PATENTTIJULKAISU PATENTSKRI FT (10) FI B. (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats (51) Kv.lk.7 - Int.kl.7

Transkriptio

1 F I 000B (12) PATENTTIJULKAISU PATENTSKRI FT (10) FI B SUOMI - FINLAND (FI) (45) Patentti myönnetty - Patent beviljats (51) Kv.lk.7 - Int.kl.7 CO7D 241/04, 401/12, 401/06, 217/26, CO7C 237/20 409/12, 207/16, (21) Patenttihakemus - Patentansökning PATENTTI- JA REKISTERIHALLITUS PATENT- OCH REGISTERSTYRELSEN (22) Hakemispäivä - Ansökningsdag (24) Alkupäiva - Löpdag (41) Tullut julkiseksi - Blivit offentlig (86) Kv. hakemus - Int. ansökan PCT/US92/09444 (32) (33) (31) Etuoikeus - Prioritet US P US P (73) Haltija - Innehavare 1 Merck & Co., Ltd., 126 East Lincoln Avenue, Rahway, NJ 07065, AMERIKAN YHDYSVALLAT, (US) (72) Keksijä - Uppfinnare 1 Vacca,Joseph P., 766 Eisenhauer Drive, Telford, PA 18969, AMERIKAN YHDYSVALLAT, (US) 2 Dorsey,Bruce D., 203 Continental Drive, Harleysville, PA 19438, AMERIKAN YHDYSVALLAT, (US) 3 Guare,James P., 1600 Kumry Road, Quakerstown, PA 18951, AMERIKAN YHDYSVALLAT, (US) 4 Holloway,M. Katharine, 171 Forest Trail, Lansdale, PA 19446, AMERIKAN YHDYSVALLAT, (US) 5 Hungate,Randall W., 1925 Rampart Lane, Lansdale, PA 19446, AMERIKAN YHDYSVALLAT, (US) (74) Asiamies - Ombud: Kolster Oy Ab Iso Roobertinkatu 23, Helsinki (54) Keksinnön nimitys - Uppfinningens benämning Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten N-(2-hydroksi-indanyyli)-5-piperatsinyylipentaaniamidijohdannaisten valmistamiseksi Förfarande för framställning av nya terapeutiskt användbara N-(2-hydroxi-indanyl)-5-piperazinylpentanamidderivat (56) Viitejulkaisut - Anförda publikationer EP A (CO7D 295/088), J. of Medicinal Chemistry 34(1991) p (57) Tiivistelmä - Sammandrag Sellaisen kaavan (I) mukaiset yhdisteet, ( I ) jossa R 2 ja R 2 ovat toisistaan riippumatta vety tai vaihtoehtoisesti substituoitu C 1 _ 4 -alkyyll tai aryyli, tai R 2 ja R2 ovat liittyneet yhteen ja muodostavat monosyklisen tai bisyklisen rengasjärjestelmän, ovat HIV-proteaasin inhibiittoreita. Nämä yhdisteet ovat käyttökelpoisia HIV:n aiheuttaman infektion ehkäisyssä ja sen vaatimassa hoidossa sekä AIDS:n vaatimassa hoidossa joko yhdisteinä, farmaseuttisesti hyväksyttävinä suoloina ja farmaseuttisen koostumuksen ainesosina olivatpa ne sitten muiden antiviraalisten aineiden, immunomodulaattorien, antibioottien tai rokotteiden kanssa valmistettuina yhdistelminä tai eivät. Keksinnössä on myös kuvattu menetelmiä AIDS:n vaatimaa hoitoa sekä HIV:n aiheuttaman infektion ehkäisyä tai infektion vaatimaa hoitoa varten.

2 Föreningar med formeln (I), vari R 1 och R 2 sjålvständigt är våte eller valfritt substituerad C 1,-alky3 eller aryl, eller R 1 2 bildar tillsammans ett monocykliskt och R eller bicykliskt ringsystem, är HIV-proteasinhibitorer. Dessa föreningar är anvåndbara vid förebyggandet eller behandlingen av infektion, förorsakad av HIV och i behandlingen av AIDS, antingen som föreningar, farmaceutiskt godtagbara salter, ingredienser i farmaceutiska kompositioner, antingen i eller icke i kombination med andra antivirala medel, immunomodulatorer, antibiotiska medel eller vacciner. Uppfinningen avser åven förfaranden för behandling av AIDS och förfaranden för förebyggande eller behandling av infektion, förorsakad av H1V.

3 1 106C25 Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten N-(2- hydroksi-indanyyli)-5-piperatsinyylipentaaniamidijohdannaisten valmistamiseksi 5 Keksintö koskee uusien kaavan I mukaisten N-(2- hydroksi-indanyyli)-5-piperatsinyylipentaaniamidijohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistusta, 10 ( I ) 15 jossa kaavassa 12 1 on ryhmä, jonka kaava on 20 1/,/'' rr

4 2 O C H3 CH3 O N C H2- NC H2-

5 3 CH ,:-.- N 5 C H3C H 2-10,Dy CH ,7"--,..,,CH2 -. I NC H 3 20 ^CH2- ' N '' N o 25 (:) C) 0 H 2- r s ^ +, H3 N% 30 BocN C H2 35 C H2 -

6 4 C H2" 5 C H2-10 C H C C H30 (C H2 H20) 2-C H2C H2 30 CH2-35

7 5 C H2-5 Ph 0 CH - ", C 1-12" C H2.- - : 25...Cj2- tai N 30 35

8 6 Keksintö koskee myös kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistuksessa välituotteena käytettävää N- (2 (R) -hydroksi- 1(S)-indanyyli)-2(R)-fenyylimetyyli-4(S)-hydroksi-5-(1-(2- (S)-N'-(t-butyylikarboksamido)piperatsinyyli))pentaani- 5 amidia, jonka kaava on Kaavan I mukaiset yhdisteet ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat inhiboivat humaani-immuunikatoviruksen (HIV) koodaamaa proteaasia ja ovat arvokkaita HIV-infektion ehkäisemisessä, HIV-infektion vaatimassa hoidossa ja tästä infektiosta johtuvan hankitun im- 20 muunikato-oireyhtymän (AIDS) hoidossa. Retrovirus, jolle on annettu nimitys humaaniimmuunikatovirus (HIV), on sen monimutkaisen taudin etiologinen agenssi, johon kuuluu immuunijärjestelmän etenevä tuhoutuminen (hankittu immuunikato-oireyhtymä; AIDS) ja 25 keskus- ja ääreishermoston rappeutuminen. Tämä virus tun- nettiin aiemmin nimityksillä LAV, HTLV-III tai ARV. Retroviruksen replikaation yleispiirteenä on se, että prekursoripolyproteiinit muokkautuvat huomattavassa laajuudessa translaation jälkeen viruksen koodaaman proteaa- 30 sin vaikutuksesta viruksen kokoonpanossa ja toiminnassa tarvittavien kypsien virusproteiinien muodostamiseksi. Normaalilla tavalla infektiokykyisen viruksen muodostuminen on estettävissä tätä muokkautumista inhiboimalla. Esimerkiksi Kohl, N. E., et al., Proc. Nat'l Acad. Sci (1988) 4686, ovat osoittaneet, että HIV:n koodaaman pro-

9 7 teaasin geneettinen inaktivoiminen synnyttää epäkypsiä ja infektiokyvyttömiä viruspartikkeleita. Nämä tulokset viittaavat siihen, että HIV-proteaasin inhibitio edustaa toimintakelpoista menetelmää AIDS:n vaatimaa hoitoa varten 5 ja HIV-infektion ehkäisyä tai tämän infektion vaatimaa hoitoa varten. HIV:n nukleotidijaksossa on yhdessä avoimessa lukukehyksessä esiintyvä pol-geeni [Ratner, L. et al., Nature 313 (1985) 277]. Todisteita sitä, että tämä jakso koodaa 10 käänteistranskriptaasia, endonukleaasia ja HIV-proteaasia, on saatu aminohappojaksojen homologiasta [Toh, H., et al., EMBO J (1985); Powers, M. D., et al., Science 231 (1986) 1567; Pearl, L. H., et al., Nature 329 (1987) 351]. Aiempiin yrityksiin löytää HIV-proteaasin inhibiittoreita 15 kuuluvat julkaisut EP ; EP ; J. Med. Chem. 34 (1991) 1228 ja Science 248 (1990) 358. Julkaisuissa EP ja J. Med. Chem. 34 (1991) s kuvataan määrättyjä N-(2-hydroksi-1-indanyyli)-5- karbonyyliamino- ja N-(2-hydroksi-1-indanyyli)-5-oksikar- 20 bonyyliamino-5-oksikarbonyyliaminoheksaaniamidijohdannaisia, kuten esimerkiksi N-(2-hydroksi-1-indanyyli)-5-(1,1- dimetyylietoksikarbonyyliamino)-6-fenyyli-4-hydroksiheksaaniamidijohdannaisia. Julkaisun mukaan kyseiset yhdisteet ovat käyttökelpoisia AIDS:n hoidossa ja HIV:n 25 ehkäisyssä ja hoidossa. Nyt kuvatut uudet N-(2-hydroksi-1- indany1)-5-piperatsinyyli-4-hydroksi-pentaaniamidiyhdisteet eroavat mainituista tunnetuista yhdisteistä siinä, että uusilla yhdisteillä on mainittuihin (oksi)karbonyyliaminoyhdisteisiin verrattuna huomattavasti paran- 30 tunut oraalinen biosaatavuus. Nyt on osoitettu, että kaavan I mukaiset yhdisteet ovat HIV-proteaasin inhibiittoreita. Kaavan I mukaiset uudet yhdisteet ovat käyttökelpoisia HIV-proteaasin inhibitiossa, HIV:n aiheuttaman 35 infektion ehkäisemisessä, HIV:n aiheuttaman infektion

10 8 vaatimassa hoidossa ja AIDS:n vaatimassa hoidossa joko yhdisteinä, farmaseuttisesti hyväksyttävinä suoloina, farmaseuttisten koostumusten ainesosina, olivatpa ne sitten yhdistelminä muiden antiviraalisten aineiden, im- 5 munomodulaattorien, antibioottien tai rokotteiden kanssa tai eivät. Seuraavassa on esitetty jäljempänä tekstissä käytettyjä lyhenteitä. Lyhenteet 10 Nimitys Suojaava ryhmä BOC (Boc) t-butyylioksikarbonyyli CBZ (Cbz) t-bentsyylioksikarbonyyli(karbobentsoksi) 15 TBS (TBDMS) t-butyylidimetyylisilyyli HBT (HOBT tai HOBt) BOP reagenssi BOP-C1 EDC Aktivoiva ryhmä 1-hydroksibentsotriasolihydraatti Kytkentäreagenssi bentsotriatsol-1-yylioksitris-(dimetyyliamino)fosfoniumheksafluorifosfaatti bis(2-okso-3-oksatsolidinyyli)fosfiinikloridi 1-etyyli-3-(3-dimetyyliaminopropyyli)karbodi-imidihydrokloridi Muut 30 (BOC) 20 (BOC 2O) di-t-butyylidikarbonaatti n-bu 4N.F - tetrabutyyliammoniumfluoridi nbuli (n-buli) n-butyylilitium DMF dimetyyliformamidi Et 3N trietyyliamiini 35 EtOAc etyyliasetaatti TFA trifluorietikkahappo DMAP dimetyyliaminopyridiini DME dimetoksietaani LDA litiumdi-isopropyyliamidi 40 THF tetrahydrofuraani 45 Ile Val Aminohappo L-isoleusiini L-valiini

11 9 Edullisimpia kaavan I mukaisia yhdisteitä ovat ne, joilla on seuraavat kaavat: 5 10 N-(2(R)-hydroksi-1(S)-indanyyli)-2(R)-fenyyli- metyyli-4(s)-hydroksi-5-(1-(4-karbobentsyylioksi-2(s)-n'- (t-butyylikarboksamido)piperatsinyyli))pentaaniamidi; ja N- (2 (R) -hydroksi-1 (S) -indanyyli) -2 (R) -fenyyli- metyyli-4(s)-hydroksi-5-(1-(4-(3-pyridyylimetyyli)-2(s)- W-(t-butyylikarboksamido)piperatsinyyli))pentaaniamidi. Kaavan I mukaisissa yhdisteissä voi olla asymmetri- 25 siä keskuksia ja ne voivat esiintyä rasemaatteina, raseemisina seoksina ja yksittäisinä diastereomeereina tai enantiomeereina. Kaavan I mukaisten yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttäviin suoloihin (veteen tai öljyyn liukoisiin tai 30 näihin dispergoituviin tuotteisiin) kuuluvat tavanomaiset ei-toksiset suolat tai kvaternääriset ammoniumsuolat, jotka muodostetaan esimerkiksi epäorgaanisista orgaanisista hapoista tai emäksistä. Esimerkkejä näistä happoadditiosuoloista ovat asetaatti, adipaatti, alginaatti, aspar- 35 taatti, bentsoaatti, bentseenisulfonaatti, vetysulfaatti,

12 10 butyraatti, sitraatti, kamferaatti, kamferisulfonaatti, syklopentaanipropionaatti, diglukonaatti, dodekyylisulfaatti, etaanisulfonaatti, fumaraatti, glukoheptanoaatti, glyserofosfaatti, hemisulfaatti, heptanoaatti, heksa- 5 noaatti, hydrokloridi, hydrobromidi, hydrojodidi, 2-hydroksietaanisulfonaatti, laktaatti, maleaatti, metaanisulfonaatti, 2-naftaleenisulfonaatti, nikotinaatti, oksalaatti, pamoaatti, pektinaatti, persulfaatti, 3-fenyylipropionaatti, pikraatti, pivalaatti, propionaatti, sukkinaat- 10 ti, tartraatti, tiosyanaatti, tosylaatti ja undekanoaatti. Emässuoloihin kuuluvat ammoniumsuolat, alkalimetallisuolat, kuten natrium- ja kaliumsuolat, maa-alkalimetallisuolat, kuten kalsium- ja magnesiumsuolat, orgaanisten emästen kanssa muodostetut suolat, kuten disykloheksyyliamii- 15 nisuolat, N-metyyli-D-glukamiini ja aminohappojen, kuten arginiinin, lysiinin ja niin edelleen, kanssa muodostetut suolat. Kaavan I mukaisia yhdisteitä ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja voidaan valmistaa siten, 20 että yhdiste, jonka kaava on saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on R 1 -X, jossa R 1 tarkoittaa samaa kuin edellä ja X on halogeeni, ja haluttaessa saatu yhdiste muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi. Lähtöaineiden ja lopputuotteiden synteesivaiheiden 35 suhteen viitataan julkaisuun EPO

13 11 Esimerkiksi kaavan II mukaisen yhdisteen asemassa 4 oleva piperatsinyylityppi voidaan alkyloida sellaisen kaavan R 1 -X mukaisella yhdisteellä, jossa X on -Cl, -Br tai -I, liuottimessa, kuten DMF:ssä, Et 3N:n läsnä ollessa 5 huoneenlämmössä. Kaavan I mukaiset yhdisteet ovat käyttökelpoisia HIV-proteaasin inhiboimisessa, humaani-immuunikatovirus (HIV) -infektion ehkäisyssä ja infektiosta johtuvien patologisten tilojen, kuten AIDS:n, hoidossa. AIDS:n vaa- 10 timalle hoidolle tai HIV-infektion vaatimalle hoidolle tai infektion ehkäisemiselle on luonteenomaista, että niissä on hoidettavana alusta loppuun kaikki HIV-infektion vaiheet: oireellisena tai oireettomana esiintyvät AIDS ja ARC (AIDS:iin liittyvä kompleksi) sekä varsinainen tai 15 mandollinen HIV-infektio. Kaavan I mukaiset yhdisteet ovat esimerkiksi käyttökelpoisia HIV-infektion vaatimassa hoidossa aiemmin tapahtuneen otaksutun HIV:lle altistumisen jälkeen esimerkiksi verensiirron, elinsiirron, ruumiinnesteiden vuorovaikutuksen, puremien, tahattomien neulan- 20 pistojen tai leikkauksen aikana tapahtuneen potilaan verelle altistumisen johdosta. Näihin tarkoituksiin voidaan kaavan I mukaisia yhdisteitä antaa oraalisesti, parenteraalisesti (mukaan luettuna ihonalaiset injektiot, suonensisäiset, lihaksen- 25 sisäiset tai intrasternaaliset injektio- tai infuusiomenetelmät), inhalaatiosumutteena tai rektaalisesti kerta-annosformulaatioissa, jotka sisältävät tavanomaisia farmaseuttisesti hyväksyttäviä kantoaineita, adjuvantteja ja vehikkeleitä. 30 Farmaseuttiset koostumukset voivat olla oraalisesti annosteltavien suspensioiden tai tablettien; nenäsumutteiden; steriilien injektiovalmisteiden, esimerkiksi steriilien vesipitoisten tai öljypitoisten injektiosuspensioiden, tai peräpuikkojen muodossa.

14 12 Nämä koostumukset valmistetaan oraalisesti annosteltavan suspension muodossa käytettäväksi farmaseuttisten formulaatioiden valmistuksessa tunnettujen menetelmien mukaisesti ja ne voivat sisältää mikrokiteistä sellu- 5 loosaa, joka muodostaa niiden perusaineen, algiinihappoa tai natriumalginaattia suspendointiaineena, metyyliselluloosaa viskositeettia lisäävänä aineena sekä tällä alalla tunnettuja makeutus- ja aromiaineita. Välittömästi lääkeainetta vapauttavina tabletteina nämä koostumukset voivat 10 sisältää mikrokiteistä selluloosaa, dikalsiumfosfaattia, tärkkelystä, magnesiumstearaattia ja laktoosia ja/tai muita tällä alalla tunnettuja lisäaineita, sideaineita, jatkoaineita, hajoamista edistäviä aineita, laimentimia ja voiteluaineita. 15 Nämä koostumukset valmistetaan nenäaerosolin tai inhalaatiovalmisteen muodossa käytettäväksi farmaseuttisten formulaatioiden valmistuksessa tunnettujen menetelmien mukaisesti ja ne voidaan valmistaa fysiologiseen suolaliuokseen tehdyiksi liuoksiksi käyttäen bentsyylialkoholia 20 tai muita sopivia säilyteaineita, absorptiota edistäviä aineita hyötyosuuden parantamiseksi, fluorihiilivetyjä ja/tai muita tällä alalla tunnettuja solubilisointi- tai dispergointiaineita. Injektioliuokset tai -suspensiot voidaan formuloida 25 tunnetulla tavalla käyttäen sopivia ei-toksisia parenteraalisesti hyväksyttäviä laimentimia tai liuottimia, kuten mannitolia, 1,3-butaanidiolia, vettä, Ringerin liuosta tai isotonista natriumkloridiliuosta tai sopivia dispergointitai kostutusaineita ja suspendointiaineita, kuten sterii- 30 lejä, ärsyttämättömiä rasvaöljyjä, joihin kuuluvat synteettiset mono- tai diglyseridit, ja rasvahappoja, mukaan lukien öljyhappo. Nämä koostumukset voidaan valmistaa annosteltaviksi peräpuikkojen muodossa sekoittamalla lääkeaine ärsyttämät- 35 tömään lisäaineeseen, kuten kaakaovoihin, synteettisiin

15 13 glyseridiestereihin tai polyetyleeniglykoleihin, jotka ovat kiinteitä tavallisissa lämpötiloissa mutta nesteytyvät ja/tai liukenevat peräsuolen sisällä lääkeainetta vapauttaen. 5 Käyttökelpoiset annosmäärät edellä mainittujen tautitilojen hoidossa tai ehkäisyssä ovat suuruusluokaltaan 0,02-5 tai 10 g päivässä ja oraaliset annokset ovat kandesta viiteen kertaa näitä suuremmat. Esimerkiksi HIVinfektion vaatimassa hoidossa on tehokasta antaa mg yhdistettä potilaan yhtä ruumiinpainokiloa kohti yhdestä kolmeen kertaa päivässä. On kuitenkin selvää, että minkä tahansa tietyn nimenomaisen potilaan ollessa kyseessä voidaan tiettyä annostasoa ja antokertojen määrää vaihdella, ja nämä ovat riippuvaiset useista erilaisista teki- 15 jöistä, joihin kuuluvat nimenomaisen käytetyn yhdisteen aktiivisuus, tämän yhdisteen metabolinen pysyvyys ja vaikutusaika, ikä, ruumiinpaino, yleinen terveydentila, sukupuoli, ruokavalio, annostelutapa ja annosteluaika, eritysnopeus, lääkeaineyhdistelmä, tietyn nimenomaisen sairaus- 20 tilan vakavuusaste ja hoidettava potilas. Mandollisia ovat myös yhdistelmät, joissa HIV-proteaasia inhiboivia yhdisteitä on yhdistetty yhteen tai useampaan muuhun AIDS:n hoidossa käyttökelpoiseen aineeseen. Olipa kysymys altistumista edeltävistä tai sen 25 jälkeisistä ajanjaksoista, voidaan kaavan I mukaisia yhdisteitä antaa esimerkiksi antamalla niiden kanssa tehokkaita määriä AIDS-virusta vastaan vaikuttavia aineita, immunomodulaattoreita, infektioita vastaan suunnattuja aineita tai rokotteita, jotka kuuluvat tälle alalle 30 tavanomaisen ammattikokemuksen piiriin. On selvää, että se piiri, johon kaavan I mukaisten yhdisteiden sekä AIDS-virusta vastaan vaikuttavien aineiden, immunomodulaattoreiden, infektioita vastaan suunnattujen aineiden tai rokotteiden muodostamat yhdistelmät 35 kuuluvat, sisältää periaatteessa kaikki ne yhdistelmät,

16 14 joissa on mukana mikä tahansa AIDS:n vaatimaan hoitoon käyttökelpoinen farmaseuttinen koostumus. Mikrobeissa ilmennetyn viruksen proteaasin inhiboitumista koskeva määritys 5 Suoritettiin inhibitiotutkimuksia, joissa inhiboi- tava reaktio oli Escherichia colissa ilmennetyn proteaasin reaktio peptidisubstraatin [Val-Ser-Gln-Asn-(betanaftyyli)Ala-Pro-Ile-Val, jonka konsentraatio reaktiota käynnistettäessä oli 0,5 mg/ml] kanssa ja jossa reaktion an- 10 nettiin tapahtua 50 mm Na-asetaatissa, jonka ph oli 5,5, 30 C:ssa 1 tunnin ajan. Useita erilaisia inhibiittorikonsentraatioita 1,0 gl:ssa DMSO:ta lisättiin 25 gl:aan veteen valmistettua peptidiliuosta. Reaktio aloitettiin lisäämällä 15 gl 0,33 nm proteaasia (0,11 ng), joka oli val- 15 mistettu liuokseen, jonka koostumus oli 0,133 M Na-asetaatti, jonka ph oli 5,5, ja 0,1-prosenttinen naudan seerumialbumiini. Reaktion lopetettiin 160 g1:11a 5-prosenttista fosforihappoa. Reaktiotuotteet erotettiin HPLC:llä (VYDAC, suurihuokosinen 5 cm C-18-käänteisfaasi, asetonit- 20 riiligradientti, 0,1-prosenttinen fosforihappo). Reaktion inhiboitumisaste määritettiin tuotteiden piikkien korkeuksista. Kvantitointistandardit saatiin käyttämällä riippumattomalla tavalla syntetisoitujen tuotteiden HPLC:tä, jolla myös tuotekoostumus varmistettiin. Esimerkeissä , annetut rajakohdat mukaan luettuna, olevien synteesituotteiden IC 50 -arvot osoittautuivat olevan alueella nm. Yhdisteiden A, B ja J IC 50 -arvot osoittautuivat olevan alueella noin 0,3 - noin 6 nm. Esimerkki 1 30 N - (2(R)-hydroksi-1(S)-indanyyli)-2(R)-fenyylimetyy- li - 4(S)-hydroksi-5-(1-(N'-(t-butyyli)-4(S)-fenoksiproliiniamid)yyli)pentaaniamidin valmistus Vaihe 1: N-(2(R)-hydroksi-1(S)-indanyyli)-3-fenyy- lipropaaniamidin valmistus 35 Kylmään (0 C) metyleenikloridiliuokseen (30 ml), joka sisälsi 2(R)-hydroksi-1(S)-aminoindaania (750 mg, 5,0 mmol) ja trietyyliamiinia (606 mg, 6,0 mmol), lisät-

17 15 tiin hydrokinnamoyylikloridin (843 mg, 5,0 mmol) liuos 5 ml:ssa metyleenikloridia. Reaktioseos lisättiin 2 tunnin kuluttua erotussuppiloon, joka sisälsi 50 ml metyleenikloridia, ja se pestiin 10-prosenttisella sitruunahappo- 5 liuoksella. (2 x 30 ml). Orgaaninen kerros kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin, mistä saatiin valkeaa kiinteää ainetta. Vaihe 2: N-(2(R)-hydroksi-1(S)-indaani-N,0-isopropylidenyyli)-3-fenyylipropaaniamidin valmistus 10 Edellä olevasta vaiheesta 1 raakatuotteeksi saatu valkea kiinteä aine liuotettiin 50 ml:aan metyleenikloridia ja seokseen lisättiin 5 ml dimetoksipropaania, minkä jälkeen siihen lisättiin 100 mg p-tolueenisulfonihappoa. Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämmössä 18 tun- 15 tia ja se kaadettiin sitten erotussuppilåon ja pestiin kylläisellä NaHCO 3 -liuoksella (2 x 30 ml). Orgaaninen kerros kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin, mistä saatiin öljyä, jolle suoritettiin kromatografia (SiO 2, 40 9,5 EtOAc/heksaani) ja tästä saatiin öljyä, joka lopulta ki- 20 teytyi itsekseen. Vaihe 3: N-(2(R)-hydroksi-l(S)-indaani-N,0-isopropylidenyyli)-2(S)-fenyylimetyylipent-4-eeniamidin valmistus Liuokseen, joka sisälsi N-(2(R)-hydroksi-1(S)-in- 25 daani-n,0-isopropylidenyyli) -3 -fenyyli-propaaniamidia (1,03 g, 2,9 mmol) 20 ml:ssa THF:ää ja joka oli jäähdytetty -78 C:seen, lisättiin n-buli:tä (2,5 M, 1,40 ml, 3,5 mmol). Reaktioseokseen lisättiin 20 minuutin kuluttua allyylibromidia (0,48 g, 3,9 mmol) ja sitä sekoitettiin C:ssa 1 tunti, minkä jälkeen siihen lisättiin reaktion lopettamiseksi 10 ml kylläistä NH 4 C1-liuosta. Reaktioseos laimennettiin 50 ml:lla vettä, uutettiin etyyliasetaatilla (2 x 50 ml), orgaaninen faasi pestiin kylläisellä NaCl-liuoksella (50 ml), kuivattiin, suodatettiin ja kon- 35 sentroitiin raakatuotteen aikaansaamiseksi. Raakatuote

18 16 puhdistettiin silikageelissä, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä. Vaihe 4: N - (2(R)-hydroksi-1(S)-indaani-N,0-isopropylidenyyli) - 2(S)-fenyylimetyyli(4(RS),5-dihydroksi)- 5 pentaaniamidin valmistus 800 mg:aan (2,2 mmol) N-(2(R)-hydroksi-1(S)-indaani - N,0 - isopropylidenyyli)-2(s)-fenyylimetyyli-pent-4- eeniamidia, joka oli liuotettu 40 ml:aan seosta, joka oli valmistettu sekoittamalla asetonia ja vettä suhteessa 10 9:1, lisättiin 0,8 ml veteen valmistettua 60-prosenttista N-metyylimorfoliini-N-oksidiliuosta, jonka jälkeen tähän lisättiin 4 ml 2,5-prosenttista osmiumtetroksidiliuosta t-buoh:ssa. 18 tunnin kuluttua reaktioseokseen lisättiin ylimäärin kiinteää natriumvetysulfaattia, sitä sekoitet- 15 tiin 2 tuntia, jonka jälkeen se suodatettiin celite-ker- roksen läpi. Suodos konsentroitiin, laimennettiin 50 ml:11a vettä, uutettiin metyleenikloridilla (2 x 50 ml), orgaaninen faasi kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin ja tästä saatiin vaandon muodossa olevaa tuo- 20 tetta. Vaihe 5: N-(2(R)-hydroksi-1(S)-indaani-N,0-iso- propylidenyyli)-2(5)-fenyylimetyyli-4(rs)-hydroksi-5- metaanisulfonyylioksipentaaniamidin valmistus 200 mg:aan (0,527 mmol) N-(2(R)-hydroksi-1(S)-in- 25 daani-n,0-isopropylidenyyli)-2(s)-fenyylimetyyli-(4(rs),5- dihydroksi)pentaaniamidia, joka oli liuotettu 7 ml:aan metyleenikloridia ja jonka lämpötila oli 0 C, lisättiin trietyyliamiinia (59 mg, 0,58 mmol), jonka jälkeen seokseen lisättiin metaanisulfonyylikloridia (66 mg, 30 0,579 mmol). 4 tunnin kuluttua reaktioseos jatkokäsiteltiin pesemällä sitä 10-prosenttisella sitruunahappoliuoksella (2 x 50 ml) ja orgaaninen faasi kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin, mistä saatiin monomesylaattia alkoholien seoksena.

19 17 Vaihe 6: N'-t-butyyli-N-Boc-4(R)-hydroksi-L-proliiniamidin valmistus Liuokseen, joka sisälsi N-Boc-4(R)-hydroksiproliinia (2,00 g) DMF:ssä (20 ml) ja joka oli jäähdytetty 5 0 C:seen, lisättiin EDC:tä (1,987 g), HOBt:tä (1,401 g), tert.-butyyliamiinia (1,09 ml) ja trietyyliamiinia (2,41 ml). Reaktioseos laimennettiin 18 tunnin kuluttua etyyliasetaatilla (150 ml) ja pestiin 10-prosenttisella HC1:llä, kylläisellä NaHCO 3 :lla, vedellä ja suolavedellä. 10 Tämän jälkeen liuos kuivattiin MgSO 4 :n päällä ja konsentroitiin, mistä saatiin valkeaa kiinteää ainetta. Vaihe 7: N'-t-butyyli-N-Boc-4(S)-fenoksi-L-proliiniamidin valmistus Liuokseen, joka sisälsi N'-t-butyyli-N-Boc-4(R)- 15 hydroksi-l-proliiniamidia (0,6 g) THF:ssä (5 ml), lisättiin fenolia (0,295 g), trifenyylifosfiinia (0,824 g) ja sitten pisaroittain dietyyliatso-dikarboksylaattia (0,495 ml). Reaktioseosta sekoitettiin 24 tuntia ympäristön lämpötilassa ja se laimennettiin etyyliasetaatilla 20 (200 ml) ja pestiin kylläisellä NaHCO 3 :lla, vedellä, suolavedellä ja kuivattiin MgSO 4 :n päällä. Vakuumissa suoritetusta konsentraatiosta saatiin keltaista öljyä, joka puhdistettiin salamakromatografisesti (tuote eluoitiin heksaani:etoac-seoksessa, jonka seos- 25 suhde oli 1:1, 30 mm:n pylväs). Vaihe 8: N-t-butyyli-4(S)-fenoksi-L-proliiniamidi - trifluorietikkahapposuolan valmistus Liuokseen, joka sisälsi N'-t-butyyli-N-Boc-4(S)- fenoksi-l-proliiniamidia (0,596 g) metyleenikloridissa 30 (4 ml) ja jonka lämpötila oli 0 C, lisättiin trifluorietikkahappoa (2 ml). Reaktioseos lämmitettiin 30 minuutin kuluttua huoneenlämpöön sitä ja sekoitettiin kaksi tuntia. Liuotin poistettiin vakuumissa ja tästä saatiin kellertävää öljyä.

20 18 Vaihe 9: N-(2(R)-hydroksi-1(S)-indaani-N,0-iso- propylidenyyli)-2-(r)-fenyylimetyyli-4-(s)-hydroksi-5-(1- (N'-(t-butyyli)-4(S)-fenoksiproliiniamid)yyli)pentaaniamidin valmistus 5 Liuokseen, joka sisälsi N-t-butyyli-4 (S) -fenoksi-lproliiniamidin triflorietikkahapposuolaa (0,36 g) ja N- (2(R)-hydroksi-1(S)-indaani-N,0-isopropylidenyyli)-2(S)- fenyylimetyyli-4(rs)-hydroksi-5-metaanisulfonyylioksipentaaniamidia (0,226 g) 3 ml:ssa isopropanolia, lisättiin 10 kaliumkarbonaattia (0,441 g) ja reaktioseos lämmitettiin 80 C:seen. Reaktioseos jäähdytettiin 18 tunnin kuluttua huoneenlämpöön, suodatettiin celiten läpi, joka pestiin vielä uusilla erillä EtOAc:ta. Suodos konsentroitiin, jäännös liuotettiin EtOAc:hen (100 ml) ja pestiin vedellä 15 ja suolavedellä ja kuivattiin MgSO 4 :n päällä. Liuotin poistettiin vakuumissa ja tulokseksi saatu öljy puhdistettiin salamakromatografisesti, mistä saatiin diastereomeerien seoksesta muodostuva tuote. Vaihe 10: N-(2(R)-hydroksi-1(S)-indanyyli)-2-(R)- 20 fenyylimetyyli-4-(s)-hydroksi-5-(1-(n'-t-butyy11-4(s)-fenoksiproliiniamid)yyli)pentaaniamidin valmistus Liuokseen, joka sisälsi N-(2(R)-hydroksi-1(S)-in- daani-n,0-isopropylidenyyli)-2-(r)-fenyylimetyyli-4-(5)- hydroksi-5-(1-(n'-(t-butyyli)-4(s)-fenoksiproliiniamid)- 25 yyli)pentaaniamidia (0,13 g) MeOH:ssa (5 ml), lisättiin kamferisulfonihappoa (CSA) (0,070 g) ympäristön lämpötilassa. Reaktioseokseen lisättiin 5 tunnin kuluttua lisää CSA:ta (0,025 g) ja sitä sekoitettiin yhteensä 18 tuntia. Reaktio lopetettiin kylläisellä NaHCO 3 :lla (5 ml) ja liuo- 30 tin poistettiin niin, että seoksen tilavuudeksi saatiin 4 ml. Vesipitoinen kerros uutettiin runsaalla määrällä EtOAc:ta ja orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suola-' vedellä ja se kuivattiin. Kun liuotin oli poistettu vakuumissa, tulokseksi saatu öljy puhdistettiin salamakromato- 35 grafialla otsikon mukaisen yhdisteen aikaansaamiseksi val-

21 19 keana vaahtona. Vaahto liuotettiin EtOAc:sta ja heksaanien seoksesta valmistettuun seokseen ja emäliuos erotettiin dekantoimalla öljystä. Tämän jälkeen öljy kuivattiin suuressa vakuumissa eksikaattorissa, mistä saatiin valkeaa 5 vaahtoa. Esimerkki 2 N- (2 (R) -hydroksi-1 (S) -indanyyli) -2 (R) -fenyylimetyyli-4 (S) -hydroksi-5- (1- (N' -t-butyyli-4 (S) -2- naftyylioksiproliiniamid)yyli)pentaaniamidin val- 10 mistus Vaihe 1: N-t-butyyli-4(S)-2-naftyylioksi-L-prolliniamiditrifluorietikkahapposuolan valmistus Noudattaen olennaisesti samanlaista menettelytapaa kuin mitä käytettiin N-t-butyyli-4(S)-fenoksi-L-proliini- 15 amiditrifluorietikkahapposuolan syntetisoimiseksi esimerkin 1 vaiheissa 6-8 pääpiirteittäin esitetyllä tavalla mutta käyttämällä 2-naftolia tässä käytetyn fenolin tilalla, valmistettiin 2-naftyylioksiproliiniamidia. Vaihe 2: N-(2(R)-hydroksi-1(S)-indanyyli)-2(R)- 20 fenyylimetyyli-4 (S) -hydroksi-5- (1- (N' -t-butyyli-4 (S) -2- naftyylioksi-prolliniamid)yyli)pentaaniamidin valmistus Otsikon mukainen yhdiste valmistettiin noudattamalla olennaisesti samanlaista menettelytapaa kuin esimerkin 1 vaiheissa 9 ja 10 pääpiirteittäin esitetyt vaiheet, mut- 25 ta käyttämällä N-t-butyyli-4 (S) -2-naftyylioksi-L-proliiniamiditrifluorietikkahapposuolaa kyseisen kohdan vaiheessa 9 käytetyn N-t-butyyli-4(S)-fenoksi-L-proliiniamiditrifluorietikkahapposuolan tilalla. Esimerkki 3 30 N-(2(R)-hydroksi-1(S)-indanyyli)-2(R) -fenyylimetyy - li-4(s)-hydroksi-5-(1-(n'-t-butyyli - 4(S) - 1 -naftyy - lioksi-proliiniamid)yyli)pentaaniamidin valmistus Vaihe 1: N-t-butyyli-4(S)-1-naftyylioksi-L-prolii - niamiditrifluorietikkahapposuolan valmistus 35 Noudattaen olennaisesti samanlaista menettelytapaa kuin mitä käytettiin N-t-butyyli-4(S)-fenoksi-L-proliini-

22 20 amiditrifluorietikkahapposuolan syntetisoimiseksi esimerkin 1 vaiheissa 6-8 pääpiirteittäin esitetyllä tavalla mutta käyttämällä 1-naftolia tässä käytetyn fenolin tilalla, valmistettiin 1-naftyylioksiproliiniamidia. 5 Vaihe 2: N - (2(R)-hydroksi-1(S)-indanyyli)-2(R)- fenyylimetyyli-4 (S) -hydroksi-5- (1- (N' -t-butyyli-4 (S) -2- naftyylioksi -proliiniamid)yyli)pentaaniamidin valmistus Otsikon mukainen yhdiste valmistettiin noudattamalla samanlaista menettelytapaa kuin esimerkin 1 vaiheissa 9 10 ja 10 pääpiirteittäin esitetyt vaiheet mutta käyttämällä N - t - butyyli - 4(S) - 1-naftyylioksi-L-proliiniamiditrifluorietikkahapposuolaa vaiheessa 9 käytetyn N-t-butyyli-4(S)- fenoksi-l-proliiniamiditrifluorietikkahapposuolan tilalla. Esimerkki 4 15 N- (2 (R) -hydroksi-1 (S) -indanyyli) -2 (R) -fenyylimetyy- li-4 (S) -hydroksi-5- (2- (3 (S) -N' - (t-butyylikarboksamido) - (4aS, 8aS) -dekahydroisokinolin) yyli)pentaaniamidin valmistus Vaihe 1: - 20 oksimetyyli)-3(r)fenyylimetyyli-3(2h)-furanonin valmistus Litiumdi-isopropyyliamidin (LDA) liuos valmistettiin lisäämällä 1,55 ml n-buli:tä (2,5-molaarinen liuos heksaanissa) 0,55 ml:aan (3,9 mmol) di-isopropyyliamiinia 10 ml:ssa THF:ää -78 C:ssa. Seokseen lisättiin 30 minuu- 25 tin kuluttua dihydro-5-(s)-((t-butyylidifenyylisilyyli)- oksimetyyli)-3(2h)-furanonin (1,38 g, 3,89 mmol) liuos 5 ml:ssa THF:ää. Kun seosta oli sekoitettu vielä 30 minuuttia, siihen lisättiin bentsyylibromidia (0,68 g, 3,9 mmol) ja sekoitusta jatkettiin 3 tuntia, minkä jälkeen 30 reaktio lopetettiin lisäämällä seokseen 10-prosenttista vesipitoista sitruunahappoliuosta. Liuos uutettiin etyyliasetaatilla (2 x 50 ml), josta tuote pestiin takaisin suolavedellä, kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin, mistä saatiin öljyä. Tuote puhdistettiin kromatografisesti

23 21 (SiO 2, 20 % EtOAc/heksaani), mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä. Vaihe 2: Dihydro-5(S)-(hydroksimetyyli)-3(R)- fenyylimetyyli-3(2h)-furanonin valmistus 5 5,26 g:n suuruiseen erään dihydro-5(s)-((t-butyylidifenyylisilyyli) oksimetyyli) -3 (R) fenyylimetyyli-3 (2H) - furanonia 40 ml:ssa asetonitriiliä lisättiin 1,34 ml 49-prosenttista vesipitoista HF-liuosta. Kun reaktioseosta oli pidetty 18 tuntia huoneenlämmössä, se väkevöitiin kui- 10 vaksi ja jäännös partitioitiin veden (50 ml) ja etyyliasetaatin (50 ml) kesken. Orgaaninen kerros pestiin suolavedellä, kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin, mistä saatiin tuotetta kullanruskeana kiinteänä aineena (sp ). 15 Vaihe 3: Dihydro-5(S)-((metaanisulfonyyli)oksimetyyli)-3(R)fenyylimetyyli-3(2H)-furanonin valmistus Liuokseen, joka sisälsi 2,93 g (14 mmol) dihydro- 5(S)-(hydroksimetyyli)-3(R)-fenyylimetyyli-3(2H)-furanonia metyleenikloridissa ja joka oli jäähdytetty 0 C:seen, li- 20 sättiin trietyyliamiinia (1,98 ml, 15,6 mmol), jonka jälkeen seokseen lisättiin metaanisulfonyylikloridia (1,20 ml, 15,6 mmol). Reaktioseos, jota pidettiin 0 C:ssa, yhdistettiin tunnin kuluttua 10-prosenttiseen vesipitoiseen sitruunahappoliuokseen, pestiin etyyli- 25 asetaatilla (2 x 100 ml), josta tuote pestiin takaisin vedellä (100 ml) ja suolavedellä (100 ml), kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin ja tästä saatiin tuote vahamaisena ruskeana kiinteänä aineena. Vaihe 4: Dihydro-5(S)-(2-(3(S)-N-(t-butyylikarboks - 30 amido)-(4as,8as)-(dekahydroisokinolin)yyli)metyyli) -3 (R) - fenyylimetyyli-3(2h)-furanonin valmistus 70 mg:n suuruiseen erään dihydro-5(s)-((metaanisulfonyyli)oksimetyyli)-3(r)-fenyylimetyyli -3 ( 2 H) - furano - nia (0,25 mmol) 10 ml:ssa ksyleeniä, joka sisälsi 100 mg 35 kaliumkarbonaattia, lisättiin 65 mg (0,27 mmol) N-t-butyy-

24 22 li-(4as,8as)-(dekahydroisokinoliini)-3(s)-karboksamidia ja reaktioseos kuumennettiin 140 C:seen. 6 tunnin kuluttua reaktioseos jäähdytettiin ja se yhdistettiin 30 ml:aan vettä ja seos pestiin etyyliasetaatilla (2 x 30 ml). Or- 5 gaaninen faasi kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin, mistä saatiin jäännös, jolle suoritettiin kromatografia (50/50 Et0Ac/heksaani), mistä saatiin tulokseksi tuotetta. Vaihe 5: 2 (R) -fenyylimetyyli-4 (S) - (t-butyylidimetyylisilyylioksi) -5- (2- (3 (S) -N- (t-butyylikarboksamido) - 10 (4aS,8aS)-dekahydroisokinolin)yyll)pentaanihapon valmistus 130 mg:n (0,305 mmol) erään dihydro-5(s)-(2-(3(s)- N-(t-butyylikarboksamido)-(4aS,8aS)-(dekahydroisokinolin)- yyli)metyyli)-3(r)-fenyylimetyyli-3-(2h)furanonia 2 ml:ssa DME:tä lisättiin 1 ml litiumhydroksidiliuosta. Kun reak- 15 tioseosta oli pidetty 4 tuntia huoneenlämmössä, se väkevöitiin kuivaksi ja sitä käsiteltiin atseotrooppisissa olosuhteissa tolueenilla (3 x) ylimääräisen veden poistamiseksi. Jäännös liuotettiin 5 ml:aan DMF:ää ja seokseen lisättiin 414 mg (6,10 mmol) imidatsolia ja 465 mg 20 (3,05 mmol) t-butyylidimetyylisilyylikloridia. Kun reaktioseosta oli pidetty kaksi päivää huoneenlämmössä, siihen lisättiin 1 ml metanolia ja liuos haihdutettiin kuivaksi 1 tunnin kuluttua. Jäännös partitioitiin kylläisen NH 4 C1-liuoksen (aq) kesken ja pestiin etyyliasetaatil- 25 la, joka kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin ja tästä saatiin öljy, joka oli tuotteen ja furanonilähtömateriaalin seos. Tämä materiaali siirrettiin raakatuotteena seuraavaan reaktioon. Vaihe 6: N-(2(R)-hydroksi-1(S)-indanyyli)-2(R)- 30 fenyylimetyyli-4(s)-(t-butyylidimetyyli-silyylioksi-5-(2- (3(S)-N'-(t-butyylikarboksamido)-(4aS,8aS)-dekahydroisokinolinjyyli)pentaaniamidin valmistus Edellä olevan vaiheen 5 raakatuote liuotettiin 3 ml:aan DMF:ää, minkä ohella tähän lisättiin 47 mg 35 (0,246 mmol) EDC:tä, 33 mg (0,246 mmol) HOET:tä ja 37 mg

25 23 2(R)-hydroksi-1(S)-aminoindaania. Liuoksen ph säädettiin arvoon 8,5-9,0 trietyyliamiinilla ja 18 tunnin kuluttua sitä jatkokäsiteltiin väkevöimällä se kuivaksi, liuottamalla jäännös 10-prosenttiseen vesipitoiseen sitruuna- 5 happoliuokseen pesemällä vesipitoinen kerros etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin ja tulokseksi saadulle öljylle suoritettiin kromatografia (SiO 2, 30 % Et0Ac/heksaani), mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä. 10 Vaihe 7: N-(2(R)-hydroksi-1(S)-indanyyli)-2(R)- fenyylimetyyli-4 (S) -hydroksi-5- (2- (3 (S) -N' - (t-butyylikarboksamido) - (4aS, BaS) -dekahydroisokinolin) yyli) pentaaniamidin valmistus Edellä olevasta vaiheesta 6 saatu tuote liuotettiin 15 1 ml:aan THF:ää ja seokseen lisättiin 1 ml 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridiliuosta THF:ssä. Kun reaktioseos oli saanut olla 18 tuntia huoneenlämmössä, se laimennettiin 20 ml:11a kylläistä NaHCO 3 -liuosta (aq) ja tuote uutettiin etyyliasetaattiin, joka seos kuivattiin, suodatettiin ja 20 konsentroitiin ja tästä saatiin vaahtoa. Tulokseksi saadulle materiaalille suoritettiin kromatografia preparatiivisella levyllä (0,5 mm, 5 % Me0H/CHC1 3 ) ja otsikon mukainen tuote eristettiin tavanomaiseen tapaan kiinteänä aineena, jonka sp. oli C. 25 Esimerkki 5 N- (2 (R) -hydroksi-1 (S) -indanyyli) -2 (R) -fenyylimetyyli-4(s)-amino-5-(2-(3(s)-n'-(t-butyylikarbok - samido)-(4as,sas)-dekahydroisokinolin)yyli)pentaa - niamidin valmistus 30 Vaihe 1: 5(S)-((t-butyyli-dimetyylisilyylioksi) - metyyli)-3(r)-fenyylimetyyli-n-b0c-2-pyrrolidinonin valmistus Liuos, joka sisälsi 5(5)-((t-butyyli-dimetyylisilyylioksi)metyyli)-N-B0C-2-pyrrolidinonia (400 mg, 35 1,26 mmol) 2 ml:ssa THF:ää, lisättiin edeltä käsin jäähdy-

26 24 tettyyn (-78 C) 1 M litiumheksametyylidisilatsidiliuokseen (1,3 ml) 5 ml:ssa THF:ää. Seokseen lisättiin 45 minuutin kuluttua 0,15 ml bentsyylibromidia (1,3 mmol) ja seoksen sekoittamista jatkettiin. Reaktioseos jatkokäsi- 5 teltiin 5 tunnin kuluttua lisäämällä se erotussuppiloon, joka sisälsi 30 ml vesipitoista 10-prosenttista sitruunahappoliuosta. Vesipitoinen kerros uutettiin (2 x 30 ml EtOAc), ja tuote pestiin siitä takaisin suolavedellä (50 ml), kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin öljyk- 10 si. Jäännökselle suoritettiin kromatografia (Si0 2, 20 % EtOAc/heksaani), mistä saatiin tuotetta öljynä. Vaihe 2: 5(S) - hydroksimetyyli-3(r)-fenyylimetyyli- 2-pyrrolidinonin valmistus 130 mg:n erään (0,34 mmol) 5(S)-((t-butyyli- 15 dimetyylisilyylioksi)metyyli)-3(r)-fenyylimetyyli-n-b0c-2- pyrrolidinonia 5 ml:ssa asetonitriiliä lisättiin 0,1 ml veteen valmistettua 48-prosenttista HF-liuosta. Kun reaktioseosta oli pidetty 3 tuntia huoneenlämmössä, se väkevöitiin kuivaksi ja laimennettiin 30 ml:lla vesipi- 20 toista 10-prosenttista NaHCO 3 -liuosta. Tämä uutettiin EtOAc:lla (2 x 30 ml), kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin, mistä saatiin raakatuotetta. Vaihe 3: 5(S) - (metaanisulfonyylioksi)metyyli-3(r)- fenyylimetyy11-2-pyrrolidinonin valmistus 25 Liuokseen, joka sisälsi vaiheesta 2 saatua raakatuotetta 5 ml:ssa metyleenikloridia ja joka oli jäähdytetty 0 C:seen, lisättiin trietyyliamiinia (42 mg, 0,41 mmol) ja metaanisulfonyylikloridia (47 mg, 0,41 mmol). Reaktioseoksen annettiin lämmetä hitaasti huoneenlämpöön 30 ja sitä sekoitettiin 18 tuntia, jonka jälkeen se laimennettiin 30 ml:lla metyleenikloridia, pestiin 30 ml:lla 10- prosenttista sitruunahappoliuosta, kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin, ja tästä saatiin tuotetta öljynä.

27 25 Vaihe 4: 5(S)-(2-(3(S)-N-(t-butyylikarboksamido)- (4aS,BaS)-(dekahydroisokinolin)yyli)-metyyli)-3(R)- fenyylimetyyli-2-pyrrolidinonin valmistus Liuokseen, joka sisälsi 380 mg (1,34 mmol) 5(S)- 5 (metaanisulfonyylioksi)metyyli-3 (R) -fenyylimetyyli -2 - pyrrolidinonia 20 ml:ssa isopropanolia, lisättiin 350 mg kaliumkarbonaattia ja 360 mg N-t-butyyli-(4aS,8aS)-(dekahydroisokinoliini)-3(S)-karboksamidia ja reaktioseos kuumennettiin 85 C:seen. 18 tunnin kuluttua jäähdytetty 10 reaktioseos suodatettiin celiten läpi, haihdutettiin kuivaksi ja jäännös liuotettiin veteen, joka uutettiin EtOAc:lla (2 x 50 ml). Orgaaniset uutteet kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin, ja jäännökselle suoritettiin kromatografia (Si0 2, 50/50 Et0Ac/heksaani), mistä saatiin 15 tuotetta öljynä. Vaihe 5: 5(S)-(2-(3(S)-N'-(t-butyylikarboksamido)- (4aS, eas) - (dekahydroisokinolin) yyli) -metyyli) -3 (R) - fenyylimetyyli-n-b0c-2-pyrrolidinonin valmistus Liuokseen, joka sisälsi edellä olevasta vaiheesta 20 4 peräsin olevaa tuotetta (260 mg, 0,611 mmol) 10 ml:ssa metyleenikloridia, lisättiin dimetyyliaminopyridiiniä (74 mg, 0,6 mmol) ja 133 mg (0,61 mmol) BOC-anhydridiä. Kun reaktioseosta oli pidetty 18 tuntia huoneenlämmössä, se jatkokäsiteltiin laimentamalla se 30 ml:11a metyleeni- 25 kloridia ja orgaaniset uutteet pestiin 30 ml:lla 10-prosenttista sitruunahappoliuosta sekä suolavedellä (30 ml), kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin, mistä saatiin öljyä. Tälle suoritetusta kromatografiasta (Si0 2, 40 % Et0Ac/heksaani) saatiin otsikon mukaista yhdistettä. 30 Vaihe 6: 5-(2-(3(S)-N'-(t-butyylikarboksamido) - - [(1',1 1 ) - (di - (4aS,8aS)-dekahydroisokinolin)yyli)-4(S) metyylietoksikarbonyyli)-amino]-2(r)-fenyylimetyyli - pentaanihapon valmistus Liuokseen, joka sisälsi edellä olevasta vaiheesta 5 35 peräsin olevaa tuotetta (260 mg, 0,495 mmol), joka oli

28 26 liuotettu 3 ml:aan dimetoksietaania, lisättiin 1,5 ml 1 M vesipitoista litiumhydroksidiliuosta (1,5 mmol). Reaktioseos jatkokäsiteltiin 2 tunnin kuluttua konsentroimalla se kuivaksi, liuottamalla jäännös kylläiseen vesipitoiseen 5 ammoniumkloridiliuokseen ja vesipitoinen faasi pestiin etyyliasetaatilla (2 x 50 ml) ja se kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin, mistä saatiin raakatuotteeksi happoa. Vaihe 7: N-(2(R)-hydroksi-1(8)-indanyyli)-2(R)- 10 fenyylimetyyli-4(s)-[(1'4')-(dimetyylietoksikarbonyyli)- amino]-5-(2-(3(8)-n'-(t-butyylikarboksamido)-(4as,8as)- dekahydroisokinolin)yylijpentaaniamidin valmistus Liuokseen, joka sisälsi edellä olevasta vaiheesta 6 peräsin olevaa tuotetta (260 mg, 0,49 mmol) metyleeni- 15 kloridissa, lisättiin EDC:tä (94 mg, 0,49 mmol), HOBT:tä (66 mg, 0,49 mmol), 2(R)-hydroksi-1(S)-aminoindaania (73 mg, 0,49 mmol) ja reaktioseoksen ph säädettiin trietyyliamiinilla arvoon 8,5-9,0. Kun reaktioseosta oli pidetty 5 tuntia huoneenlämmössä, se jatkokäsiteltiin lai- 20 mentamalla se 50 ml:11a metyleenikloridia ja pesemällä orgaaniset uutteet kylläisellä vesipitoisella ammoniumkloridiliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin ja jäännökselle suoritettiin kromatografia, mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä vaahtona. 25 Vaihe 8: N-(2(R)-hydroksi-1(S)-indanyyli)-2(R)- fenyylimetyyli-4(s)-hydroksi-5-(2-(3(s)-w-(t-butyylikarboksamido)-(4as,8as)-dekahydroisokinolin)yyli)pentaaniamidin valmistus Liuokseen, joka sisälsi edellä olevasta vaiheesta 7 30 peräsin olevaa tuotetta (180 mg, 0,28 mmol) 5 ml:ssa metyleenikloridia ja joka oli jäähdytetty 0 C:seen, lisättiin 1 ml trifluorietikkahappoa. Reaktioseos jatkokäsiteltiin 4 tunnin kuluttua konsentroimalla se kuivaksi ja jäännös liuotettiin 50 ml:aan metyleenikloridia ja pes- 35 tiin 10-prosenttisella vesipitoisella NaHCO3-liuoksella.

29 27 Orgaaninen kerros kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin ja tästä saatiin tuote kiinteänä aineena jolle suoritettiin kromatografia (SiO 2, 7 95 Me0H/CH 2 C1 2 ), mistä saatiin otsikon mukaista yhdistettä, jonka sp. oli C. 5 Esimerkki 6 N- (2 (R) -hydroksi-1 (S) -indanyyli) -2 (R) -fenyyli- metyyli-4(8)-hydroks1-5-(1-(4-karbobentsyylioksi-2- (S)-N'-(t-butyylikarboksamido)piperatsinyyli))pentaaniamidin valmistus 10 Käyttäen olennaisesti samaa menettelytapaa kuin mitä käytettiin esimerkissä 1 mutta käyttämällä N-t-butyyli-4-CBZ-piperatsiini-2(S)-karboksamidia tässä olevassa vaiheessa 9 käytetyn N-t-butyyli-4(5)-fenoksi-L-proliiniamidin tilalla saatiin otsikon mukaista yhdistettä. 15 Esimerkki 7 N"-(N-(2-pyridyyli)-valyyli)-2(R)-fenyylimetyyli- 4(8)-hydroksi-5-(2-(3(S)-(N'-t-butyylikarboksami - do)-(4as,8as)-dekahydroisokinolin)yyli)pentaani - amidin valmistus 20 Käyttäen olennaisesti samaa menettelytapaa kuin mitä käytettiin esimerkissä 4 mutta käyttämällä N-2- pyridyylivaliinia tämän vaiheessa 6 käytetyn 2(R)-hydroksi-1(S)aminoindaanin tilalla saatiin otsikon mukaista yhdistettä. 25 Esimerkki 8 N-(2(R)-hydroksi-1(8)-indanyyli)-2(R)-fenyyli - metyyli-4(s)-hydroksi-5-(2(s)-(n'-t-butyyli fe - nyyli-propionamidi)amino)pentaaniamidin valmistus Käyttäen olennaisesti samaa menettelytapaa kuin 30 mitä käytettiin esimerkissä 1 mutta käyttämällä N-tbutyylifenyylialaniiniamidia tässä olevassa vaiheessa 9 käytetyn N 1 -t-butyyli-4 (S) -fenoksi-l-proliiniamidin tilalla saatiin otsikon mukaista yhdistettä.

30 28 Esimerkki 9 N - (4(S) - 3,4-dihydro-1H-2,2-dioksobentsotiopyranyyli) - 2(R) - fenyylimetyy11-4(s)-hydroksi-5-(2-(3(s)- W - (t -butyylikarboksamido)-(4as,8as)-dekahydrolso- 5 kinolin)yyli)pentaaniamidin valmistus Vaihe 1: N - (4(S) - 3,4-dihydro-1H-bentsotiopyranyyli) - 2(R) - fenyylimetyyli-4(s)-hydroksi-5-(2-(3(s)-t-butyylikarboksamido)-(4as,8as)-dekahydroisokinolin)yyli)pentaaniamidin valmistus 10 Käyttäen olennaisesti samaa menettelytapaa kuin mitä käytettiin esimerkissä 4 mutta käyttämällä 4(S)-amino-3,4-dihydro-1H-bentsotiopyraania tässä olevassa vaiheessa 6 käytetyn 2 (R) -hydroksi-1 (S) -aminoindaanin tilalla saatiin otsikon mukaista yhdistettä. 15 Vaihe 2: N-(4(S)-3,4-dihydro-1H-2,2-dioksobentsotiopyranyyli) -2 (R) -fenyylimetyy11-4 (S) -hydroksi-5- (2- (3 (S) -t-butyylikarboksamido) - (4aS, 8aS) -dekahydroisokinolin)yyli)pentaaniamidin valmistus Edellä olevasta vaiheesta 1 peräsin oleva yhdiste 20 liuotettiin suhteessa 1:1 valmistettuun metanolin ja veden seokseen. Tähän seokseen lisättiin 10 ekvivalenttia Oxonea ja reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämmössä. Kun reaktio oli mennyt loppuun, seos väkevöitiin kuivaksi, siihen lisättiin vettä ja se uutettiin etyyliasetaatilla ja uute 25 kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin ja tästä saatiin otsikon mukaista yhdistettä. Esimerkki 10 N-(4(S)-3,4-dihydro-1H-2,2-dioksobentsotiopyranyy- li)-2(r)-fenyylimetyyli-4(s)-hydroksi-5-(1-(4-kar- 30 bobentsyylioksi-2(s)-n'-(t-butyylikarboksamido)plperatsinyyli))pentaaniamidin valmistus Vaihe 1: Dihydro-5(S)-(1-(4-karbobentsyylioksi- 2 (S) -N' - (t-butyylikarboksamido)piperatsinyyll)metyyli) - 3(R)-fenyylimetyyli-3(2H)-furanonin valmistus 35 Käyttäen olennaisesti samaa menettelytapaa kuin mitä käytettiin esimerkin 4 vaiheessa 4 mutta käyttämällä

31 29-4-karbobentsyylioksi-2(S)-N'-(t-butyylikarboksamido)piperatsiinia siinä käytetyn N'-t-butyyli-(4aS,8aS)-(dekahydroisokinoliini) -3 (S) -karboksamidin tilalla saatiin otsikon mukaista yhdistettä. 5 Vaihe 2: 2(R)-fenyylimetyyli-4(S)-(t-butyylidimetyylisilyylioksi)-5-(1-(4-karbobentsyylioksi-2(S)-N'- (t-butyylikarboksamido)piperatsinyyli))pentaanihapon valmistus Käyttäen olennaisesti samaa menettelytapaa kuin 10 mitä käytettiin esimerkin 4 vaiheessa 5 mutta käyttämällä dihydro-5(s)-(1-(4-karbobentsyylioksi-2(s)-n'-(t-butyyli- karboksamido)piperatsinyyli)metyyli)-3(r)-fenyylimetyyli- 3(2H)-furanonia siinä käytetyn dihydro-5(s)-(2-(3(s)-n'- (t-butyylikarboksamido)-(4as,8as)-(dekahydroisokinolin)- 15 yyli)-metyyli)-3(r)-fenyylimetyyli-3(2h)furanonin tilalla saatiin otsikon mukaista yhdistettä. Vaihe 3: N-(4(S)-3,4-dihydro-1H-bentsotiopyranyyli)-2(R)-fenyylimetyyli-4(S)-(t-butyylidimetyylisilyylioksi) -5- (1- (4-karbobentsyylioksi-2 (S) -N - (t-butyyli- 20 karboksamido)piperatsinyyli))pentaaniamidin valmistus Raakatuotteen muodossa olevaa 2(R)-fenyylimetyyli- 4(S)-(t-butyylidimetyylisilyylioksi)-5-(1-(4-karbobent- syylioksi-2(s)-n'-(t-butyylikarboksamido)piperatsinyyli))- pentaanihappoa liuotettiin 3 ml:aan DMF:ää, jonka ohella 25 seokseen lisättiin 1 ekvivalentti EDC:tä, 1 ekvivalentti HOBT:tä ja 1 ekvivalentti 4(S)-amino-3,4-dihydro-1H-bentsotiopyraania. Liuoksen ph säädettiin trietyyliamiinilla arvoon 8,5-9,0 ja 18 tunnin kuluttua se jatkokäsiteltiin konsentroimalla se kuivaksi liuottamalla jäännös 10-pro- 30 senttiseen vesipitoiseen sitruunahappoliuokseen ja pesemällä vesipitoinen kerros etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin ja saadulle jäännökselle suoritettiin kromatografia otsikon mukaisen tuotteen aikaansaamiseksi.

32 30 Vaihe 4: N - (4(S) - 3,4 - dihydro-1h-bentsotiopyranyyli) -2 (R) - fenyylimetyyli - 4(S)-hydroksi)-5-(1-(4-karbobentsyylioksi - 2(S) - (t -butyylikarboksamido)piperatsinyyli))pentaaniamidin valmistus 5 Edellä olevasta vaiheesta 3 peräisin oleva tuote liuotettiin 1 ml:aan THF:ää ja seokseen lisättiin 1 ml 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridiliuosta THF:ssä. Kun reaktioseosta oli pidetty 18 tuntia huoneenlämmössä, se laimennettiin 20 ml:lla kylläistä NaHCO 3 -liuosta (vesipitoinen 10 liuos) ja tuote uutettiin etyyliasetaattiin, ja se kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin ja tästä saatiin jäännös. Jäännökselle suoritettiin kromatografia tuotteen aikaansaamiseksi. Vaihe 5: N - (4(S) - 3,4-dihydro-18-2,2-dioksobentso- 15 tiopyranyyli) - 2(R) - fenyylimetyyli-4(s)-hydroksi-5-(1-(4- karbobentsyylioksi - 2(S)-N'-(t-butyylikarboksamido)piperatsinyyli))pentaaniamidin valmistus Edellä olevasta vaiheesta 4 peräisin oleva yhdiste liuotettiin suhteessa 1:1 valmistettuun metanolin ja veden 20 seokseen. Tähän seokseen lisättiin 10 ekvivalenttia Oxonea ja reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämmössä. Kun reaktio oli mennyt loppuun, seos väkevöitiin kuivaksi, siihen lisättiin vettä ja se uutettiin etyyliasetaatilla ja kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin ja tästä saatiin ot- 25 sikon mukaista yhdistettä. Esimerkki 11 N - (2(R) -hydroksi-1(s)-indanyyli)-2(r)-((4-((2-hyd- roksi)etoksi)fenyyli)metyyli)-4(s)-hydroksi-5-(2- (3 - (S) -N' - (t-butyylikarboksamido)-(4as,8as)-deka- 30 hydroisokinolin)yyli)pentaaniamidin valmistus Vaihe 1: N-(2(R)-hydroksi-1(S)-indanyyli)-2(R)-((4- (2 -allyylioksi)fenyyli)metyyli)-4(s)-hydroksi-5-(2-(3(s)- t-butyylikarboksamido) - (4aS 8aS) -dekahydroisokinolin) - yyll)pentaaniamidin valmistus 35 Liuokseen, joka sisälsi N-(2(R)-hydroksi-1(S)-in- danyyli)-2(r)-((4-hydroksifenyyli)metyyli)-4(s)-hydroksi-

33 31 5- (2- (3 (S) -t-butyylikarboksamido) - (4aS, 8aS) -dekahydroiso- kinolin)yyli)pentaaniamidia dioksaanissa, lisättiin 6 ekvivalenttia allyylibromidia ja 6 ekvivalenttia keesiumkarbonaattia. Reaktioseos kuumennettiin 90 C:seen. 5 Kun reaktion oli mennyt loppuun, saostuma erotettiin suodattamalla, dioksaani väkevöitiin kuivaksi ja jäännös laimennettiin vedellä, ja seos pestiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin, mistä saatiin tuotetta. 10 Vaihe 2: N-(2(R)-hydroksi-1(S)-indanyyli)-2(R)-((4- ((2-hydroksi)etoksi)fenyyli)metyyli)-4(S)-hydroksi-5-(2- (3(S)-N'-(t-butyylikarboksamido)-(4aS,8aS)-dekahydroisokinolin)yyli)pentaaniamidin valmistus Edellä olevasta vaiheesta 1 peräisin oleva tuote 15 liuotettiin metanoliin, seokseen lisättiin 1 ekvivalentti p-tolueenisulfonihappoa ja reaktioseos jäähdytettiin -78 C:seen. Reaktioseoksen läpi kuplitettiin ylimäärin otsonia, kunnes saatiin pysyvä sininen väri. Pullossa olevan seoksen läpi johdettiin typpeä kaiken otsonin poista- 20 miseksi ja seokseen lisättiin ylimäärin natriumboorihydridiliuosta. Reaktioseos lämmitettiin huoneenlämpöön ja siihen lisättiin sitten kylläistä NaHCO 3 -liuosta. Seos konsentroitiin poistamalla metanoli pyöröhaihduttajalla ja vesipitoinen jäännös pestiin etyyliasetaatilla ja se kui- 25 vattiin, suodatettiin ja konsentroitiin, mistä saatiin otsikon mukainen yhdiste. Esimerkki 12 N- (2 (R) -hydroksi-1 (S) -indanyyli) -2 (R) - ((4- ((2-30 (1-(4-karbobentsyylioksi-2(S)-N'-(t -butyylikar hydroksi)etoksi)fenyyli)metyyli)-4(s)-hydroksi boksamido)piperatsinyyliflpentaaniamidin valmistus Käyttäen olennaisesti samaa menettelytapaa kuin mitä käytettiin esimerkissä 11 mutta käyttämällä N - (2(R) - hydroksi-l(s)-indanyyli)-2(r)-((4-hydroksifenyyli)metyy - 35 li)-4(s)-hydroksi-5-(1-(4-karbobentsyylioksi-2(s)-(t-bu-

34 32 tyylikarboksamido)piperatsinyyli)pentaaniamidia siinä käytetyn N - (2(R) - hydroksi-1(s)-indanyyli)-2(r)-((4-hydroksifenyyli) metyyli) -4 (S) -hydroksi-5- (2- (3 (S) -t-butyylikarboksamido) - (4aS, 8aS) -dekahydroisokinolin) yyli) pentaani- 5 amidin tilalla saatiin otsikon mukainen yhdiste. Esimerkki 13 N- (2 (R) -hydroksi-1 (S) -indanyyli) -2 (R) ( (4- (2- (4- morfolinyyli)etoksi)fenyyli)metyyli)-4(s)-hydroksi- 5- (2- (3 (S) -N' - (t-butyylikarboksamido) - (4aS, 8aS) - 10 dekahydroisokinolin)yyli)pentaaniamidin valmistus P. 1 mennettiin Liuokseen, joka sisälsi N-(2(R)-hydroksi-1(S)-indanyyli) - 2(R) - ((4 - hydroksifenyyli)metyyli)-4(s)-hydroksi- 5 - (2 - (3(S) - N' - (t -butyylikarboksamido)-(4as,8as)-dekahydroisokinolin)yyli)pentaaniamidia dioksaanissa lisättiin 15 6 ekvivalenttia kloorietyylimorfoliinia ja 6 ekvivalenttia keesiumkarbonaattia. Reaktioseos kuumennettiin 90 C:seen. Kun reaktion oli mennyt loppuun, saostuma erotettiin suodattamalla, dioksaani väkevöitiin kuivaksi ja jäännös lai- vedellä ja seos pestiin etyyliasetaatilla. Or- 20 gaaninen faasi kuivattiin, suodatettiin ja konsentroitiin, mistä saatiin otsikon mukainen yhdiste. Esimerkki 14 N- (2 (R) -hydroks1-1 (S) -indanyyli) -2 (R) - ( (4- (2- (4- morfolinyyli)etoksi)fenyyli)metyyli)-4(s)-hydroksi (1- (4-karbobentsyylioksi-2 (S) -Nt - (t-butyylikar- boksamido) piperatsinyyli) ) pentaaniamidin valmistus Liuokseen, joka sisälsi N-(2(R)-hydroksi-1(S)-in- danyyli)-2(r)-((4-hydroksifenyyli)-metyyli)-4(s)-hydroksi- 5- (1- (4-karbobentsyylioksi-2 (S) - (t-butyylikarboksamido) - 30 piperatsinyyli) pentaaniamidia dioksaanissa, lisättiin 6 ekvivalenttia kloorietyylimorfoliinia ja 6 ekvivalenttia keesiumkarbonaattia. Reaktioseos kuumennettiin 90 C:seen. Kun reaktion oli mennyt loppuun, saostuma erotettiin suodattamalla, dioksaani väkevöitiin kuivaksi ja jäännös lai- 35 mennettiin vedellä ja seos pestiin etyyliasetaatilla. Or-