Raakamaidosta tehtävät STEC tutkimukset. Saija Hallanvuo Elintarvike- ja rehumikrobiologian tutkimusyksikkö Tutkimus- ja laboratorio-osasto

Transkriptio

1 Raakamaidosta tehtävät STEC tutkimukset Saija Hallanvuo Elintarvike- ja rehumikrobiologian tutkimusyksikkö Tutkimus- ja laboratorio-osasto Raakamaidon tuotanto ja myynti koulutuspäivä viranomais- ja alan ohjeista

2 Ihmiselle patogeeniset E. colit -esiintyminen Escherichia coli bakteerit kuluvat ihmisen ja tasalämpöisten eläimien suoliston normaaliin bakteeristoon Yleensä hyödyllisiä Osa muuntunut ripulin aiheuttajiksi EHEC bakteerien tärkein varasto on (oireeton) nautakarja ja muut märehtijät EHEC on yleisvaarallinen tartuntatauti Sairastumisen aiheuttava bakteerimäärä (nk. infektiivinen annos) on ainoastaan muutamia bakteereita

3 Ihmiselle patogeeniset E. colit Tartunnan alkuperä on aina uloste Voidaan jaotella kliinisten oireiden tai bakteerin ominaisuuksien mukaan

4 Ihmiselle patogeeniset E. colit Kliininen jaottelu: EHEC aiheuttaa paksusuolentulehduksen ja veriripulin, joka voi johtaa hemolyyttis-ureemiseen syndroomaan (HUS)

5 Ihmiselle patogeeniset E. colit EHEC:in aiheuttamat oireet: Paksusuolentulehdus, jonka ensimmäisiä oireita ovat voimakkaat vatsan alueen kouristukset ja ripuli. Tauti voi olla myös täysin oireeton tai lieväoireinen Oireet alkavat keskimäärin 3 4 vuorokauden kuluttua tartunnasta Uloste muuttuu verensekaiseksi tleensä toisena tai kolmantena päivänä sairastumisesta ja verenvuoto kestää 4 10 päivää Noin puolet sairastuneista oksentelee ja noin kolmannes kuumeilee lievästi Erityisen alttiita komplikaatioille: vanhukset ja alle 5-vuotiaat lapset, joista 5-10%:lle kehittyy munuaisvaurio (HUS), tajunnanhäiriö tai anemia Kuolleisuus HUS:iin alle 5 vuotiailla lapsilla on 5-10%

6 Ihmiselle patogeeniset E. colit: Elintarvike tai ympäristöanalytiikassa jaottelu tapahtuu bakteerin ominaisuuksien mukaan: Tutkittaessa näytteitä ei usein vielä ole selvää onko kyseessä EHEC, kuten humaanipuolella on tilanne kun eristetään bakteeri veriripulioireiselta potilaalta > syy miksi käytetään mieluummin nimitystä STEC (tai VTEC) Nimitys EHEC historiasyistä käytössä (ei täysin täsmennetylle) ryhmälle ihmiselle patogeenisia STEC bakteereja EHEC > aina patogeeninen ihmiselle STEC > kaikki kannat eivät välttämättä aiheuta sairautta ihmiselle STEC ryhmä pystytään täsmentämään > syy miksi käytetään mieluummin nimitystä STEC (tai VTEC)

7 Ihmiselle patogeeniset E. colit: STEC (shigatoksiinia tuottava E. coli) on E. coli -bakteeri jolla on shigatoksiinin muodostamiseen tarvittavat geenit stx1 ja/tai stx2 stx geenit > Stx toksiini (Shigatoksiini) > Vaurioita verisuonten sisäpinnalla Shigatoksinen = Verotoksinen (STEC = VTEC; stx = vtx) STEC bakteerit, joilla on lisäksi intimiiniä koodaava eae geeni liittyvät usein STEC infektioiden vakavimpiin muotoihin LEE (Locus of Enterocyte Effacement) patogeenisuussaareke > tyypilliset vauriot suolen limakalvon soluissa merkkigeeninä eae eae positiivisten ryhmällä myös yleisnimi AEEC (Attaching and effacing E. coli) > ryhmässä muitakin kuin STEC:jä

8 Ihmiselle patogeeniset E. colit: eae stx1, stx2 Tyypilliset EHEC:it Epätyypilliset EHEC:it (mm. Saksan ituepidemian aiheuttaja)

9 Ihmiselle patogeeniset E. colit: Bakteerin pinta-antigeeneihin perustuva serotyypitys jakaa E. colit yli 180:een serotyyppiin Pelkän serotyypin perusteella ei voi päätellä sairaudenaiheuttamiskykyä Tärkeimmät STEC serotyypit Euroopassa: O157, O26, O111, O103 ja O145 ( Top-5 )

10 Ihmiselle patogeeniset E. colit: Tutkimukset tähän saakka keskittyneet STEC O157:H7:n Vaikka non-o157 STEC:it vastaavat noin puolesta EHEC - sairastumisista 35 6 ilmoitettuja sairastapauksia ilmaantuvuus non-o157 tapauksia/vuosi O157 tapauksia/vuosi EHEC ilmaantuvuus/ milj. asukasta/vuosi kotimaisten EHEC tartuntojen ilmaantuvuus / milj. asukasta/ vuosi

11 Ihmiselle patogeeniset E. colit: eae stx1, stx2 Epätyypilliset EHEC:it Serotyyppien O157, O26, O111, O103 ja O145 E. colit Yleisimmät tyypilliset EHEC:it

12 STEC tutkimukset maidosta Raakamaitoasetus määrittelee STEC-bakteeriksi: Escherichia coli O26, O103, O111, O145 ja O157 -bakteereja, joilla on shigatoksiinin (Stx I ja/tai Stx II) muodostamiseen tarvittavat geenit sekä muita shigatoksiinia tuottavia E. coli -bakteereja, joiden on todettu aiheuttavan ihmisten sairastumisia Toksiinigeenit ratkaisevia määrittelyssä! PCR signaalit toksiinigeeneistä ja tärkeimmistä ihmisten infektioissa esiintyvistä serotyypeistä antavat viitteen terveysvaarasta

13 STEC tutkimukset maidosta Raakamaitonäytteestä tehdyssä PCR -tutkimuksessa havaitut shigatoksiinin (Stx I ja/tai Stx II) muodostamiseen tarvittavat geenit yhdessä serotyyppispesifisessä PCR-tutkimuksessa havaitun O-geenin kanssa muodostavat alustavan STEC - positiivisen tuloksen. Toimija lopettaa raakamaidon myynnin alustavan positiivisen tuloksen perusteella ja ryhtyy muihin korjaaviin toimenpiteisiin, tarvittaessa valvojan päätöksellä Huom! Laboratorio voi antaa tuloksen esim. alustava STEC serotyyppiä O157 > Tämän tulisi johtaa toimenpiteisiin

14 Eviran ohjeen 16040/1 liite 3: STEC ja STEC O157 tutkimukset

15 STEC tutkimukset maidosta Lehmän raakamaidossa ei saa esiintyä STEC bakteereita: raja-arvo: ei esiinny 25 ml:ssä yhdessäkään tutkitussa 5:ssä osanäytteessä Siirtymäaikana mahdollista tutkia STEC:in sijasta enterobakteerit: raja-arvo: m= 100 pmy/ml, M= 500 pmy/ml, osanäytteiden lukumäärä on 5, enintään 2 näytettä saa olla välillä m-m

16 STEC tutkimukset ulosteesta Ulosteesta tutkitaan ainoastaan STEC O157 (asetuksen 24/EEO/2006 nimittämä EHEC-bakteeri ) Toimijan on toimitettava tutkittavaksi nautakarjan ulostenäytteet STEC O157 - bakteerin varalta ennen toiminnan aloittamista ja sen jälkeen vähintään kerran vuodessa (raakamaitoasetus, 6 ) Ulostenäytteet STEC -bakteerin tutkimiseksi on otettava niin, että vähintään yksi näytteenotto vuodessa toteutetaan heinäkuun alun ja marraskuun lopun välisenä aikana (raakamaitoasetus, liite 2) Jos maidontuotantotilan raakamaitonäytteessä on todettu muu STEC -bakteeri, tai jos on muutoin erityistä syytä epäillä, että nautakarjassa on muu STEC -bakteeri, on ulostenäytteet lisäksi tutkittava epäillyn bakteerin varalta. (raakamaitoasetus, 6 )

17 STEC tutkimukset ulosteesta STEC O157:n määritelmä: E. coli serotyyppiä O157, jolla on shigatoksiinin (=verotoksiinin) muodostamiseen tarvittavat geenit vtx1 ja/tai vtx2 ja bakteerin kiinnittymiseen tarvittava geeni eae Toksiinigeenit ratkaisevia tässäkin määrittelyssä! Eviran hyväksymä (tutkimuksiin pätevä) laboratorio tutkii näytteet E. coli O157:n varalta ja lähettää eristämänsä kannan jatkotutkimuksiin Eviraan tuloksen saamiseksi > pystyy tuottamaan tuloksen myös itse, jos käytössä on PCR-menetelmä toksiinigeenien osoittamiseksi (bakteerikannan lähetysvelvollisuus Eviraan säilyy silti)

18 Raakamaidosta tehtävät tutkimukset A. Elintarvikkeiden turvallisuutta koskevat vaatimukset 1 mikro-organismi näytteenottosuunnitelma rajat vertailumenetelmä o n lehmän ja vuohen raakamaito Listeria monocytogenes 5 ei esiinny 25 ml:ssa SFS-EN ISO vuohen raakamaito Salmonella 5 ei esiinny 25 ml:ssa SFS-EN ISO 6579 lehmän raakamaito STEC O26, O103, O111, O145 ja O157 -bakteerit tai siirtymäaikana enterobakteerit C kohdan mukaisesti 3 5 ei esiinny 25 ml:ssa CEN ISO/TS lehmän raakamaito kampylobakteerit, jotka kasvavat 41,5 C:ssa 5 ei esiinny 25 ml:ssa SFS-EN ISO

19 Raakamaitoasetuksen tutkimukset Huomio kiinnitettävä siihen että asetus määrää käyttämään tiettyjä menetelmiä Laboratoriolla voi olla käytössä useita eri tutkimuksia samalle asialle Tutkimuspyyntö menetelmäviitteen kanssa takaa sen että tutkituksi tulee oikea asia Maitotutkimukset: Vaihtoehtoiset määritysmenetelmät ovat sallittuja, jos ne validoidaan vertailumenetelmää vastaan SFS-EN ISO standardin mukaisesti Asetuksen 699/2013 Liite 2 STEC-BAKTEERITUTKIMUKSET NAUTAKARJASTA: Luku 1. Näytteenotto ja tutkimukset Ulostenäytteet Escherichia coli O157 -bakteerin toteamiseksi on tutkittava menetelmän SFS-EN ISO mukaisesti.

20 Maito- ja ulostetutkimusten STEC menetelmien eroista ISO 16654:2001 NMKL 164:2005 (sallittu vaihtoehtoinen menetelmä Eviran suositeltavien menetelmien luettelossa, identtinen ISO 16654:n kanssa) Tähtäävät E. coli O157 eristämiseen tai toteamiseen ISO/TS 13136:2012 Tähtää koko STEC ryhmän toteamiseen ja eristämiseen (erit. serotyypit O157, O26, O111, O103 ja O145)

21 STEC bakteerien toteaminen raakamaidosta: Reaaliaikainen PCR Tulos: Ei todettu Näyte-DNA Viljely > Bakteerin eristys

22 STEC bakteerien toteaminen raakamaidosta: Asetuksen menetelmä (ISO/TS 13136) poikkeaa jo lähtökohdiltaan täysin ulostetutkimuksiin määrätystä menetelmästä (ISO 16654) Tutkimuksen tilaajan ymmärrettävä pyytää tutkimusta asetuksen menetelmäviitteellä (eli ISO/TS 13136) väärinkäsitysten välttämiseksi Asetuksen menetelmä (ISO/TS 13136) tällä hetkellä käytössä Suomessa ainoastaan Evirassa Siirtymäaikana (2014 loppuun) enterobakteeritutkimus voi korvata STEC tutkimuksen > toivon mukaan STEC menetelmä jo laajemmin käytössä suomalaisissa laboratorioissa vuonna 2015

23 STEC O157 bakteerien toteaminen ulosteesta: Laboratoriot, joilla on E. coli O157 tutkimusvalmius menetelmille ISO 16654:2001 tai NMKL 164:2005: Kokemäenjoen vesistön vesiensuojeluyhdistys ry (KVVY), Tampere/Hämeenlinna MetropoliLab, Helsinki Savo-Karjalan Ympäristötutkimus, Kuopio SeiLab Oy, Seinäjoen elintarvike- ja ympäristölaboratorio, Seinäjoki Oulun seudun ympäristötoimi liikelaitos, Elintarvike- ja ympäristölaboratorio, Oulu? >Näistä kaikki tarjoavat myös kampylobakteeritutkimuksia ja listeriatutkimuksia Lähilaboratoriosta voi löytyä lypsyprosessin hygieniavaatimuksiin kuuluva tutkimus bakteerien kokonaislukumäärä = pesäkemäärä 30 C:ssa Maitohygienialiiton listaus tutkimusvalmiuksista:

24 Kiitos mielenkiinnosta! Kysymyksiä?