Geeliputkien lähetys ja säilyttäminen Laboratoriolääketiede 2014 Riitta Tähtelä, FT, sairaalakemisti Mehiläinen Oy Laboratoriopalvelut 1
Verinäytteiden käsittely Suositusten mukaan Näytteet otetaan lisäaineelliseen tai lisäaineettomaan putkeen Seerumi tai plasma erotetaan soluista mahdollisimman pian (2 tunnin sisällä näytteenotosta) Hajautettu näytteenotto, keskitetty analysointi ja näytteiden automatisoitu esikäsittely Näytteiden lähettäminen kokoverenä primaariputkessa Näytteiden käsittely keskitetysti Näytteiden analysointi primaariputkesta Miten analyytit säilyvät, kun näytteiden käsittelyyn tulee usein tuntienkin viive? 2
Kirjallisuus Tanner, M et al (2008) 35 analyyttiä mitattiin seerumigeeliputkista, joita oli seisotettu 15, 25 ja 35 C-asteessa 4 h, 8 h ja 24 h ennen sentrifugointia; 30 koehenkilöä; vertailunäytteenä oli putki, jota seisotettiin 30 min huoneenlämmössä enne sentrifugointia BD:n seerumigeeliputket, peruskemian analyysit Rochen analysaattorilla, immunokemia Abbottin Architect, DPC:n Immulite 2000, D-25 RIAlla Kliinisesti hyväksyttävä muutos (CAL) laskettiin analyyteille ottaen huomioon analyyttinen ja biologinen variaatio Useat analyytit, mm. lipidit, ASAT, ALAT, AFOS, GT, TSH, T4-V, FSH, PSA, D-25, säilyivät muuttumatta merkitsevästi kaikissa testatuissa olosuhteissa 3
Kirjallisuus Tanner, M et al (2008) Kalium muuttui merkitsevästi 15 ja 35 asteessa kaikissa aikapisteissä Huoneenlämmössä K säilyi muuttumatta merkitsevästi 4 h Fosfaatti ei muuttunut merkitsevästi, kun putkia seisotettiin 15 asteessa 24 tuntiin asti, 25 asteessa 8 tuntiin; korkea lämpötila aiheutti tuloksen merkitsevän kohoamisen kaikilla seisotusviiveillä, LD samoin Rauta ei muuttunut merkitsevästi, kun putkea seisotettiin 15 asteessa 24 h asti, 25 asteessa 8 h asti Mg muuttui merkitsevästi vain 35 asteessa 24 h seisotetussa putkessa 4
Kirjallisuus Leino ja Koivula (2009) 28 peruskemian ja 15 immunokemian analyytin säilyvyys 6 h jääkaappija huoneenlämmössä sentrifugoimatta säilytetyissä Lihepariinigeeliputkissa (Terumo), verrattiin puolen tunnin sisällä sentrifugoituihin näytteisiin Analyysit Roche Diagnosticsin Modular-analysaattoreilla laitevalmistajan reagenssein 50 henkilön näytteet Merkitsevä muutos = vertailuarvo + 2.8 x menetelmän SD Vain K muuttui merkitsevästi jääkaapissa säilytetyssä näytteessä Kuljetusta simuloivat olosuhteet eivät muuttaneet merkitsevästi minkään analyytin pitoisuutta 5
Kirjallisuus Oddoze et al (2012) 81 analyytin säilyvyys kokoveressä testattiin, 50 koehenkilöä peruskemia ja spes. proteiinit (39 ) 2, 4, 6 ja 24 h joko jääkaappi- tai huoneenlämpötilassa Li-hepariini-, seerumilasi- ja seerumigeeliputkissa hormonit ja merkkiaineet -> 72 h jk tai hl seerumilasi- ja K3-EDTAputkissa Lisäksi testattiin säilyvyys sentrifugoinnin jälkeen erottamattomassa plasmassa / seerumissa em. olosuhteissa BD:n putket, analysointi Roche Diagnosticsin laitteilla (D-25 Diasorin) Analyteille laskettiin rajat kokonaismuutokselle (TCL), jossa otettiin huomioon analyyttinen ja biologinen variaatio Muutos merkitsevä, jos em. rajoja suurempi 6
Kirjallisuus Oddoze et al (2012) Useimmat testatut analyytit säilyivät kokoverenä 24 h joko jk tai hl Analyytti TCL Seerumiputki Lihepariiniplasmaputki Jk Hl Jk Hl K + 2.8 % kohoaa < 4 h kohoaa < 2 h Pi + 5.2 % 24 h 6 h 4 h 2 h LD + 6.4 % < 4 h < 2 h - - Mg + 5.5 % 24 h 6 h > 4 h > 4 h Sentrifugoidussa, mutta ei erotetussa seerumissa tai plasmassa useimmat analyytit säilyivät 24 h molemmissa lämpötiloissa poikkeuksena ym. analyytit 7
Kirjallisuus Oddoze et al (2012) Tuloksia, hormonien ja merkkiaineiden säilyvyys kokoveressä Testatuista hormoneista mm. TSH, T4-V, T3-V, FSH, PRL ja D-25 säilyivät muuttumatta merkitsevästi jopa 72 h sekä huoneenlämmössä että jääkaapissa seerumiputkessa mm. PTH- ja C-peptidi säilyivät jääkaappilämpötilassa molemmissa testatuissa putkissa Hormonien ja merkkiaineiden säilyvyys seerumissa geelin päällä / plasmassa Samankaltainen kuin kokoveressä 8
Oma testaus Testasimme kuljetuksen vaikutusta analyyttipitoisuuteen sentrifugoidussa geelin päällä olevassa Li-hepariiniplasmassa ja seerumissa (peruskemia) Koska eri putkivalmistajien geeleissä on eroja, testasimme vaikutusta eri putkivalmistajien putkissa (Terumo, Greiner) Kuljetusolosuhteita simuloitiin pitämällä sentrifugoituja putkia 3 h ajan putkikeinussa huoneenlämmössä 9
Oma testaus Testasimme myös peruskemian analyyttien säilyvyyttä sentrifugoidussa geelin päällä olevassa plasmassa jääkaappi- ja huoneenlämpötiloissa (Terumon putket) kuljetuksen vaikutusta sentrifugoidussa geelin päällä olevassa seerumissa muutamiin hormonimäärityksiin (Terumon putket) hormonien säilyvyyttä seerumikokoveressä huoneenlämmössä ja geelin päällä olevassa seerumissa jääkaapissa 10
Oma testaus Kuljetuksen / säilytyksen jälkeen saatuja tuloksia verrattiin tuloksiin, jotka saatiin vertailuputkista Li-hepariiniputket sentrifugoitiin 15 30 minuutin kuluttua näytteenotosta (2200 g, 10 min), määritykset tehtiin välittömästi Seerumiputket sentrifugoitiin 30 60 minuutin kuluttua näytteenotosta, määritykset tehtiin välittömästi Muutoksien merkitsevyys testattiin t-testillä, muutoksen kliininen merkitsevyys arvioitiin vertaamalla keskimääräistä %-muutosta ulkoisen laadunarvioinnin sallittuihin %- muutoksiin (Labquality), joissa otetaan huomioon analyytin analyyttinen ja biologinen variaatio 11
Testatut analyytit, peruskemia Analyytti Menetelmä CV % Analyytti Menetelmä CV % K Suora ISE 1.8 Fe Ferene S 2.3 Na Suora ISE 1.4 Bil NBD 3.4 Krea Entsym 2.6 AFOS IFCC, 37 C 4.4 Kol Entsym 2.5 ALAT IFCC, 37 C 3.4 Kol-HDL Entsym 2.8 Amyl IFCC, 37 C 3.1 Trigly Entsym 2.8 ASAT IFCC, 37 C 2.9 Uraat Entsym 2.0 CK IFCC, 37 C 3.0 Ca Arsenazo III 2.1 GT IFCC, 37 C 2.8 Alb BCP 2.0 Määritykset tehtiin Thermo Fisher Scientificin reagensseilla Konelab Prime 60i-analysaattoreilla 12
Testatut analyytit, immunokemia Analyytti Menetelmä CV % TSH IFMA 3.7 T4-V FIA 3.8 25-D FIA 4.8 FSH IFMA 3.0 LH IFMA 2.5 PRL IFMA 3.2 Määritykset tehtiin AIA 2000L-analysaattorilla (Tosoh, Japani) laite-/reagenssivalmistajan reagenssein. 13
Glukoosin säilyvyys Jäljellä oleva glukoosi huoneenlämmössä 0-72 h seisotetuissa putkissa %:na korkeimmasta pitoisuudesta 14
Glukoosin säilyvyys Jäljellä oleva glukoosi huoneenlämmössä 0-8 h seisotetuissa putkissa %:na korkeimmasta pitoisuudesta 15
Simuloidusta kuljetuksesta johtuvat muutokset peruskemian määrityksiin Tulokset kahden putkivalmistajan putkissa eivät poikenneet toisistaan Analyytti Plasma Seerumi Kliin. merkitsevä t-testi, p Muutos-% t-testi, p Muutos-% muutos K > 0.05 + 1.5 < 0.05 + 1.0 + 4 % Na > 0.05 + 0.8 > 0.05 + 0.3 + 2 % Krea > 0.05 + 1.0 > 0.05 + 0.6 + 8 % Kol < 0.05 + 1.5 < 0.05 + 2.5 + 5 % Kol-HDL > 0.05 + 0.2 > 0.05 + 1.0 + 10 % Trigly > 0.05 + 0.3 < 0.05 + 3.0 + 15 % Uraat > 0.05-0.3 > 0.05-0.4 + 8 % Ca < 0.05 + 2.1 < 0.05 + 1.8 + 3 % Alb < 0.05 + 2.4 < 0.05 + 3.0 + 5 % 16
Simuloidusta kuljetuksesta johtuvat muutokset peruskemian määrityksiin Analyytti Plasma Seerumi Kliin. merkitsevä t-testi, p Muutos-% t-testi, p Muutos-% muutos Fe < 0.05 + 9.0 < 0.05 + 3.9 + 12 % Bil < 0.05-2.5 < 0.05-3.5 + 12 % AFOS > 0.05 + 0.4 > 0.05 + + 12 % ALAT < 0.05 + 10.5 < 0.05 + 3.6 + 12 % Amyl > 0.05 + 0.4 > 0.05-0.2 + 12 % ASAT < 0.05 + 8.8 < 0.05 + 4.6 + 12 % CK > 0.05-2.6 > 0.05-1.0 + 12 % GT < 0.05 + 16.6 > 0.05 + 2.5 + 12 % 17
Peruskemian analyyttien säilyvyys sentrifugoidussa geelin päällä olevassa Li-hepariiniplasmassa Analyytti %-muutos, jääkaappil. %-muutos, huoneenl. Kliin. 1 vrk 2 vrk 1 vrk 2 vrk merkitsevä muutos K + 1.9 + 7.1 + 5.7 + 12.2 + 4 % Na + + 0.3 + 1.9 + 4.9 + 2 % Krea + + + 4.3 + 4.2 + 8 % Kol + + 3.7 + 5.0 + 10.3 + 5 % Kol-HDL - 1.2 + 1.0 + 5.3 + 9.1 + 10 % Trigly + 2.2 + 1.6 + 3.1 + + 15 % Uraat + + + + 4.0 + 8 % Ca + + 1.4 + 3.7 + 5.4 + 3 % Alb + 2.0 + 4.0 + 10.9 + 16.8 + 5 % 18
Peruskemian analyyttien säilyvyys sentrifugoidussa geelin päällä olevassa Li-hepariiniplasmassa Analyytti %-muutos, jääkaappil. %-muutos, huoneenl. Kliin. 1 vrk 2 vrk 1 vrk 2 vrk merkitsevä muutos Gluk - 5.3-12.5-28.3-55.0 + 6 % Fe - 1.0 + 1.1 + 4.3 + 8.8 + 12 % Bil + + - 1.3 + + 12 % AFOS - 1.9-1.7 + 3.5 + 6.0 + 12 % ALAT + + 5.5 + 5.0 + 5.0 + 12 % Amyl - 3.2-3.0-1.7 + 2.3 + 12 % ASAT + 5.0 + 13.6 + 22.0 + 28.2 + 12 % CK - 2.0-2.0-2.9-1.5 + 12 % GT + 1.5 + 1.8 + 6.8 + 8.4 + 12 % 19
Simuloidusta kuljetuksesta johtuvat muutokset hormonimäärityksiin Analyytti t-testi, p Muutos, % Kliin. merkitsevä muutos TSH > 0.05 + 2.3 + 12 % T4-V > 0.05 + 3.4 + 12 % 25-D > 0.05 + 2.3 + 25 % FSH > 0.05-0.3 + 20 % LH > 0.05-0.8 + 20 % PRL > 0.05 +1.4 + 20 % 20
Sentrifugoinnin viivästymisen ja näytteen säilyttämisen vaikutus hormonimäärityksiin Sentrifugoinnin viivästyminen ad. 8 h huoneenlämmössä ei aiheuttanut muutosta testattujen hormonien pitoisuuksissa / aktiivisuuksissa. Seerumin jääkaappisäilytys sentrifugoidussa putkessa geelin päällä 1 vrk ajan ei muuttanut testattujen hormonien pitoisuuksia / aktiivisuuksia. 21
Yhteenveto Peruskemian analyyttien pitoisuus ei muutu merkitsevästi, vaikka kokoveren sentrifugointi viivästyisi ad. 6-8 tuntia (Lihepariinigeelipuket, seerumigeeliputket) Kuljetuksen vaikutuksesta GT-aktiivisuus nousi kliinisesti merkitsevästi sentrifugoidussa geelin päällä olevassa Li-hepariiniplasmassa Muiden testattujen analyyttien pitoisuudet / aktiivisuudet eivät muuttuneet kliinisesti merkitsevästi geelin päällä olevassa plasmassa tai seerumissa kuljetuksen vaikutuksesta 22
Yhteenveto Kaikki testatut peruskemian analyytit säilyivät merkitsevästi muuttumatta, kun geelin päällä olevaa Li-hepariiniplasmaa säilytettiin jääkaappilämpötilassa 1 vrk ajan Pidempi säilytys jääkaapissa muutti kliinisesti merkitsevästi useiden analyyttien pitoisuuksia / aktiivisuuksia Huoneenlämmössä geelin päällä säilytetyssä Lihepariiniplasmassa useiden analyyttien pitoisuudet / aktiivisuudet muuttuivat jo yhdessä vuorokaudessa kliinisesti merkitsevästi 23
Yhteenveto Testattujen hormonien pitoisuudet / aktiivisuudet eivät muuttuneet kliinisesti merkitsevästi kokoveri-seerumigeeliputken sentrifugoinnin viivästyessä ad. 8 h kun seerumia säilytettiin geelin päällä jääkaapissa 1 vrk Kuljetus geelin päällä olevassa seerumissa ei vaikuttanut kliinisesti merkitsevästi testattujen hormonien pitoisuuksiin / aktiivisuuksiin 24
Viitteitä Bowen RAR, Remaley AT. Biochemia Medica 2014;24.31-44 Henriksen LO, Faber NR at al. Scand J Clin Lab Invest 2014;2:1-8 Leino A, Koivula MK. Ann Clin Biochem 2009;46:159-61. Oddoze C, Lombard E, Portugal H. Clin Biochem 2012;45:464-9. O Keane MP, Cunningham SK. Clin Chem Lab Med 2006;44:662-8. Tanner M, Kent N et al. Ann Clin Biochem 2008;45:375-9. 25
Kiitos! 26