Huumetestauksen tekniikkaa SKKY ry:n ja Sairaalakemistit ry:n syyskoulutuspäivät 1.11.2013, Helsinki FT Antti Leinonen Huume-, lääkeaine- ja dopinganalytiikan yksikkö Yhtyneet Medix Laboratoriot Oy
Huumetestien käyttöalueita Terveydenhoito Päihdehuolto Sosiaalihuolto Vankilat Työpaikat Oppilaitokset Liikenne Oikeuslääketiede Urheilu
Esimerkkejä testattavista aineista Psykostimulantit Opiaatit ja huumaavat kipulääkkeet Anksiolyytit, sedatiivit ja unilääkkeet O OH Ekstaasi, fensyklidiini, gammahydroksivoihappo, kannabis, khat, LSD, psilosybiini.. HO H 3 C H 3 C O OH CH 3 CH 3 N NH 2 CH 3 HO O H N CH 3 CH 3 N O O O CH 3 O CH 3 O O
Yleisimmin käytetyt näytematriisit Virtsa Veri (seerumi, plasma) Sylki
Testauksen strategiaa ja tekniikkaa Seulonta kaupallisilla immunologisilla määritysmenetelmillä Positiivisten seulontatulosten varmistaminen kromatografis/massaspektrometrisesti Kromatografiaan ja massaspektrometriaan pohjautuvat laajat tutkimukset
Immunologiset seulonnat Pikatestit Instrumentoidut testit
Esimerkki kompetitiivisesta menetelmästä NEG Näyte + + Näyte POS + +
Esimerkki nonkompetitiivisesta menetelmästä NEG Näyte + Y YY Y YY + Y YY POS Näyte + + Y YY Y YY Y YY
Esimerkki pikatestin toimintaperiaatteesta NEG T T T T POS T T T T Petri Muranen, LABEMA
Esimerkkejä yleisimmistä saatavilla olevista testeistä Amfetamiinit Barbituraatit Bentsodiatsepiinit Buprenorfiini Fensyklidiini Fentanyyli Kannabis Kokaiini Metadoni Metakvaloni Oksikodoni Propoksifeeni Tramadoli
Cutoff -rajat Cutoff NEG POS Amfetamiinit 300 ng/ml Bentsodiatsepiinit 200 ng/ml Buprenorfiini 1 ng/ml Kannabis 20 ng/ml Kokaiini 300 ng/ml LSD 1 ng/ml Opiaatit 300 ng/ml
Testin sensitiivisyys eri yhdisteille Opiaatit 300 ng/ml Morfiini* Kodeiini 6-asetyylimorfiini Hydrokodoni Hydromorfoni Levorfanoli Oksikodoni 300 ng/ml 250 ng/ml 1090 ng/ml 360 ng/ml 500 ng/ml 2750 ng/ml 5390 ng/ml
Varmistusanalyysit Seulontapositiivisen näytteen uusinta-analyysi toimintaperiaatteeltaan erilaisella menetelmällä Antaa yksityiskohtaista ja luotettavaa tietoa näytteen sisältämistä yhdisteistä ja niiden määristä Tehdään samasta näytteestä kuin seulonta
Milloin varmistaa Positiiviset seulontatulokset suositellaan varmistettavaksi aina Jos positiivisella tuloksella on oikeudellista tai kurinpidollista vaikutusta Jos tutkittava kiistää seulontatuloksen Negatiivisten tulosten varmistaminen tarpeen tietyissä tilanteissa
Varmistusanalyysi käytännössä Tehdään seulontaan käytetystä näytteestä Analysointi kromatografis/massaspektrometrisellä menetelmällä Perustuu epäilyttävästä näytteestä ja vertailunäytteestä saatujen mittaustulosten vertailuun Tuloksen tulkinnalle asetettu tunnistuskriteerit ja raportointirajat Mittaukset tyypillisesti kohdeanalyysejä
Kaasukromatografi/ massaspektrometri (GC/MS) 1. Esikäsitellyn näytteen injektointi 2. Yhdisteiden kromatografinen erotus 3. Yhdisteen ionisointi/fragmentointi ja ionien analysointi 4. Yhdisteiden tunnistaminen - retentioaika - massaspektrit/fragmentit 3. 1. 2. 4. 4.
Näytteen esikäsittelyja mittaustapoja Näytteenesikäsittely - nesteuutto, kiinteäfaasiuutto - hydrolyysi, derivatisointi. Kromatografinen erotus - nestekromatografi, kaasukromatografi Massaspektrometrinen detektio - elektroni-ionisaatio, sähkösumutus. - MS, MS/MS, HRMS - scan, selektiivinen ionien seuranta..
Esimerkki kannabiksen varmistuksesta Kohdeyhdisteenä 11-nor-9-karboksi- 9 -THC Mukana kalibraattori, positiivinen ja negatiivinen kontrolli - 2 ml virtsaa - Deuteroidun analogin lisäys sisäiseksi standardiksi - Hydrolyysi 2M NaOH:lla, 15 min 100 ºC - ph:n säätö välille 1-2 - Uutto heksaani/etyyliasetaatti (7+1, v/v) seokseen - Orgaanisen faasin erotus ja haihdutus - Silylointi (MSTFA), 20 min 60 ºC Analysointi GC/MS-SIM
Esimerkki kannabiksen varmistuksesta Tetrahydrokannabinolihapon O-TMS -johdannaisen GC/MS-analyysi Kalibraattori 30 ng/ml Blankvirtsa Positiivinen potilasnäyte
Suoraan massaspektrometrisesti mitattavia yhdisteitä Gammahydroksivoihappo / Gammabutyrolaktoni Tsaleploni, tsolpideemi, tsopikloni Metyyli- ja etyylifenidaatti Pregabaliini, gabapentiini
Esimerkki laajan huumetestin strategiasta Virtsanäyte Immunoassay 1 Uutto 1 Uutto 2 Uutto 3 Immunoassay 2 GC/NPD GC/MS GC/MS LC/MS/MS GC/MS LC/MS/MS
Yhteenveto Immunologiset testit + massaspektrometria yleisin mittausstrategia Käytettyjen analyysimenetelmien ominaisuudet tunnettava Immunologiset testit rajoittuneita spesifisyydeltään ja sopivuudeltaan huumepitoisuuksien arviointiin Seulonta- ja varmistusanalyysit yleensä kohdeanalyysejä Haasteena kirjava, lisääntyvä ja muuttuva käytettävien aineiden määrä sekä uudet molekyylit