Immunosuppressiivisten lääkeaineiden analytiikka MS:lla Outi Itkonen sairaalakemisti, dos. Erikoiskemian prosessivastaava HUSLAB 10.2.2017
Elinluovutuksissa ja - siirroissa ennätysvuosi 2016 Elimiä saatiin 132 luovuttajalta 24 / miljoona asukasta Vuonna 2016 yht. 399 elinsiirtoa 262 munuaissiirtoa 61 maksansiirtoa 27 haimansiirtoa (ennätys) 30 sydänsiirtoa (joista 4 lasta) 18 keuhkonsiirtoa 1 kehonosasiirto (kasvot)
Suomessa tehdyt elisiirrot Yhteensä noin 4500 potilasta
Hyljintäreaktio Hyperakuutti hyljintä on minuuttien sisällä tapahtuva reaktio HLA estetään sopivuuskokein Akuutti hyljintä 3 vrk 3 kk T-soluvälitteinen reaktio voidaan hoitaa tehokkaasti hyljinnänestolääkityksellä
Hyljintäreaktio Krooninen hyljintä on pidemmällä aikavälillä ilmenevä reaktio mekanismit epäselviä hoitona uusi siirre 3-4%
Lähde: British Society for Immunology
Hyljinnänestolääkitys APC, MHC-II, B7 kalsineuriinin aktivaatio CyA, Tacro IL-2 IL-2R vasta-aine TOR Sirolim, Everoli cyclin/cdk T-solujen proliferaatio MMF, azathioprine
Siklosporiini A CyA, syklosporiini 1202.6 g/mol käyttö RA Crohnin tauti nefroottinen syndrooma immunosuppressio elinsiirroissa psoriasis, jne haittavaikutukset munuais- ja maksatoksinen, haimatulehdus, kouristukset, mahahaava, kuumeilu, pahoinvointi, verenpaine, jne tavoitetaso 50 500 µg/l
Takrolimuusi fujimycin, FK-506 804.0 g/mol käyttö mahahaava dermatologiassa immunosuppressio elinsiirroissa haittavaikutukset tulehdukset, sydänvaurio, verenpaine, maksa- ja munuaistoksisuus, syöpäalttius, DM, jne terapeuttinen alue 5 15 µg/l
Sirolimuusi rapamysiini 914.2 g/mol käyttö immunosuppressio elinsiirroissa lymphangioleiomyomatoosi haittavaikutukset hyperkolesterolemia, vatsakivut, päänsärky, verenpaine, trombosytopenia, anemia, jne. vain heikosti munuaistoksinen
Everolimuusi sirolimuusin 40-O-(2-hydroksietyyli)-derivaatta MW 958.2 Käyttö immunosuppressio elinsiirroissa munuaissyöpä muiden syöpien hoito Haittavaikutukset sydän- ja hengityselimet, septinen shokki, stomatiitti, tulehdukset, anemia.
Tutkimusmäärät Tutkimus kpl (2016) B -CyA (3606) 18 238 B -Tacro (4360) 12 877 B -Sirolim (8840) 441
Monitoroinnin haasteet kapea terapeuttinen alue vakavat haittavaikutukset annoksen ja lääkealtistuksen suhde eivät korreloi yksilökohtainen farmakokinetiikka potentiaaliset eri lääkeaineiden vuorovaikutukset Mitatut CyA pitoisuudet munuaisen siirtopotilaiden veressä (n=18) kun annos oli 102 ± 18 mg kahden viikon käytön jälkeen. Kawai et al., J Pharmacol Exp Therap 1998;287:457-468
Monitoroinnin haasteet suuret näytevolyymit kliininen tarve nopealle vastausajalle haastava näytemateriaali toksiset vaikutukset hankala erottaa kliinisestä taudista esim. munuaistoksisuus vs. munuaisen hyljintä tai viruksen aiheuttama nefropatia menetelmän suorituskyvyn oltava johdonmukaisesti robusti (elinaikainen monitorointi) tulostasoerot eri menetelmien välillä mahd. ristireaktiot metaboliittien kanssa
Seger et al., Ther Drug Monit 2016;38l:170 189
Lääkeaine Metodologia Valmistaja Mittausepävarm Bias (%) Spesifisyys (RR%) CyA LC-MS/MS useita kaupallisia 10% referenssi spesifinen in-house Emit 2000 Siemens Healthcare Diagnostics 20% -8 14% 7% CEDIA PLUS Thermo Scientific 16% -7 18% 20% ACMIA Siemens Healthcare Diagnostics 9% 13 28% 6% CMIA Abbott Laboratories 15% 17 23% <3% ADVIA Siemens Healthcare Diagnostics 9% -12 14% 15% ECLIA Roche Diagnostics <10% 9 % AM1 2%, muut n.d. Tacro LC-MS/MS useita kaupallisia 10% referenssi spesifinen in-house Emit 2000 Siemens Healthcare Diagnostics 17% 1 10% 10% ACMIA Siemens Healthcare Diagnostics 9% 7 % 99% CMIA Abbott Laboratories 10% 7 % <3% ECLIA Roche Diagnostics <15% 5 % n.d. QMS Thermo Scientific <8% 13 % <8% Seger et al., Ther Drug Monit 2016;38l:170 189
EQA B -CyA B -Tacro ACI/LGC
EQA CyA: LCMS 160, CMIA 110, ECLIA 20, ACMIA 30, EMIT 25, CEDIA 40 Tacro: LCMS 180, CMIA 155, ECLIA 20, ACMIA 30, EMIT 20 Sirolimus: LCMS 160, CMIA 60 Everolimus: LCMS 130, QMS 40 UK-NEQAS PT scheme www.bioanalysis.co.uk
LC-MS/MS menetelmä räkitys ja sekoitus 15 min automaattinen korkin poisto viivakoodin luku primääriputkesta (robotti) pipetointi: näyte, saostaja+istd (robotti) ravistelu 5 min ja sentrifugointi 10 min
LC-MS/MS menetelmä moniajo-lc-ms/ms propyylisyano-kromatografia, 600 µl/min vesimetanoligradientti (NH 4 COOH) 3.2 min MS/MS -detektio CyA m/z 1220 1203, ISTD 1224.1 1207 Tacro m/z 821.5 768.5, ISTD 826.6 773.7 Sirolim m/z 931.7 864.7, ISTD 935.6 864.7 Everoli m/z 975.7 908.7, ISTD 981.6 914.8 kaupalliset kalibraattorit ja QA-näytteet
Moniajo eli multiplexing
CyA Tacro Sirolim Everoli
Menetelmän ominaisuudet Ominaisuus CyA Tacro Sirolim Everoli Sarjan sisäinen CV <3.6% <4.5% <5.3% <5.6% Sarjojen välinen CV <3.6% <9.5% < 8.2% <7.4% Kokonaisvariaatio <4.7% <10.5% <9.2% <9.3% Lineaarisuus (µg/l) 3.2-1840 1.1-42.3 0.3-49 0.3-44.5 LOD (µg/l) 1.6 0.3 0.2 0.02 LOQ (µg/l) 3.2 1.1 0.3 0.3 Saanto 93-96% 88-100% 81-97% 82-106% Matriisiefekti 1-21% 16-26% 17-21% 16-26%
B -CyA 1000 B CyA Immunometria = -10,4 + 1,24 MS n = 565 800 Immunometria (µg/l) 600 400 200 0 0 200 400 600 800 1000 MS (µg/l)
B -Tacro 45 40 B Tacro Immunometria = 0,17 + 1,2 MS n = 398 35 Immunometria (µg/l) 30 25 20 15 10 5 0 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 MS (µg/l)
B -Sirolim 16 14 B Sirolim Immunometria = 0,1167 + 1,275 MS n = 35 12 Immunometria (µg/l) 10 8 6 4 2 0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 MS (µg/l)
Yhteenveto menetelmä on spesifinen ja tarkka mittausalue kattaa hyvin terapeuttiset alueet
Yhteistyössä Anna Becker, tutkija, FM Esa Hämäläinen, oyl, dos. Ursula Turpeinen, kemisti, dos. Janne Backman, yl, prof. Seija Mäki-Mikkilä, lh Renja Vehviläinen, lh Outi Itkonen, kemisti, dos. HUSLAB Erikoiskemian henkilökunta, HUSLAB virologian henkilökunta, HUSLAB NVO Kiitos!