BAL-menetelmä: laboratorion näkökulma OYS Patologian osasto Sytologian laboratorio Leena Seppälä 2017
Keuhkohuuhtelunäytteiden määrä 2016-301 huuhtelunäytettä, joista 58 oli ns. asbesti-balleja - Pneumocystis jirovecii pyyntöjä oli 118, joista positiivisia oli 4 (+1)
Näytteitä lähettävät: Bronkoskopia (os.40 alaisuudessa) Teho I Korvaleikkaussali Oulaskankaan keuhkopkl
Näytteen laatu: Tuore fiksoimaton keuhkohuuhtelunäyte Jos näyte on tartuntavaarallinen, se otetaan 70%:n alkoholiin 1:1
Näytteen kuljetus: muovinen näytepullo jäämurskan sekaan kuljetusastiaan toimitetaan välittömästi lähetin mukana sytologian laboratorioon mukana Weblab-pyyntö/lähete
Pyyntö/lähete Lähetteessä tulee olla: ongelman määrittely onko aikaisemmin tehty Baltutkimusta erityistoivomukset huuhtelupaikat, -määrät ja saaliit huuhtelun suorittamiseen liittyvät ongelmat tiedot potilaan tupakoinnista
Ilman erillistä pyyntöä tehtävät TUTKIMUKSET (Bl-BAL-1) solujen kokonaismäärä elävien solujen osuus (viabiliteetti) lieriöepiteelisolujen osuus (bronkuskontaminaatio) tulehdussolujen jakauma (erittelylaskenta), MGG ja papa esitarkastajan arviointi näytteestä Patologin lausunto
Eri pyynnöstä esim. asbestikappaleiden osoittaminen pneumocystis jiroveciin osoittaminen (oma lähete) CD4,CD8 (flow-sytometria) CMV PAS,PASM ORO
Näytteen käsittely Punnitaan näyte: - kokonaismäärä millilitroina lähetteeseen (vähennetään muovipullon paino pois) Sekoitetaan näyte huolella, mutta varoen, ennen näytteen käsittelyä
Pipetoidaan: -Trypan Blue-väriä 100 µl + 100 µl näytettä (ei alkoholifiksoidusta näytteestä) -2 ml 96% etanolia + 2 ml näytettä (toinen 2+2 varalle) -yksi 4 ml putki tuorenäytettä sytospin-valmisteita varten (asb.määritystä varten 2x5 ml+5 ml)
Kokonaissolumäärän laskeminen Trypan Blue-värjäyksestä annetaan värin vaikuttaa n. 5min solulaskenta tehdään Bürkerin kammiossa
Bürkerin kammio Koko kammio = 3 x3 A-ruutua Yksi A-ruutu = 16 B-ruutua A-ruutua rajaa kolminkertainen viiva, B-ruutua kaksinkertainen viiva
Solujen laskeminen A-ruudusta lasketaan ruudun sisällä olevien solujen lisäksi A- ruudun ylä- ja vasemmalla rajalla olevat solut (tummat solut). Ala- ja oikealla rajalla olevat solut (vaaleat solut) jätetään laskematta.
Kammiosta lasketaan elävät (värittömät) ja kuolleet (siniset) solut 10:sta A-ruudusta (ei punasoluja) Tulos: 2x elävien ja kuolleiden solujen lukumäärä = solumäärä x E6/l - samalla lasketaan elävien solujen %-osuus (=elävien solujen määrä/kokonaissolumääräx100)
Fiksoimattomasta näytteestä Tehdään sytospin-valmisteita eri värjäyksiä varten, määrä solurikkauden mukaan: Solumäärät: alle 100 pipetoidaan 400 µl 100-200 pipetoidaan 200 µl 200-400 pipetoidaan 100 µl
Sytospinsentrifuugi ja tarvittavaa välineistöä
BAL-NÄYTTEEN SYTOLOGISEEN TUTKIMUKSEEN KUULUU: o Solutyyppien erittelylaskenta o Vierasesinepartikkeileiden tai mikrobien tunnistus o Maligniteettiluokka Nämä tehdään sekä fiksoimattomasta että fiksoidusta näytteestä
- Fiksoimattomasta näytteestä VÄRJÄTÄÄN May-Grünwad-Giemsa Näytteestä lasketaan 200 solua ja solumäärä ilmoitetaan täysinä prosenttilukuina tulehdussolujen jakauma (%) lieriöepiteelisolujen osuus (%) sekä annetaan sytologinen arvio Berliininsinivärjäys Muu pyydetty värjäys (PAS, PASM jne.)
Alkoholifiksoidusta näytteestä tehdään sytotek-valmiste, joista värjätään pääsääntöisesti Papanicolaou (2 ml+2 ml) lieriöepiteelisolujen osuus tulehdussolujen jakauma sytologinen arvio
ASBESTI-BAL (Bl-BAL-2) Berliininsinivärjäystä varten: - Fiksoimattomasta näytteestä tehdään sytospin-valmisteita (4x400 µl) - Fiksoidusta näytteestä (2x5 ml näytettä+5 ml alkoholia) tehdään sytotek-valmisteita - Asbestikappaleiden määrä lasketaan kaikilta värjätyiltä valmisteilta ja ilmoitetaan kpl/11.6ml näytettä
Pneumocystis jirovecii-määritys BAL-näytteestä ( -PncaVr) Tuoreesta tai tartuntavaarallisen näytteen kyseessä ollessa alkoholifiksoidusta näytteestä tehdään 8 sytospin-valmistetta. - 2 lasia värjätään MGG:lla - 6 lasia + positiivinen kontrolli värjätään Methenamiinihopeavärjäyksellä
Esitarkastaja katsoo näytelasit ja antaa oman arvionsa näytteistä Patologi antaa lopullisen lausunnon näytteistä sytologisten tutkimusten valmistuttua
BAL-näytteen haasteet laboratoriolle - Bal-näyte keskeyttää muut työt - Tuorenäyte - Veriset näytteet haasteellisia - Vaatii päivystysvalmiuden, syto, histo, patologi (klo 15.30 ) - Erikoispöydän työntekijän hallittava pneumocystiksen värjääminen - Pienet erittäin hennot asbestikappaleet