ANTIGEENIEN PAIKANTAMINEN SOLUBLOKEISTA



Samankaltaiset tiedostot
NOPEAT KUDOSPROSESSITEKNIIKAT PATOLOGIASSA

Histopatologian. Pirkko Hirsimäki. patologian palvelualue

BAL-menetelmä: laboratorion näkökulma. OYS Patologian osasto Sytologian laboratorio Leena Seppälä 2017

Shandon Cytospin Collection Fluid Shandon Instant Eosin, Alcoholic Shandon Instant Eosin, Aqueous. Thermo ELECTRON CORPORATION

Luuydinbiopsian valmistus ja tulkinta. Kaarle Franssila

LABORATORIOHOITAJAN ERITYISOSAAMINEN PATOLOGIAN LABORATORIOSSA. Kati Kannisto

Virtaussytometrian perusteet

Ennen verensiirtoa tehtävät tutkimukset miksi veret viipyvät?

PT-MODULI IMMUNOHISTOKEMI- ALLISTEN NÄYTTEIDEN ESIKÄ- SITTELYSSÄ

AGARSOLUBLOKKIMENETELMÄ PLEURA- JA ASKITESNÄYTTEIDEN IMMUNOHISTOKEMIALLISISSA VÄRJÄYKSISSÄ

TIIMITYÖSKENTELY LYMFOOMADIAGNOSTIIKAN JA HOIDON KULMAKIVI. K Franssila & E Jantunen

KOLARIN TK LABORATORIO. Outi Rowe Laboratoriohoitaja, FIBMS, MSc

ALL2000_Amendment_2014

focus PATOLOGIA Immunohistokemia Tissue Micro Array Biopankit Molekyylibiologia

Immunohistokemia HPV-muutosten ja tavallisten gynekologisten adenokarsinoomien diagnostiikassa. Elisa Lappi-Blanco OYS, patologian osasto

Raskaana olevien ja vastasyntyneiden verensiirto ja seulonta käytäntö. Uusi Verensiirto-opas

Näytteenottovälineet mikrobiologisiin näytteisiin

PATOLOGIA PATOLOGIAN TUTKIMUSNIMIKKEET

Immunohistokemian ja tekniikan kierrosten arviointi ja ongelmakohdat värjäysmenetelmissä

IAP, Majvik (ka)

Verensiirtoon liittyvät toimenpiteet sairaalassa ja verensiirron toteutus

Mikrobilääkejäämien toteaminen maidosta Delvotest SP-NT - testillä

Mesotelioomadiagnostiikan osuvuus ja ammattisyövän toteamisen käytännöt Suomessa. 1 Loppuraportti Sisko Anttila

PAKKAUSSELOSTE. VPRIV 200 yksikköä infuusiokuiva-aine, liuosta varten VPRIV 400 yksikköä infuusiokuiva-aine, liuosta varten velagluseraasi alfa

Ursula Liuska LAADUNTARKKAILUNÄYTTEIDEN VALMISTUS IMMUNOHISTOKEMIALLISIIN VÄRJÄYKSIIN OULUN YLIOPISTOLLISEN SAIRAALAN PATOLOGIAN LABORATORIOON

IMMUNOHISTOKEMIALLISET CD-VÄRJÄYK- SET

MALIGNI MESOTELIOOMA: Sisko Anttila Jorvin patologian laboratorio Huslab

SYTOLOGIAN LABORATORION LAADUNOHJAUS JA LAADUNVARMISTUSMENETTELYT

IAP syyskokous 2008 Lasiseminaari

Näytteen laatuun liittyvät preanalyyttiset tekijät. Joanna Ilvesaro Sairaalasolubiologi Patologian osasto Fimlab Laboratoriot oy

TIEDOTE HELSINGIN JA UUDENMAAN SAIRAANHOITOPIIRI PATOLOGIAN VASTUUALUE

Diagnostisten testien arviointi

Kromosomit. 1. Mitoosipreparaatti sipulin juurenkärjestä. 2. Drosophilan sylkirauhaskromosomi. monisteen sivulta 32-

Tyvisolusyöpä: mitä patologin tulee siitä lausua. Lauri Talve patologian el, LT TYKS-SAPA

Vanhemmille, joiden raskaus jäi kesken raskausviikolla

Hyvinvointianalyysi Eettiset toimintaperiaatteet. Jyväskylä Joni Kettunen Tiina Hoffman Satu Tuominen

LABORATORIOTYÖ: RESTRIKTIOENTSYYMIDIGESTIO

LQ:n laaduntarkkailukierros Histologian tekniikka 2004/1

QIAsymphony SP protokollatietolehtinen

QIAamp DSP DNA FFPE Tissue Kit -käsikirja

PATOLOGIAN TUTKIMUSOHJEISTO

PORFYRIATUTKIMUSKESKUS HELSINGIN YLIOPISTOLLINEN KESKUSSAIRAALA

Koska veriryhmästä voi poiketa - ja koska ei?

MULTI DrugControl -virtsan huumetesti

Työnopastusohje Kainuun sosiaali- ja terveydenhuollon

ITÄ-SUOMEN LABORATORIOKESKUKSEN ISLAB Laboratoriotiedote 17/2008 LIIKELAITOSKUNTAYHTYMÄ. Kliininen mikrobiologia (5)

KONTROLLIKIRJASTO. Anita Naukkarinen ylisolubiologi kliinisen patologian yksikkö KYS-Kuvantamiskeskus

Maksasiirteiden patologiaa Suomen IAP:n kevätkokous, Tampere

NOPEAKASVUISET B SOLUB NON HODGKIN LYMFOOMAT. Tampere derström

VASTA-AINETUNNISTUS MITÄ NÄYTTEESTÄ TUTKITAAN VERIPALVELUSSA. Suvi Toivonen ja Marita Kaislaranta. Verikeskuspäivä

Hanna Järvenpää & Tanja Pohjola PATHOS DELTA -PIKAKUDOSPROSESSORIN TOIMINNAN TESTAUS

Mineraalilaboratorio Mila Oy Versio 2.8 Näytteenotto-ohje MINERAALILABORATORIO MILA OY NÄYTTEENOTTO-OHJE

Vastasyntyneen veriryhmämääritys ja sopivuuskoeongelmat

BAL-NÄYTTEEN KULKU NÄYT- TEENOTOSTA SYTOLOGISEEN TULKINTAAN

Mikroskooppiset tekniikat käyttökohteesta

VERIRYHMÄT JA VERIRYHMÄVASTA-AINEET

In Situ Hybridisaatio - menetelmä patologian laboratorion työvälineenä

PLEURANESTEEN SYTOSENTRIFUGIVALMIS- TEIDEN JA SOLUBLOKKIEN DIAGNOSTISTEN VASTAUSTEN VERTAILU

Positiivisesta seulonnasta sopivien verien löytymiseen

Värjäysliuokset, reagenssit ja fiksatiivit eläindiagnostiikkaan

Mikroaaltouunin soveltuvuus fiksaatioon ja kudosprosessointiin sekä J.F.C-reagenssin sopivuus fiksaatioaineeksi mikroaaltouunimenetelmässä

Innovaatioista. Vesa Taatila

Virtsan kemiallisen seulonnan kliininen käyttö. Dosentti Martti L.T. Lalla Osastonylilääkäri HUSLAB Kirurginen sairaala

Hyvä tasalaatuisuus laboratoriossa. ISLAB, Joensuun aluelaboratorio Marja Liehu

Yersinia-serologia. Markus Penttinen Lääketieteellinen mikrobiologia Turun yliopisto

FOSFORIPITOISUUS PESUAINEESSA

ylilääkäri Teijo Kuopio

Uroteelineoplasiat. Paula Kujala

TYÖPISTEAUDITOINNIT PATOLOGIAN LABORATORIOSSA. Anita Naukkarinen Sanna Kirjavainen KYS-Kuvantamiskeskus Kliinisen patologian osasto

SELKÄYDINNESTEEN PERUSTUTKIMUKSET

PATOLOGIAN LABORATORION TOIMINTAJÄRJESTELMÄ

Ajankohtaista HSY:n jätehuollosta

PATOLOGIAN LABORATORION TOIMINTAJÄRJESTELMÄ

LIITE I VALMISTEYHTEENVETO

HPV In situ -hybridisaation käyttöönotto

Luku 6. Dynaaminen ohjelmointi. 6.1 Funktion muisti

LIERIÖSOLUATYPIAT GYNEKOLOGISESSA PAPA- NÄYTTEESSÄ

Nestemäisillä biopolttoaineilla toimiva mikrokaasuturbiinigeneraattori Vene-ohjelman seminaari

Kertausta virtsan liuskatestin tekemiseen

Bioanalyytikko-opiskelijoiden harjoittelupaikat Mikkelin aluelaboratoriossa

Mycoplasma bovis hiljainen ja tappava. Eläinlääkäri Taina Haarahiltunen Yksityispraktikko, Nurmijärvi

IdHAIR Black Magic. Valmistele. Blackmagic

2. Tutkimuksen DNA, vasta-aineet IF (natiivi) (S -DNAnAb, 1261) nimi, menetelmä ja viitearvot muuttuvat.

LYMFOSYTOOSIT SANOIN JA KUVIN. Pentti Mäntymaa TAYS, Laboratoriokeskus

SODANKYLÄN KOITELAISENVOSIEN KROMI-PLATINAMALMIIN LIITTYVIEN ANORTOSIITTIEN KÄYTTÖMAHDOLLISUUDET

LIITO-ORAVASELVITYS VAMMALAN KUKKURISSA

TUKIMATERIAALI IMMUNOHISTOKEMIAL- LISISTA CD-VÄRJÄYKSISTÄ

Nivelreuman serologiset testit: mitä ne kertovat? LT, apulaisylilääkäri Anna-Maija Haapala TAYS Laboratoriokeskus

Muistisairaudet saamelaisväestössä

PPSHP Vuoden 2010 aineiston trimmausprojekti. Peteri & Vesa

Kokemuksia riskinarvioinnista

FUSILLIA JA BARILLAN ARRABBIATA-KASTIKETTA, TURSKAA JA MUSTIA OLIIVEJA

Palauttakaa tämä ohje näytteen mukana seuraavin tiedoin:

G. Teräsvalukappaleen korjaus

1. ELÄINLÄÄKEVALMISTEEN NIMI. AURIZON korvatipat, suspensio 2. LAADULLINEN JA MÄÄRÄLLINEN KOOSTUMUS

Sisältö. Johdanto. Vastaajien esittely. Absoluuttinen raportti. Suhteellinen raportti. Vaihe 1. Vaihe 2. Vaihe 3

Labqualitypäivät Riitta Karttunen. HUSLAB, kl. Mikrobiologia Virologian ja immunologian osasto

Korvakäytävä on puhdistettava ja kuivattava huolellisesti ennen hoitoa.

Kohdun sileälihaskasvaimet. Molekylaariset mekanismit ja histologiset kriteerit. Tom Böhling Haartman-instituutti, HY HUSLAB

Transkriptio:

ANTIGEENIEN PAIKANTAMINEN SOLUBLOKEISTA LabQuality-päivät 8.2.2007 Antero Laasonen, Johanna Varpula, Tarja Ylimäki Seinäjoen keskussairaala Patologian osasto

YLEISTÄ Solublokkeja (histoblokkeja) valmistetaan kun: diagnoosin kannalta perusteltua ja näytemäärä huomioiden mahdollista Tänä päivänä suuri osa sytologisista näytteistä solupreparaateiksi solusentrifuugimenetelmällä Papa- ja viskooseja solunäytteitä lukuun ottamatta nopeus, halpa, tasalaatuisuus, soluhävikistä huolimatta useimmiten luotettava jos riittävästi henkilökuntaa ja näytemateriaalia saadaan fiksoimattomana - erikoistutkimukset mahdollisia säilyvyys?, fiksatiivin valinta?

Solusentrifuugivalmiste alkoholilla fiksoidun solunäytteen säilyminen valmiita PAPA-värjättyjä preparaatteja yleensä vain 1 tai korkeintaan muutama Immunohistokemiallisia värjäyksiä näistä voidaan yrittää purkamalla preparaatti (dokumentti?) ja hyvällä onnella ja arvauksella saadaan IHC tulos onnistuminen antigeenikohtainen kestävätkö solut värjäysprosessin

Solublokki/histoblokkitekniikka Käytössä pitkään agar-aggregointi, kaupallinen menetelmä (Shandonin sytoblok) agar-menetelmä työläs, solusaalis usein disaggregoituu agariin valettaessa Shandonin menetelmässä reunaefekti ja solujen imeytyminen kartonkiin eli molemmissa menetelmissä tiiviin solusaaliin saaminen ongelmana, soluhävikki valaminen ongelma HE:n lisäksi useita leikkeitä IHC-värjäyksiin

Solublokki/histoblokkitekniikka Plasma-trombiiniaggregointimenetelmä (PT) Tanskassa Aalborgin sairaalassa käytetty menetelmä sittemmin myös Suomessa esifiksoitu näyte sentrifugoidaan, sekoitetaan plasmaan ja aggregoidaan trombiinilla jälkifiksoidaan formaldehydillä, prosessointi valuvaiheessa selkeä preparaatti solusaalis usein hyvä

Solublokki/histoblokkitekniikka Opinnäytetyössä selvitettiin PT- aggregointimenettelytapa solupaketin tiiviys saostushetkellä/mikroskoopissa aggregointi: ennen fiksointia /fiksoinnin jälkeen Millä solumäärällä saadaan aikaiseksi blokki, joka on riittävä IHC värjäyksiä ajatellen solut laskettiin natiivista ja parafiiniin valetusta näytteestä Fiksatiivi: ETOH (50%)/PEG (5%) + jälkifiksointi formaldehydillä (4%) / pelkkä formaldehydi (4%) antigeenien säilyminen

PROSESSI

Näytetyypit Bal (11),virtsa (10), pleura (5), ascites (2) Valinta: saatavuuden perusteella ja tieto että ainakin virtsa ja bal-tyypeissä niukkoja näytteitä bal- ja virtsanäytteistä ei rutiinisti valmisteta sytoblok-näytteitä näytteen valmistus: ensin diagnostinen näyte ja loppuosa tutkimukseen

Paikannettavat antigeenit Bal: CD3, CD4, CD8, CD45 (LCA) Virtsa: CK-pan+,CK7, CK20, EMA, VIM, MOC-31 Pleura: CK-pan+, CK5/6, CD15, BerEP4, Moc 31 Ascites: CK-pan+, Calretinin, CK5/6, VIM

Immunohistokemiallinen menetelmä Käytimme samaa tekniikkaa kuin normaaleille kudosnäytteille esikäsittelyt vasta-ainelaimennukset osoitusmenetelmä (Powervision +)

Tulokset PT- menetelmä yhdistettynä Shandonin sytoblok menetelmään oli selvästi parempi aggregoimis-menetelmä kuin pelkkä Shandonin agar-menetelmä saadaan tiivis kompakti solupreparaatti (Kati Sorvali 2004 PT/Agar)

Tulokset Testaamistamme näytetyypeistä saatiin suhteellisen vähäisilläkin solumäärillä aikaiseksi riittävä solublokki (2 4 x 10 5) aina parempi mitä suurempi solusaalis ei kovin suurta eroa solusaaliissa aggregoitiinko natiivina vai fiksaation jälkeen poikkeuksena virtsanäytteet (tavanomainen normaali virtsa huono näytetyyppi - epiteelisolut poikkileikkautuvat kunnon tiivistä soluaggregaattia ei saatu pienillä solumäärillä aikaiseksi)

Tulokset: Aggregointimenetelmä Sentrifugoi näyte mielellään 50 ml:n putkissa Fiksoi solut 200ul-1000 ul:lla fiksiä n. 1-2 t HL:ssa (näyte voidaan laittaa jääkaappiin odottamaan prosessointia) Lisää 0.9 NaCl:a putki täyteen ja sentrifugoi näyte Pese näyte vielä 0.9% NaCl:lla (voi jättää pois?) Sekoita solunappi varovasti tuoreeseen plasmaan Tiputa tuoretta härän trombiinia päälle sekoita varovasti ravistellen näytettä Pasteur-pipetillä Shandonin sytoblokkiin, formaliinifiksaatio ja kudoskuljettimeen

Tulokset: Immunohistokemia Näytteet voitiin esikäsitellä ja värjätä samoin periaattein kuin tavalliset histologiset leikkeet Sytologiset näytteet fiksoituvat nopeasti ja vasta-aineita joudutaan laimentamaan Keratiiniantigeenit: ETOH/PEG+formaliinijälkifiksoiduissa näytteissä keratiinien paikantaminen onnistui yhtä luotettavasti kuin formaliinifiksoiduissa näytteissä

Tulokset: Immunohistokemia Ber EP4, Calretiniini, EMA ja erityisesti CD-antigeenien paikantaminen onnistui luotettavammin formaldehydillä fiksoiduista näytteistä kuin ETOH/PEGfiksoiduista näytteistä CD-antigeenien kohdalla ETOH/PEGfiksatiivi huonontaa selkeästi antigeenien säilymistä, vaikka solut jälkifiksoitiin formaldehydillä > saadaan negatiivinen tulos jos antigeenin määrä solussa vähäinen

Tulokset: Immnohistokemia Virtsanäytteissä tutkimukseen saatu näytemäärä oli aivan liian pieni varmojen johtopäätösten tekemiseksi

Formaliinifiksaatio PT aggregointi

Virtsa: Form/ETOH-PEG Formaliini PEG

Pleura BerEP4 Form/PEG Formaliini PEG

Pleura Moc 31 Form/PEG Formaliini PEG

Bal CD3 Formaliini/PEG Formaliini PEG

Johtopäätökset PT-aggregointi paras tapa tuottaa solublokkeja vaatii hienosäätöä - soluja riittävästi tutkimukseen Formaldehydifiksaatio immunohistokemian kannalta luotettavampi kuin ETOH/PEG + jälkifiksointi formaldehydillä IHC-menetelmä: sama kuin parafiinileikkeille

Johtopäätökset Vaihtoehtoja: tärkeät näytteet tuoreena tai kahdessa eri fiksatiivissa, joista toinen on formaldehydi (formaldehydi-fiksoitu näyte voi odottaa jääkaapissa) Tuoreet sytosentrifuugivalmisteet fiksaatio tulee päättää pian - työläs

Virtsanäyte