullisesti noin 2 tunnin aikana. Aktivoitu oligosakkaridi voidaan ottaa talteen saostamalla käyttäen 1,4-dioksaania (80 % v/v), joka myös jättää supernatanttiin ylimääräisen SIDEAn (tai SIDESin).
24 Oligosakkaridien konjugointi proteiiniin Keksinnön mukaisesti käytettäviä proteiineja on mm. mikä tahansa proteiini, jota turvallisesti voi antaa nuorille nisäkkäille ja joka voi toimia immunologisesti 5 tehokkaana kantajaproteiinina. Nimenomaisissa suoritusmuodoissa voidaan käyttää solupinnan proteiineja, membraaniproteiineja, toksiineja ja toksoideja. Turvallisuuskriteerejä on mm., ettei primaarista toksisuutta esiinny ja minimaalinen allergisen reaktion riski. Kurkkumätä- ja jäyk- 10 käkouristustoksoidit täyttävät nämä kriteerit; se tarkoittaa, että sopivasti valmistettuna ne eivät ole myrkyllisiä, ja allergisten reaktioden esiintyminen on hyväksyttävän alhainen. Vaikka allergisten reaktioiden riski aikuisilla voi olla merkittävä, on se lapsilla minimaalinen. 15 Muissa nimenomaisissa keksinnön suoritusmuodoissa soveliaita kantajaproteiineja ovat mm., näihin kuitenkaan rajoittumatta, Salmonella flagelliini-, Haemophilus piliini-, Haemophilus 15 kda-, kda- ja 40 kda-membraaniproteiinit, Escherichia colin lämpölabii- 20 li enterotoksiini LTB, koleratoksiini ja virusproteiinit, kuten rotavirus VP7- ja respiratoorinen solusitkosvirus F- ja G-proteiinit. "Kantaja-efektin" johdosta heikosta antigeenistä, kun se liitetään voimakkaampaan kantaja-antigeeniin 25 (s.o. heterologiseen proteiiniin), tulee immunogeenisempi kuin mitä se yksinään edustaisi. Jos eläin aikaisemmin on immuinisoitu pelkästään kantajalla, niin eläin voi olla "perusrokotettu" ja osoittaa lisääntynyttä immuunivastetta ei pelkästään kantaja-antigeeniä, vaan myöskin liitettyjä 30 hapteeniryhmiä kohtaan. Lapset immunisoidaan ruutiininomaisesti jäykkäkouristus- ja kurkkumätätoksoideilla. Näin heidät olisi perusrokotettu jompaankumpaan näistä toksoideista konjugoidun kapselipolymeeriantigeenin vastaiseen esiintymiseen.
25 24 Yleisesti, mikä tahansa heterologinen proteiini voisi toimia kantaja-antigeenina. Kuitenkin tietyillä bakteeritoksiineilla, kuten jäykkäkouristus- ja kurkkumätätoksiineilla on se lisäetu, että ne koostuvat kandesta 5 osasta, joista toisella ("sitoja"-alayksiköllä) on voimakas affiniteetti sitoutua nisäkässolujen pintaan. Näin on mandollista, konjugointi tällaiseen "sitoja"proteiiniin saattaisi kannetun antigeenin tehokkaammin herättämään vasteita immuunisysteemin soluissa. 10 Kantajaproteiinit, joihin kapselipolymeeri on konjugoitu, voivat olla natiivitoksiinia tai heikennettyä toksiinia (toksoidia). Myös suhteellisen uudella mutaatiotekniikalla voidaan tuottaa geneettisesti muunnettuja proteiineja, jotka ovat antigeenisesti toksiinin kaltaisia, 15 kuitenkaan olematta myrkyllisiä. Näitä kutsutaan "ristiinreagointimateriaaliksi" eli CRM:ksi. CRM 197 on merkittävä, koska se yhden ainoan aminohapon kohdalla poikkeaa natiivista kurkkumätätoksiinista, mutta immunologiosesti ei erotu siitä. 20 Kapselipolymeerin konjugointi natiivitoksiiniin voi alentaa toksisuutta, mutta merkittävää myrkyllisyyttä saattaa jäädä. Sen vuoksi proteiinin lisädetoksikointiin käytetään formaliinia, joka reagoi proteiinin vapaiden aminoryhmien kanssa. Jäännöstoksisuus voi vielä olla huo- 25 Lena. Sen lisäksi missä tahansa valmiste-erässa on spontaani detoksikaatio mandollinen ja se on otettava huomioon tässä työskentelytavassa. Vaihtoehtoisesti nativitoksiini voidaan tehdä myrkyttömöksi formaliinilla, jolloin valmistetaan tavanomai- 30 nen toksoidi ennen konjugointia kapselipolymeeriin. Kuitenkin edeltävä formaliinikäsittely vähentää kapselipolymeerifragmenttien pelkistettävien ryhmien reaktioon käytettävien vapaiden aminoryhmien lukumäärää. CRM:illä on näinollen merkittäviä etuja siinä suhteessa, ettei niillä 35 ole mitään luontaista toksisuutta eikä mikään niiden ami-
26 25 noryhmistä ole formaliinin miehittämä. Lisäetu on myös, ettei työskentelyyn CRM:ien kanssa liity mitään terveysriskejä. CRM 197 :n tapauksessa, joka immunologisesti on ident- 5 tinen natiivitoksiinin kanssa, formaliinikäsittely (joskaan tässä ei ole mitään detoksikaation tarvetta) tehostaa suuresti immuunivastetta. Tämän käsitetään johtuvan molekyylin stabiloitumisesta kehon hajoittamismekanismeja vastaan ja/tai ristisidosten aggregaatiosta (partikkelien 10 immunogeenisuus lisääntyy koon myötä). Kaikista yllä esitetyistä syistä ovat jäykkäkouristus- ja kurkkumätätoksiinit ensisijaisia kantajaproteiiniehdokkaita, joskin on olemassa muita, jotka myöskin voivat olla sopivia. Vaikka näiden muiden turvallisuudesta ei ole 15 olemassa samaa tietämystä kuin kurkkumädän ja jäykkäkouristuksen, voi kuitenkin niiden käyttöön olla olemassa muita ylivoimaisia syitä. Esimerkiksi ne voivat kantajina olla jopa tehokkaampia, tai niiden tuottaminen voi olla merkittävästi taloudellisempaa. Muita kantajaehdokkaita 20 ovat esimerkiksi psedomonas-, stafylokokki-, streptokokki-, pertussis- ja Escherichia coli -toksiinit. Keksinnön spesifisessä suoritusmuodossa aktivoidut oligosakkaridit voidaan sitoa CRM 197 -proteiiniin, joka on puhdistettu seuraavasti: 25 Corynebacterium diphteriaella tuotettu CRM 197 voidaan eristää elatusaineesta suodattamalla bakteeriviljelmä Millipore-membraanin läpi, saostamalla proteiini suodoksesta ja puhdistamalla CRM 197 ioninvaihtokromatografisesti, kuten jäljempänä kappaleessa 6 esitetään. Vaihtoehtoisesti 30 voidaan oleellisesti puhdasta CMR 197 :ää tuottaa millä tahansa tunnetulla menetelmällä. Aktivoitu oligosakkaridi voidaan kovalenttisesti sitoa kantajaproteiiniin orgaanisen liuottimen ja haluttaessa minkä tahansa muun aineen (kuten kondensoivan ai- 35 neen) läsnäollessa edistämään aktivoidun oligosakkaridin
27 26 terminaalisen funktionaalisen ryhmän sitomista proteiiniin. Keksinnön spesifisessä edullisessa suoritusmuodossa aktivoitu oligosakkaridi, jolla on terminaalinen esteriryhmä, voidaan kovalenttisesti sitoa kantajaproteiinissa 5 läsnäoleviin vapaisiin aminoryhmiin seuraavasti: Aktivoitu oligosakkaridi voidaan liuottaa dimetyylisulfoksidiin ja sitten lisätä kantajaproteiinin, (esimerkiksi CMR 197 :än, tähän kuitenkaan rajoittumatta, jota on noin 2 mg/ml) vesiliuokseen siten, että monoesteriaktivoi- 10 dun oligosakkaridin ja kantajaproteiinin aminohapporyhmien kokonaismäärän molaarinen suhde on noin 1 : 2 ja lopullinen DMSO:n pitoisuus on noin 50 % v/v. Tämä konjugointireaktio suoritetaan 4 C:ssa, ja joskin reaktio on lähes valmis noin kandessa tunnissa, on sopivaa jättää se käy- 15 mään yli yön, jotta reaktion kaikkien spesifisten glykokonjugaattityyppien saanto nostetaan mandollisimman korkeaksi. Näin saadut glykokonjugaatit puhdistetaan sitten geelikromatografisesti. Yksivalenttisen rokotteen syntetisoimiseksi baktee- 20 rin yhdestä serotyypistä saadut oligosakkaridit voidaan konjugoida proteiiniin. Monivalenttisen rokotteen syntetisoimiseksi glykokonjugaatit voidaan valmistaa sitomalla useista eri bakteerilajeista tai eri serotyypeistä saatu oligosakkaridien seos kantajaproteiiniin; vaihtoehtoisesti 25 voidaan sekoittaa glykokonjugaatteja, jotka on saatu antamalla yhden oligosakkaridityypin reagoida kantajaproteiinin kanssa erillisinä reaktioina käyttäen eri oligosakkarideja. Näin monivalenttirokote voi sisältää kantajaproteiinin, jossa on homogeeninen tai heterogeeninen popu- 30 laatio sidottuja oligosakkarideja.
28 27 dinta 5.4. Glykokonjugaattien immunokemiallinen luonneh- Yllä kuvatulla menetelmällä valmistettujen glykokonjugaattien immunogeenisyyden todentaminen voidaan testata 5 millä tahansa sopivalla eläinjärjestelmällä ennen humaanikäyttöä, tähän kuitenkaan rajoittumatta, mm. kaneilla, sioilla, marsuilla, hiirillä, rotilla tai vuohilla. Keksinnön spesifisessä suoritusmuodossa kaneihin (noin 2 kg:n painoisiin) inokuloidaan ihon alle glykoproteiinikonju- 10 gaattia alumiinifosfaatin läsnäollessa tai ilman sitä. Noin 2,5 pg oligosakkaridia muodostaisi 2 kg:n kanille sopivan annoksen. Vasta-ainetiitterit arvioitaisiin ELISAmenetelmällä (entsyymiin sidottu immunosorbenttimääritys) tai millä tahansa muulla tunnetulla menetelmällä. Koska 15 keksinnön glykokonjugaatteja vastaan kehitetyt vasta-aineet eivät ehkä pysty immunopresipitoimaan antigeenia, ei sellaisia vasta-ainemäärityksiä, jotka perustuvat immunopresipitaatioon, voi suositella tiitterin määritykseen Rokotteen formulointi ja antomuoto 20 Rokotteen formuloinissa sopivia kantaja-aineita ovat mm. natriumfosfaatilla puskuroitu keittosuolaliuos (ph 7,4) tai natriumfosfaatilla puskuroituuun keittosuolaliuokseen (ph 6) suspendoitu 0,125 M alumiinifosfaattigeeli tai muut tavanomaiset väliaineet. 25 Yleensä rokotteet, jotka sisältävät n. 5 - n. 100 pg, edullisesti n n. 50 pg oligosakkaridia, ovat sopivia aikaansaamaan tehokkaita vasta-ainetasoja nuorten lämminveristen nisäkkäiden kapselipolymeereille. Tietysti tarkka annostelu tulisi määritelä rutiinimaisella 30 annos/vaste -kokeilulla. Lasten rokotteiden valmistamiseksi glykoproteiinikonjugaattien pitoisuus on noin lig oligosakkaridin rajoissa. Suurempia annoksia voidaan antaa kehon painon perusteella. On odotettavissa, että perättäisesti annetut pienet annokset ovat paremmat,
29 28 kuin jos sama konjugaattimäärä annettaisiin yhtenä ainoana ruiskeena. Valmistettuja rokotteita voidaan antaa kaiken ikäsille lämminverisille nisäkkäille ja erityisesti ne sovel- 5 tuvat aiheuttamaan aktiivisen immunisoinnin patogeenisten Haemophilus influenzae -tyyppi b-, Escherichia colj-, Streptococcus pneumoniae-, Neisseria meningitis- ja Pseodomonas aerugenosa -bakteerien nuorissa nisäkkäissä aiheuttamia systeemisairauksia vastaan. 10 Keksinnön mukaisesti valmistettu rokote voidaan an- taa ihon alle, laskimosisäisesti, lihakseen, vatsaontelonsisäisesti, suun tai nenän kautta. Rokote voi sisältää glykokonjugaatin liuoksena tai mikropartikkeleina tai se on sisällyttetty pieniin pallosiin tai rakkuloihin, esi- 15 merkiksi liposomeihin Oligosakkaridikonjugoitujen rokotteiden käyttökelpoisuus Edullisessa toimintamuodossa glykokonjugaattirokotteita kapseloituja patogeensia bakteereja vastaan käyte- 20 tään suojaamaan herkkiä yksilöitä näiden bakteerien aiheuttamilta kehittyviltä taudeilta. Herkkiä yksilöitä ovat esimerkiksi nuoret lapset, joiden immuunisysteemi ei ole kehittynyt, henkilöt joilta on poistettu perna, kuin myöskin kaikki yksilöt, joilla on epävarma immuunisysteemi tai 25 krooninen tauti, varsinkin hankittu immuunikato (AIDS), hematopoeettinen tauti, diabetes, krooninen sydäntauti, krooninen keuhkotauti ja sirppisoluanemia. Proteiinikantajaan konjugoitumisensa ansiosta tehostavat keksinnön glykokonjugaatit sisältämiensä oligosakkaridien immunogeeni- 30 suutta. Täten keksinnön mukaisesti valmistettuja glykokonjugaatteja voidaan käyttää antamaan suojaa mitä tahansa bakteeri-infektiota vastaan, jolla on polysakkaridikapseli, näitä ovat mm. Streptococcus pneumoniae, Haemophilus in
30 29 la typhi, Streptococcus mutans. Cryptococcus neoformans, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus ja pseudomonas aerugenosa. Lapsilla erityisen virulentteja ja nimenomaan tässä keksinnössä käytettyjä S. pneumoniae -kan- 5 toja ovat mm. tyypit 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23 ja 33F. Tässä nimenomaisessa suoritusmuodossa keksinnön rokotteita voidaan käyttää indusoimaan monospesifinen ja 10 homogeeninen immuunivaste. Monospesifiseen immuunivasteeseen liittyy useita etuja, esimerkiksi se tarjoaa vastaaineita, (I) joilla on homogeeninen spesifisyys ja pääasiallisesti kaikki vasta-aineet ovat suuntautuneet yhteen spesifiseen epitooppiin ja niillä on sama affiniteettiva- 15 kio, (II) joilla on korkea affiniteettivakio ja voimakas antibakteerinen aktiivisuus, (III) joilla on lisääntynyt kohdespesifisyys ja joilta puuttuu ristireagointi isäntää lähellä olevien antigeenien kanssa, mistä seurauksena saadaan turvallisempi rokote, (IV) joilla on alentunut komp- 20 lementin aktiivisuus johtuen monospesifisten antigeenien vasta-aineiden alentuneesta presipitaatioaktiivisuudesta, millä myöskin saadaan turvallisempi rokote. On lisäksi suoritusmuotoja, joissa käsillä olevaa keksintöä voidaan käyttää tuottamaan rokotteita, jotka 25 tunnistavat kantajaproteiineihin keksinnön menetelmin sidottuja peptidejä tai lipo-oligosakkarideja tai muita pintaoligosakkaridihapteeneja. Tällaisia rokotteita voidaan käyttää esimerkiksi aiheuttamaan immuuniteettia kasvainsoluja kohtaan tai valmistettaessa kemialliseen lääkeai- 30 neseen tai bioaktiiviseen aineseen konjugoituja antituumorivasta-aineita; tällainen antituumoriaktiivisuus voitaisiin indusoida sitomalla tuumorispesifinen antigeeni tai sen epitooppi kantajaproteiiniin käyttäen keksinnön menetelmiä.
31 30 6. Esimerkki: Monivalenttikonjugoidun pneumokokkioligosakkaridirokotteen kehittäminen 6.1. Polysakkaridin valmistaminen S. pneumoniae -tyyppi 6A:n kapselipolysakkaridia, 5 S.pneumoniae -tyyppi 14:n kapselipolysakkaridia, S. pneumoniae -tyyppi 19F:n kapselipolysakkaridia ja S.pneumoniae -tyyppi 23F:n kapselipolysakkaridia saatiin Amerikkalaisesta tyyppiviljelmäkokoelmasta (ATCC) Polysakkaridin hydrolysoiminen S. pneumoniae -tyyppi 6A:n polysakkaridin hydrolysoiminen 2 mg S. pneumoniae -tyyppi 6A:n kapselipolysakkaridia liuotettiin 1 ml:aan vesiliuoista, jossa oli 10 mm etikkahappoa ph 3,4, sitten annettiin hydrolysoitua sulje- 15 tuissa ampulleissa öljyhauteella 100 C:n lämpötilassa 30 tunnin ajan. Tuloksena saadut oligosakkaridit erotettiin sitten reaktioseoksesta kromatografisesti Sephadex G15:lla (Pharmacia, Uppsala), joka oli tasapainotettu 15 mm NaCl-liuoksella ph 7,0 4 C:ssa. 20 Kromatografiaefluentit analysoitiin sitten Kabatin ("Experimental Immunochemistry", ed. E. A. Rabat & Mayer, 1964, ss ), Chen et al.'n (Anal. Chem. 28 (1956) ) ja Porro et al.'n (Anal. Bioch. 118 (1981) ) julkaisemien menetelmien mukaan metyylipentoo sien, fosforin ja pelkistävien ryhmien, esimerkiksi aldehydien läsnäolon toteamiseksi. Analyysissä saatiin metyylipentoosi/aldehydisuhteeksi 3,96, metyylipentoosi/fosforisuhteeksi 0,96 ja fosfori/aldehydisuhteeksi 4,12. Geelikromatografiassa Sephadex G-50 Superfinellä 30 (Pharmacia) puskuria käyttäen saatiin jakautumisvakioksi (kd) 0,538 (heksoosilla), jota vastaa molekyylipaino n Ydinmagneettinen resonanssi (NMR), kaasukromatografia ja stökiometrinen analyysi osoittivat oligodsakkari- 35 dien koostuvan 3-4 :stö toistuvasta yksiköstä, joiden
32 31 joukossa todettiin galatoosia, joka oli immunodominoiva sokeri S. pneumoniae -tyyppi 14:n polysakkaridin hydrolysoiminen 5 2 mg S. pneumoniae -tyyppi 14:n kapselipolysakkaridia liuotettiin 1 ml:aan vesiliuosta, jossa oli 0,5 M trifluorietikkahappoa, ja annettiin hydrolysoitua suljetuissa ampulleissa öljyhauteella 70 C:n lämpötilassa 7 tuntia. Tuloksena saadut oligosakkkaridit erotettiin reaktio- 10 seoksesta kromatografisesti Sephadex G 15:11ä (Pharmacia, Uppsala), joka oli tasapainotettu 15 mm NaC1- liuoksella ph 7,0 4 C:ssa. Kromatografiaefluenttien heksosamiini- ja aldehydipitoisuudet analysoitiin ja saatiin heksosamiini/aldehydi- 15 suhteeksi 3,17. Kaasukromatografinen ja stökiometrinen analyysi osoittivat molekyylipainon vastaavan 3-4 toistuvaa perusyksikköä. Galaktoosin haaraketjujen poistuma kaasukromatografisesti määritettynä oli 10 % :n rajoissa. Geelikromatografialla Sephadex G-50 Superfinellä (Phar- 20 macia) käyttäen 15 mm NaCl-liuosta ph 7,0 saatiin oligosakkarideille jakautumisvakioksi (Kd) 0,30 määritettynä koko heksoosista S. pneumoniae -tyyppi 19F polysakkaridin hydrolysoiminen 25 2 mg S. pneumoniae -tyyppi 19F:n kapselipolysakkaridia liuotettiin 1 ml:aan vesiliuosta, jossa oli 10 mm etikkahappoa ph 3,4 ja annettiin hydrolysoitua suljetuissa ampulleissa öljyhauteella 50 C:n lämpötilassa 49 tuntia. Saadut oligosakkaridit erotettiin sitten reaktioseoksesta 30 kromatografoimalla Sephadex G-15:11ä (Pharmacia, Uppsala), joka oli tasapainotettu 15 mm NaCl-liuoksella ph 7,0 4 C:ssa. Kromatografiaefluentit analysoitiin sitten Kabatin ("Experimental Immunochemistry", ed. E.A. Rabat ja Mayer 35 (1964), ss ), Chen et al.'n (Anal. Chem. 28
33 32 (1956) ) ja Porro et al.'n (Anal. Biochem. 118 (1981) ) esittämillä menetelmillä metyylipentoosien, fosforin ja pelkistävien ryhmien, esimerkiksi aldehydiryhmien, läsnäolon toteamiseksi. Analyysissä saatiin 5 metyylipentoosi/pelkistetty metyylipentoosisuhteeksi 3,5 ja metyylipentoosi/fosforisuhteeksi 3,2. Geelikromatografia Sephadex G-50 Superfinellä (Pharmacia) antoi tuloksena oligosakkarideille Kd = 0,46 (kokonaisheksoosille) ja yhdistetty kaasukromatografinen ja 10 stökiometrinen analyysi osoitti sen koon vastaavan 3-4 toistuvaa perusyksikköä S. Pneumoniae -tyyppi 23F:n polysakkaridin hydrolysoiminen 2 mg S. pneumoniae -tyyppi 23F:n kapselipolysakkari- 15 dia liuotettiin 1 ml:aan 0,25 M trifluorietikkahapon vesiliuosta ja annettiin sitten hydrolysoitua suljetuissa ampulleissa öljyhauteella 70 C:n lämpötilassa 3 tuntia. Saadut oligosakkaridit erotettiin sitten reaktioseoksesta kromatografisesti Sephadex G15 avulla (Pharmacia, Uppsa- 20 la), joka oli tasapainotettu 15 mm NaC1 -liuoksella ph 7,0 4 C:ssa. Kromatografiaefluentit analysoitiin sitten Kabatin ("Experimental Immunochemistry", ed. E. A. Rabat ja Mayer (1964) ss ), Chen et al.'n (Anal. Chem. 28 (1956) ) ja Porro et al.'n (Anal. Biochem. 118 (1981) ) esittämien menetelmien mukaisesti metyylipentoosien, fosforin ja pelkistävien ryhmien, esimerkiksi aldehydiryhmien, läsnäolon toteamiseksi. Analyysissä saatiin heksoosi/aidehydisuhteeksi 4,5-4,5, heksoosi/metyy- 30 lipentoosisuhteeksi 2,3 ja fosfori/aldehydisuhteeksi 2,9. :. Kaasukormatografinen ja stökiometrinen analyysi osoittivat 3,5-4,5:n toistuvan perusyksikön läsnäolon. Ramnoosin haaraketjujen poistuma, joka määritettiin kaasukromatografisesti, oli vähemmän kuin 8 %.
(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT. - (51) Kv.lk.4 "-' A 61K 39/12. (24) Alkupäivä Löpdag 01.06.84
(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT C (45) PAÖntti Myörinetty Paten't - beviljats - (51) Kv.lk.4 "-' A 61K 39/12 (21) Patenttihakemus Patentansökning 842215 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus
LisätiedotII 1 1111111 II 111 11111 11 11111 111 11111 111
II 1 1111111 II 111 11111 11 11111 111 11111 111 FI000104374B (12) (10) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT FI 104374B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 14.01.2000 SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA
Lisätiedot11 11111111 111 11111 11 1110111! 11 11191911 1 11111111 111 111111
11 11111111 111 11111 11 1110111! 11 11191911 1 11111111 111 111111 (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 107515B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 31.08.2001 SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI-
LisätiedotJukka Hytönen Kliinisen mikrobiologian erikoislääkäri UTULab Bakteeriserologia
Bordetella pertussis Laboratorion näkökulma Jukka Hytönen Kliinisen mikrobiologian erikoislääkäri UTULab Bakteeriserologia SIDONNAISUUDET Asiantuntija Labquality Ammatinharjoittaja Mehiläinen Apurahoja:
LisätiedotKliinisesti merkittävien bakteerien jaottelua
Johdanto kliinisesti merkittäviin bakteereihin Miksi kliininen bakteriologia on tärkeää? Bakteerien luokittelusta Bakteeri-infektiot Patogeeni Tartunnanlähde Ennaltaehkäisy Bakteriologista diagnostiikkaa
LisätiedotGram-värjäykset. Olli Meurman
Gram-värjäykset Olli Meurman 5.2.2010 Gram-värjäys Gram-positiivinen Kiinnitys (kuumennus/alkoholi) Gram-negatiivinen Kristalliviolettivärjäys Kiinnitys jodilla Värinpoisto alkoholilla Safraniinivärjäys
LisätiedotRokottaminen - käytännön ohjeita pulmatilanteisiin
Rokottaminen - käytännön ohjeita pulmatilanteisiin Th Nina Strömberg Rokotusohjelmayksikkö THL 5.4.2016 1 Rokottamisen muistisäännöt Rokottamisessa ja rokotussarjojen aikatauluttamisessa on tietyt lainalaisuudet,
LisätiedotMiten rokottaminen suojaa yksilöä ja rokotuskattavuus väestöä Merit Melin Rokotusohjelmayksikkö
Miten rokottaminen suojaa yksilöä ja rokotuskattavuus väestöä Merit Melin Rokotusohjelmayksikkö 1 ESITYKSEN SISÄLTÖ Miten rokottaminen suojaa yksilöä? Immuunijärjestelmä Taudinaiheuttajilta suojaavan immuniteetin
LisätiedotB-leuk-määritys vieritestimittauksena infektiodiagnostiikassa
4.2.2009 B-leuk-määritys vieritestimittauksena infektiodiagnostiikassa Ville Peltola Dosentti, lasten infektiolääkäri TYKS Hengitystieinfektioiden lukumäärä vuosittain 7 Infektioita/ vuosi/ henkilö (keskiarvo)
LisätiedotMenjugate. 22.06.2016, Versio 1 RISKIENHALLINTASUUNNITELMAN JULKINEN YHTEENVETO
Menjugate 22.06.2016, Versio 1 RISKIENHALLINTASUUNNITELMAN JULKINEN YHTEENVETO VI.2 VI.2.1 Julkisen yhteenvedon osiot Tietoa sairauden esiintyvyydestä N. meningitidis -bakteeri voi aiheuttaa infektion
LisätiedotTHL:n laboratoriopohjainen seuranta ja kantakokoelmaan lähetettävät bakteerikannat,
THL:n laboratoriopohjainen seuranta ja kantakokoelmaan lähetettävät bakteerikannat, 1.1.2015 Bakteeri Lähetysperuste Tyypitys THL:ssa ja vastauskäytäntö Minne lähetetään Metisilliiniresistentti Staphylococcus
Lisätiedot(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT. (10) Fl 110234 B. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 31.12.2002. (51) Kv.lk.7 - Int.kl.
1111111111 1111111111 1111 11111111 11111 1111 11111111 F1000B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) Fl B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 31.12.2002 SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS
LisätiedotLabquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 2/2012
Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 2/2012 Kuvat ja teksti: Markku Koskela Mikrobiologian ylilääkäri OYS, Oulu Huom! Käyttäkää yläpalkin suurennusmahdollisuutta 100-400% pesäkekasvun
Lisätiedot( B ) (11) KUULUTUSJ'ULKÅISU UTLAGGNINGSSKRIFT 89172. .. - (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5 C 07H 15/04, C 07K 3/08, A 61K 39/385 // C 07H 11/04
( B ) (11) KUULUTUSJ'ULKÅISU UTLAGGNINGSSKRIFT 89172 C /1:3) P3,',y.. - (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5 C 7H 15/4, C 7K 3/8, A 61K 39/385 // C 7H 11/4 -- SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus Patent-
LisätiedotInjektioneste, suspensio. Vaaleanpunertava tai valkoinen neste, joka sisältää valkoista sakkaa. Sakka sekoittuu helposti ravisteltaessa.
1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI Trilyme injektioneste, suspensio koirille 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS Yksi annos (1 ml) sisältää: Vaikuttavat aineet: Inaktivoitu Borrelia burgdorferi sensu lato: Borrelia
LisätiedotLabquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 3/2012
Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 3/2012 Kuvat ja teksti: Markku Koskela Mikrobiologian ylilääkäri OYS, Oulu Huom! Käyttäkää yläpalkin suurennusmahdollisuutta 100-400% pesäkekasvun
LisätiedotBI4 IHMISEN BIOLOGIA
BI4 IHMISEN BIOLOGIA MITÄ ROKOTUKSIA? Muistatko mitä rokotuksia olet saanut ja minkä viimeiseksi? Miten huolehdit koulun jälkeen rokotuksistasi? Mikrobit uhkaavat elimistöä Mikrobit voivat olla bakteereita,
LisätiedotArvokkaiden yhdisteiden tuottaminen kasveissa ja kasvisoluviljelmissä
Arvokkaiden yhdisteiden tuottaminen kasveissa ja kasvisoluviljelmissä Siirtogeenisiä organismeja käytetään jo nyt monien yleisten biologisten lääkeaineiden valmistuksessa. Esimerkiksi sellaisia yksinkertaisia
LisätiedotSUOMI-FINLAND (22) Hakemispäivä - Ansökningsdag 07.11.85 (FI)
(13) (11) KUULUTUSJULKA I SU UTLAGGN I NGSSKR I FT 84558 C ( 3) T t t y (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5 2:1 A 61K 39/12, C 07K 7/08 (21) Patenttihakemus - Patentansökning 854396 SUOMI-FINLAND (22) Hakemispäivä
LisätiedotOvatko MDR-mikrobit samanlaisia?
Ovatko MDR-mikrobit samanlaisia? Risto Vuento 1 Onko sillä merkitystä, että MDR-mikrobit ovat samanlaisia tai erilaisia? Yleisesti kaikkeen hankittuun resistenssiin pitäisi suhtautua vakavasti Varotoimet
LisätiedotYersinia-serologia. Markus Penttinen 041105 Lääketieteellinen mikrobiologia Turun yliopisto
Yersinia-serologia Markus Penttinen 041105 Lääketieteellinen mikrobiologia Turun yliopisto Yersiniainfektio Yersiniainfektio aiheuttaa mm. seuraavia tauteja: 1. Akuutteja tauteja - suolistotulehduksia
LisätiedotMikrobilääkeresistenssitilanne Suomessa ja maailmalla
Mikrobilääkeresistenssitilanne Suomessa ja maailmalla Jari Jalava, FT 7.4.2017 1 Mikrobilääkeresistenssin seurantamekanismit FiRe - Finnish Study Group for Antimicrobial Resistance Tartuntatautirekisteri
LisätiedotVALMISTEYHTEENVETO. Valkoista kuiva-ainetta sisältävä injektiopullo ja väritöntä liuotinta sisältävä ruisku.
VALMISTEYHTEENVETO 1. LÄÄKEVALMISTEEN NIMI Act-HIB,10 mikrog/0,5 ml injektiokuiva-aine ja liuotin, liuosta varten Haemophilus influenzae tyyppi b (Hib) -rokote (konjugoitu) 2. VAIKUTTAVAT AINEET JA NIIDEN
LisätiedotBiomolekyylit ja biomeerit
Biomolekyylit ja biomeerit Polymeerit ovat hyvin suurikokoisia, pitkäketjuisia molekyylejä, jotka muodostuvat monomeereista joko polyadditio- tai polykondensaatioreaktiolla. Polymeerit Synteettiset polymeerit
LisätiedotHevosten rokottaminen. Eläinlääkäri Martti Nevalainen Intervet Oy, osa Schering-Plough konsernia
Hevosten rokottaminen Eläinlääkäri Martti Nevalainen Intervet Oy, osa Schering-Plough konsernia Miksi rokotuttaa hevosia? Pyritään ennaltaehkäisemään tai lieventämään tartuntatauteja, jotka saattavat aiheuttaa
LisätiedotKandiakatemiA Kandiklinikka
Kandiklinikka Kandit vastaavat Immunologia Luonnollinen ja hankittu immuniteetti IMMUNOLOGIA Ihmisen immuniteetti pohjautuu luonnolliseen ja hankittuun immuniteettiin. Immunologiasta vastaa lymfaattiset
Lisätiedot30 RYHMÄ FARMASEUTTISET TUOTTEET
30 RYHMÄ FARMASEUTTISET TUOTTEET Huomautuksia 1. Tähän ryhmään eivät kuulu: a) ravintovalmisteet ja juomat (kuten dieettiset, diabeettiset tai "vahvistetut" ravintovalmisteet, lisäravinteet, vahvistavat
Lisätiedot111 11111111 III IIII 1111111111111 11 11111 II III III
111 11111111 III IIII 1111111111111 11 11111 II III III F I 000B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 30.06.2000 SUOMI - FINLAND (FI) PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS
LisätiedotActinobacillus pleuropneumoniae, serotyyppi 2, kanta RP 1*
1. ELÄINLÄÄKEVALMISTEEN NIMI Hyobac App Multi Vet., injektioneste, emulsio 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS Vaikuttavat aineet: Annosta kohti (1,0 ml) Actinobacillus pleuropneumoniae, serotyyppi
LisätiedotHunajan terveysvaikutuksista. Helsingin yliopisto, Ruralia-instituutti ja Luomuinstituutti Carina Tikkanen-Kaukanen FT, dosentti, tutkimusjohtaja
Hunajan terveysvaikutuksista Helsingin yliopisto, Ruralia-instituutti ja Luomuinstituutti Carina Tikkanen-Kaukanen FT, dosentti, tutkimusjohtaja BerryFoods A. Tuotekehitysosio Pilot-mallituote:marja-hunajmehu,
LisätiedotMiten tulkitsen mikrobiologisia laboratoriovastauksia?
Miten tulkitsen mikrobiologisia laboratoriovastauksia? 08.11.2017 Sisätautimeeting Kerttu Saha, sairaalamikrobiologi Seinäjoen keskussairaala, Kliininen mikrobiologia Mikrobiologiset tutkimukset - Etsitään
LisätiedotAutoimmuunitaudit: osa 1
Autoimmuunitaudit: osa 1 Autoimmuunitaute tunnetaan yli 80. Ne ovat kroonisia sairauksia, joiden syntymekanismia eli patogeneesiä ei useimmissa tapauksissa ymmärretä. Tautien esiintyvyys vaihtelee maanosien,
Lisätiedotb) Laske prosentteina, paljonko sydämen keskimääräinen teho muuttuu suhteessa tilanteeseen ennen saunomista. Käytä laskussa SI-yksiköitä.
Lääketieteellisten alojen valintakokeen 009 esimerkkitehtäviä Tehtävä 4 8 pistettä Aineistossa mainitussa tutkimuksessa mukana olleilla suomalaisilla aikuisilla sydämen keskimääräinen minuuttitilavuus
LisätiedotSUOMI FINLAND (21) Patenttihakemus - Patentansökning 860015
111111111111111111111111111 1 111111111111111111 1 111111111111111111 1 111 F 0000B (B) (U)KUULUTUBJULKAIBU UTLAGGNINGSSKRIFT '''` Pat: - t :::13cl -J.t 27 C3 12:5 (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5 A 61K 39/00,
LisätiedotImmuunipuutokset. Olli Vainio OY Diagnostiikan laitos OYS Kliinisen mikrobiologian laboratorio 17.10.2008
Immuunipuutokset Olli Vainio OY Diagnostiikan laitos OYS Kliinisen mikrobiologian laboratorio 17.10.2008 Immuunijärjestelm rjestelmän n toiminta Synnynnäinen immuniteetti (innate) Välitön n vaste (tunneissa)
LisätiedotLIITE I VALMISTEYHTEENVETO
LIITE I VALMISTEYHTEENVETO 1 1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI Nobivac L4 injektioneste, suspensio koirille 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS Yksi 1 ml:n annos sisältää: Vaikuttavat aineet: Inaktivoidut Leptospira
LisätiedotRiskiryhmien pneumokokkirokotukset
Riskiryhmien pneumokokkirokotukset Hanna Nohynek Sairaanhoitopiirien tartuntatautipäivät 30.9.2013 Rokotusten ja Immuunipuolustuksen osasto 2013-09-30 Riskiryhmien Pnc rokotukset / HNohynek 1 Pneumokokkirokotteet
Lisätiedot(12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 106844 B. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 30.04.2001. (51) Kv.Ik.7 - Intk1.7
11111111111111i111111 100 11(311111111,111i1111111111i 1111111 (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI 106844 B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 30.04.2001 SUOMI - FINLAND (FI) (51) Kv.Ik.7
LisätiedotSUOIVII FINLAND (21) Patenttihakemus Patentansökning 883876
1111111 11111 1111 111111111111111111111111111111111111 F 10000B (B) (11)KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT C (45) Patentti myönnetty Patznt me1de1at 27 01 1997 (51) Kv.lk.6 - Int.c1.6 A 61K 39/09, C 12N
LisätiedotTehtävä 2. Selvitä, ovatko seuraavat kovalenttiset sidokset poolisia vai poolittomia. Jos sidos on poolinen, merkitse osittaisvaraukset näkyviin.
KERTAUSKOE, KE1, SYKSY 2013, VIE Tehtävä 1. Kirjoita kemiallisia kaavoja ja olomuodon symboleja käyttäen seuraavat olomuodon muutokset a) etanolin CH 3 CH 2 OH höyrystyminen b) salmiakin NH 4 Cl sublimoituminen
Lisätiedot5 LIUOKSEN PITOISUUS Lisätehtävät
LIUOKSEN PITOISUUS Lisätehtävät Esimerkki 1. a) 100 ml:ssa suolaista merivettä on keskimäärin 2,7 g NaCl:a. Mikä on meriveden NaCl-pitoisuus ilmoitettuna molaarisuutena? b) Suolaisen meriveden MgCl 2 -pitoisuus
LisätiedotClinical impact of serum proteins on drug delivery Felix Kratz, Bakheet Elsadek Journal of Controlled Release 161 (2012)
Clinical impact of serum proteins on drug delivery Felix Kratz, Bakheet Elsadek Journal of Controlled Release 161 (2012) 429 445 Sampo Kurvonen 25.10.2017 Sisältö Plasmaproteiineista Albumiini Transferriini
Lisätiedot11111111111 1111111 1 111111 1111111 II 1111111111111 1111 F I 000103122B
11111111111 1111111 1 111111 1111111 II 1111111111111 1111 F I 000B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRIFT (10) FI B (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats 30.04.1999 (51) Kv.lk.6 - Int.k1.6 SUOMI-FINLAND
LisätiedotPihkauutteen mikrobiologiaa
Pihkauutteen mikrobiologiaa 1. Taustaa Lapin ammattiopiston toimeksiannosta tutkittiin pihka / kasvisöljyseoksen antimikrobista tehoa. 2. Tutkimusmenetelmä Antimikrobinen teho arvioitiin sovelletulla agardiffuusiomenetelmällä
Lisätiedot(Muut kuin lainsäätämisjärjestyksessä hyväksyttävät säädökset) ASETUKSET
1.10.2018 L 245/1 II (Muut kuin lainsäätämisjärjestyksessä hyväksyttävät säädökset) ASETUKSET KOMISSION ASETUS (EU) 2018/1461, annettu 28 päivänä syyskuuta 2018, Euroopan parlamentin ja neuvoston asetuksen
Lisätiedot1. ELÄINLÄÄKEVALMISTEEN NIMI. AURIZON korvatipat, suspensio 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS
VALMISTEYHTEENVETO 1. ELÄINLÄÄKEVALMISTEEN NIMI AURIZON korvatipat, suspensio 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS 1 ml valmistetta sisältää: Vaikuttavat aineet: Marbofloksasiini... 3,0 mg Klotrimatsoli...
LisätiedotVALMISTEYHTEENVETO. Duramune DAPPi injektiokuiva-aine, kylmäkuivattu ja liuotin suspensiota varten
VALMISTEYHTEENVETO 1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI Duramune DAPPi injektiokuiva-aine, kylmäkuivattu ja liuotin suspensiota varten 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS 1 annos (1 ml) sisältää: Vaikuttavat aineet:
LisätiedotKomplementtitutkimukset
Komplementtitutkimukset Hanna Jarva HUSLAB ja Haartman-instituutti Bakteriologian ja immunologian osasto Komplementti osa luontaista immuunijärjestelmää koostuu yli 30 proteiinista aktivoituu kaskadimaisesti
LisätiedotLasten immuunipuutokset. Merja Helminen Lasten infektiolääkäri TaYS lastenklinikka 2004
Lasten immuunipuutokset Merja Helminen Lasten infektiolääkäri TaYS lastenklinikka 2004 Mikä on poikkeava infektioherkkyys lapsella? Sairausjaksot ikäryhmittäin päiväkotilapsilla Pönkä ym. 1994 Ikä (v)
Lisätiedot11. Elimistö puolustautuu
11. Elimistö puolustautuu Taudinaiheuttajat Tautimikrobit (= patogeenit): Bakteerit (esim. kolera), virukset (esim. influenssa), alkueliöt (esim. malaria), eräät sienet (esim. silsa) Aiheuttavat infektiotaudin
LisätiedotEPIONEN Kemia 2015. EPIONEN Kemia 2015
EPIONEN Kemia 2015 1 Epione Valmennus 2014. Ensimmäinen painos www.epione.fi ISBN 978-952-5723-40-3 Painopaikka: Kopijyvä Oy, Kuopio Tämän teoksen painamiseen käytetty paperi on saanut Pohjoismaisen ympäristömerkin.
LisätiedotLIITE I VALMISTEYHTEENVETO
LIITE I VALMISTEYHTEENVETO 1 1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI Porcilis ColiClos injektioneste, suspensio sioille 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS Yksi 2 ml:n annos sisältää: Vaikuttavat aineet: Escherichia
LisätiedotSUOMI-FINLAND 0 KUULUTUSJULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFt43094
SUOMI-FINLAND 0 KUULUTUSJULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFt Kv. lk./int. Cl. C 1 2 k 7/00 Lk./KI. 30 h 6 CO Patentti myönnetty 11 11971 Patent meddetat Patenttihakemus Patentansökning 2099/66 Hakemispkiivä Ansökningsdag
LisätiedotMyymälässä pakattujen juustojen mikrobiologinen laatu ja käsittelyhygienia
Myymälässä pakattujen juustojen mikrobiologinen laatu ja käsittelyhygienia Projektiyhteenveto 2014 Pääkaupunkiseudun kunnissa toteutettiin touko-lokakuussa 2014 yhteinen projekti, jonka tarkoituksena oli
LisätiedotVALMISTEYHTEENVETO. Täydellisen parenteraalisen ravitsemuksen täydennyksenä vesiliukoisten vitamiinien päivittäisen tarpeen tyydyttämiseksi.
VALMISTEYHTEENVETO 1. LÄÄKEVALMISTEEN NIMI Soluvit infuusiokuiva-aine, liuosta varten 2. VAIKUTTAVAT AINEET JA NIIDEN MÄÄRÄT Yksi Soluvit-injektiopullo sisältää: Yksi pullo sisältää vaikuttavia aineita:
LisätiedotLIITE EMEAN TIETEELLISET JOHTOPÄÄTÖKSET JA HYLKÄYSPERUSTEET
LIITE EMEAN TIETEELLISET JOHTOPÄÄTÖKSET JA HYLKÄYSPERUSTEET LÄÄKEVALMISTEKOMITEAN () 19. HEINÄKUUTA 2007 ANTAMAN VALMISTETTA NIMELTÄ NATALIZUMAB ELAN PHARMA KOSKEVAN LAUSUNNON UUDELLEENARVIOINTI Heinäkuussa
LisätiedotNucala. 01.02.2016 Versio 1 RISKIENHALLINTASUUNNITELMAN JULKINEN YHTEENVETO
EMA/671186/2015 Nucala 01.02.2016 Versio 1 RISKIENHALLINTASUUNNITELMAN JULKINEN YHTEENVETO VI.2 Julkisen yhteenvedon osiot Tämä on Nucalan riskienhallintasuunnitelman yhteenveto, jossa esitetään toimenpiteet,
LisätiedotLasten rokotukset. HBV - riskiryhmät. Suomen rokotusohjelma. Suomen lasten rokotusohjelma - riskiryhmät. Suomen rokotusohjelma - riskiryhmät
Suomen rokotusohjelma Lasten rokotukset 27.9.2013 Yleinen rokotusohjelma Rota DTaP-IPV-Hib + Rota + PCV DTaP-IPV-Hib + Rota + PCV DTaP-IPV-Hib + PCV MPR Influenssa DTaP-IPV MPR dtap tulossa: HPV Lapset
LisätiedotPAKKAUSSELOSTE. Erbitux 2 mg/ml infuusioneste, liuos Setuksimabi
PAKKAUSSELOSTE Erbitux 2 mg/ml infuusioneste, liuos Setuksimabi Lue tämä pakkausseloste huolellisesti, ennen kuin aloitat lääkkeen käyttämisen. Säilytä tämä pakkausseloste. Voit tarvita sitä myöhemmin.
LisätiedotMikrobilääkeresistenssi Pohjois-Savon sairaanhoitopiirissä 2018
Mikrobilääkeresistenssi ssä www.islab.fi Terveydenhuollon-ammattilaiselle Mikrobiologian tilastoja kliinisesti tärkeimmät bakteerilajit ja näytelaadut yksi kyseisen lajin bakteerikantalöydös/potilas Herkkyysmääritysstandardi:
LisätiedotSELKÄYDINNESTEEN PERUSTUTKIMUKSET
Käyttöönottopäivä: 21.11.2011 1 (5) SELKÄYDINNESTEEN PERUSTUTKIMUKSET Atk-numero ja -lyhenne 1154 Li-BaktVi 1470 Li-Gluk 2186 Li-Laktaat 2514 Li-Prot 2655 Li-Solut 4059 Li-Syto Likvorin irtosolututkimus
LisätiedotGLUTEENIANALYTIIKKA KELIAKIAN KANNALTA. Viljateknologien Helmikollokvio Hartwall, Lahti 8.2.2008 Päivi Kanerva
GLUTEENIANALYTIIKKA KELIAKIAN KANNALTA Viljateknologien Helmikollokvio Hartwall, Lahti 8.2.2008 Päivi Kanerva Gluteenittomuus Gluteenittomia tuotteita koskevan standardin on asettanut Codex Alimentarius
LisätiedotPihkauutteen mikrobiologiaa. Perusselvitys pihkajalosteen antimikrobisista ominaisuuksista
Pihkauutteen mikrobiologiaa Perusselvitys pihkajalosteen antimikrobisista ominaisuuksista Rainer Peltola Täsmätietoa Lapin luonnontuotteista maakunnalle 2016 Pihkauutteen mikrobiologiaa Perusselvitys
LisätiedotNivelreuman serologiset testit: mitä ne kertovat? LT, apulaisylilääkäri Anna-Maija Haapala TAYS Laboratoriokeskus
Nivelreuman serologiset testit: mitä ne kertovat? LT, apulaisylilääkäri Anna-Maija Haapala TAYS Laboratoriokeskus Sisältö 1. Nivelreuma: etiologia, esiintyvyys, diagnostiikka 2. Nivelreuman serologiset
LisätiedotI1111111 111111111IlIl 11111111111111111111181111111111i
I1111111 111111111IlIl 11111111111111111111181111111111i F I00008 111111 il I I Ill (B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 91688. L.-*, 1.-Lu-..IC " _ b./ n * I. - A I... I. 1. n!. : :,.:. (17) :-
LisätiedotKEMIA HYVÄN VASTAUKSEN PIIRTEET
BILÄÄKETIETEEN enkilötunnus: - KULUTUSJELMA Sukunimi: 20.5.2015 Etunimet: Nimikirjoitus: KEMIA Kuulustelu klo 9.00-13.00 YVÄN VASTAUKSEN PIIRTEET Tehtävämonisteen tehtäviin vastataan erilliselle vastausmonisteelle.
LisätiedotKUULUTUSJULKAISU r 7. Patentti MY'jnr1.2'_ ty 10 Cl 193 (45) 1i. (go) KvA?mit.a3. (21) Patenttlhakemus Patemensökning (n) HaltemispIllvi AmoöknIquelag
SUOMI FINLAND (F I) Patentti- ja rekisterihallitus Patent- och registerstyreisen (B]. KUULUTUSJULKAISU r 7 C UTLAGGNINGSSKRIFT 0 Patentti MY'jnr1.2'_ ty 10 Cl 193 (45) 1i (go) KvA?mit.a3 (21) Patenttlhakemus
LisätiedotVALMISTEYHTEENVETO. Yksi millilitra käyttövalmista oraalisuspensiota sisältää amoksisilliinitrihydraattia vastaten amoksisilliinia 50 mg.
VALMISTEYHTEENVETO 1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI Amovet vet 50 mg/ml jauhe oraalisuspensiota varten 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS Vaikuttava aine: Yksi millilitra käyttövalmista oraalisuspensiota sisältää
LisätiedotCosentyx-valmisteen (sekukinumabi) riskienhallintasuunnitelman yhteenveto
EMA/775515/2014 Cosentyx-valmisteen (sekukinumabi) riskienhallintasuunnitelman yhteenveto Tämä on Cosentyx-valmisteen riskienhallintasuunnitelman yhteenveto, jossa esitetään toimenpiteet, joilla varmistetaan,
LisätiedotVALMISTEYHTEENVETO. Ei saa käyttää tapauksissa, joissa esiintyy yliherkkyyttä penisilliineille, kefalosporiineille tai apuaineille.
VALMISTEYHTEENVETO 1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI KEFAVET VET 50 mg/ml rakeet oraalisuspensiota varten 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS 1 ml sisältää: Vaikuttava aine: Kefaleksiinimonohydraatti vastaten
Lisätiedot(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 83667. (51) Kv.lk.5 - Int.cl.5 C 12N 5/18, A 61K 39/012. (21) Patenttihakemus - Patentansökning 843142
(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 83667 _. (51) Kv.lk.5 - Int.cl.5 C 12N 5/18, A 61K 39/012 SUOMI-FINLAND (FI) Patentti- ja rekisterihallitus Patent- och registerstyrelsen (21) Patenttihakemus
Lisätiedot( II ) ( 1 1 ) KUULUTUSJULKA I SU. UTLAGGN I NG S SKR I FT C ( " r) (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5. (24) Alkupäivä - Löpdag 30.05.85
( II ) ( 1 1 ) KUULUTUSJULKA I SU UTLAGGN I NG S SKR I FT C ( " r) (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5. 84431 A 61K 39/02, C 07K 15/04, C 12P 21/00 (21) Patenttihakemus - Patentansökning 860417 SUOMI-FINLAND (FI)
Lisätiedot(FI) (41) Tullut julkiseksi - Blivit offentlig 05.12.85
(B) (11)KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT 81452 C ( ) (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5 _ G O1N 33/571, C 07K 7/04, A 61K 39/00 (21) Patenttihakemus - Patentansökning 854839 (22) Hakemispäivä - Ansökningsdag 05.12.85
LisätiedotHistopatologian. Pirkko Hirsimäki. patologian palvelualue
Histopatologian värjäystekniikka: äjä tk kierrospalaute Pirkko Hirsimäki TYKS-SAPA SAPA liikelaitos l i patologian palvelualue 5.2.2010 2010 1 Ulkoinen laadunarviointikierros: Histopatologia 4/2008 Osallistujat
LisätiedotLIITE I VALMISTEYHTEENVETO
LIITE I VALMISTEYHTEENVETO 1 1. LÄÄKEVALMISTEEN NIMI Synflorix injektioneste, suspensio esitäytetyssä ruiskussa Konjugoitu pneumokokkipolysakkaridirokote (adsorboitu) 2. VAIKUTTAVAT AINEET JA NIIDEN MÄÄRÄT
LisätiedotCORTIMENT (budesonidi) 26.11.2013, versio 1.0 RISKIENHALLINTASUUNNITELMAN JULKINEN YHTEENVETO
CORTIMENT (budesonidi) 26.11.2013, versio 1.0 RISKIENHALLINTASUUNNITELMAN JULKINEN YHTEENVETO VI.2 Julkisen yhteenvedon osiot VI.2.1 Tietoa sairauden esiintyvyydestä Haavainen paksusuolentulehdus (UC)
LisätiedotKOMISSION ASETUS (EU) /, annettu , asetuksen (EY) N:o 847/2000 muuttamisesta vastaavanlaisen lääkkeen käsitteen määritelmän osalta
EUROOPAN KOMISSIO Bryssel 29.5.2018 C(2018) 3193 final KOMISSION ASETUS (EU) /, annettu 29.5.2018, asetuksen (EY) N:o 847/2000 muuttamisesta vastaavanlaisen lääkkeen käsitteen määritelmän osalta (ETA:n
LisätiedotTÄS ON PROTSKUU! Missä yhteyksissä olet törmännyt sanaan proteiini tai valkuaisaine?
TÄS ON PROTSKUU! KOHDERYHMÄ: Työ soveltuu parhaiten yläkouluun kurssille elollinen luonto ja yhteiskunta, sekä lukioon kurssille KE1. KESTO: Työ koostuu kahdesta osasta: n. 30 min/osa. MOTIVAATIO: Mitä
LisätiedotLabquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 4/2014
Labquality Ulkoinen laadunarviointikierros Bakteeriviljely 1 4/2014 Kuvat ja teksti: Markku Koskela Mikrobiologian ylilääkäri Nordlab Oulu Huom! Käyttäkää yläpalkin suurennusmahdollisuutta 100-400% pesäkekasvun
LisätiedotTARTUNTATAUDIT Ellen, Olli, Maria & Elina
TARTUNTATAUDIT Ellen, Olli, Maria & Elina ELIMISTÖN PUOLUSTUSKYKY Immuniteetti eli vastutuskyky on elimistön kyky suojautua tarttuvilta taudeilta Jos tauteja aiheuttavat mikrobit uhkaavat elimistöä, käynnistyy
LisätiedotTehtävä 1. Valitse seuraavista vaihtoehdoista oikea ja merkitse kirjain alla olevaan taulukkoon
Tehtävä 1. Valitse seuraavista vaihtoehdoista oikea ja merkitse kirjain alla olevaan taulukkoon A. Mikä seuraavista hapoista on heikko happo? a) etikkahappo b) typpihappo c) vetykloridihappo d) rikkihappo
LisätiedotKäytännön asiaa rokottamisesta
Käytännön asiaa rokottamisesta TH Nina Strömberg Rokotusten ja immuunisuojan osasto THL 16.2.2011 Valtakunnalliset Terveydenhoitajapäivät 2011 1 Rokotteiden säilyvyys Rokotteet ovat herkkiä lämpötilan
LisätiedotS UOM 1 FI N LAN D 0 KUULUTUSJULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFT 4 5 7 6 6
S UOM 1 FI N LAN D 0 KUULUTUSJULKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFT 4 5 7 6 6 Kv. lk./int. Cl. C 12 k 5/00 (5:» Uc./KI. 30 h 6 Patentti myönnetty Patent meddelat 11 IX 1972 Patenttihakemus Patentansökning 547 /6 9
Lisätiedot1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI. SUISENG vet. Injektioneste, suspensio, sioille 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS. Koostumus annosta kohti (2 ml):
1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI SUISENG vet. Injektioneste, suspensio, sioille 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS Koostumus annosta kohti (2 ml): Vaikuttavat aineet: E. colin F4ab-fimbrian adhesiini 65 % ER
LisätiedotVALMISTEYHTEENVETO 1. LÄÄKEVALMISTEEN NIMI 2. VAIKUTTAVAT AINEET JA NIIDEN MÄÄRÄT 3. LÄÄKEMUOTO 4. KLIINISET TIEDOT. 4.
VALMISTEYHTEENVETO 1. LÄÄKEVALMISTEEN NIMI TROSYD 1 % emulsiovoide 2. VAIKUTTAVAT AINEET JA NIIDEN MÄÄRÄT Yksi gramma emulsiovoidetta sisältää 10 mg tiokonatsolia. Täydellinen apuaineluettelo, ks. kohta
LisätiedotTESTAUSSELOSTE. E. coli-lux kokonaistoksisuusmittaus huonepölystä TURUN YLIOPISTO BIOKEMIAN LAITOS IMMUNOKEMIAN LABORATORIO
TESTAUSSELOSTE E. coli-lux kokonaistoksisuusmittaus huonepölystä TURUN YLIOPISTO BIOKEMIAN LAITOS IMMUNOKEMIAN LABORATORIO 1 (4) 1. Yleistiedot 1.1 Tutkimuskohde ja tunnistetiedot Loviisa / koulu / hk-tilat
LisätiedotVALMISTEYHTEENVETO 1. LÄÄKEVALMISTEEN NIMI
VALMISTEYHTEENVETO 1. LÄÄKEVALMISTEEN NIMI ditebooster Injektioneste, suspensio, esitäytetyissä ruiskuissa. Kurkkumätä- ja jäykkäkouristusrokote (adsorboitu, vähennetty antigeenimäärä) 2. VAIKUTTAVAT AINEET
LisätiedotNaproxen Orion 25 mg/ml oraalisuspensio. 26.10.2015, Versio 1.2 RISKIENHALLINTASUUNNITELMAN JULKINEN YHTEENVETO
Naproxen Orion 25 mg/ml oraalisuspensio 26.10.2015, Versio 1.2 RISKIENHALLINTASUUNNITELMAN JULKINEN YHTEENVETO VI.2 VI.2.1 Julkisen yhteenvedon osiot Tietoa sairauden esiintyvyydestä Naproxen Orion on
LisätiedotVALMISTEYHTEENVETO. Addex-Kaliumklorid 150 mg/ml infuusiokonsentraatti. Osmolaliteetti: noin 4 000 mosm/kg vettä ph: noin 4
VALMISTEYHTEENVETO 1. LÄÄKEVALMISTEEN NIMI Addex-Kaliumklorid 150 mg/ml infuusiokonsentraatti 2. VAIKUTTAVAT AINEET JA NIIDEN MÄÄRÄT 1 ml Addex-Kaliumkloridia sisältää: Kaliumkloridi 150 mg/ml, joka vastaa
LisätiedotKondensaatio ja hydrolyysi
Kondensaatio ja hydrolyysi REAKTIOT JA ENERGIA, KE3 Määritelmä, kondensaatioreaktio: Kondensaatioreaktiossa molekyylit liittyvät yhteen muodostaen uuden funktionaalisen ryhmän ja samalla molekyylien väliltä
LisätiedotVesirokkorokotukset vihdoinkin lasten rokotusohjelmaan
Vesirokkorokotukset vihdoinkin lasten rokotusohjelmaan Tuija Leino, ylilääkäri Rokotusohjelmayksikkö 5.5.2017 Ei sidonnaisuuksia lääketeollisuuteen, THL: ssä vuodesta 1997 27.4.2017 Esityksen nimi / Tekijä
Lisätiedotniin monta nisäkäs-siirtoktilkua, ettei niiden hengitystien epiteelissä
SUOMI-FINLAND (I» KUULUTUSJOLKAISU UTLÄGGNINGSSKRIFT 41428 Kv. lk./int. Cl. A 61 k 23/00 30 h 6 ;inn3tt:r 10 ZI 1?(.) Patenttihakemus Patentansökning 983/65 Qit Hakemispäivä Ansökningsdag 22 IV 1965 Alkupäivä
LisätiedotSanna Nikunen ELL 4.10.2012
Sanna Nikunen ELL 4.10.2012 Kuuluu heimoon Orthomyxoviridae, joka jaetaan kahteen sukuun; Influenssa A- ja B- virukset sekä influenssa C-virukset A-virukset eläimillä ja ihmisillä, B- virukset harvinaisempia,
LisätiedotTutkimus odottaville äideille.
Tutkimus odottaville äideille. Hyvä odottava äiti! Tampereen yliopiston rokotetutkimuskeskus toteuttaa paikkakunnallasi tutkimuksen, jolla selvitetään kuinka tehokkaasti yleisesti käytössä olevan dtap-
LisätiedotIMMUUNIPUUTOKSET. Olli Vainio Turun yliopisto
IMMUUNIPUUTOKSET Olli Vainio Turun yliopisto 130204 IMMUNOLOGIA Oppi kehon puolustusmekanismeista infektiota vastaan Immuunijärjestelmä = kudokset, solut ja molekyylit, jotka muodostavat vastustuskyvyn
LisätiedotVALMISTEYHTEENVETO. Valmistetta ei saa antaa kanille, marsulle, hamsterille, gerbiilille eikä muille pienille jyrsijöille.
1. ELÄINLÄÄKKEEN NIMI Amovet vet 150 mg/ml injektioneste, suspensio VALMISTEYHTEENVETO 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS 1 ml sisältää: Vaikuttava aine: Amoksisilliinitrihydraatti (172,1 mg) vastaten
LisätiedotKeuhkoahtaumatauti pahenemisvaiheen hoito
Keuhkoahtaumatauti pahenemisvaiheen hoito Keuhkoahtautmatauti Mahdollisimman varhainen taudin diagnostiikka Diagnoosi on oikea Optimaalinen lääkitys ja hoito: -tupakoinnin lopetus -lääkitys -kuntoutus
LisätiedotMitä moniresistentin mikrobin kantajuus tarkoittaa? Eristääkö vai ei?
Mitä moniresistentin mikrobin kantajuus tarkoittaa? Eristääkö vai ei? Infektioiden torjunnalla turvaa ja laatua hoitolaitoksiin Alueellinen koulutuspäivä 29.11.2016 Hygieniahoitaja, Anu Harttio-Nohteri/VSSHP
LisätiedotSource: http://industrydocuments.library.ucsf.edu/tobacco/docs/kmpc0106
t PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS PATENTTI OSAS'I'0 Hakemus : 921078 Luokka : A 24B 015/26 Tutkij a : Hakija : Asiamies : KR Philip Morris Products Inc. Oy Borenius & Co Ab / Pia Hjelt, puh. 492593 Asiamiehen
LisätiedotENTSYYMIKATA- LYYSIN PERUSTEET (dos. Tuomas Haltia)
ENTSYYMIKATA- LYYSIN PERUSTEET (dos. Tuomas Haltia) Elämän edellytykset: Solun täytyy pystyä (a) replikoitumaan (B) katalysoimaan tarvitsemiaan reaktioita tehokkaasti ja selektiivisesti eli sillä on oltava
Lisätiedot