(B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT. (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5

Transkriptio

1 (B) (11) KUULUTUSJULKAISU UTLAGGNINGSSKRIFT SUOMI-FINLAND (Fi) Patentti- ja rekisterihallitus Patent- och registerstyrelsen (71)Hakija - Sökande (32) (33) (31) Etuoikeus - Prioritet GB P 1. Akzo N.V., Velperweg 76, 6824 Arnhem, Netherlands, (NL) (72)Keksijä - Uppfinnare 1. Welsh, Jill, Houghton, The Elms, The Thicket, Huntingdon Cambs. PE 17 2BQ, United Kingdom, (GB) (74) Asiamies - Ombud: Oy Kolster Ab (54) Keksinnön nimitys - Uppfinningens benämning Koiran parvoviruskanta ja menetelmä koiran parvovirusrokotteen valmistamiseksi Hund parvovirusstam och förfarande för framställning av ett hund parvovirusvaccin (83) Mikro-organismitalletus - Deposition av mikroorganism: CNCM (56)Viitejulkaisut - Anförda publikationer SE B (A 61K 39/23), WO A 81/02978 (A 61K 39/23) (57)Tiivistelmä - Sammandrag (51) Kv.lk.5 - Int.c1.5 A 61K 39/23, C 12N 7/00 (21)Patenttihakemus - Patentansökning (22)Hakemispäivä - Ansökningsdag (24) Alkupäivä - Löpdag (41) Tullut julkiseksi - Blivit offentlig (44) Nähtäväksipanon ja kuul.julkaisun pvm. - Ansökan utlagd och utl.skriften publicerad Kyseessä oleva keksintö koskee rokotetta, joka sisältää koiran uuden parvoviruskannan ja jolla on kyky murtautua äidiltä perittyjen vasta-ainetasojen läpi, jotka ovat pysyviä 9-12 viikon ikäisissä koiranpennuissa, ja vieläpä immunisoida pääosa koiranpennuista, jotka ovat kuuden viikon ikäisiä ja joilla on äidiltä perittyjä vasta-aineita. Föreliggande uppfinning avser ett vaccin som omfattar en ny parvavirusstam hos hundarna och har sådana egenskaper att det förmår bryta igenom de från modern deriverade antikroppnivåerna, vilka råder i 9-12 veckor gamla valpar, och även kan immunisera största delen av valparna vid 6 veckors ålder i närvaro av från modern deriverade antikroppar.

2 Koiran parvoviruskanta ja menetelmä koiran parvovirusrokotteen valmistamiseksi Keksintö koskee koiran uutta parvoviruskantaa ja 5 menetelmää näitä viruksia sisältävän koiran parvovirusrokotteen valmistamiseksi. Koirien infektio ja erityisesti nuorien koirien infektio, jonka koiran parvovirus (CPV) aiheuttaa, johtaa suolistotautiin, jolle on ominaista yhtäkkinen ripuli, 10 kuume ja leukopenia (suhteellinen lymfopenia). On kehitetty rokotteita CPV:n aiheuttaman koirien infektion estämiseksi. Nämä rokotteet eivät kuitenkaan usein ole tehokkaita, kun niitä annetaan äidiltä perityn vasta-aineen (MDA) läsnä ollessa. Tietyissä koiranpennuis- 15 sa tämä passiivinen immuniteetti saattaa säilyä huomattavan ajan (4 kk tai enemmän) riittävällä tasolla häiritäkseen rokotusta. Viimeisinä aikoina, kun MDA-taso laskee, koiranpentu saattaa olla riittämättömästi suojattu infektiota ja sairautta vastaan, mutta se saattaa olla vielä 20 vastustuskykyinen rokotteen suhteen. Niin ollen nämä koiranpennut jäävät suojatta huomattavaksi ajaksi elämänsä alkuvaiheessa; erityisesti sen jälkeen, kun äidiltä saatu immuniteetti on hävinnyt, koko pentueen infektoitumisvaara muodostaa vakavan riskin. 25 Tästä syystä tarvitaan CPV-rokotetta, joka menes- tyksellisesti immunisoi koiranpennut niiden elämän varhaisessa vaiheessa. Tämän keksinnön päämääränä on sellaisen rokotteen tarjoaminen ja tämä saavutetaan uuden keksinnön mukaisen 30 koiran parvoviruskannan avulla. Keksinnön mukaiselle rokotteelle on siten ominaista, että se sisältää CPV-kannasta, jota merkitään sisäisesti numerolla 154, peräisin olevia viruksia. Tämän kannan näytteitä on talletettu talletuslaitokseen :35 Collection Nationale de Cultures de Microorganismes,

3 Institut Pasteur, Patiisi, Ranska talletusnumerolla Keksinnön mukaiselle menetelmälle koiran parvovirusrokotteen valmistamiseksi on tunnusomaista, että koiran parvoviruskannan 1-404, CNCM, viruksia viljellään solu- 5 viljelmässä, minkä jälkeen virukset otetaan talteen keräämällä soluviljelmänesteet ja virusaines lyofilisoidaan tai muutetaan suspensioksi stabilointiaineitten ja/tai apuaineitten mandollisen lisäyksen ja/tai mandollisen inaktivoinnin jälkeen. 10 Rokotteet sisältävät edullisesti CPV-kannan viruksia elävänä, heikennetyssä muodossa. Heikentäminen suoritetaan suorittamalla viruksille kasvatussarja soluviljelmissä, joiden solut ovat peräisin koira- tai kissalajeilta, noin 37 C:n lämpötilassa. Ku- 15 takin vaihetta varten virukset kootaan aiemmasta viljelyvaiheesta ja siirrostetaan elatusaineeseen, joka sisältää tuoretta soluviljelmää. Solut viljellään alalla tunnetulla tavalla. Rokotteen valmistusta varten täten heikennetty vi- 20 rusymppi voidaan kasvattaa soluviljelmässä, kuten esimerkiksi kissanembryon fibroblasti-(fef) -viljelmässä. Mieluummin tämä suoritetaan koiralle normaalissa lämpötilassa. Täten kasvatetut virukset voidaan koota kokoamalla kudosviljelmäneste ja/tai -solut. Valinnaisesti voidaan 25 kokoamisen aikana virusten saantoa lisätä menetelmin, jotka parantavat infektoivien partikkeleiden vapautumista kasvualustasta, esimerkiksi sonikoinnin avulla. Rokote saatetaan valmistaa suspension muodossa tai se saatetaan lyofilisoida. Lyofilisoituihin CPV-rokotteisiin on edul- 30 lista lisätä yhtä tai useampaa stabiloimisainetta. Sopivia stabiloimisaineita ovat esimerkiksi SPGA (jota Bovarnick on kuvannut julkaisussa J. Bacteriology 59 (1950) 509), hiilihydraatit (kuten esimerkiksi sorbitoli, mannitoli, tärkkelys, sakkaroosi, dekstraani, glukoosi), proteiinit 35 (kuten esimerkiksi albumiini tai kaseiini) tai niiden ha-

4 joamistuotteet, proteiineja sisältävät aineet (kuten esimerkiksi naudan seerumi tai kuorittu maito) sekä puskurit (kuten esimerkiksi alkalimetallifosfaatit). Valinnaisesti saatetaan lisätä myös yhtä tai useampaa yhdistettä, jolla 5 on adjuvantin aktiivisuutta. Sopivia adjuvantteja ovat esimerkiksi aluminiumhydroksidi, -fosfaatti tai -oksidi, mineraaliöljyt (kuten esimerkiksi Bayol F m, Marcol 52 m ja saponiinit. Keksinnön mukaiset rokotteet saattavat vaihtoehtoi- 10 sesti sisältää CPV-kannan inaktivoidussa muodossa. Keksinnön mukaiset inaktivoidut CPV-rokotteet valmistetaan viruksista, joista on poistettu sekä replikaatio että virulenssi. Yleensä tämä voidaan saavuttaa kemiallisin tai fysikaalisin keinoin. Kemiallinen inaktivointi 15 voidaan suorittaa käsittelemällä viruksia entsyymeillä, formaldehydillä, B-propionilaktonilla tai etyleeni-iminillä tai niiden johdannaisilla, orgaanisella liuottimella (kuten esimerkiksi halogenoidulla hiilivedyllä) ja/tai detergentillä (kuten esimerkiksi Tweenm, Triton X (R), nat- 20 riumdesoksikolaatti, sulfobetaiini tai setyylitrimetyyliammoniumsuolat). Fysikaalinen inaktivointi voidaan edullisesti suorittaa kohdistamalla viruksiin runsasenergiainen säteily, kuten esimerkiksi UV-valo, Y"-säteily tai X-säteet. Jos on tarpeellista, inaktivoiva aine neutraloidaan; 25 esimerkiksi formaldehydillä inaktivoidut valmisteet voidaan neutraloida tiosulfaatilla. Tarvittaessa ph palautetaan myöhemmin arvoon 7. Yleensä lisätään inaktivoituihin viruksiin myös adjuvanttia ja valinnaisesti yhtä tai useampaa emuigaattoria, kuten esimerkiksi Tween (R) ja 30 Spanm. Viruskanta 154, identifioitiin koiran parvovirukseksi seuraavien ominaisuuksien perusteella: (i) Sen kyvyn perusteella kasvaa sekä kissan että koiran soluissa. 35 (ii) Sen kasvun epäonnistumisen perusteella sekä

5 kissan että koiran soluissa, jotka eivät jakautuneet. (iii) Hemagglutiniinin valmistumisen perusteella soluviljelmässä, joka agglutinoisi sian erytrosyyttejä ph 7,2:ssa, mutta ei ihmisen eikä jyrsijöiden erytrosyyttejä. 5 (iv) Tyypillisten tumasulkeumien muodostumisen perusteella soluviljelmissä. (v) Sen neutraloitumisen perusteella kissan ja koiran antiseerumilla, joka on valmistettu kissan panleukopenia-virusta ja tunnettua koiran parvovirusta vastaan. 10 (vi) Hemagglutinaation inhiboitumisen perusteella, joka tapahtuu antiseerumilla, joka on valmistettu kissan panleukopenia-virusta ja tunnettuä koiran parvovirusta kohtaan. Uusi CPV-kanta eroaa edelleen tähän saakka tunne- 15 tuista CPV-kannoista seuraavien ominaisuuksien perusteella: a. Kykynsä perusteella kasvaa fibroblastityyppisissä soluissa, jotka ovat peräisin sekä kissalta että koiralta, 37 C:ssa aiheuttaen tyypillisen solun vahin- 20 goittumisen. Taulukossa I esitetään yhteenvetona keksinnön mukaisen kannan kasvuominaisuudet verrattuna tunnettuihin CPV-kantoihin: Taulukko I Erilaisten CPV-kantojen kyky kasvaa erilaisissa so- 25 luviljelyjärjestelmissä. Soluviljelmäkokoonpano A 72 FEF CRFK CPV-kanta Boostervac (R) (C-vet) Enduracell (R) (Smith-Kline) 30 Novivac P.C. (uusi, keksinnön mukainen rokote) Luonnonvarainen tyyppi Taulukon tekstin selitykset: A 72 = Binnin koiran fibroblastisolulinja 35 FEF = Kissan embryon fibroblastisolulinja

6 CRFK = Crandall-kissan munuaissolulinja ++++ = Laajalle levinnyt solua vahingoittava vaikutus (CPE) sekä hemagglutinaatio (HA) ensimmäisessä vil jelyvaiheessa = Vähäinen CPE ensimmäisessä viljelyvaiheessa ++ = CPE ja HA toisessa viljelyvaiheessa = Toisen viljelyvaiheen jälkeen kehittyvä CPE = Ei CPE eikä HA toistettujen viljelyjen jälkeen. 10 b. Suurien, erillisten plakkien muodostuminen agarin alla yllä mainituissa solulinjoissa. Näiden tulosten perusteella voidaan päätellä, että CPV-kanta 154 edustaa uutta viruskantaa. Viruskanta 154 saatiin koirien ulosteista, joilla 15 koirilla ilmeni CPV-infektion oireita. Kuitenkin se saatetaan eristää myös suolistoalueen näytteistä, kateenkorvasta tai muusta lymfakudoksesta, luuytimestä, verestä tai maksasta, koiranpennuilta tai koirilta, jotka virus on infektoinut. Näytemateriaali saatetaan puhdistaa ja lai- 20 mentaa puskuroidulla keittosuolaliuoksella tai soluviljelmän elatusaineella ennen kuin se siirrostetaan aktiivisesti kasvaviin, koiralta tai kissalta peräisin oleviin soluihin. Vastakohtana rokotteille, jotka sisältävät tunnet- 25 tuja viruskantoja, keksinnön mukainen rokote on tehokas pääosassa kuuden viikon ikäisiä koiranpentuja ja käytännöllisesti katsoen 100 %:illa koiranpentuja, jotka ovat 9-12 viikon ikäisiä. Tämä tarkoittaa, että uudet CPV-virukset pystyvät murtautumaan mandollisesti läsnä olevien, 30 äidiltä perittyjen vasta-aineiden läpi, jotka ovat tuossa iässä pysyviä, aiheuttamatta kuitenkaan CPV-infektion oireita rokotetuissa koiranpennuissa. Äidiltä perityt vasta-ainetiitterit ovat 12 viikon iässä tavallisesti laskeneet alle 1:32 ja tasot, jotka 35 ovat enemmän kuin 1:32, ovat hyvin harvinaisia 12 viikon

7 iässä. Lähes 100 eläimistä, joiden tiitteri on 1:32, reagoi rokotukseen, joka on suoritettu keksinnön mukaisella rokotteella ja vieläpä tasolla 1:64 reagoi pääosa koiranpennuista. 5 Sopivat rokotustavat koiranpennuille, joilla tiedetään tai oletetaan olevan äidiltä saatuja vasta-aineita CPV vastaan, ovat esimerkiksi joko yksi rokotus 12 viikon iässä tai toistetut rokotukset, jotka aloitetaan kuuden viikon iässä (esimerkiksi 6, 9 ja 12 viikon iässä) tai 10 viikoittainen rokotus neljän viikon iästä lähtien. Jos mitään tietoa äidiltä perittyjen vasta-aineiden läsnä olosta ei ole saatavissa, suositellaan yleensä rokottamista 12 viikon iässä. Elävän, heikennetyn rokotteen suositeltu annos on TCID 50 :stä lähtien, kuitenkin koiranpennuilla, joilla on MDA, mieluummin ainakin 10 6 TICD50 koiranpentua kohti. Näiden rokotteiden antaminen voidaan suorittaa parenteraalisesti (esim. injektiona) tai enteraalisesti (esim. suun kautta suoritettavana antamisena). 20 CPV-rokoteteeseen voidaan myös lisätä yhtä tai useampaa seuraavista koiran rokoteviruksista: koiran penikkatauti, tartunnanvaarallinen koiran hepatiitti (CAV- 1 ja CAV-2), vesikauhu, parainfluenssa, koiran koronavirus, tuhkarokko ja/tai tartunnanvaaralliset bakteerit lep- 25 tospirosis ja Bordetella. Patogeenisuuden, immunogeenisuuden ja virulenssin lisääntymisen tutkimiseksi siirron aikana CPV siirrettiin sarjassa 7 koiralle. Tässä tutkimuksessa käytettiin 18 koiranpentua, joilta kaikilta alttiiksipanon aikana vasta- 30 aineet puuttuivat. Kaikki koiranpennut säilyivät terveinä havaintojaksojen aikana ja ne ilmaisivat vasta-ainevasteita. Valkosolujen lukumäärä säilyi normaalilla alueella. Keksinnön mukaisen rokotteen antaman suojan tehokkuus osoitettiin rokottamalla neljä koiranpentua, joilla 35 oli ilmennyt vasta-ainevastetta, virulentilla CPV-kannalla

8 yhdessä kanden rokottamattoman kontrollin kanssa. Rokottamattomat koirat kehittivät kliinisiä oireita, jotka olivat ominaisia CPV-infektiolle, kun taas rokotetut koiranpennut eivät saaneet infektion oireita. 5 Esimerkki 1 Viruksen eristäminen ja siirrostus Virus eristettiin peräsuolen vanutuposta, joka oli otettu parvovirusinfektiotapauksesta, joka sattui kandeksan viikon ikäiselle jäniskoiran pennulle siitoskoiratar- 10 hassa. Virus ympättiin FEF-viljelmään ja siirrostettiin lisäksi näihin soluihin ennen siirtämistä koiran A72-solulinjan viljelmiin. [Binn, Marchwicki & Stephenson A.M.J.V.R. vol. 41 (1981) s ]. Viruksen kaikki 15 siirrostukset soluviljelmässä suoritettiin 37 C:ssa. Tämän jälkeen virusta heikennettiin tässä solulinjassa suoritetun 41 siirrostuksen kautta, minä aikana tehtiin neljä kloonausvaihetta 4., 7., 10. ja 40. siirrostuksen tasolla. Kussakin tapauksessa valittiin suuri, kir- 20 kas, eristetty plakki. A72-soluissa (POOL 182) suoritetun 41. siirrostuksen virus ympättiin takaisin FEF-viljelmiin ja POOL 182:n jälkeisen, FEF:issä suoritetun 2. siirrostuksen sato varastoitiin "MASTER SEED" -eränä ja merkittiin POOL :ksi. Esimerkki 2 Elävän rokotteen valmistus A. Primaariset ja sekundaariset käyttöympin erät valmistettiin "master seed" -erästä, joka oli saatu esi- 30 merkin 1 mukaisesti. Nämä ovat neljä ja viisi FEF-soluviljelmäsiirrostusta A72-solulinjasta suoritetun siirtämisen jälkeen. FEF-soluviljelmät infektoidaan, kuten ymppäyskäyttöymppinä toimivalla viruksella. Sitten viljelmiä inkuboidaan, kunnes virusperäiset soluja vahingoittavat vai- 35 kutukset ovat saavuttaneet sopivan vaiheen. Tänä ajankoh-

9 tana kootaan soluviljelmän elatusaine ja varastoidaan - 70 C :ssa. B. Sadon näytteet määritetään virustiitterin suhteen ja tutkitaan steriliyden suhteen. Kun tunnetaan vi- 5 rustiitteri, virus sekoitetaan stabiloivan aineen kanssa, jotta lopulliseen seokseen saadaan sorbitolia 5,5 % ja NZamiinia (kaseiinin haimauute) 5,5 %. Sitten seos täytetään tilavuudeltaan 1,0 ml:n vetoisiin, neutraaleihin lasipulloihin ja tämän jälkeen ne jäädytyskuivataan ja suljetaan 10 tyhjössä. Esimerkki 3 Koiranpentujen rokottaminen ottaen huomioon äidiltä perityt vasta-aineet Rokotetta, joka sisälsi 1073 TCID 50 suuruisen an- 15 noksen CPV, annettiin 135 koiranpennulle, joilla oli vaihtelevat tasot äidiltä peräisin olevia vasta-ainetiittereitä (MDA), jotka oli todettu hemagglutinaation inhibition avulla. Näistä 124 rokotettiin kuuden viikon iässä. Pienellä osalla koiranpentuja ei ollut serologisesti vastetta 20 rokotteelle kuuden viikon kuluttua; nämä rokotettiin uudelleen 8-9 viikon iässä ja kaikissa tapauksissa niillä ilmeni vastetta viivyttelemättömin serologisin muutoksin. Yhteenveto tuloksista esitetään taulukoissa 2 ja 3.

10 Taulukko 2 Koiranpentujen serologinen vaste yhden rokotuksen jälkeen 5 MDA- Pen- % kaikista Rokotet- Serologi- Rokotet- Serologitiit- tu- tutki- tujen lu- nen vaste tujen lu- nen vaste terit jen tuista kumäärä rokotuk- kumäärä rokotuksen 6 vii- lkm pennuis- 6 vk ku- sen jäl- 9 vk ku- jälkeen kon kulut- ta luttua keen 6 vk luttua 9 vk kulut- tua kuluttua tua < Taulukko 3 luku- % luku- % määrä määrä (keski- arvo) (keski- arvo) Serologinen vaste koiranpennuilla, joilla ei ilmene vastetta rokotukseen kuuden viikon kuluttua ja jotka rokotetaan uudelleen 8-9 viikon kuluttua MDA - tiit - Uudelleen rokotet- Serologinen vaste terit 6 tujen lukumäärä lukumäärä % vk kuluttua 8-9 vk kuluttua <

11 Esimerkki 4 Rokotteen tehokkuuden vertailu muiden kanssa havaittavien äidiltä perittyjen vasta-aineiden läsnä ollessa Kolmen erilaisen rokotteen tehokkuuksia verrattiin 5 kandessa erillisessä kokeessa. Ensimmäisessä kokeessa jäniskoirayhdyskunnassa syntyneet pennut rokotettiin joko Smith-Kleinsin elävällä, heikennetyllä rokotteella (SK-CPV) tai Intervet Feline Parvovirus -rokotteella (FPV). 10 Toisessa kokeessa jäniskoirayhdyskunnassa syntyneet pennut rokotettiin joko elävällä CPV-rokotteella, kyseessä olevan keksinnön mukaisesti (Int-CPV) tai Intervet Feline Parvovirus -rokotteella (FPV). Koiranpennut rokotettiin viikoittain 4-8 viikon 15 iästä lähtien. Kaikki pennut olivat saaneet äidiltä peräisin olevia vasta-aineita emältään. Tulokset esitetään taulukossa 4. Taulukko 4 ensimmäinen koe toinen koe 20 SK-CPV FPV Int-CPV FPV käsiteltyjen pentueiden lukumäärä elävänä syntyneiden pentujen lukumäärä vieroitettujen ja rokotettujen pentujen lukumäärä vieroituksen jälkeen CPV-infektion vuoksi kuolleiden lukumäärä CPV-infektion johdosta kuolleet % 11,0 10,8 4 13,1 sairaiden pentujen lukumäärä, tervehtyneet hoidon jälkeen 24 kokonais-%, joka koskee kliinistä CPV-sairautta 28,7 28,9 6 34,5

12 Voidaan tehdä johtopäätös, että pentujen immunisointi kyseessä olevan keksinnön mukaisella rokotteella antaa suojan kuolemaan johtavaa CPV-sairautta vastaan, joka suoja on verrattomasti parempi kuin tunnetuilla ro- 5 kotteilla saavutettu suoja. Esimerkki 5 Inaktivoidun rokotteen valmistus Soluviljelmän elatusainetta, joka saadaan esimerkin 2 mukaisesti (jolla on tiitteri 10/8 tcid/50 ml:aa kohti) 10 käsitellään 8-propionilaktonilla 0,1 %:n konsentraatiossa kanden tunnin inkuboinnin aikana, joka suoritetaan 37 C:ssa. Koko määrä nestettä neutraloidaan lisäämällä aika ajoin pisaroittain 1 N NaOH. Fenolipuna (läsnä viljelyvä- 15 liaineessa) antaa indikaation, kun ph:n säätä on välttämä- tön. Lopuksi seoksen kanssa sekoitetaan aluminiumfosfaattia, adjuvanttina, lopulliseksi 0,3 %:n konsentraatioksi. 20 Esimerkki 6 Pentujen, joilla on äidiltä peräisin oleva immuniteetti, vaste rokotukseen 12 viikon iässä Kaksi ryhmää koiranpentuja, joilla oli huomattavat äidiltä peräisin olevien vasta-aineiden tiitterit, immuni- 25 soitiin joko elävällä esimerkin 2 mukaan valmistetulla rokotteella tai heterotyyppisellä, kissan parvovirukseen perustuvalla rokotteella. Äidiltä perityt vasta-aineet määritettiin hemagglutinaation inhibitiotitrauksella. 30 Kussakin ryhmässä käytettiin kolmea erilaista an- nosaluetta ja kukin rynmä käsitti yhdeksän koiranpentua. Tulokset esitetään taulukossa 5.

13 Taulukko 5 Ryhmä I: Nobivac PC Annos/pentu (tcid/50:nä) Koira nro MDA rokotushetkenä (HI-tiitteri) Vaste ei 10/ ei 3 16 kyllä 4 16 kyllä 10/7 5 8 kyllä kyllä 7 16 kyllä 10/ kyllä 9 32 kyllä Ryhmä II: Kissan parvovirusrokote ei 10/ ei 12 8 ei ei 10/ ei ei 16 8 ei 10/ kyllä 18 8 ei

14 Patenttivaatimukset 1. Koiran parvoviruskanta, joka on talletettu numerolla talletuslaitokseen CNCM Menetelmä koiran parvovirusrokotteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että patenttivaatimuksen 1 mukaisia koiran parvoviruksia viljellään soluviljelmässä, minkä jälkeen virukset otetaan talteen keräämällä soluviljelmänesteet ja virusaines lyofilisoidaan tai muute- 10 taan suspensioksi stabilointiaineitten ja/tai apuaineitten mandollisen lisäyksen ja/tai mandollisen inaktivoinnin jälkeen.

15 Patentkrav 1. Hund parvovirusstam, som är deponerad vid depositionsinstitutionen CNCM under nummer Förfarande för framställning av ett hund parvovirusvaccin, k ä n n e t e c k n a t därav, att hund parvovirus enligt patentkravet 1 odlas i en cellodling, varefter virusen tas tillvara genom att cellodlingsvätskorna insamlas och virusmaterialet lyofiliseras eller 10 överförs i suspension efter eventuell tillsats av stabiliseringsmedel och/eller hjälpmedel och/eller eventuell inaktivering.