LQ:n laaduntarkkailukierros Histologian tekniikka 2004/1

Transkriptio

1 LQ:n laaduntarkkailukierros Histologian tekniikka 2004/1 Kudosleikkeiden värjääminen Happoa kestävien sauvojen osoittaminen Retikuliinisäikeiden osoittaminen Tulokset: Labqualityn kotisivuille Antero Laasonen EPSHP/Seinäjoen keskussairaala Patologian osasto

2 Laaduntarkkailukierros: Histologian tekniikka 2004/1 Arviointikierroksen toteutus: valmiit parafiinileikkeet ilmoittautuneille laboratorioille vuoden 2004 lokakuussa Osallistumisaktiivisuus: happoa kestävät sauvat (27/27) retikuliini (27/27) Kierroksen arvioi itsenäisesti 2 henkilöä Seinäjoen keskussairaalan patologian osastolta: solubiologi Satu Hautanen ja sairaalasolubiologi Antero Laasonen. Arviointitulokset ovat konsensus heidän antamistaan arvioinneista.

3 Laaduntarkkailukierros: Histologian tekniikka 2004/1 Yleistä värjäysten arvioinnista Arviointiasteikko: pistettä = erinomainen 4 pistettä = lähes moitteeton, - lievää ali- tai ylivärjäytymistä, vähäistä epätasaisuutta jne 3 pistettä = hyvä, diagnoosin kannalta riittävä, mutta selkeää alitai ylivärjäytymistä, epätasaisuutta, sakkaa jne 2 pistettä = tulos on heikko ja diagnoosin kannalta epävarma 1 piste = epäonnistunut, värjäytymistä havaittavissa vaikka erittäin niukasti 0 pistettä = negatiivinen - epäonnistunut

4 Laaduntarkkailukierros: Histologian tekniikka 2004/1 Happoa kestävien sauvojen osoittaminen Monikudosnäyte: Tuberkuloosi PAD: Tampereen yliopistollisen keskussairaalan ja Hyvinkään sairaalan (HUS) näytteistä poratut palat ( 3 lieriötä) Keinotekoinen keuhkotubinäyte /Seinäjoen keskussairaala kasvatettuja MT-basilleja fiksoitiin 1kk formaliinilla basillien saostus plasma-trombiini- menetelmällä ruiskutus tuoreeseen obduktiosta saatuun keuhkonäytteeseen (2 pv:n fiksaatio vakuumissa) runsaina keskittyminä esiintyneitä MT- basilleja

5 Laaduntarkkailukierros: Histologian tekniikka 2004/1 Arvioinnista CF(carbol fuchsin): Kaikista kolmesta eri potilasnäytteestä tuli osoittaa MT basillit (värjäsimme joka 10:n itse) Värjäystulos: Basillien tulisi värjäytyä punaisiksi tai voimakkaan vaaleanpunaisiksi Taustavärjäys: riittävä basillien lokalisoimiseksi (rakenteet) taustaväri ei saa peittää basilleja mahdollisimman selkeä kontrasti CF:n ja taustavärin välillä Pyrimme huomioimaan leikepaksuuden vaihtelusta aiheutuvia värjäytymiseroja.

6 Laaduntarkkailukierros: Histologian tekniikka 2004/1 Laboratorioiden käyttämät menetelmät: Laboratoriot värjäsivät happokestävät sauvat kahdella perusmenetelmällä: Ziehl-Neelsen ja Kinoyn. Perusperiaate molemmissa menetelmissä on sama, vain kemikaalien konsentraatiot ja värjäysajat poikkeavat toisistaan. Vasta-/taustavärinä käytettiin: Methylene blue (basic blue 9), Delafieldin Haematoxylin, Light green (acid green 5), Malachite green Carbol base (solvent green 1), Toluidine blue O (basic blue 17).

7 Laaduntarkkailukierros: Histologian tekniikka 2004/1 Yhteenveto tuloksista: MT basillien osoittamisessa onnistuttiin vaihtelevasti, keskiarvo 3.3. Erinomaisesti onnistuneita (5/27) Tampereen ja erityisesti Hyvinkään näytteistä MT basillien osoittamisessa oli nähtävissä selkeitä eroja laboratorioiden välillä. Niillä laboratorioilla, joilla keinotekoisessa näytteessä MT basillit värjäytyivät kohtalaiseesti tai hennosti, varsinaisissa "luonnollisissa" näytteissä basilleja oli vaikea havaita tai ne olivat negatiivisia (10/27). Yhden laboratorion tulos arvioitiin negatiiviseksi Usein taustaväri peitti basillit tai sen sävy oli lähellä bakteerien värisävyä

8 Laaduntarkkailukierros: Histologian tekniikka 2004/1 Happoa kestävät sauvat /Menetelmäkyselyn tulokset: Käsivärjäys (27/27) Carbol-fuchsin: - 30 min - 18h, RT min, o C - 30 sek, MW (450 W) - itse valmistettu CF: parhaat tulokset (kaupallinen myös ok) Vastaväri: - Metyleenisini (käytetyin) % -2% -2-3 sek-5 min RT - 1 % sek MW 450 W Histologisen erikoisvärjäyksen lisäksi/tukena: - 1/27 ilmoitti käyttävänsä immunohistokemiallista värjäystä ja - 1/27Auramiini-Rodamiinia

9 Tuloksista: happoa kestävät sauvat S:joen puntsi T:reen puntsi Hyvinkään puntsi Erinomainen, 1466 Erinomainen, 1466 Erinomainen, 1466

10 Tuloksista: Happoa kestävät sauvat Hyvinkään puntsi T:reen puntsi Epävarma, 21 Epävarma, 21

11 Tuloksista: happoa kestävät sauvat S:joen puntsi Vaihda taustaväriä S:joen puntsi Hyvä kontrasti CF/taustaväri

12 Laaduntarkkailukierros: Histologian tekniikka 2004/1 Retikuliinisäikeiden osoittaminen Monikudosnäyte Kudosten valinta: - palvelisivat mahdollisimman hyvin retikuliini-värjäyksen arviointia (maksa, aortta, munuainen, perna ja imusolmuke) Säikeiden arvioinnista retikuliini-verkoston osoittaminen: erityisesti maksa värjäyksen tasaisuus: - saman kudoksen eri palat puntsit intensiteetti: hennoimpienkin säikeiden tulisi värjäytyä värjäyksen sävy: tumman harmaa / musta tai tumman / musta violetti (ei värin vaihtoa: retikuliini musta ja muu kollageeni ruskea)

13 Laaduntarkkailukierros: Histologian tekniikka 2004/1 Retikuliinisäikeiden osoittaminen Tuma/tausta- värjäyksen arvioinnista: ei välttämätön (hopea värjää tumat hennosti) mahdollistettava lokalisaatio: kontrasti tumavärin ja hopeavärjäyksen välillä taustaväri ei saa peittää retikuliini-säikeitä Pyrimme huomioimaan leikepaksuuden vaihtelun (värjäsimme sarjaleikkeistä joka 10:n)

14 Laaduntarkkailukierros: Histologian tekniikka 2004/1 Yhteenveto retikuliinivärjäyksen tuloksista: värjäys onnistui kohtalaisesti ka /27: hyvä erinomainen 2/27: värjäystulos arvioitiin epäonnistuneeksi 3/27: laboratoriolla tulos oli epävarma 5/27: laboratoriolla selvästi havaittavissa värjäytymisen epätasaisuutta Tumavärjäys: 9/27 laboratoriota (keskiarvo 4.2) Muut: tumat tulivat pääosin kuitenkin hyvin esiin mahdollistaen lokalisaation.

15 Laaduntarkkailukierros: Histologian tekniikka 2004/1 Kyselyn tulos: Menetelmä: Gomorin retikuliini - menetelmä tai sen variaatiot käytetyin. Perusperiaate eri variaatioissa oli kuitenkin kutakuinkin sama 26/27 käsivärjäys suuri osa valmisti liuokset itse

16 Liite 2; Histologian laaduntarkkailukierros 2004 Retikuliinivärjäys: kyselyn tulokset Värjäykset tehtiin huoneenlämmössä Värjäyksen vaihe Kemikaali Konsentraatio Värjäysaika Käytetyimmät vaihteluväli vaihteluväli pitoisuudet ja ajat Hapetus (Oxidation) kaliumpermanganaatti %, 1-5 min 0.5 % / 1 min Differentointi oksaalihappo 1-5 %, 1-2 min 1% / 1 min (bleach," valkaisu") kalium metabisulfiitti 2-5 %, 10 sek - 2 min 2 % / 1 min Herkistäminen ferriammoniumsulfaatti 2-4 % 1-10 min 2 % / 1 min (sensitization) - - Hopea Alkaalinen ammonium hopea 1-20 % 75 sek- 10 min 10 % / 1 min impregnaatio Vilarin hopea Pelkistys formaldehydi % 30 sek -10 min 10 % / 3 min (reduction) - - Toning / kultakloridi % kasto-15 min 0,2 % / 10 min "värisävyn vaihto" - - Diffaus (ylimääräinen Na tiosulaatti 1-10 % kasto- 5 min 1-2 % / 1 min ( hopea pois) - - Vastaväri/ Kernechtrot % 1-2 min - yleisin: ei vasta-väriä Tumaväri Mayer HTX valmisväri 15 sek - 1 min - Kernechtort ja Mayerin HTX Eosin Y 0.25 % 1min molemmat hyviä

17 Retikuliini/maksa - kaikki kohdallaan värjäyksessä

18 Retikuliini /aortta (tunica media) - kaikki kohdallaan värjäyksessä

19 Retikuliini/munuainen - kaikki kohdallaan värjäyksessä

20 Retikuliini/perna - kaikki kohdallaan värjäyksessä

21 Retikuliini/maksa (väärä sävy) - retikuliini ja muu kollageeni punaruskea sävy 1199

22 Retikuliini/maksa -epäyhtenäinen hento värjäytyminen

23 Retikuliini/perna - tumma taustaväri häiritsee säikeiden osoittamista 1055

24 Retikuliini/aortta - sakkaisuus haittaa tulkintaa (loppu diff. puuttu?) Aortta Maksa

25 Retikuliini/maksa; epäonnistunut ja lisäksi epäyhtenäinen taustavärjäytyminen Maksa, pelkkä Kernechtrot Maksa, pelkkä Kernechtrot

26 LQ:n laaduntarkkailukierros Histologian tekniikka 2004/1 Tulokset osoittavat, että harvemmin käytettävien erikoisvärjäysten kohdalla parannettavaa esiintyy Kierros tulisi uusia (AB-PAS, Kongo osoituksena tulosten paranemisesta kierroksia uusittaessa) Monikudosnäytteen merkitys vertailukudoksena Happoa kestävät sauvat: - CF-väri tuore ja itse valmistettu, - taustavärin ja sävyn merkitys Retikuliini: -monivaiheinen / - epäonnistumisen syyt selvitettävä vaiheittain