1 Ruora-jakson mikroskopia I: Ruoansulatusrauhaset ja mahalaukku/h.hervonen ja M.Airaksinen 2013 Mikrokopiatyön kulku: - Mikroskopoidaan valmisteet näyteryhmittäin monisteen ohjeen mukaan. - Täydennetään jo olemassa olevia tietoja oppikirjan avulla, keskustelemalla työparin kanssa ja opettajiin turvautuen. Keskitytään työn kuluessa esille tuleviin seikkoihin. Valmisteet ryhmittäin: I. Sylkirauhaset ja haima Valmiste 51: Korvanalussylkirauhanen Valmiste 52: Leuanalussylkirauhanen Valmiste 53: Kielenalussylkirauhanen Valmiste 54:Haima II. Maksa ja sappirakko Valmiste 1: Maksa Valmiste 92: Paasto-, normaali- ja rasvamaksa Valmiste 55: Sappirakko III. Mahalaukku Valmiste B: Mahalaukun fundusosaa Valmiste 46: Mahalaukun porttiosaa Viitteet kirjaan: RP6p = Ross ja Pawlina: Histology. A Text and Atlas. Lippincott, Williams&Wilkins, 2010 I Sylkirauhaset ja haima (RP6p. s545-554) Valmiste 51: Korvanalussylkirauhanen (glandula parotidea) (RP6p. s550-1; kuva 16.27a s553; plate52 s564-5) Valmisteen kuvaus: HE-värjäys. Näytteenä osa rauhasta. Rauhasen lohkoinen rakenne ilmenee erillisinä rauhaskudosrakenteina, joita erottaa sidekudos - tässä myös valmistuksesta johtuvia rakoja artefakta. Huom! Tämä näyte sopii hyvin yleisen rauhasrakenteen tarkasteluun, mutta ei ole erityisen hyvä esimerkki seroosista rauhassolusta, sillä rauhassolujen kärjet ovat jääneet vaaleiksi, eivätkä näytä sisältävän proteiineja sisältäviä (eosinofiilisiä) eritejyväsiä kuten pitäisi. Tarkastele näytettä pienellä suurennoksella: etsi hyvin ja tasaisesti värjäytynyt lohko/alue. Siirry keskiruurennokseen: Tarkastele solujen järjestäytymistä: Minkä muotoisia solut ovat ja millaisia rakenteita ne muodostavat? Edelleen: Miten solut ovat värjäytyneet? Minkä muotoisia rauhassolujen tumat ovat ja miten ne sijaitsevat soluissa? Käytä välillä suurta suurennosta yksityiskohtien tarkastamiseksi! Rauhasputkia löydät sieltä täältä keskisuurennoksella skannaamalla. Millä kriteereillä erotat tiehyen rauhasrakenteesta. Entä verisuonista? Pyri tunnistamaan rauhasputkia! Bonustehtävä: Myoepiteliaaliset solut liittyvät tämän rauhasen rauhasrakenteisiin. Mistä asemasta tämän solun soluruumiin tulisi löytyä? Etsi!
Valmiste 52: Leuanalussylkirauhanen (glandula submandibularis) (RP6p. s551; kuva 16.27b s553; plate51 s562-3) Valmisteen kuvaus: HE-värjäys. Osa rauhasta. Lohkot taas osittain irronneet toisistaan sidekudosseptojen kohdalta. Osa rauhasta on puhtaasti seroosia, osa sekarauhasta. Tässä näytteessä seroosin rauhassolun eritejyväsetkin erottuvat solun kärjessä selvästi eosinofiilisinä hyvänä kontrastina tuman seudussa ja basaalisesti sijaitsevan RER:n basofilialle. Tämä on piirtämisen arvoinen preparaatti. Tarkastele näytettä taas pienellä suurennoksella. Kiinnitä huomiotasi siihen, että tässä näytteessä näkyy paljon enemmän rauhastiehyitä kuin edellisessä. Pienellä suurennoksella tarkastellessasi huomaat, että osassa rauhasta on puhtaasti serooseja rauhasrakenteita (tasaisen voimakkaasti värjäytyneet osat) ja vain osassa löytyy sekarauhasia (mukoosien solujen solulimat jäävät tässä värjäyksessä aivan vaaleiksi). Huomaa: Osa vaaleista soluista on rasvasoluja. Valitse seroosi rauhasosa ja siirry keskisuurennokseen. Tutki rauhasakinusten yleisrakennetta. rauhassolujen muoto? Tutki rauhassolujen muoto ja värjäytyvyys! Erotatko jo eritejyväset? Käytä tarpeen mukaan suurinta suurennosta yksityiskohtien tarkastamiseksi. Etsi taas pienellä suurennoksella alue, jossa esintyy sekarauhasia. Suorita vastaava tarkastelu niille! Intercalated duct, striated duct ja intra/interlobular duct ovat termejä, joita tiehyistä käytetään. Tunnista näytteestä eri tiehyttyypit! 2 Valmiste 53: Kielenalussylkirauhanen (glandula sublingualis) (RP6p. s; kuva 16.27c s553; plate53 s566-7) Valmisteen kuvaus: HE-värjäys. Lohkoinen rakenne - sidekudos verisuonineen välissä. Hyvä näyte demonstroimaan mukoosivoittoisia sekarauhasrakenteita - tyypillinen seroosien rauhassolujen demilune-rakenne erottuu selvänä lähes värjäytymättä jääneiden mukoosien rauhasrakenteiden päistä. Solujen hienorakenne ei ole edellisen näytteen luokkaa. Valitse muutama mielenkiintoisen näköinen kohde ja tarkastele erityyppisten solujen rakennetta ja sijaintia (ks yllä) rauhasrakenteissa.
3 Valmiste 54: Haima (pancreas) (RP6p. s647-654; kuvat 18.20-23 s648-651; plate68 s662-3) Valmisteen kuvaus: HE-värjäys. Haima koostuu suuresta määrästä pieniä lohkoja, jotka näytteen valmistuksessa pyrkivät irtaantumaan toisistaan - raot ovat siis artefaktaa. Värjäytyvyys vaihtelee näytteen eri osissa. Myös solujen sisältämien eritejyvästen määrä vaihtelee eri lobulusten välillä. On siis tärkeää valita sopiva alue tarkasteluun. Yleistarkastelussa jo erotat eksokriinisen haiman kudoksen lomassa endokriinisen haiman saarekkeita: Langerhansin saarekkeet. Valitse kuitenkin eksokriinisen haiman rakenteen ja värjäytyvyyden perusteella sopiva alue ja tarkastele sitä lähemmin (keskisuurennos). Huomaa taas asinusten rakenne - ovatko nämä asinukset isompia kuin sylkirauhasissa? Pystytkö erottamaan rauhassolujen kärjissä eritejyväsiä? Mitä ne sisältävät? Rauhassolujen basaaliosat värjäytyvät basofiilisesti - mistä se johtuu? Haiman rauhastiehyet eivät erotu niin selvästi kuin edellisissä näytteisssä. Pyri kuitenkin löytämään asinus, josta lähtee tiehyt! II Maksa ja sappirakko (RP6p. s628-647) Valmiste 1/1a: Maksa (RP6p. s628-641, kuvat 18.4,.11 ja.14; plate65-66 s656-659) Valmisteen kuvaus: Rauta-hematoksyliini -värjäys. Värjäys on hieman ankea väritykseltään, mutta tumat ja rauhasen rakenne erottuvat niin selkeästi kuin mahdollista. Itse maksaolujen soluliman yksityiskohdat eivät ole selkeät, mutta mikään muukaan värjäys ei ole tässä suhteessa juuri sen parempi (ks kirjojen kuvat). Yleistarkastelussa nähdään maksan rakenteessa isojakin verisuonia ja niihin liittyvää sidekudosta - näissä on usein havaittavissa sama triadiryhmittymä mikä lobulustasollakin. Pyri tunnistamaan nämäkin rakenteet! Etsi keskuslaskimoita (central vein, vena hepatican haara) - niiden ympärillä näet maksasolujuosteet säteittäisinä. Käy suuremmilla suurennoksilla välillä tarkastamassa yksityiskohtia (esim millainen seinämä keskuslaskimolla on?)! Etsi myös portatriadi ja tunnista siinä olevat rakenteet! pystytkö seuraamaan sinusoidia triadista keskuslaskimoon? Sinusoidin seinämässä erottuu soluja mihin soluluokkiin ne kuuluvat - onko valomikroskooppisella tasolla mahdollista erotella mikä solu (tuma) on mikä?
4 Valmiste 92: Paasto-, normaali- ja rasvamaksa Valmisteen kuvaus: Valmisteessa on kolme kudosnäytettä: rotan paastomaksa (erikoisvärjäys, rakenne on huono, ei kannata tarkastella), normaali maksa (HE*, keskellä) ja rasvamaksa (HE, maksasolut sisältävät paljon rasvaa) *Eläimelle on ruiskutettu hiilipartikkeleita verenkiertoon ennen näytteen ottoa. Tarkastele ensin pienellä suurennoksella ja sitten isommilla normaalimaksaa ja vertaa sen rakennetta sitten rasvamaksaan. Löydätkö valmiste 1:n mukaiset rakenteet kummastakin? Missä määrin maksasolut muistuttavat näissä eri näytteissä toisiaan? Mihin rakenteisiin hiilipartikkelit ovat kertyneet? Valmiste 55: Sappirakko (RP6p s643-6; plate 67 s660-1) Valmisteen kuvaus: HE-värjäys. Kokonaisen sappirakon ympyrämäinen läpileikkaus. Sisällä sappirakolle tyypillinen limakalvo myös sappirakon seinämän kaikki kerrokset ovat näkyvissä. Pienellä suurennoksella sisäpinnan limakalvo erottuu voimakkaasti poimuuntuneena. Joissakin näytteissä saattaa esiintyä poikkileikkauksia, joita voisi luulla putkiksi tai kystoiksi. Tarkastele epiteeliä suuremmilla suurennoksilla: Miten luokittelet tämän epiteelin? Mikä on sen funktio? Sappirakon seinämässä on voimaka sileä lihaksisto - tarkastele en poikki ja pituusleikkauksia. Bongaa kaikki sileälihaksen rakenneominaisuudet!
Valmiste B (=45): Mahalaukun fundusosaa (RP6p s574-585; plate57 s612-3) Valmisteen kuvaus: HE-värjäys. Näyte koostuu pätkästä mahalaukun fundus/corpus-osan limakalvoa. Mukana on myös mahalaukun seinämän sileää lihasta, joka kuitenkin pyrkii repeytymään iri limakalvosta. Maharauhasen parusrakenteet erottuvat selvästi. Tutki näytteen yleisrakennetta ja erityisesti limakalvoa pienellä suurennoksella. Sinun pitäisi löytää alue, jossa limakalvon rauhaset kulkevat suorina pinnasta muscularis mucosaan asti (= limakalvon pintaan nähden kohtisuora leikkaus). Tällaisesta kohdasta voit tutkia rauhasen eri osia parhaiten. Jos on kyse vähänkään vinosti leikkautuneesta kohdasta, näkyy limakalvossa paljon rauhasputken poikkileikkauksia. 5 Tunnista ensin suurin piirtein rauhasen eri osat: kuopake (pit), liitos (isthmus), kaula (neck) ja tyvi (base). Tutki rauhasputken suhdetta muscularis mucosaan ja lamina propriaan (mitä soluja erotat lamina propriassa?). Tunnista soluista ensimmäiseksi: pintasolut (surface lining cells - mitkä ominaisuudet?), parietaalisolut (mitkä ominaisuudet?) ja pääsolut (mitkä ominaisuudet?). Limaa tuottavat kaulasolut (mucous neck cells) eivät erotu varmuudella tällä värjäyksellä. Happoa erittävät soluthan ovat suuria, pyöreä tuma suht keskellä, sytoplasma voimakkaan eosinofiilinen. Proteiiniä erittävän solun ominaisuuksiin kuuluvat:pyöreä tuma, basaalisesti sytoplasma on basofiilinen (RER) ja apikaalisesti vaalea tai eosinofiilinen (eritejyväset). Bonustehtävä: Etsi rauhasen basaaliosista enteroendokriinisia soluja (RP s530-1). Ne sijaitsevat pääosin rauhasputken pohjaosissa (jossa on enimmäkseen pääsoluja) varsinaisen rauhassolun ja tyvikalvon välissä. Niiden sytoplasma ei värjäydy ja ne erottuvatkin siten pieninä "kirkkaina" soluina rauhasrakenteen periferiassa. Valmiste 46: Mahalaukun porttiosaa (RP6p s583-4; plate58 s614-5) Valmisteen kuvaus: Limavärjäys, jossa lima erottuu kirkkaan punaisena. Pätkä antrumin seinämää, jossa erottuvat edelliseen verrattuna yksinkertaisemmat rauhasrakenteet. Tämän näytteen tarkoituksena on osoittaa, että osassa mahalaukkua ei ole edellisen kaltaista rauhasta, vaan yksinkertaisempia rauhasrakenteita. Tältäkin alueelta saattaa rauhasen pohjaosista löytyä endokriinisiä soluja (gastriinin eritys!).