Ituepidemia ja VTEC -tutkimukset elintarvikkeista Saija Hallanvuo Mikrobiologian tutkimusyksikkö Ajankohtaista laboratoriorintamalla / 12.10.2011
EHEC-ITUEPIDEMIAN VAIHEITA: Vahva signaali epidemiasta Saksassa Kuluttajien ohjeistus: Pohjois-Saksassa vältettävä kurkkuja, tomaatteja, salaattia Varautuminen mahdollisiin tutkimuksiin alkaa Evirassa Toukokuu 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 Kesäkuu Kurkkujen STEC löydös EI ole epidemiatyyppiä (O104) Epäilykset kohdistuvat luomuituihin (Ala-Saksilainen tuottaja). Evira tiedottaa: ituja ei Suomessa Uusi kuluttajien ohjeistus: vältettävä raakoja ituja 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Suomalainen Saksassa matkustanut varmistuu tartunnan kantajaksi - toipuu ECDC: 2508 EHEC-tapausta, 817 HUS tapausta, 36 kuolemaa (EU) Kesäkuu 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 10 tapauksen rypäs löytyy Ranskasta. Epäillään ituja, jotka kasvatettu siemenseoksesta: sinappi, rucola ja sarviapila Evirassa sovitaan näytteenotosta (kohdistuen kaikkiin ituihin) Heinäkuu 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Saksassa jäljitys egyptiläiseen sarviapilan siemenerään, 49 kuollutta, 4100 sairastunutta (EU) Suomesta löytyy sittenkin epäilyksenalaisia sarviapilan siemeniä - ensimmäiset näytteet Eviraan 26.7 16.9 1.10 Epidemia julistetaan päättyneeksi Itututkimukset (yht. 198) päättyvät Evirassa. Näytteistä ei todettu STEC -bakteereita EFSA kumoaa itujen kuumennuskehoituksen ja idätyskiellon
Ihmiselle patogeeniset E. colit Tartunnan alkuperä on aina uloste Voidaan jaotella kliinisten oireiden tai bakteerin ominaisuuksien mukaan
Ihmiselle patogeeniset E. colit Kliininen jaottelu: EHEC aiheuttaa paksusuolentulehduksen ja veriripulin, joka voi johtaa hemolyyttis-ureemiseen syndroomaan (HUS)
Ihmiselle patogeeniset E. colit: Jaottelu bakteerin ominaisuuksien mukaan: Aiheuttaa tyypilliset vauriot suolen limakalvon soluissa > LEE geenit > AEEC (Attaching and effacing E. coli) Vaurioita verisuonten sisäpinnalla > stx geenit > STEC (Shigatoksinen E. coli) Shigatoksinen = Verotoksinen (STEC = VTEC; stx = vtx) AFFSA s Opinion 15th July 2008
Ihmiselle patogeeniset E. colit: Epätyypilliset EHEC:it, myös Saksan epidemiakanta Tyypilliset EHEC:it, myös O157
ilmoitettuja sairastapauksia ilmaantuvuus Ihmiselle patogeeniset E. colit: 35 30 25 20 15 10 5 6 5 4 3 2 1 0 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 non-o157 tapauksia/vuosi O157 tapauksia/vuosi EHEC ilmaantuvuus/ milj. asukasta/vuosi kotimaisten EHEC tartuntojen ilmaantuvuus / milj. asukasta/ vuosi 0
Ihmiselle patogeeniset E. colit ja tutkimukset: Non O157 EHEC:it Tärkeimmät serotyypit: O26, O111, O103 ja O145 Vastaavat noin puolesta EHEC -sairastumisista Saksan epidemiatyyppi O104 Tutkimisen tärkeys Viimeistään Saksan epidemia opetti Tuoretuottajat heränneet tutkituttamaan koko ryhmää, ei pelkkää O157:aa Kasvisvälitteisiä EHEC epidemioita esiintynyt lisääntyvässä määrin
Reaaliaikainen PCR tutkimus: Näytteestä etsitään kolmea bakteerin taudinaiheuttamiskykyyn liittyvää geeniä: Toksiinigeenit vtx1, vtx2 ja intimiiniä koodaava eae (Saksan variantilla oli näistä ainoastaan vtx2) Positiivinen tulos johtaa bakteerikannan eristysyritykseen IMS käsittelyn kautta (tai ilman) Sopii laboratorioille, joilla valmius reaaliaikaiseen PCR:ään ja kokemusta EHEC analytiikasta (akkreditoitu viljelymenetelmä) Huomioitava matriisien PCR:ää estävä vaikutus > validointi lisätyillä näytteillä, reaktion sisäinen kontrollointi
VTEC tutkimukset nyt ja tulevaisuudessa: Tilanne tällä hetkellä: ISO 16654:2001 NMKL 164:2005 Useat kaupalliset PCR kitit elintarvikkeille Tähtäävät O157 eristämiseen tai toteamiseen Tavoitetila tulevaisuudessa: Käytössä prcen ISO/TS 13136 standardi EFSA julkaissut vuonna 2009: http://www.efsa.europa.eu/en/efsajournal/pub/1366.htm Elintarvikkeita koskevat osiot löytyvät sivulta 22 ja liitteistä Tähtää VTEC bakteerien toteamiseen ja eristämiseen (serotyypit: O157, O26, O111, O103 ja O145)
VTEC bakteerien toteaminen: Näyte 25g Vertailu O157:n toteamiseen: 225 ml PPV (homog. 5 min) ))mmin)16mgnovobi(homogenisointi,stomach er) Rikastus 18 24 h 37 ±1 C mtsb liemi (selektiivisempi) lämpötila 41,5 C Rikastuslientä 1 ml, DNA:n eristys ja realtime PCR positiivinen PCR-tulos sekä vtx ja eae geenien suhteen negatiivinen PCRtulos; raportoidaan ei todettu VTEC IMS käsittely O157 spesifinen Serotyyppispesifinen Real-time PCR (5 eri PCRää) positiivinen PCR-tulos vtx, eae ja serotyyppispesif. sekvenssien suhteen Kohdebakteerin eristys pakastetusta rikasteliemestä (IMS avulla) ja/tai viljelemällä suoraan rikasteesta TBX, RMAC, CT-SMAC ja CHROMagar STEC, isolaatin varmistus vtx:illä, eae ja serotyyppispesif. PCR:llä. Tulosten raportointi serotyypeittäin Muut VTEC - bakteerit kuin O157 eivät tule esiin!