METABOLISTEN SAIRAUKSIEN ANALYTIIKAN JÄRJESTÄMINEN NORDLAB OULUSSA. Marja-Kaisa Koivula Sairaalakemisti, FT, dosentti

HTML
DOWNLOAD

Koko: px

Aloita esitys sivulta:

Download "METABOLISTEN SAIRAUKSIEN ANALYTIIKAN JÄRJESTÄMINEN NORDLAB OULUSSA. Marja-Kaisa Koivula Sairaalakemisti, FT, dosentti"

Asta Haavisto
9 vuotta sitten
Katselukertoja:

1 METABOLISTEN SAIRAUKSIEN ANALYTIIKAN JÄRJESTÄMINEN NORDLAB OULUSSA Marja-Kaisa Koivula Sairaalakemisti, FT, dosentti

2 Esityksen sisältö Johdanto Kromatografiset menetelmät Entsymaattinen määritysmenetelmä Alihankinta 2

3 Metabolisten sairauksien analytiikan haasteita Aineenvaihduntasairaudet hyvin harvinaisia Runsas määrä erilaisia yksittäisiä tauteja, joiden luonne on toisistaan poikkeava Monessa taudissa on eri muotoja. Haastavat tautimuodot tulevat usein esiin vauvana tai lapsena, lievemmät löytyvät tavallisesti myöhemmin. Synnynnäinen aineenvaihduntasairauden epäily Kehitysviivästymät, taantumat Metabolinen kriisi 3

4 Metabolinen kriisi B -Laktaat B -Pyruv fp-nh4-ion P -ATCH S -Keto-O fs-ffa fs-insu P -Gluk P -ALAT P -CK P -Cl P -Aminoh P -TT-INR P -Lihep5 S -Korsol cb-vekaas2 B -AsylKar B -OHButVT U -Näyte U -Keto-O U -Orgah-O U -Aminoh S -Karni 4

5 Kromatografiset menetelmät

6 Kromatografiset menetelmät Ohutlevykromatografia (TLC) oligosakkaridit Aminohappoanalysaattori LC-MS/MS aminohapot asyylikarnitiinit orotaatti GC-MS orgaaniset hapot / /

7 Ohutlevykerroskromatografia (TLC, Thin Layer Chromatography) Mitä TLC eli ohutlevykromatografia on? Ohuen levyn pinnalla suoritettava kromatografinen menetelmä Tutkittava seos liikkuu huokoisessa aineessa liuottimen avulla. Eri aineet kulkeutuvat eri tavoin ja tapahtuu erottumista. nopea, yksinkertainen ja edullinen analyyttinen menetelmä 7

Ohuen levyn pinnalla suoritettava kromatografinen menetelmä Tutkittava seos liikkuu

8 Mitä TLC:n ajamiseen tarvitaan? TLC-levy eluentti ajoastia näytteiden applikointi: ohut lasikapillaari täplien visualisointikeino 1. UV-valo tai 2. levyn värjäys jodilla tai 3. värjäysreagenssilla (resorsinolireagenssilla) 8

9 TLC 9 / / Esityksen nimi ja esittäjä

10 TLC: U -Oligs-O Potilasnäyte 2. AGU-kontrolli 3. Salla-kontrolli U- Oligs-O: Aspartylglukosaminuria -> AGU- tauti? U- Aminohapot Geenitesti: AGU-taudin valtamutaatio AGA-geenin pistemutaatio c.488g>c / /

11 TLC: U -Oligs-O AGU-kontrolli 2. Salla-kontrolli 3. Potilasnäyte U- Oligs-O: Siaalihapon eritys korostunutta -> Sallan tauti? Geenitesti: Sallan taudin valtamutaatio SLC17A5 c.115c>t / /

12 Erndim: Educational oligosaccarides kit GM1 2. GM2 3. Pompe 4. AGU 5. Schindler / /

13 Erndim: Educational oligosaccarides kit / /

14 Aminohappoanalysaattori 14

15 Aminohappoanalysaattori ioninvaihto-nestekromatografia (HPLC) ph-gradientti automaattinen näytteensyöttäjä kolonniuuni fotometrinen detektori ninhydridivärjäys (kolonnin jälkeen) kvantitatiivinen menetelmä keksitty vuonna 1958 ja Nobelin palkinto 1972 kansainväliset standardit, reagenssit ja kolonnit potilasnäytteen / / esikäsittely tärkeää

(kolonnin jälkeen) kvantitatiivinen menetelmä keksitty vuonna 1958 ja Nobelin

16 Aminohappoanalysaattori 16

17 Aminohappoanalysaattori 17

18 Mitä ninhydridi tekee? 570 nm Imino acids nm

19 Aminohappoanalysaattori Integrointi tarkistetaan tulosraportti Laboratoriolääkäri antaa tuloksesta lausunnon. 19 / / Marja-Kaisa Koivula

20 LC-MS/MS LC MS/MS 20

21 LC-MS/MS 21

22 LC-MS/MS 22

23 LC-MS/MS 23

24 LC-MS/MS: aminohapot Glysiini Methyl-D3 24

25 LC-MS/MS: aminohapot Glutamiini Tarkoitus on saada samanlainen potilasraportti kuin aiemmin. 25

26 LC-MS/MS vs. aminohappoanalysaattori LC-MS/MS riippumattomuus reagenssivalmistajista (näytteiden esikäsittely yksinkertaistuu) analyysiajat lyhenevät LC-MS/MS:ssa kaksi erotteludimensiota HPLC:n retentioaika MS/MS fragmentaatio Johtavat suureen spesifisyyteen. Matriisiefekti 26

27 LC-MS/MS: asyylikarnitiinit, orotaatti Menetelmäkehitys kesken Puhdasaineita vaikea saada 27

28 LC-MS/MS-metodiikan rajoituksia Matriisiefekti = matriisin ionisaatiosupressio Herkkyysrajat Ionisaatiota ei tapahdu tai tuoteionia ei muodostu. Liikkuvan faasin, lisäaineiden ja virtausnopeuden rajoitukset Sopivien deuteroitujen sisäisten standardien saatavuus 28

29 GC-MS: Shimadzu QP-2010 SE 29

30 GC-MS Datan käsittelyä helpottavat MS-kirjastot. 30

31 GC-MS: orgaaniset hapot (MCAD) 31 / / Marja-Kaisa Koivula

32 GC-MS: orgaaniset hapot (MCAD) 32 / /

33 GC-MS: orgaaniset hapot (terve) Kvalitatiivisen tunnistuksen lisäksi eräiden orgaanisten happojen selektiivinen taulukko 33 / /

34 Entsymaattinen määritysmenetelmä

35 Vapaat rasvahapot (fs-ffa) 35

36 Vapaat rasvahapot (fs-ffa) 36

37 Alihankinta

38 Alihankinta Vastasyntyneiden seulonta Happamat hydrolaasit Mukopolysakkaridit Orotaatti Asyylikarnitiinit Karnitiini Muita erityistutkimuksia / /

39 Yhteenveto

40 Yhteenveto Haasteellista erityisanalytiikkaa Esikäsittely käsityötä Itse tehdyt menetelmät (in house) Tuloksista annetaan lausunto. Samasta sairaudesta eri variaatioita. Osa alihankitaan ulkomailta. Vastasyntyneiden seulonnan positiiviset löydökset pitää varmistaa ja hoitoa seurata. 40 / / Esityksen nimi ja esittäjä

41 41

Samankaltaiset tiedostot

VASTASYNTYNEIDEN HARVINAISTEN SYNNYNNÄISTEN AINEENVAIHDUNTA- SAIRAUKSIEN SEULONTA

VASTASYNTYNEIDEN HARVINAISTEN SYNNYNNÄISTEN AINEENVAIHDUNTA- SAIRAUKSIEN SEULONTA Synnynnäiset aineenvaihduntasairaudet Harvinaisia, periytyviä sairauksia Esiintyvyys < 1:2000 Oireet ilmenevät yleensä