ATP-mittarit, mikrobien identifiointimenetelmä ja CO 2 -tuotannon mittaaminen HAMK, Hämeenlinna, 8.5.2018 Petri Muranen
Hygienia ja omavalvonta a) Mikrobiologiset menetelmät Swab-testit kuivamaljat kontaktimaljat laskeumamaljat Dipslide-pintanäytteenottoputket
Hygienia ja omavalvonta b) Luminometria / ATP 3M Clean-Trace ATP järjestelmä: 3M Clean-Trace Surface ATP pintanäytteille 3M Clean-Trace Water ATP vesinäytteille
Miten ATP-menetelmä eroaa mikrobiologisista menetelmistä? ATP Mikrobiologinen menetelmä reaaliaikainen kokonaislika helppo, ei pitkäaikaista koulutusta kasvuviive 1-3 vrk mikrobit vaatii koulutusta
1. ATP-menetelmä ATP (adenosiinitrifosfaatti) on runsasenerginen yhdiste = siihen varastoituu energiaa ATP:tä on kaikissa elävissä soluissa: ruoka hiiva bakteerit homeet
ATP-menetelmä perustuu lusiferaasi-entsyymin toimintaan: ATP + lusiferaasi = valoa
ATP-menetelmä mittaa kokonaislikaa mitä enemmän likaa (ATP:tä) sitä enemmän syntyy valoa sitä suurempi mittaustulos (Relative Light Unit, RLU) nopea, helpokäyttöinen reaaliaikainen toistettavat tulokset = luotettava trendianalyysi pitkäaikainen säilytys: jääkaapissa +2-8 o C. Ota tikut huoneenlämpöön vähintään 10 minuuttia ennen käyttöä lyhytaikainen säilytys : huoneenlämmössä +21 o C 28 päivän ajan
Pintanäytteenotto Pidä tikkua peukalon jaetusormen välissä niin, että tikkua on helppo pyörittää. Älä koske tikun pumpulipäähän tai varteen! Paina tikkua kohti pintaa. Pyöritä samallalabema tikkua ja kerää Life science näytettä and koko biotechnology pumpulipäällä! expert
Paina tikku putkeen. Aktivoi tikku painamalla sinisestä päästä niin pitkälle, että tikun pumpulipää uppoaa putkessa olevaan nesteeseen. Pidä putkea peukalon ja etusormen välissä. Heiluttele puolelta toiselle vähintään 5 sekuntia.
Näytteenotto nesteestä Ota näyte nesteestä. Laita tikku putkeen ja aktivoi se painamalla punaisesta päästä: muovipää uppoaa nesteeseen. Pidä putkea peukalon ja etusormen välissä ja heiluttele puolelta toiselle vähintään 5 sekuntia.
Mittaus avaa luminometrin kansi, aseta tikku sisään ja paina Mittanäyte lue tulokset suhteellisina RLU-yksiköinä
Tulokset
LM1
Tulosten toistettavuus useita eri luminometritoimittajia variaatiokerroin (CV%) kertoo poikkeamasta eli kuinka lähellä mittaustulokset ovat toisiaan suuria eroja testien suorituskyvyssä = mittausten toistettavuudessa 3M Clean-Trace 9% Kilpailija 1 25% Kilpailija 2 50% Kilpailija 3 75%
Number of Results toistettavuuden vaikutus käytännössä: turhaa siivousta 0 25 50 75 100 125 150 Tulosjakauma CV=38% Tulosjakauma CV=8% RLU of Result tuhlataan aikaa ja rahaa, ei vaarallista ~15% VÄÄRIÄ POSITIIVISIA, jos testin toistettavuus on huono (CV >38%)
Number of Results toistettavuuden vaikutus käytännössä: ei siivota riittävästi 0 50 100 150 200 250 300 350 Tulosjakauma CV=38% Tulosjakauma CV=8% RLU of Result liian optimistinen kuva hygieniatasosta, VAARALLISTA!! ~15% VÄÄRIÄ NEGATIIVISIA, jos testin toistettavuus on huono (CV >38%)
erilainen signaalin tulkinta 3M Clean-Trace photomultiplier Kilpailija 1 photodiode erot tikuissa 3M Clean-Trace koko tikun pää mitataan Kilpailija 1 vain huuhteluvesi mitataan
Raja-arvot Käyttäjien määriteltävissä omassa työympäristössään. Kansainvälisissä tutkimuksissa 250 RLU:ta katsottu hyväksi tasoksi sairaaloissa Esimerkkejä: Käyttöpaikka OK?? Hälytys Tavallinen osasto < 500 500 1000 > 1000 Teho-os., leikkausos. < 250 250 500 > 500 Välinehuolto ja sterilointipalvelut < 100 100-200 > 200
Sovellusalueet ja asiakkaat siivousyritykset uimahallit terveystarkastajat sairaalat elintarviketeollisuus (käytössä jo 20 vuotta) Atria, Saarioinen, HK Valio panimot (Hartwall, Pyynikki) Lisätietoja: iiris.ylostalo@labema.fi
2. Mikrobien identifiointimenetelmä Biolog MicroLog Manual tunnistaminen perustuu bakteerien sormenjälkeen : 96 reaktiota mikrokuoppalevyllä yhdellä kerralla
71 hiilenlähdettä + 23 kemiallista herkkyystestiä hapan ph sokerit NaCl maitohappo Gram+ Gramheksoosi-PO4:t aminohapot heksoosihapot karboksyylihapot, esterit ja rasvahapot pelkistysvoima
helppoa ja yksinkertaista: ei tarvita värjäyksiä, oksidaasitestiä, katalaasitestiä, vaan aerobiset G+ ja G- bakteerit samalla levyllä vaaditaan puhdasviljelmä ja yksi pesäke pesäke siirrostetaan siirrostusliemeen, joka sekoitetaan siirrostusliemi lisätään levylle => inkuboitumaan 18 tunniksi tulosten tulkinta seuraavana päivänä kunkin kuopan väriä verrataan valkoiseen taustaan (pos, neg, rajat.) tulos syötetään ohjelmaan, joka vertaa sitä tietokantaan => nimi tietokannassa yli 1800 G+ ja G- mikrobia: 267 hiivaa, 361 anaerobia jne
täysin automaattinen semi-automaattinen manuaalinen
Asiakkaat Allergan MedImmune Pfizer Apotex Banner Pharmacaps Amylin Alcon Biogen IDEC Sun Pharmaceuticals Bausch and Lomb Bayer Sanofi Actavis Baxter Roche Teva GSK Novartis Ciba Vision Genentech Bristol Myers Squibb Neogen MSD Fresenius Kabi Sandoz Lisätietoja: Mead Johnson timo.tumelius@labema.fi
3. Panimohiivan laaduntarkkailu hiivalla on merkittävä panos oluiden makuun ja laatuun, siksi on tärkeää saada luotettavaa tietoa sen toiminnasta fermentointikyvyn määrittäminen tapahtuu mittaamalla hiivojen metabolian tuottaman hiilidioksidin määrää CO 2 -tuotannon määrä korreloi hiivan kunnon kanssa ANKOMin valmistama GPM-laitteisto (Gas Production Measurement) on automaattinen mittausjärjestelmä kaasunmuodostuksen seurantaan
RF1-moduli Puhdistusportti Poistoventtiili kaasunäytteille Pullokoot 100, 250, 500 ja 1000 ml
Langattomuus / etämittaukset kukin RFS-yksikkö voi johtaa 50 modulia ja inkubointipaikat voivat sijaita hajallaan: langattomuus tarjoaa joustavuutta
GPM-laitteiston etuja pullojen inkubointi ja mittaukset tuotantolämpötilassa nopea, tuloksia saadaan riittävästi jo 2-3 tunnissa: jos hiiva on kunnossa, kaasua muodostuu nopeasti (1 bar / alle 140 min) automaattinen järjestelmä korkissa on painetunnistin, joka mittaa kumuloituvaa painetta ja lähettää tiedot inkubointilämpötilan ja mittausaikaväli (esim. 30-90 sek) säädettävissä
Käytössä panimoteollisuudessa, esim. Carlsbergillä useita satoja Starter Pack Lisätietoja: timo.tumelius@labema.fi
Kiitos tarkkaavaisuudesta! www.labema.fi
Labema kartalla Labema Suomi 1988 Labema OÜ Tallinna 1998 UAB Labema Vilna 2017 SIA Labema Riga (syksy 2018)