Desialotransferriinimääritys kapillaarielektroforeesilla

Koko: px

Aloita esitys sivulta:

Download "Desialotransferriinimääritys kapillaarielektroforeesilla"

Arttu Kahma
8 vuotta sitten
Katselukertoja:

1 Desialotransferriinimääritys kapillaarielektroforeesilla Labqualityn Laaduntarkkailupäivät Annukka Mäki VITA Laboratorio

2 CDT = Carbohydrate Deficient Transferrin alkoholin suurkulutuksen merkkiaine pitoisuus nousee kun alkoholin käyttö on runsasta ja jatkuvaa pitoisuus alkaa laskea noin kahden viikon kuluttua alkoholin käytön lopettamisesta

alkoholin käyttö on runsasta ja jatkuvaa pitoisuus

3 NH COOH Fe Fe 413 N acetyl glucosamine Mannose Galactose Sialic acid

4 CDT:n määritysmenetelmissä vähän siaalihappotähteitä sisältävät isoformit erotetaan kromatografisesti ioninvaihtokromatografia + RIA tai FIA tai TIA - HPLC elekroforeettisesti - isoelektrinen fokusointi - kapillaarielektroforeesi

ioninvaihtokromatografia + RIA tai FIA tai TIA - HPLC

5 Kapillaarielektroforeesi (CE) on tekniikka, jolla erotetaan liuosseoksessa olevat ioniset ja/tai neutraalit yhdisteet toisistaan.

6 Elektro-osmoottinen virtaus EOF _ Silikakapillaari

- - - + _ + + + + + + + + + + + + + + - - -

7 Kapillaari Detektori + - Puskuriastiat - Näyteastia Jännitelähde Elektrodit

8 Menetelmä P/ACE TM MDQ electropherograph Beckman Coulter Silikakapillaari pituus 60 cm halkaisija 50 µm Ceofix CDT Capillary Electroforesis

9 Näytteen esikäsittely 60 µl seerumia 60 µl FeCl 2 liuos, 0.1 %

10 Menetelmä Huuhtelu initiaattoriliuoksella 1.5 min, paine 15 psi Huuhtelu puskuriliuoksella 2 min, paine 15 psi Näyteinjektio, vakuumi 10 s, 0.5 psi Erotus, jännite 28 kv, 7.4 min Kapillaarin huuhtelu, 0.2 mol/l NaOH, 1 min, paine 60 psi Kapillaarin puhdistus, 80 µa ja paine 20 psi, 1.5 min Analyysiaika yhtä näytettä kohden noin 15 min

vakuumi 10 s, 0.5 psi Erotus, jännite 28 kv, 7.4 min Kapillaarin huuhtelu, 0.

12 UV - 200nm Migration Time Name Corrected Area Percent Minutes Minutes Au sialo sialo sialo sialo sialo sialo AU µa

075 0.0 2.5 5.0 7.5 Minutes 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Au 6.23 0 sialo 1.20 6.33 0.25 6.

13 Au Minutes

14 Au Minutes

15 alkoholin suurkuluttajaa 3 alkoholin kohtuu käyttäjää AU

16 Menetelmävalidointi korrelaatio alkoholin kulutukseen viitealue toistettavuus

17 Näytteet 1. WHO/ISBRA Study on State and Trait Markers of Alcohol and Alcoholism Päihdelääketieteen tutkimusyksikkö on Helsinki Clinical Center 2. Biological Markers of Alcohol Consumption and Effect of Calcitonin in Nonalcoholic Men: A Prospective, Double- Bilind Study Ville-Veikko Elomaa, Elisa Löyttyniemi, Päivi Kärkkäinen, Mikko Salaspuro and Kalevi Laitinen Alcohol Clin Exp Res, Vol 20, No 5, 1996: pp

18 Näytteet Tutkimusmateriaali - 58 raitista henkilöä kohtuukäyttäjää - 95 suurkuluttajaa Suurkulutuksen raja: alkoholin keskimääräinen kulutus päivässä yli 60 g, mikä vastaa noin neljää ravintola-annosta väkeviä juomia

raja: alkoholin keskimääräinen kulutus päivässä yli 60

19 Näytteet Viitearvojen tarkistaminen naista miestä

20 COMPARISON OF CAPILLARY ELECTROPHORESIS (ANALIS CEOFIX CDT KIT) AND SMALL COLUMN (BIORAD %CDT-TIA AND CDTECT) METHODS FOR SERUM CARBOHYDRATE-DEFICIENT TRANSFERRIN IN DETECTION OF HEAVY DRINKING Taina Methuen, Annukka Mäki, Pertti Kaihovaara, Kalevi Laitinen, Jukka Hurme and Mikko Salaspuro 9TH CONGRESS OF THE EUROPEAN SOCIETY FOR BIOMEDICAL RESEARCH ON ALCOHOLISM Alcohol and Alcoholism Vol 20, 2003: p 524

Methuen, Annukka Mäki, Pertti Kaihovaara, Kalevi Laitinen, Jukka Hurme and Mikko Salaspuro 9TH

21 Korrelaatio alkoholikulutukseen %DST-CE: 0.74 %CDT-CE: 0.70 %CDT-TIA: 0.58 CDTect: 0.44

22 Viitearvot mediaani keskiarvo SD 95. persent persent. vaihteluväli naiset n=113 miehet n=107 kaikki n=220 raittiit, miehet n=58

23 Sensitivity Ref erence Line %DST-CE %CDT-TIA 0.00 CDTect Specificity

24 %CDT-TIA cut off Sens CI Spec CI 2.9 a to to b to to c to to d to to 94 %DST-CE cut off 1.8 a to to b to to c to to d to to 94

25 Toistettavuus, sarjan sisäinen ka SD %CV n Matala 1.45 % 0.03 % Korkea %

26 Toistettavuus, päivittäinen ka SD %CV n Matala 1.51 % 0.09 % Korkea 8.58 % 0.38 %

27 Au Minutes

28 Au Minutes

29 Comparison between «CC» homozygous (normal) and a «CB» variant of transferrin of two alcohol abusers. 4 Sialo C B 2 Sialo C B 0 Sialo C B 5 Sialo C B CB variant CC C 0 Sialo C 2 Sialo C 3 Sialo C 4 Sialo C 5 Sialo

30 Heterotsygoottiset transferriinivariantit Tutkimusnäytteet, 257 kpl - BC tyyppi: 5 kpl (1.9 %) - CD tyyppi: 2 kpl (0.8 %)

31 Heterotsygoottiset transferriinivariantit Viitemateriaali Naiset - BC tyyppi: 4 kpl (3.3 %) - CD tyyppi: 1 kpl (0.8 %) Miehet - BC tyyppi: 4 kpl (3.3 %) - CD tyyppi: 4 kpl (3.3 %)

32 Migration Time difference between the two tetrasialo Tf Variants 0.15 min D C 4D 5D 4C Asymmetric Valley One Shoulder 0.12 min Symmetric Valley C B2 4C 4B min C B1 4C 5C 4B1 Symmetric Valley One Peak D B1 4D 5D 0.37 min 4B1 Symmetric Valley Two Peaks

33 Dvariant Dvariant Alcohol Abuser B2 variant B1 variant

34 Au Au Minutes -0.02

35 Au Au Minutes

36 monoklonaalinen α-raskasketju Au Au Minutes

37 monoklon. IgA kappa Au Au Minutes 0.00

38 Yhteenveto hyvä toistettavuus helppo näytteiden esikäsittely geneettisten varianttien tunnistus hyvä korrelaatio alkoholin kulutukseen

39 CDT menetelmän uusi versio analyysiaika lyhenee tulostaso kohoaa noin % CRP:n häiriövaikutus poistuu

Samankaltaiset tiedostot

Alkoholin suurkulutuksen tunnistaminen laboratoriodiagnostiikalla. Onni Niemelä

Alkoholin suurkulutuksen tunnistaminen laboratoriodiagnostiikalla Onni Niemelä EPSHP Seinäjoki 7.9.2009 Tausta Jo 12 % aikuisväestöstä kuluttaa alkoholia niin paljon, että terveyshaittoja aiheuttavat rajat